突变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定
Cdh1和Num1过表达菌株的构建
Cdh1和Num1过表达菌株的构建Cdh1和Num1是两种重要的负调控蛋白，它们在细胞周期调控中起到了关键作用。
Cdh1是一个是蛋白分解介导的降解调解因子，在细胞周期进程中与模板蛋白酶复合物APC/C一起参与有丝分裂终止和有丝分裂周期的调控。
Num1是一个参与有丝分裂起始、中期和末期的关键蛋白，它通过与细胞质分裂和核膜以及微管等结构相互作用，调控细胞的有丝分裂进程。
为了研究它们在细胞周期调控中的作用机制，我们需要构建过表达Cdh1和Num1的菌株。
过表达菌株的构建是一种常用的研究方法，通过高水平表达目标基因，可以更好地研究其功能和作用机制。
我们选择了嵌合表达方式，即将目标基因与一个适当的表达载体进行融合，使得目标基因能够在大量表达的同时不丢失其原有的生物学功能。
我们需要选择合适的表达载体。
常用的表达载体有原核表达载体和真核表达载体两种。
原核表达载体多用于大肠杆菌表达，真核表达载体多用于酵母菌、哺乳动物细胞等真核系统的表达。
在本次实验中，我们选择了酵母菌表达系统，因为酵母菌是一种简单、易于操作的真核生物，能够更好地保持目标基因的天然结构和功能。
然后，需要将Cdh1和Num1的编码序列克隆到所选的表达载体上。
这里我们选择了利用PCR方法来扩增Cdh1和Num1的编码序列，然后将PCR产物与表达载体的线性化背景DNA 进行连接。
连接后的重组质粒可以通过化学方法或电击法转化到酵母菌中。
接下来，我们需要通过筛选和鉴定来确认已经构建成功的过表达菌株。
可以通过对转化的菌落进行PCR扩增来检测是否成功克隆了目标基因。
然后，可以通过菌落PCR扩增产物的测序来验证目标基因的正确性和完整性。
可以通过Western blot等蛋白质检测方法来确认目标基因的过表达。
在成功构建了过表达菌株后，我们可以利用这些菌株进行进一步的研究。
通过与原来的野生型菌株进行对照实验，我们可以研究Cdh1和Num1在细胞周期调控中的作用机制，探究其对细胞周期的调控效应和调控通路。
人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建和表达的开题报告
人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建和
表达的开题报告
开题报告
题目：人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建和表达
一、研究背景
心血管疾病是目前世界上最主要的致死原因之一，其中冠心病是一
种常见的心血管疾病，是由于心脏冠状动脉供血不足导致心脏缺血而引
起的一系列病变。
CITED2是一种蛋白质转录因子，已被证实在胚胎发育和心肌细胞分化中发挥重要作用，并被认为是心脏疾病的潜在治疗靶点。
此外，已经报道了CITED2的两种突变型与心脏发育缺陷之间的关联。
二、研究目的
本研究旨在构建并表达人CITED2野生型和两种突变型真核表达质粒，以探究它们在心肌细胞分化和心脏发育中所起的作用，并为心脏疾
病的临床研究提供理论基础。
三、研究内容
1. 从人体细胞中提取RNA并逆转录成cDNA，扩增人CITED2野生
型和两种突变型基因序列。
2. 将CITED2野生型和两种突变型基因序列克隆到真核表达质粒pCMV-Tag2B中，构建CITED2野生型和两种突变型真核表达质粒。
3. 验证构建的真核表达质粒是否准确，并通过Western blotting等
方法检测CITED2野生型和突变型的表达情况。
4. 进行心肌细胞分化实验和心脏发育相关的实验，观察不同类型CITED2对心脏发育和心肌细胞分化的影响。
四、研究意义
本研究将建立一种诱导心肌细胞分化的体系，对人CITED2在心脏发育和心肌细胞分化中的作用进行深入研究，并探索CITED2突变与心脏发育缺陷的关联。
同时，本研究的结果将为心脏疾病的临床治疗提供新的理论基础和潜在治疗策略。
Cdh1小干扰RNA载体构建与鉴定探析
Cdh1小干扰RNA载体构建与鉴定探析
毕业论文【摘要】目的Cdh1是细胞周期后期分裂促进复合物APC的一个调节亚基，在细胞周期调控中发挥着重要作用。
