PD-1删除后T细胞抗肿瘤作用的实验研究

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功能化氧化石墨烯携带PD-L1_siRNA抑制肝癌细胞的恶性生物学行为

激光生物学报ACTA　LASER　BIOLOGY　SINICAVol. 32 No. 4Aug . 2023第32卷第4期2023年8月收稿日期：2023-05-05；修回日期：2023-05-29。

基金项目：湖南省研究生科研创新项目（QL 20210136）；2021年湖南省企业科技特派员项目（2021GK 5015）；湖南省自然科学基金面上项目（2021JJ 30453）；国家自然科学基金面上项目（81872256）。

作者简介：李志伟，博士研究生。

∗ 通信作者：李立民，讲师，主要从事生物材料与医用电子学方面的研究。

E-mail: fblwlee@ 。

功能化氧化石墨烯携带PD -L1 siRNA 抑制肝癌细胞的恶性生物学行为李志伟a ，单丽红a ，刘曦冉a ，闵　洋a ，丁小凤a ，李立民b*（湖南师范大学 a. 生命科学学院基因功能与调控研究室；b. 工程与设计学院，长沙 410081）摘　要：程序性死亡受体1（PD-1）/程序性死亡配体1（PD-L 1）信号通路主要参与免疫负调控作用，且在许多类型的肿瘤的恶性发展中具有关键作用。

PD-L 1的高表达可促进肝细胞癌（HCC ）的侵袭，提高肿瘤复发的风险。

另外，PD-L 1常作为免疫检查点的阻断靶点，主要通过单抗将其中和，引发抗肿瘤免疫反应。

因此，PD-L 1是HCC 免疫治疗中极具潜力的靶点之一。

本文主要探究纳米级功能化氧化石墨烯（GO-PEI-PEG ）携带PD-L1 siRNA 对肝癌细胞的恶性生物学行为的影响。

研究结果显示，将GO-PEI-PEG/PD-L1 siRNA 转染至MHCC 97H 细胞后，细胞的增殖和迁移均被抑制，细胞周期阻滞在G 1期，且细胞凋亡的数目增多。

进一步研究发现，GO-PEI-PEG/PD-L1 siRNA 对MHCC 97H 细胞的抑制作用是通过阻碍AKT 信号通路激活实现的。

这些试验结果表明，GO-PEI-PEG 具备优秀的递送性能，携带PD-L1 siRNA 可有效干扰PD-L 1表达，进而抑制肝癌细胞的恶性生物学行为，这为治疗HCC 提供了更安全、有效的递送新策略。

结直肠癌中微卫星不稳定状态可预测免疫治疗效果

结直肠癌中微卫星不稳定状态可预测免疫治疗效果微卫星 (Microsatellite) 是遍布于人类基因组中的短串联重复序列, 有单核苷酸、双核苷酸或高位核苷酸的重复，重复次数10-50 次。

与正常细胞相比，肿瘤细胞内的微卫星由于重复单位的插入或缺失而导致微卫星长度的改变，就叫做微卫星不稳定性（MSI）。

据文献报道，大约 15% 的结直肠癌中存在 MSI-H 现象，MSI-H 与MSS的发病机制、预后和对药物的敏感性均不同。

临床上已将MSI 作为结直肠癌及其他实体瘤预后和制定辅助治疗方案的重要分子标志物。

正常情况下，当机体出现DNA复制错误时，错配修复蛋白会识别并清除错配碱基。

当肿瘤细胞中存在MMR 基因缺失（Mis-Match Repair deficiency， dMMR）时，肿瘤细胞就会失去对 DNA 复制中产生的错误的修复能力，会导致整个基因组不稳定和微卫星不稳定。

而当错配DNA无法被修复时，体内会出现很多蛋白质变异，进而被人体免疫调控细胞识别。

如果免疫功能正常，会将已经变异的细胞清除掉；当免疫功能下降、免疫监控能力受到损害时，就会产生肿瘤。

研究表明，肿瘤细胞携带的突变越多，能被患者自身免疫系统特异性识别的新生抗原就越多，自身免疫系统特异性杀伤肿瘤细胞的概率就越大。

但往往免疫系统没有攻击肿瘤细胞的原因在于肿瘤细胞通过 PD-1/PD-L1 这条信号通路抑制了T细胞的杀伤作用。

未致敏的T细胞激活需要双信号系统调控：第一信号具有抗原特异性，第二信号不具有抗原特异性。

T细胞首先通过TCR（T细胞抗原受体）识别MHC-抗原肽获得抗原识别第一信号，再由共刺激分子提供的协同刺激信号-第二信号，T细胞才能被激活。

第二信号可有多方面来源，主要来自专职APC（抗原递呈细胞）表面的B7分子（配体）和T细胞上的CD28分子（受体）的结合。

专职APC可组成性地提供第一信号和第二信号，因此可以有效地激活未致敏的T细胞。

PD-1/PD-L1抑制剂在外周T细胞淋巴瘤治疗中的研究进展#br#

1035欢迎关注本刊公众号·综　述·《中国癌症杂志》2020年第30卷第12期CHINA ONCOLOGY 2020 Vol.30 No.12通信作者：邹立群 E-mail: hxlcyxy@ 外周T 细胞淋巴瘤（p e r i p h e r a l T-c e l l lymphoma ，PTCL ）是一组高度异质性和侵袭性的非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma ，NHL ），其发病率具有明显的地域差异，在中国占NHL 的23%~27%，明显高于欧美国家（10%~15%）［1］。

中国最常见的PTCL 亚型是结外NK/T 细胞淋巴瘤（extranodal NK/T-celllymphoma ，ENKTL ）鼻型，其次是外周T 细胞淋巴瘤非特指型（peripheral T-cell lymphoma-not otherwise specified ，PTCL-NOS ）、间变性大细胞淋巴瘤（anaplastic large cell lymphoma ，A L C L ）、血管免疫母细胞性T 细胞淋巴瘤（angioimmunoblastic T-cell lymphoma ， AITL ）［2-3］。