近年来研究发现，Cdh1-APC在哺乳动物神经元中有大量表达，具有调节轴突生长和突触形成的功能，其在中枢神经系统疾病的发生发展中起重要作用。
为了进一步探讨Cdh1的功能，本实验拟构建Cdh1小干扰RNA载体，并将其转染至Hela细胞进行鉴定。
方法根据pENTRTM/H1/TO载体要求和参考文献表1 实时定量PCR检测Hela细胞中Cdh1的表达（±s）
类别 Ct(β-actin ) C t(Cdh1) △Ct转染pENTR/shcontrol ± ± ±< vs未转染及转染pENTR/shcontrol相比。
FRAT1基因真核表达质粒的构建与鉴定
原癌 基 因 Ｆ ＲＡＴ１ （ｆ ｒ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｔ ｌ ｙ ｒ ｅ ａ ｒ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｄ ｉ ｎ
ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ 、 Ｄ ＮＡ 连接试剂 盒 （ Ｄ ＮＡ Ｌ ｉ ｇ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｋ ｉ ｔ ） 等均 购
Ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｅｕ ｋ ａ ｒ ｙ ｏ ｔ ｉ ｃ Ｅｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｆ ＲＡＴ １ Ｇｅ ｎ ｅ ＹＵ Ｑｉ ｎ ｇ — ｇ ｏ ｎ ｇ， ＺＨＡ ＮＧ Ｘｉ ｎ ｘｉ ｎ，
Ｒ ＮＡｉ 载体 ， 为研 究 Ｆ Ｒ ＡＴ１ 基 因 对 结 肠 癌 细 胞 增 殖 凋 亡 侵袭 的影 响提 供 了稳 定 转 染 的 Ｒ ＮＡ 干 扰质 粒 。
关键词 ： 载体 ； Ｆ Ｒ ＡＴ１ ； ＲＮ Ａ干扰 ； 结 肠癌
中 图分 类 号 ： Ｑ７ ８ ６ 文献标识码 ： Ａ
Ｇ Ｕ Ｗｅ ｉ ， ｅ ｔ ａ １ ． （ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ，
ｉ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｄａ ｌ ｉ ａ ｎ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｄ ａ ｌ ｉ ａ ｎ¨６ ０ ０ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
一
２２ ６ 一
Ｃｈ ｉ ｎ Ｊ Ｉ ａ ｂ Ｄｉ ａ ｇ ｎ， Ｆｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ， ２ ０１ ３ ， Ｖｏ ｌ １ ７， Ｎｏ ． ２
文章编号 ： １ ０ ０ ７ —４ ２ ８ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ ０ ２ ２ ６ —０ ４
重组质粒的构建、转化、筛选和鉴定
重组质粒的构建、转化、筛选和鉴定实验目的：1.学习在实现DNA体外重组过程中，正确选择合适的载体和限制性内切酶并能对限制性核酸内切酶对载体和目的DNA进行切割，产生利于连接的合适末端。
2.学习设计构建重组DNA分子的基本方法，掌握载体和外源目的DNA酶切的操作。
3.学习利用T4DNA连接酶把酶切后的载体片段和外源目的DNA片段连接起来，构建体外DNA分子的技术，了解并掌握几种常用的连接方式。
4.掌握利用Cacl2感受态细胞的方法。
5.学习掌握热击法转化E.coli的原理和方法。
6.掌握α互补筛选法和PCR检测法筛选重组子的方法。
并鉴定体外导入目的DNA片段的大小。
7.学习和掌握PCR反应的基本原理和操作技术，了解引物设计的基本要求。
实验原理：外源DNA与载体分子的连接即为DNA重组技术，这样重新组合的DNA分子叫做重组子。
重组的DNA分子式在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经限制性内切酶酶切的载体分子和外源DNA分子连接起来。
将重组质粒导入感受态细胞中，将转化后的细胞在选择性培养基中培养，可以通过α互补筛选法筛选出重组子，并可通过酶切电泳及PCR检验的方法进行重组子的鉴定。