目前化疗仍是PTCL 的主要治疗方PD-1/PD-L1抑制剂在外周T细胞淋巴瘤治疗中的研究进展骆　倩1，邹立群21. 四川大学华西临床医学院，四川成都 610041；2. 四川大学华西医院肿瘤一科，四川成都 610041［摘要］外周T 细胞淋巴瘤（peripheral T-cell lymphoma, PTCL ）是一组高度异质性和侵袭性的非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma ，NHL ）。

在目前化疗为主的治疗下，PTCL 患者通常预后差，复发率高，因此需要积极探索新药来改善预后。

肿瘤微环境（tumor microenvironment ，TME ）在多种肿瘤中发挥重要作用，程序性死亡［蛋白］-1（programmed death-1，PD-1）/程序性死亡［蛋白］配体-1（programmed death ligand-1，PD-L1）信号通路是参与肿瘤免疫逃逸的重要途径之一，针对PD-1/PD-L1通路的抑制剂在多种肿瘤中疗效显著，在PTCL 的治疗上也有广阔的应用前景。

医学研究：肿瘤治疗的新进展

医学研究：肿瘤治疗的新进展近年来，医学界在肿瘤治疗领域取得了令人振奋的新进展。

随着科技的不断发展，医学研究人员对肿瘤治疗的理解也日益深入。

本文将着重介绍肿瘤治疗的新进展，包括免疫疗法、基因编辑和靶向治疗等方面的研究成果。

免疫疗法：激活机体的免疫系统免疫疗法是目前肿瘤治疗中最具前景的一种方法之一。

传统的治疗方法，如放疗和化疗，通常会破坏人体免疫系统，而免疫疗法则是通过激活机体的免疫系统来攻击肿瘤细胞。

1. PD-1/PD-L1 抑制剂的出现PD-1（程序性死亡蛋白1）和PD-L1（程序性死亡配体1）抑制剂是免疫疗法的重要突破之一。

这些抑制剂通过阻断PD-1与PD-L1的结合，从而使肿瘤细胞无法逃避机体免疫系统的攻击。

近年来，多个PD-1/PD-L1 抑制剂已经投入临床应用，并取得了显著的疗效。

2. CAR-T细胞疗法CAR-T细胞疗法是一种基于人工改造的T细胞治疗方法。

研究人员通过体外抽取患者的T细胞，并在实验室中对其进行基因改造，使其能够识别并攻击肿瘤细胞。

随后，改造后的T细胞被重新注入患者体内，发挥抗肿瘤作用。

目前，CAR-T细胞疗法已经在某些肿瘤治疗中显示出了极高的疗效，被认为是未来肿瘤治疗的一个重要方向。

基因编辑：精确控制肿瘤细胞基因编辑技术的快速发展也为肿瘤治疗带来了新的希望。

通过精确操纵肿瘤细胞的基因组，研究人员可以更好地控制和治疗肿瘤。

1. CRISPR-Cas9的应用CRISPR-Cas9是一种革命性的基因编辑工具。

研究人员利用CRISPR-Cas9技术，可以直接对肿瘤细胞中的异常基因进行精确修复或靶向删除。

通过这种方法，人们有望将肿瘤细胞中的致病基因修复或移除，从而达到治疗肿瘤的目的。

2. 基因编辑与免疫疗法的结合有趣的是，基因编辑技术与免疫疗法也可以结合起来，产生更好的治疗效果。

研究人员可以通过基因编辑技术改造患者的T细胞，使其具有更好的免疫反应能力，从而增强免疫疗法的效果。

这种综合应用能够更有效地治疗肿瘤，为患者带来更大的福音。

PD-1敲除及GPC3修饰的嵌合抗原受体T细胞治疗肝癌的实验研究

DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2021.01.004·论著·PD-1敲除及GPC3修饰的嵌合抗原受体T细胞治疗肝癌的实验研究姜舒，王冰，郭霞，张芸，谢亮，罗朝霞，刘赢滢【摘要】目的构建程序死亡受体1（PD-1）敲除及磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（GPC3）修饰的嵌合抗原受体T 细胞（GPC3-PD1gRNA-CART cells），研究其对肝癌细胞株HepG2 的体外杀伤作用，以及其对肝癌动物模型的体内抗肿瘤作用。

方法制备GPC3-PD1gRNA-CART 细胞，用流式细胞仪检测PD-1、GPC3 CAR 的表达情况。

体外实验中，设立不同的效靶比（1:1、2:1、4:1），用LDH 法测定刀豆蛋白刺激后的GPC3-PD1gRNA-CART 细胞体外对HepG2 细胞株的杀伤率，检测刀豆蛋白刺激后的GPC3-PD1gRNA-CART 细胞和HepG2 细胞株共孵育18 h 后的细胞培养上清液中IFN-γ 的释放水平。

设置受刀豆蛋白 A 刺激的和未受刀豆蛋白 A 刺激的GPC3 修饰的CART 细胞（GPC3 CART cells）作为对照组。

于重度免疫缺陷小鼠（NDG 小鼠）皮下注射HepG2 细胞建立肝癌动物模型，观察GPC3-PD1gRNA-CART 细胞体内抑瘤作用。

实验分为模型组、实验组（GPC3-PD1gRNA-CART 组、GPC3 CART组），模型组和实验组通过皮下注射 1 × 106个HepG2 细胞造模，在肿瘤长径达3 mm 后实验组经尾静脉注射5 × 106个GPC3-PD1gRNA-CART 细胞或GPC3 CART 细胞，模型组经尾静脉注射0.9% NaCl，每周注射 1 次，共 3 周，注射体积均为0.2 ml。

每隔 2 天观测肿瘤体积情况，治疗 3 周后取皮下肿瘤组织，HE 染色检测肿瘤组织情况。

结果流式细胞术分析结果显示，GPC3 CAR 表达率为98.8%。

肿瘤免疫治疗的抗体治疗 PD-1和PD-L1

• 而目前临床上研究和应用最广泛但免疫检查点抑制剂包括CTLA-4、 PD-1和PD-L1单抗，通过抑制免疫检查点活性，释放肿瘤微环境中的免疫刹车，重新激活T 细胞对肿瘤的免疫应答效应，从而达到抗肿瘤的作用。
PD-1与PD-L1中PD的意思是Programmed Cell Death，程序性的细胞死亡，其实每一个细胞都会定期死亡，比如人体的红血球120天后就会死掉，但接着会有新的红血球生长替代。这些都是有程序的。这个程序中，白细胞起着很关键的作用，它决定红血球的死亡更替。
T细胞的负性刺激调控
• 为避免过度活跃的免疫应答导致过度的炎症反应和自身免疫性疾病，人体进化出免疫检查点（immune checkpoint）机制来控制免疫反应的强度和持续时间，最大限度地减少免疫应答对健康组织的损害，主要有CTLA4-B7通路和PD-1／PD-L1通路。
• 但是肿瘤细胞入侵后，会利用这一抑制性的通路来压制T细胞激活，从而逃脱免疫系统的围剿，即免疫逃逸。
• 这些肿瘤特异性的体细胞突变可以产生新抗原，称之为“neo-antigens”，是T细胞的重要识别位点。
• 在快速增殖的肿瘤中，存在neo-antigens特异的T细胞，但这些T细胞受免疫检查点抑制剂的阻断，不能有效的执行杀伤肿瘤细胞的功能，只有在被解除阻断后，T细胞才能恢复功能。在免疫检查点抑制剂的前期的临床试验中已经观察到，高的非同义突变负荷预示着更好的疗效。
主动免疫有细胞因子、肿瘤疫苗、免疫检查点抑制剂等。
• 而主动免疫中的免疫检查点抑制剂，就包括了我们平时经常听到的PD-1抑制剂、 PD-L1抑制剂。
T淋巴细胞的激活
• 一般而言人体免疫系统，会对聚集在淋巴结或脾脏的外来抗原产生反应，促进具有抗原特异性的T细胞增生。

实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识

实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识摘要外周血细胞免疫功能检测在实体肿瘤免疫治疗受益者筛选、免疫相关不良反应监测、肿瘤疗效及预后评估等方面受到临床关注。

为促进临床有效选择和解读实体肿瘤诊疗相关的外周血细胞免疫功能指标，中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心（中国医科大学附属第一医院）组织相关领域的学术专家，对外周血细胞免疫功能指标包括T淋巴细胞亚群精细分型、髓源性抑制细胞和细胞因子的临床应用价值进行了充分总结，并撰写了专家共识，同时对外周细胞免疫功能实验室检测指标和方案或方法给出了推荐和参考方向，以期为实体肿瘤患者的精准诊疗提供帮助。

T细胞介导的细胞免疫应答是宿主抗肿瘤免疫最主要的途径，也是肿瘤发生免疫逃逸形成免疫抑制的关键靶点。

肿瘤微环境的局部细胞免疫，以及基于脾脏、淋巴结和血循环的外周细胞免疫的功能状态与肿瘤发生发展和治疗转归密切相关［1］。

基于外周血的细胞免疫功能检测在筛选免疫治疗受益者、监测免疫相关不良反应（immune-related adverse events，irAE）及评估肿瘤疗效和预后方面的作用越来越受到临床关注。

如何正确选择和解读实体肿瘤诊疗相关的外周血细胞免疫功能指标，目前国内外尚无统一规范。

为此，中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心组织在肿瘤免疫监测和流式细胞术分析淋巴细胞亚群领域经验丰富的专家，结合国内外进展，撰写实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测的专家共识，旨在帮助临床合理选择免疫指标评估外周血细胞免疫功能，以辅助实体肿瘤的精准诊疗。

鉴于细胞免疫功能在实体肿瘤免疫治疗中的重要价值，共识编写工作组关注细胞免疫应答从启动到发挥效应功能的全过程，针对参与细胞免疫应答的效应细胞、辅助细胞、负向免疫调节细胞等多种细胞亚群和免疫分子进行了临床研究证据的整合，筛选出在肿瘤免疫治疗监测、预后评估中具有指导价值的外周血细胞免疫功能实验室指标，并结合临床检验实践归纳为T淋巴细胞亚群精细分型，髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cell，MDSC）亚群分析和细胞因子水平检测三大类，并对这些指标的检测方案和临床应用选择作出了推荐。

《细胞》子刊：PD-1抗体抗癌的真相，我们理解错了！

《细胞》⼦刊：PD-1抗体抗癌的真相，我们理解错了！我们对免疫治疗机制认识可能错了。

⼀直以来，⼤家认为只要PD-1抑制剂阻⽌肿瘤细胞踩免疫细胞的刹车，抗肿瘤能⼒⾃然就有了。

然⽽，事情并可能并没有我们想象的这么简单。

最近，⿇省总医院的Mikael Pittet博⼠领导的研究团队，在著名学术期刊Immunity上发表研究成果，刷新了我们对PD-1抗体起作⽤的认知。

他们发现，当PD-1抗体结合到T细胞的PD-1受体上后，T细胞并没有⽴即获得抗癌能⼒；只有另⼀种免疫细胞——树突状细胞——发放“授权”之后，杀伤性T细胞才能发挥抗肿瘤的作⽤。

⽽杀伤性T细胞与树突状细胞之间需要通过⼲扰素-γ（IFN-γ）和⽩细胞介素12（IL-12）进⾏信息交流，这之间涉及到⼀系列信号通路的激活。

左边为以前的认知，右边为本次的新发现此外，科学家还发现了增强PD-1抗体抗癌效果的联合治疗⽅法，⽽且这种联合治疗能使⼩⿏保持对肿瘤的免疫记忆，防⽌肿瘤复发！这个发现表明，免疫治疗不是“兵来将挡，⽔来⼟掩”这种简单的局部攻防战，在PD-1-PD-L1这条轴线背后，可能隐藏着⼀条更长的战线，⼀个更加⼴阔的战场。