1.重组子的构建酶切时首先要了解目的基因的酶切图谱，选用的限制性内切酶不能目的基因内部有专一的识别位点，否则当用一种或两种限制性内切酶切割外源工体DNA时不能得到完整的目的基因。
其次要选择具有相应的单一酶切位点质粒或者噬菌体载体分子。
常用的酶切方法有双酶切法和单酶切法两种。
本实验采用单酶切法，即只用一种限制性内切酶切割目的DNA片段，酶切后的片段两端将产生相同的黏性末端或平末端，再选用同样的限制性内切酶处理载体。
在构建重组子时，除了形成正常的重组子外，还可能出现目的DNA片段以相反方向插入载体分子中，或目的DNA串联后再插入载体分子中，甚至出现载体分子自连，重新环化的现象。
单酶切法简单易行单是后期筛选工作比较复杂。
Cdh1和Num1过表达菌株的构建
Cdh1和Num1过表达菌株的构建1. 引言1.1 背景介绍Cdh1和Num1是细胞周期调控蛋白，它们在细菌中起着重要的调控作用。
Cdh1是一个辅助蛋白，与蛋白激酶结合后促进废弃物磷酸化并标记其降解，从而调控细胞周期的进行。
Num1也是一个蛋白质，它参与细胞极性的形成和维持，对细菌的形态和细胞极性具有重要影响。
研究Cdh1和Num1的过表达对细菌的影响，可以帮助我们更深入地了解这些蛋白在细菌中的作用机制。
构建Cdh1和Num1过表达菌株也为细菌研究提供了新的工具和途径。
通过对Cdh1和Num1的功能和作用机制进行研究，可以为未来的细菌工程和生物技术研究提供借鉴和指导。
在本文中，我们将重点介绍Cdh1和Num1的功能和作用机制，探讨它们过表达对细菌的影响，以及构建Cdh1和Num1过表达菌株的方法。
通过本文的研究和讨论，我们希望能够揭示Cdh1和Num1在细菌中的重要性，并为其潜在应用价值提供理论支持。
【字数：247】1.2 研究目的研究目的：本研究旨在探究Cdh1和Num1在细菌中的作用机制，以及它们的过表达对细菌生长的影响。
通过构建Cdh1和Num1过表达菌株，我们可以深入研究这两个蛋白在细菌中的功能和调控机制，为进一步探讨细菌生长调控提供重要参考。
我们也希望通过实验结果的分析和讨论，揭示Cdh1和Num1在细菌中的潜在应用价值，为未来的生物工程和药物研发提供新的思路和方法。
通过本研究，我们将更深入地理解细菌的生长调控机制，为探索生物学和生物技术领域的新前沿做出贡献。
2. 正文2.1 Cdh1和Num1的功能和作用机制Cdh1和Num1是细菌中的两种重要蛋白质，它们在细胞周期调控和细胞分裂中发挥着关键作用。
Cdh1是一个E3泛素连接酶，可以促使泛素化靶蛋白并将其降解，从而调控细胞周期的转变和细胞有丝分裂的进行。
Num1则是一种结构蛋白，参与了细胞极性的维持和细胞分裂的定位。
Cdh1和Num1的功能机制在很大程度上取决于其与其他蛋白质的相互作用。
Cdh1和Num1过表达菌株的构建
Cdh1和Num1过表达菌株的构建引言：随着分子生物学和基因工程技术的不断进步，人们对于基因表达调控的研究也越来越深入。
在研究生物体的生长、发育、代谢等过程中，往往需要对特定基因进行过表达或者抑制表达，以了解其功能及在生物体中的作用机制。
构建可用于过表达特定基因的细菌菌株对于生物学研究非常重要。
本文将介绍Cdh1和Num1过表达菌株的构建方法及其在生物学研究中的应用。
一、Cdh1和Num1基因简介Cdh1和Num1是两种重要的基因，它们在真核细胞中发挥着重要的功能。
Cdh1是细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）的一个相关蛋白激酶抑制剂，它参与了细胞周期的调控，特别是细胞有丝分裂期的维持。
Cdh1蛋白在细胞有丝分裂期被降解，当细胞周期进行到有丝分裂期后期时，Cdh1蛋白会逐渐被合成并积累，从而参与了细胞有丝分裂期的维持。
而Num1是真核细胞中的一个重要的质体定向运输相关蛋白，它参与了细胞内各种物质的转运及有丝分裂过程中维持细胞的形态结构等。
二、Cdh1和Num1过表达菌株的构建1. 选择适当的载体在进行基因过表达构建时，首先需要选择适当的载体。
一般来说，pGEX载体是用于在大肠杆菌中进行蛋白的过表达的一种常用载体，因此我们可以选择pGEX载体作为Cdh1和Num1基因的过表达载体。