Mikael Pittet博⼠其实Pittet博⼠团队的这个发现，也属偶然。

之前的研究表明，在肿瘤内，各种细胞因⼦，包括IFN-γ、IL-12很活跃，并且这俩在免疫作⽤中扮演着重要⾓⾊[2-3]。

但是⼈们对它们在肿瘤免疫中发挥的作⽤⼀直不是很清楚。

于是，Mikael Pittet教授团队想好好地认识下它们⼆位。

他们将 IFN-γ和IL-12打上荧光标签，然后⽤⼀种单细胞活体成像的技术追踪这两个因⼦在肿瘤内的活动情况，其中肿瘤也⽤荧光进⾏了标记。

活体成像结果显⽰，在⼩⿏接受了PD-1抗体注射⼀天后，肿瘤中表达IFN-γ的细胞数量增加了6倍，其中最多的就是具有肿瘤杀伤功能的杀伤性T 细胞。

与此同时，表达IL-12的细胞数量增加了12倍，⽽这些细胞在形态上很像树突状细胞，并且显⽰其具有运动能⼒。

医学检验科开展PD-1检测

医学检验科开展PD-1检测我科流式细胞室于近期开展PD-1检测。

该检测项目可用于评估患者免疫功能、评估肿瘤治疗效果、指导靶向用药等。

【检测原理】程序性死亡受体-1(programmed cell death protein-1，PD-1 /CD279)是重要的免疫检查点，免疫检查点本是人体免疫系统中起保护作用的分子，起类似刹车的作用，防止T 细胞过度激活导致的炎症损伤等。

而肿瘤细胞利用人体免疫系统这一特性，通过过度表达免疫检查点分子，抑制人体免疫系统反应，逃脱人体免疫监视与杀伤，从而促进肿瘤细胞的生长。

PD-1是一个诱导表达的蛋白，即T细胞在未被激活的时候是几乎没有PD-1的表达的，只有在T细胞活化之后，PD-1才会被诱导表达。

除了在活化成熟的T细胞上有表达，PD-1还在胸腺的双阴性(CD4-CD8-)T细胞、活化的NK细胞、单核细胞和未成熟的朗格汉斯细胞上呈低表达。

PD-1通过与其两个配体PD-L1(B7-H1/CD274)和PD-L2(B7-DC/CD273)的作用而抑制T细胞的活化及细胞因子的产生，在维持机体的外周耐受上发挥至关重要的作用。

PD-L1和PD-L2两者表现为不同的表达模式。

PD-L1组成性的低表达于抗原递呈细胞(APCs)、以及非造血细胞如血管内皮细胞、胰岛细胞以及免疫豁免部位(如胎盘、睾丸和眼睛)。

炎性细胞因子如I型和II型干扰素、TNF-α和VEGF等均可以诱导PD-L1的表达。

PD-L2只在被激活的巨噬细胞和树突细胞中有表达。

PD-1 与PD-L1在激活的T细胞结合后，发挥负向调控T细胞活性的作用。

肿瘤细胞及肿瘤微环境可通过上调PD-L1和PD-L2表达实现免疫逃逸，达到自我保护。

肿瘤细胞通过PD-1/PD-L1实现免疫逃逸，抗PD-1/PD-L1单抗可阻断这个过程利用抗PD-1/PD-L1 的单克隆抗体阻断PD-1/PD-L1信号通路，在多种实体瘤中显示出卓越的抗肿瘤疗效。

pd1新药临床实验

pd1新药临床实验PD1新药的临床实验是现代医药研究领域的一项重要工作。

PD1（Programmed Death 1）是一种免疫检查点抑制剂，通过抑制PD1和其配体PD-L1的结合，可以激活患者自身的免疫系统，从而增强机体对抗肿瘤的能力。

临床实验是评估PD1新药疗效和安全性的必要步骤。

一、PD1新药的研发背景PD1新药的研发源于对免疫逃逸机制的深入研究。

在正常情况下，人体免疫系统会通过调节免疫细胞的活性和免疫应答来对抗异常细胞的生长和扩散。

然而，某些肿瘤细胞可以利用免疫检查点信号通路抑制机体的免疫应答，从而逃避免疫系统的清除。

针对这一机制，科研人员成功开发出PD1新药，以期通过激活免疫系统来抑制肿瘤的生长。

二、PD1新药临床实验的目的PD1新药临床实验的主要目的是评估其疗效和安全性。

临床实验通常包括多个临床阶段，从I期到III期。

在I期临床实验中，研究人员会选择一小群患者进行试验，以确定药物的耐受性、剂量和最佳给药路线。

在II期和III期临床实验中，研究人员会招募更多的患者，通过随机对照试验或非随机对照试验来评估药物的疗效和安全性。

三、PD1新药临床试验的步骤1.研究设计和伦理审批：在开始临床试验之前，研究人员必须制定研究设计，并递交给相关的伦理委员会进行审批。

研究设计包括病例纳入和排除标准、随机分组方法、药物给予剂量和给药方案等。

2.病例招募和入组：在伦理审批获得后，研究人员会开展相关的宣传活动，吸引符合研究标准的患者参与临床试验。

招募到的患者需要经过详细的筛选，符合入组标准的患者将签署知情同意书，并进行相关检查。

3.治疗干预和随访：入组的患者会按照研究设计接受相应的治疗干预，包括定期给药、实验性药物与对照药物的比较等。

同时，研究人员会进行定期的随访，收集疗效和不良事件的数据，并对患者进行安全检测和监测。

4.数据收集和分析：在临床试验结束后，研究人员会进行数据的收集与整理，并进行统计学分析。

通过对疗效和安全性的评估，评估PD1新药在临床实践中的潜力。

PD-1PD-L1在肿瘤细胞中的研究进展

PD-1/PD-L1在肿瘤细胞中的研究进展摘要：程序性死亡受体1(PD-1)与表达在肿瘤细胞表面的配体PD-L1结合后，发挥负性调控作用，通过抑制抗原受体的信号，抑制T、B细胞的激活、分化和增殖，诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)凋亡，在肿瘤细胞逃逸机体免疫监控过程中发挥重要作用。