2. 获得Cdh1和Num1基因Cdh1和Num1基因可以从合适的真核细胞来源中进行克隆，包括从已有基因库、PCR扩增或者化学合成等手段获得目标基因。
3. 将Cdh1和Num1基因插入pGEX载体将获得的Cdh1和Num1基因与pGEX载体进行重组，构建成Cdh1和Num1的过表达载体。
具体操作可以采用限制性内切酶切割和连接、PCR扩增等方法进行。
4. 将重组后的载体导入大肠杆菌将重组后的Cdh1和Num1过表达载体导入大肠杆菌中，利用大肠杆菌自身的复制及表达系统进行Cdh1和Num1基因的过表达。
这一步通常需要进行真菌体物质转导、电穿孔法、热激转化等技术。
Cdh1和Num1过表达菌株的构建
Cdh1和Num1过表达菌株的构建【摘要】本文旨在构建Cdh1和Num1过表达菌株，通过表达分析和功能验证实验探究其作用机制。
首先利用分子克隆技术建立Cdh1和Num1过表达菌株，随后进行表达分析，验证其过表达效果。
接着进行功能验证实验，探讨Cdh1和Num1在细胞周期调控中的重要性。
结果表明Cdh1和Num1的过表达可以显著影响细胞周期进程，进一步讨论其在细胞生长和分化中的作用机制。
实验总结提出了本研究的重要性，并展望未来可能的研究方向，旨在深入探究Cdh1和Num1在细胞周期调控中的作用，为相关疾病的治疗提供理论依据。
本研究为细胞周期调控领域的研究提供了新的思路和方法。
【关键词】Cdh1, Num1, 过表达菌株, 构建, 表达分析, 功能验证实验, 结果讨论, 实验总结, 展望未来1. 引言1.1 背景介绍Cdh1和Num1是酿酒酵母中重要的调控因子，分别参与细胞周期调控和细胞极性的调控。
Cdh1是一个E3泛素连接酶，参与细胞周期的负调控，调节细胞周期的前进和细胞受精后期的细胞核重组。
Num1是一种极性形成蛋白，主要参与细胞聚集和极性细胞分裂的过程。
在许多研究中，Cdh1和Num1被发现在细胞周期调控和胞器聚集中起着重要作用。
本研究旨在构建Cdh1和Num1过表达菌株，并对其进行表达分析和功能验证实验，以探究其在酵母细胞中的作用机制。
通过对这两个因子的过表达调控，有望揭示它们在细胞周期和胞器聚集调控中的具体功能，为深入理解细胞调控机制提供新的视角和参考。
1.2 研究目的研究目的：本研究旨在构建Cdh1和Num1过表达菌株，探究其在细胞生命周期调控和细胞分裂过程中的作用机制。
通过建立这两种过表达菌株，我们希望能够深入研究Cdh1和Num1在细胞周期调控中的功能，进一步揭示其对细胞周期的调节作用。
我们还将进行表达分析和功能验证实验，探究Cdh1和Num1在细胞生命周期不同阶段的表达模式及其对细胞分裂的影响。
基因突变鉴定方法
基因突变鉴定方法
基因突变听起来好神秘呢！那咱们来聊聊怎么鉴定它吧。
一种常见的方法是DNA测序啦。
就像是给DNA这个长长的“密码本”一个字一个字地看。
现在技术可发达啦，能很精准地读出DNA序列。
要是有突变，就像密码本里某个字突然变了一样，测序就能发现这个小变化。
这就好比你原本的一篇文章里，某个字被悄悄改了，一仔细读就能发现不同。
还有PCR - RFLP技术哦。
PCR就像是一个复印机，把我们想要研究的那段DNA大量复制出来。
然后RFLP就开始工作啦，它能识别特定的DNA序列，就像一把特殊的小剪刀，正常的DNA被剪出来的片段是特定的大小，如果有突变，那剪出来的片段大小就不一样啦，就像原本切得整整齐齐的蛋糕块，突然有一块形状变了。
基因芯片技术也超酷的。
想象一下，有个小小的芯片，上面有好多好多已知的基因片段。
我们把要检测的DNA放上去，如果有突变，就会和芯片上正常的片段不一样，就像拼图里有一块形状不太对，一下就能看出来。
这技术能一下子检测好多基因呢，效率很高。
另外呀，单链构象多态性分析也很有趣。
单链的DNA在正常和突变的时候，它们的形状会不一样哦。
就像正常的小蛇和突然长了个小角的小蛇，通过特殊的方法可以把这种形状的差异显示出来，这样就能知道有没有突变啦。
这些鉴定方法就像是一个个小侦探，在基因这个神秘的小世界里寻找突变的蛛丝马迹呢。
它们各有各的本事，科学家们就靠着这些方法，一点点揭开基因突变的秘密，这对研究很多疾病，还有生物的进化之类的可重要啦。
《CDH1基因启动子区DNA甲基化修饰对胰腺癌细胞的作用研究》范文
《CDH1基因启动子区DNA甲基化修饰对胰腺癌细胞的作用研究》篇一一、引言胰腺癌是一种恶性程度极高的消化系统肿瘤，其发病率和死亡率在全球范围内持续上升。