通过对于PD-1及其信号通路传导的深入认识，针对阻断PD-1和PD-L1信号通路的抑制剂也不断进入临床试验，为肿瘤患者带来福音。

关键词：PD-1 PD-L1 肿瘤细胞免疫逃逸免疫抑制剂人体的免疫系统在控制肿瘤发生的过程中起着关键作用。

程序性死亡分子1(PD-1)是一个重要的免疫细胞活化的负调控分子，可通过与其配体PD-L1和PD-L2的结合而发挥免疫抑制[1]。

肿瘤免疫逃逸的机制包括：肿瘤细胞表面MHC-I 类分子的表达下调，缺少免疫共刺激分子，分泌免疫抑制性细胞因子，表达死亡配体或表达抑制性配体[2]。

许多肿瘤细胞系及肿瘤细胞高表达PD-L1分子，其与淋巴细胞表面的PD-1分子结合后，削弱了机体的抗肿瘤免疫应答[3]，从而导致肿瘤免疫逃逸的发生。

一．肿瘤的特征肿瘤起源于克隆性增殖的异常细胞，在致癌突变的驱使下，这些细胞经过筛选与进化，获得癌细胞的标志性特征。

经典的特征包括：持续的增殖信号，逃避生长抑制调控，抗细胞凋亡，无限复制能力，血管新生，侵袭和转移，细胞能量代谢重编程以及免疫逃逸[4]。

二．PD-1/PD-L1的生物学特性1.PD-1的结构及其表达程序性死亡受体1(PD-1)是Ishida[5]等人通过消减杂交技术于1992年发现的。

PD-1是CD28家族成员，其编码由288个氨基酸残基组成的50~55KD的免疫球蛋白超家族I型跨膜糖蛋白，由胞外区、跨膜区和胞内区组成[6]，其结构与CTLA4、CD28和ICOS有21%~33%的同源性[7]。

胞外区由免疫球蛋白IgV结构域组成，在其与配体结合中发挥重要作用；胞内区包含两个酪氨酸残基，N-末端参与构成免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)，在免疫应答中发挥负性调节作用[8]，C-末端参与构成免疫受体酪氨酸转换基序(ITSM)[9]。

黑色素瘤pd1临床实验

黑色素瘤pd1临床实验黑色素瘤PD-1临床实验近年来，肿瘤治疗领域取得了突破性进展，其中包括了免疫治疗的出现。

而在黑色素瘤治疗领域，PD-1抑制剂被广泛应用并且取得了显著的疗效。

本文将对黑色素瘤PD-1临床实验进行讨论，探究其在黑色素瘤治疗中的应用和疗效。

一、PD-1抑制剂：国际间的共识与进展PD-1是免疫检查点受体的一种，受癌细胞分泌的PD-L1配体的作用，使T细胞失去活性，通常表现为免疫逃逸。

因此，通过抑制PD-1和PD-L1结合，可以恢复T细胞的免疫活性，对黑色素瘤等恶性肿瘤起到治疗作用。

目前，多个PD-1抑制剂已经获得国际认可和广泛使用，如nivolumab、pembrolizumab等。

临床实验结果显示，PD-1抑制剂在治疗黑色素瘤中具有较好的疗效和耐受性。

二、黑色素瘤PD-1临床实验研究的疗效1. 单用PD-1抑制剂治疗黑色素瘤临床实验研究显示，单用PD-1抑制剂治疗晚期黑色素瘤的患者，可以获得显著的生存期延长和肿瘤缩小。

其中，pembrolizumab治疗黑色素瘤的KEYNOTE-006研究，证实了该药物在治疗黑色素瘤中的疗效。

2. PD-1抑制剂联合其他治疗手段为了提高黑色素瘤PD-1抑制剂治疗的疗效，目前研究者也尝试将其与其他治疗手段联合应用。

例如，PD-1抑制剂与BRAF抑制剂的联合治疗，通过同时刺激免疫系统和抑制肿瘤细胞的增殖，取得了较好的临床效果。

三、黑色素瘤PD-1临床实验中的安全性尽管PD-1抑制剂在黑色素瘤治疗中显示出良好的疗效，但其不良反应也不可忽视。

临床实验研究发现，PD-1抑制剂可引起皮疹、疲劳、呕吐等不良反应，少数患者可能出现严重的免疫相关性不良反应，如肺炎、甲状腺功能异常等。

因此，在应用PD-1抑制剂治疗黑色素瘤时，医生需要密切监测患者的不良反应并及时处理。

结论黑色素瘤PD-1临床实验的研究表明，PD-1抑制剂在治疗晚期黑色素瘤中具有显著的疗效和耐受性。

然而，随着研究的深入，我们还需进一步探索PD-1抑制剂联合其他治疗手段的潜力，并关注其安全性。

安徽省重点中学2023届高三第三次测评生物试卷含解析

2023年高考生物模拟试卷注意事项:1．答题前，考生先将自己的姓名、准考证号码填写清楚，将条形码准确粘贴在条形码区域内。

2．答题时请按要求用笔。

3．请按照题号顺序在答题卡各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试卷上答题无效。

4．作图可先使用铅笔画出，确定后必须用黑色字迹的签字笔描黑。

5．保持卡面清洁，不要折暴、不要弄破、弄皱，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。

一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。

每小题只有一个选项符合题目要求）1．在室温条件下，短时间内给健康大鼠静脉大量注射11℃、1．2%的NaCl溶液，可能会引起（）A．红细胞形态发生皱缩B．尿量增加C．肾小管重吸收水能力增强D．汗腺分泌活动增强2．大豆种子萌发过程中鲜重的变化曲线如图。

下列说法错误的是（）A．阶段I中种子细胞的结合水/自由水的比值下降B．阶段II中胚细胞合成有解除休眠作用的赤霉素逐渐增多C．阶段I中种子细胞有机物总质量变多而鲜重增加D．阶段I后根向地生长的原因是生长素分布不均3．肝细胞和细菌都能以协助扩散的方式吸收葡萄糖，其中细菌协助葡萄糖运输的载体蛋白为GLUT1，肝细胞协助糖运输的载体蛋白为GLUT2,其运输的速率和葡萄糖浓度的关系如图所示。