基因组DNA甲基化是一种重要的表观遗传学调控机制，其在肿瘤发生和发展过程中扮演着重要角色。
其中，CDH1基因的启动子区DNA甲基化修饰与胰腺癌的发生、发展密切相关。
本研究旨在探讨CDH1基因启动子区DNA 甲基化修饰对胰腺癌细胞的作用及其潜在机制。
二、材料与方法1. 材料本研究所用材料包括胰腺癌细胞系、正常胰腺细胞系、CDH1基因启动子区甲基化特异性引物等。
2. 方法（1）细胞培养与处理：培养胰腺癌细胞系和正常胰腺细胞系，并进行相应处理。
（2）DNA提取与纯化：提取细胞DNA，进行纯化处理。
（3）甲基化特异性PCR：利用甲基化特异性引物，对CDH1基因启动子区进行甲基化特异性PCR扩增。
（4）生物信息学分析：对PCR产物进行测序和生物信息学分析。
（5）功能实验：通过转染技术，在胰腺癌细胞中过表达或敲除CDH1基因，观察其对细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。
三、结果1. CDH1基因启动子区DNA甲基化水平本研究发现，胰腺癌细胞中CDH1基因启动子区的DNA甲基化水平显著高于正常胰腺细胞。
甲基化特异性PCR和测序结果证实了这一发现。
2. CDH1基因表达水平CDH1基因启动子区DNA高甲基化与CDH1基因表达下调密切相关。
在胰腺癌细胞中，CDH1基因的表达水平显著低于正常胰腺细胞。
3. CDH1基因对胰腺癌细胞的作用通过功能实验发现，过表达CDH1基因能够抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭等生物学行为，而敲除CDH1基因则促进这些生物学行为。
这表明CDH1基因在胰腺癌细胞的生长和转移过程中发挥着重要作用。
4. 生物信息学分析结果生物信息学分析发现，CDH1基因启动子区DNA甲基化可能与多种信号通路和转录因子相关，这些信号通路和转录因子在胰腺癌的发生和发展过程中发挥着重要作用。
BC022687基因原核及真核重组质粒的构建及表达的开题报告
BC022687基因原核及真核重组质粒的构建及表达的开题报告一、选题背景及意义基因工程技术是现代生物科学领域中一项重要的技术，可以改变生物体的遗传性状和代谢特性，从而实现人类对生物体的控制和利用。
其中，原核和真核重组质粒的构建及表达是基因工程技术中常用的手段之一，广泛应用于药物研发、工业生产、农业等领域。
而BC022687基因是近年来发现的一种与肿瘤相关的新基因，其调节机制和生物学功能正受到越来越多的关注。
因此，构建和表达BC022687基因原核和真核重组质粒具有重要的研究意义和应用前景。
二、研究内容和方法1. 原核和真核重组质粒的构建：根据BC022687基因的序列设计引物，利用PCR扩增目的序列，并将其克隆入适当的质粒载体中。
其中，原核重组质粒常利用大肠杆菌等细菌作为宿主，可采用pUC、pET等常用的质粒载体；而真核重组质粒常利用哺乳动物细胞作为宿主，可采用pcDNA、pEGFP等常用的质粒载体。
2. 重组质粒的转化：将构建好的重组质粒转化至细菌或哺乳动物细胞中，利用细胞自身的DNA复制和表达机制进行生物学特性和功能的研究。
3. 重组蛋白的表达和纯化：对表达BC022687基因的细胞进行培养和诱导，收集细胞上清液或细胞内包涵体，进行蛋白纯化和鉴定。
常用的纯化方法包括亲和层析、凝胶过滤、离子交换、逆流层析等。
4. 蛋白的功能鉴定：对纯化得到的BC022687蛋白进行功能鉴定，探究其在肿瘤形成和发展等方面的生物学功能和调节机制，采用细胞生物学和分子生物学等多种方法进行分析。
三、预期结果及意义通过建立BC022687基因原核和真核重组质粒的体系，可以对该基因的生物学特征及其在肿瘤形成和发展等方面的调节机制进行深入研究，从而为肿瘤治疗和预防提供理论依据和实验基础。
同时，这项工作的成功也将丰富基因工程技术的应用和发展，并推动其在生物医药、生物产业等领域的广泛应用。
CDH1基因
CDH1基因突变诊断研究进展摘要：E-钙黏蛋白(cadherin)基因（CDH1基因）外显子突变是目前已知的、导致HDGC等多种肿瘤发病的最重要因素, 筛查其突变情况可以用于指导肿瘤的临床诊治，CDH1基因的其他改变, 如内含子突变、基因甲基化及单核苷酸多态性也可能影响其表达,但这些改变与肿瘤诊断的关系尚需进一步研究。