下列推测不正确的是A．GLUT1对葡萄糖的亲和力比GLUT2对葡萄糖亲和力大B．葡萄糖能以相同的方式进人红细胞和肝细胞C．两种载体蛋白都需要内质网、高尔基体的加工D．载体蛋白的存在能显著提高细胞摄取葡萄糖的速率4．科学家把等量的小白鼠败血症病毒(一种RNA病毒)颗粒分别加入甲、乙两支试管，其中甲试管中含有带放射性标记的脱氧核糖核苷三磷酸缓冲溶液，乙试管中含有带放射性标记的核糖核苷三磷酸缓冲溶液。

一段时间后，甲试管中能检测到含有放射性的核酸，乙试管中不能检测到含有放射性的核酸。

下列叙述正确的是（）A．甲试管中可以检测到子代病毒B．该病毒颗粒中不含有与DNA合成有关的酶C．乙试管中无放射性核酸的合成是因为缺少RNA酶D．加入RNA酶，甲试管中放射性核酸明显减少5．下列不．符合生态工程基本原理的说法是（）A．超载放牧导致草地退化，主要违背协调与平衡原理B．矿区生态环境的恢复工程中，关键是土壤微生物群的构建和植被恢复C．城市生活垃圾实现废物资源化利用依据的是物质循环再生原理D．退耕还湿地和建立自然保护区的主要目的是为了给人类提供游览胜地6．下列关于细胞呼吸的原理及应用的叙述，错误的是（）A．丙酮酸可在线粒体内氧化分解成二氧化碳和水B．利用乳酸菌发酵制作酸奶时，应先通气后密闭C．粮食入库前晒干可降低细胞中有机物的消耗D．剧烈运动时，人体释放的二氧化碳全部来自线粒体二、综合题：本大题共4小题7．（9分）微生物的生长繁殖需要不同种类的碳源、氮源、无机盐、生长因子等营养物质，若培养基中的某种营养物质不能被微生物利用，微生物便不能生长。

集训07 动物生命活动的调节(一)-备战2020年高考生物【非选择题预测】专项集训(解析版)

集训07 动物生命活动的调节（一）1.PD-1是表达在多种活化T细胞表面的一种受体，PD-L1是一种能够与之结合的蛋白质（见图1）。

PD-1和PD-L1结合会抑制T细胞的活化、增殖。

研究发现，肿瘤细胞表面的PD-L1数量较多，更有一些类型的肿瘤细胞除了表面有PD-L1，还分泌出大量的PD-L1（见图2）。

（1）请写出题干中未使用过的特异性免疫过程中的五个术语（专业名词）。

________________（2）目前已研发出针对PD-L1的单克隆抗体（mAb）。

结合图1信息，mAb能治疗肿瘤是因为使用mAb时，mAb通过与_________ 结合，阻止了__________结合，从而______________ 。

（3）临床试验结果显示，相同剂量的mAb对有的肿瘤患者治疗有效，有的无明显效果。

请根据以上信息分析其可能的原因。

_______________________【答案】细胞免疫、体液免疫、抗原、巨（吞）噬细胞、呈递、淋巴因子、效应T 细胞、效应B 细胞（浆细胞）、记忆T 细胞、记忆B 细胞、抗体等肿瘤细胞表面的PD-L1 PD-L1 与T 细胞表面的PD-1 解除对T 细胞的抑制，使效应T 细胞对肿瘤细胞能够发挥有效的杀伤作用如果病人甲的肿瘤细胞能大量分泌PD-L1，其体内的PD-L1 浓度会高于病人乙（肿瘤细胞分泌PD-L1 的量少或不分泌）。

因此，相同剂量的mAb 不能使甲病人体内的PD-L1 全部被mAb 特异性结合，那么肿瘤细胞仍有可能抑制T 细胞的正常功能，导致治疗无明显效果【解析】（1）特异性免疫包括细胞免疫和体液免疫，根据以上分析可知，题干中提到了T淋巴细胞，未使用过的特异性免疫过程的专业术语有：细胞免疫、体液免疫、抗原、巨（吞）噬细胞、呈递、淋巴因子、效应T 细胞、效应B 细胞（浆细胞）、记忆T细胞、记忆B细胞、抗体等。

（2）根据题中信息“针对PD-L1 的单克隆抗体（mAb）”，说明单克隆抗体（mAb）能特异性与PD-L1结合，因此结合图1 信息可知，单克隆抗体（mAb）可以与肿瘤细胞表面的PD-L1特异性结合，阻止了PD-L1与T细胞表面的PD-1蛋白的结合，从而解除对T细胞的抑制，那么特异性免疫就能正常发挥作用，因此效应T细胞对肿瘤细胞能够发挥有效的杀伤作用，避免肿瘤的形成。

STING激动剂联合PD-1抗体通过激活T细胞的抗肿瘤活性抑制肺癌进展的研究

STING激动剂联合PD-1抗体通过激活T细胞的抗肿瘤活性抑制肺癌进展的研究①张西科杨建彬邵鸿飞康利娜刘艳玲刘杰②（邢台市人民医院，河北医科大学附属医院药剂科，邢台 054000）中图分类号R734.2 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2023）07-1469-05［摘要］目的：探索STING激动剂联合PD-1抗体是否可以有效激活体内的T细胞，发挥抑制肺癌进展的作用。

方法：通过CFSE检测T细胞的体外增殖情况；通过ELISA法检测T细胞的细胞因子分泌能力；利用小鼠皮下移植瘤模型验证STING 激动剂联合PD-1抗体对肿瘤细胞的体内抑制作用；利用免疫荧光实验检测CD3+ T细胞的肿瘤浸润情况；通过流式细胞术检测肿瘤浸润T细胞IFN-γ分泌情况；利用免疫组化法检测肿瘤组织中PD-1的表达水平。

结果：STING激动剂可以在体外显著增强T细胞的增殖能力（P<0.000 1）以及分泌IL-2（P<0.01）和IFN-γ（P<0.01）的能力；STING激动剂联合PD-1抗体显著抑制路易斯肺癌细胞LLC在小鼠体内的生长（P<0.000 1）；STING激动剂联合PD-1抗体可以显著增强肿瘤组织中CD3+T细胞的浸润情况（P<0.000 1），增加肿瘤组织中IFN-γ阳性的T细胞比例（P<0.000 1），同时还可以显著降低肿瘤组织中PD-1的表达水平（P< 0.000 1）。