关键词：E-钙黏蛋白；CDH1基因；肿瘤诊断CDH1基因是位于染色体16q22.1的一种肿瘤抑制基因。
它的功能是E-cadherin的编码。
E-cadherin是依赖性粘附的钙粘蛋白家族成员。
E-钙粘蛋白的蛋白质被发现在上皮细胞，表示在人类发展的早期阶段。
E-钙黏蛋白(cadherin)基因（CDH1基因）的损失和上皮相关的变化细胞粘附和运动已注意到在数种癌症，包括胃癌，大肠癌，乳腺癌和卵巢癌。
本文综述了E-钙黏蛋白(cadherin)基因（CDH1基因）在肿瘤诊治方面的研究进展。
1.动物模型检测Irina V.Kovtun_, Kimberly J.Harris3, Aminah Jatoi1【1】研究了在妇科肿瘤中E-cadherin的表达情况。
通过敲除MMR基因，引起DNA错配修复（MMR）而发生妇科肿瘤小鼠模型，发现E-cadherin和DNA结合中断MMR途径增加子宫内膜肿瘤的发病率老鼠。
E-cadherin的启动子区的序列分析证明了E-cadherin表达的损失是由失活突变引起的，这意味着E-cadherin是一个突变靶向的Msh2-缺陷小鼠。
Msh2（2/2）/ CDH1（1/2）的小鼠提供妇科肿瘤发生的一个很好的模式，可能有助于测试分子靶向特异性治疗。
艾斯克尔·吐拉洪,陈凯,邓大伟【2】建立裸鼠低位直肠癌淋巴结转移模型，检测E-钙黏蛋白在裸鼠低位直肠癌淋巴结转移模型中的表达，探讨其在直肠癌淋巴结转移过程中的作用。
发现E-钙黏蛋白表达的减弱或缺失，导致肿瘤细胞间黏附性降低，诱导EMT发生，可促进肿瘤细胞获得侵袭和转移的能力，进而促进了肿瘤的浸润及淋巴结转移，但其具体作用机制还不十分清楚，仍有待于进一步研究。
人PDCD4启动子真核报告质粒的构建和鉴定
第48卷 第5期 V ol.48 N o.5 山 东 大 学 学 报 (医 学 版)JOU RNAL O F SHANDOO G UN I V ERS ITY(H EAL TH SC IEN C ES)2010年5月 M ay2010 收稿日期:2009212221基金项目:中国博士后科学基金(2006BS03064)。
作者简介:刘凤鸣(1985-),男,硕士研究生,主要从事肿瘤免疫研究。
通讯作者:张利宁(1960-),女,教授,博士生导师,主要从事免疫调节与疾病研究。
E2m ail:zhang-lining@hot m 文章编号:1671-7554(2010)05-0032-04人P DCD4启动子真核报告质粒的构建和鉴定刘凤鸣,张霞,宋兴国,姜杨,张利宁(山东大学医学院免疫学研究所,济南250012)摘要:目的 克隆人程序性死亡因子4(PD CD4)基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,其活性,为进一步研究PD CD4表达调控奠定基础。
方法 采用PCR技术,从人基因组DNA中扩增出PD CD4启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL42B asic中,测序所扩增的DNA序列,并将构建的pGL42PD CD42P1荧光素酶报告质粒,与内参照pRL2TK用脂质体法瞬时共转染OV CA R3,S KOV3细胞系,通过双荧光素酶活性检测确定其启动子活性。
结果 测序结果表明,扩增的PD CD4启动子序列正确,pGL42PD CD42P1转染OV CA R3细胞(高表达内源性PD CD4)24h后,双荧光素酶活性检测显示其启动子相对活性约为pGL42B asic空载体的67倍;而pGL42PD CD42P1转染低表达内源性PD CD4的S KOV3细胞后相对活性约为15倍。
结论 成功构建PDCD4启动子的克隆及人PD CD4启动子报告基因,为后续研究奠定了基础。