结论：STING激动剂联合PD-1抗体可以有效激活体内T细胞的抗肿瘤免疫应答，抑制肺癌荷瘤小鼠模型的肿瘤进展，该研究对在肺癌的临床治疗中实践这一联合疗法具有重要意义。

［关键词］肺癌；STING；PD-1；T细胞；免疫治疗STING agonist combined with PD-1 antibody inhibits lung cancer progression by activating antitumor activity of T cellsZHANG Xike， YANG Jianbin， SHAO Hongfei， KANG Lina， LIU Yanling， LIU Jie. Department of Pharmacy， Xingtai People's Hospital， Affiliated Hospital of Hebei Medical University， Xingtai 054000， China［Abstract］Objective：To explore whether STING agonist combined with PD-1 antibody can effectively activate T cells in vivo and play a role in inhibiting the progression of lung cancer. Methods：The proliferation of T cells in vitro was detected by CFSE. The cytokine secretion ability of T cells was detected by ELISA. The anti-tumor effect of STING agonist combined with PD-1 antibody on tu‐mor cells in vivo was verified by subcutaneous transplanted tumor model in mice. The tumor invasion of CD3+ T cells was detected by immunofluorescence assay. IFN-γ tumor infiltrating T cells was detected by flow cytometry. Immunohistochemistry was used to detect the expression level of PD-1 in tumor tissues. Results：STING agonists could significantly enhance T cell proliferation （P<0.000 1）and secretion of IL-2 （P<0.01） and IFN-γ （P<0.01） in vitro. STING agonist combined with PD-1 antibody significantly inhibited the growth of Lewis lung cancer cell in mice （P<0.000 1）. STING agonist combined with PD-1 antibody could significantly enhance the infiltration of CD3+T cells in tumor tissues （P<0.000 1）， increase the proportion of IFN-γ positive T cells in tumor tissues （P<0.000 1），and also significantly reduce the expression level of PD-1 in tumor tissues （P<0.000 1）. Conclusion：STING agonist combined with PD-1 antibody can effectively activate the anti-tumor immune response of T cells in vivo and inhibit tumor progression in lung cancer bearing mouse model. This study is of great significance for the clinical practice of this combination therapy in lung cancer.［Key words］Lung cancer；STING；PD-1；T cell；Immunotherapy肺癌是我国发病率最高的癌症，每年约有78万例新增病例，死亡约63万人，且这一数字仍呈上升趋势［1］。

山东省莱芜一中2024届高考冲刺模拟生物试题含解析

山东省莱芜一中2024届高考冲刺模拟生物试题请考生注意：1．请用2B铅笔将选择题答案涂填在答题纸相应位置上，请用0．5毫米及以上黑色字迹的钢笔或签字笔将主观题的答案写在答题纸相应的答题区内。

写在试题卷、草稿纸上均无效。

2．答题前，认真阅读答题纸上的《注意事项》，按规定答题。

一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。

每小题只有一个选项符合题目要求）1．两对相对性状的遗传实验中，可能具有1:1:1:1比例关系的是（）①F1杂种自交后代的性状分离比②F1产生配子类别的比例③F1测交后代的表现型比例④F1测交后代的基因型比例⑤F1自交后代的基因型比例A．①②④B．②④⑤C．②③⑤D．②③④2．下列有关基因突变的叙述，正确的是（）A．基因突变可导致染色体上基因的结构和数目都发生改变B．发生在植物体细胞的基因突变可通过无性繁殖传递给后代C．基因突变的不定向性体现基因突变可发生在个体发育的任何时期D．DNA分子中发生碱基对的增添、缺失和替换都会引起基因突变3．如图表示将①②两个植株杂交得到③，将③作进一步处理分别培育出不同品种的过程。

下列分析错误的是（）A．由③到④因是人工诱变育种过程，所以③可定向变异为④B．由③到⑧的育种过程中，遵循的主要原理是染色体数目变异C．若③的基因型为AaBbdd，则⑩植株中能稳定遗传的个体占总数的1/4D．由③到⑨的育种方式可明显缩短育种年限4．土壤内含有松散的颗粒，有利于微生物和小动物的生存，下列说法正确的是（）A．土壤中微生物的存在有利于生态系统的物质循环B．土壤中微生物能将有机物分解，释放的能量供给绿色植物利用C．利用土壤小动物的避光趋湿怕高温，可采用带灯罩的日光灯制作诱虫器来进行收集D．为调查土壤中小动物的丰富度，可选用样方法，并随机取样5．2012年诺贝尔生理学或医学奖授予了在细胞核重编程研究领域做出杰出贡献的科学家。

细胞核重编程是将人类成熟的体细胞重新诱导回干细胞状态，以发育成各种类型细胞的过程。

T细胞与肿瘤细胞共培养以检测细胞毒性

CD8 T细胞与肿瘤细胞共培养导致T细胞介导的细胞毒性增强与对照P815细胞相比，在抗CD3表达的NSCLC细胞系中，T细胞介导的细胞毒性在4小时内较小（大致上，PC-9为3％，NCI-H1975为11％，NCI-H3255为17％）（图2a）。然而，到18小时，T细胞介导的细胞毒性在P815细胞和PC-9、NCI-H1975和NCI-H3255 EGFRm细胞系中都显著增强（图2b）。并且细胞毒性水平与E : T比值成正比。此外，作者还测定了与不同肿瘤细胞系共培养后T细胞的功能，发现与PC-9肿瘤细胞共培养的T细胞表达最高水平的颗粒酶B（图 2c），而与NCI-H1975肿瘤细胞共培养的T细胞表达最高水平的PD-1（图2d）。
实验方法
由于篇幅有限，我们将重点分享CD8 T细胞与表达抗CD3的肿瘤细胞共培养系统的操作步骤。
CD8 T细胞与肿瘤细胞共培养
Day1：文献中使用的是EasySep™人CD8 T细胞富集试剂盒从PBMC中分离CD8 T细胞；接着按1 : 1的比例，使用CD3/CD28激活剂刺激CD8 T细胞，并将其培养在含10% FBS、1%青链霉素双抗生素和100 U/ml IL-2的DMEM完全培养基中。调整细胞密度为1×106 cells/ml，每2 - 3天换液。
图3. 通过抗CD3表达的肿瘤细胞共培养系统研究靶向治疗对T细胞介导的细胞毒性的影响 a. 使用360 nM Geftinib和160 nM Osimertinib EGFR TKIs预处理PC-9，b. 加入10 µM SCH58261和c. 加入12.5 nM Dasatinib的共培养系统中，活细胞的百分比，DMSO为对照组。 EGFR TKIs=表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂；**P＜0.01，***P＜0.0005和****P＜ 0.0001。

T细胞抗肿瘤免疫的分子机制研究

T细胞抗肿瘤免疫的分子机制研究随着癌症在全球范围内的不断增加，人们对于寻找有效的肿瘤治疗方法的需求也越来越迫切。

在过去的几十年里，研究人员们发现，人体免疫系统中的T细胞对于抗击肿瘤具有重要作用。

本文将探讨相关的分子机制研究。

一、T细胞及其抗肿瘤免疫功能T细胞是人体免疫系统中的一类重要细胞，主要负责免疫调节和抗感染功能。

研究发现，T细胞在抗击肿瘤中也扮演着重要角色。

通过与肿瘤细胞相互作用，T细胞可以杀伤癌细胞，并释放信号分子来激活其他免疫细胞，从而形成免疫反应链。

二、肿瘤抗原的识别与结合T细胞抗肿瘤免疫的第一步是对肿瘤抗原的识别与结合。

肿瘤细胞与正常细胞相比，常常表达着一些特定的肿瘤相关抗原。

T细胞通过其表面的T细胞受体（TCR）与这些抗原结合，从而触发进一步的免疫反应。

三、T细胞活化与增殖在肿瘤抗原与T细胞受体结合后，T细胞需要进行活化与增殖，以进一步增强其抗肿瘤能力。

这个过程受到多种分子因子的调控，比如细胞因子IL-2的作用。

IL-2能够刺激T细胞增殖，从而使其得以扩大抗肿瘤的规模。

四、免疫检查点抑制与T细胞耐受尽管T细胞具有抗肿瘤的潜力，但某些肿瘤细胞可以通过激活免疫检查点来抑制T细胞的活性。

这种抑制机制可以使肿瘤逃避免疫系统的攻击。

因此，研究人员们将目光转向了免疫检查点抑制剂，如PD-1和CTLA-4抗体。

这些新型药物可以抑制免疫检查点的活性，恢复T细胞的功能。

五、T细胞介导的肿瘤细胞杀伤T细胞抗肿瘤免疫的核心是T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。

通过释放效应分子，如穿孔素和颗粒酶，T细胞可以直接杀伤肿瘤细胞，从而抑制其生长和扩散。

六、记忆T细胞的形成与抗肿瘤免疫的持久性在抗肿瘤免疫中，记忆T细胞的形成起着至关重要的作用。

一旦肿瘤被清除，记忆T细胞可以长期保存在人体内，以防止肿瘤的复发。

这种持久性的抗肿瘤免疫能力为疾病的控制和预防提供了有力的支持。

综上所述，T细胞抗肿瘤免疫的分子机制研究具有重要意义。

PD-1+肿瘤浸润性CD8+T淋巴细胞的表型鉴定及功能研究.pdf

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺｈｕＢｏ，Ｅｍａｉｌ：ｏｎｃｏｌｏｇｙ＿ｂｏｚｈｕ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
机体Ｔ细胞免疫在控制肿瘤的发生、发展过程中起到了重要作用［１－４］。其中肿瘤局部浸润性ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞在机体抗肿瘤免疫应答中发挥了关键作用。近年来发现，肿瘤患者体内存在免疫抑制机制［５］，妨碍机体对肿瘤的清除，导致肿瘤长期定植，表现为Ｔ淋巴细胞功能障碍与增殖能力减弱［６］。ＰＤ１已被公认为是衰竭性Ｔ淋巴细胞的表面标志［７］。阻断ＰＤ１ＰＤ１Ｌ通路可以部分恢复衰竭性Ｔ细胞的功能［８－１０］。为确认肿瘤局部是否存在衰竭性Ｔ淋巴细胞，并进一步研究其功能特点，揭示肿瘤在体内长期定植的原因，本研究通过小鼠皮下注射Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞株，建立了小鼠肿瘤模型；从肿瘤局部分离得到ＣＤ８＋ＰＤ１＋Ｔ细胞，并对细胞自身特点与功能做了初步探讨。
１．７统计学分析
计量资料以ｘ珋±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件，组间差异方差齐采用单因素方差分析；方差不齐采用秩和检验。
２结果
２．１肿瘤局部浸润性ＣＤ８＋Ｔ细胞分离与鉴定
为确定肿瘤局部是否存在浸润性淋巴细胞，肿瘤局部分离得单个核细胞后染ＣＤ８＋表型，发现确存在肿瘤浸润性ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞（图１Ａ），为进一步明确ＣＤ８＋Ｔ细胞亚群，复染ＰＤ１，发现存在一ＣＤ８＋Ｔ细胞亚群高表达衰竭性表型ＰＤ１（图１Ｂ）。
１．５羟基荧光素二醋酸盐琥珀酸亚胺酯（ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｄｉａｃｅｔａｔｅｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌｅｓｔｅｒ）染色
参考Ｑｕａｈ等［１１］的染色方案进行。ＣＦＳＥ终浓度为１μｍｏｌ／Ｌ。ＣＦＳＥ染色后细胞铺与９６孔平底板，５０００／孔。ＣＤ３抗体５μｇ／ｍＬ，ＣＤ２８抗体２μｇ／ｍＬ，ｍＩＬ２１０Ｕ／ｍＬ３７℃ 体外刺激０、１、３、５、７ｄ后分别进行流式检测。设不染色空白对照孔。