关键词:程度性死亡因子4;启动子;荧光素酶;报告基因中图分类号:Q344.14 文献标志码:AConstruction and identification of the hum an P DCD4p ro m otorluciferase reporter p las m idL I U Feng2m ing,ZHAN G X ia,SON G X ing2guo,J I AN G Yang,ZHAN G L i2ning(Institute of I mm unology,School of M edicine,Shandong U niversity,J inan250012,C hina)Abstract:O bjecti ve To construct the hum an p rogramm ed cell death4p rom otor luciferase reporter gene vector and de2 tect its activity in cells.M ethods The PD CD4p rom otor from hum an genom ic DNA w as am p lified by PCR,and w as inserted into the luciferase report gene pGL42basic vector.The am p lified DNA sequence w as confir m ed by sequencing.To detect the transcrip tional activity of hum an PD CD42P1in the p lasm id,transient transfection w as perfor m ed in differ2 ent cell lines,and pRL2TK w as used to deter m ine the transfection efficiency.Results The sequencing results indicated that the am p lified sequence w as correct.The results of transient transfection show ed that the recom binant p lasm id could be highly exp ressed in the OV CA R3cell line w hich could highly exp ress endogenous PDCD4,but low ly in the SKOV3 cell line in w hich low ly exp ressed endogenous PD CD4could be detected.Conclusi on The hum an PD CD4p rom otor luciferase reporter gene vector w as successfully constructed,w hich lays an experi m ental foundation for further study.Key words:Programm ed cell death4;P rom otor;L uciferase;R eporter gene 程序性细胞死亡因子4(p rogramm ed cell death 4,PD CD4)基因是在细胞凋亡中因一种表达特异的蛋白质而鉴别出来的一种抑癌基因,可以抑制蛋白的转录和翻译,进而抑制肿瘤细胞的生长。
突变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定
质粒pBluescript-Cdh1上突变为G，但氨基酸无变化，为同义突变，其他DNA序列无突变。经测序鉴
定pBluescript-Cdh1-4A40、121、151、163突变质粒第40、121、151、163位氨基酸全部突变为丙氨酸。提
示实验成功构建磷酸化位点突变型Cdh1基因真核表达质粒。
关键词：组织构建；组织构建细胞学实验；细胞周期末期促进复合物；Cdh1；定点突变；聚合酶联反应；真核表达质粒；神经系统；发育；神经损伤修复；基因治疗；国家自然科学基金；
细胞周期末期促进复合物调节亚基cdh1的活性受到磷酸化调节磷酸化的cdh1能与细胞周期末期促进复合物结合从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性
中国组织工程研究 2013,Vol. 17 Issue (2): 315-319
DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.02.023
of the anaphase promoting complex.
OBJECTIVE:To construct and identify a mutated-Cdh1 eukaryotic expressing vector.
Cdh1和Num1过表达菌株的构建
Cdh1和Num1过表达菌株的构建李巧巧;庞文颖;海力;唐仙英【摘要】[目的]研究Cdh1和Num1之间是否存在相互作用,构建用于Cdh1和Num1免疫共沉淀试验的过表达菌株.[方法]首先在酵母菌株YWL630中用GAL1和3HA对CDH1进行标记,构建GAL1-3HA-CDH1 NUM1-GFP菌株,再利用酵母四分体解离的方法使菌株YWL63和YWL490分别与该菌株杂交并进行四分体解离,从而得到所需菌株.[结果]成功构建不同基因型和配型的重组酵母菌株,其中YT52成功过表达了约340 kD的Num1,YT53成功过表达了340 kD的Num1和75 kD的Cdh1,YT57成功过表达了75 kD的Cdh1.[结论]经过同源重组的方法成功标记CDH1并诱导蛋白过表达,通过酵母四分体解离的方法构建用于Cdh1和Num1互作试验的过表达菌株,为揭示APC/C是否介导Num1的降解及机制奠定基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2019(047)010【总页数】5页(P1-4,9)【关键词】过表达;酵母四分体解离;Cdh1;Num1【作者】李巧巧;庞文颖;海力;唐仙英【作者单位】中南民族大学生命科学学院,武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室,生物技术国家民委重点实验室,湖北武汉430074;中南民族大学生命科学学院,武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室,生物技术国家民委重点实验室,湖北武汉430074;中南民族大学生命科学学院,武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室,生物技术国家民委重点实验室,湖北武汉430074;中南民族大学生命科学学院,武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室,生物技术国家民委重点实验室,湖北武汉430074【正文语种】中文【中图分类】Q26在不对称细胞分裂期间，有丝分裂纺锤体必须正确适当地定向，以确保细胞命运决定因子准确地分配到每个子细胞[1]。
人突变型IκBα真核表达质粒的构建和鉴定
人突变型IκBα真核表达质粒的构建和鉴定秦涛;郑启昌;王继亮;卢欣;张勇【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2005(18)10【摘要】目的:构建人突变型IκBα真核表达质粒. 方法:应用RT-PCR及重叠延伸PCR技术,得到点突变的人M, 并定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体,酶切和DNA序列测定鉴定. 结果:经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒PcDNA3.0-IκBαM构建正确. 结论:真核表达质粒PcDNA3.0-IκBαM构建成功,为进一步研究其生物功能打下基础.【总页数】3页(P872-874)【作者】秦涛;郑启昌;王继亮;卢欣;张勇【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,湖北,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,湖北,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,湖北,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,湖北,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,湖北,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】Q517【相关文献】1.人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建与表达 [J], 胡计华;吴晓云;杨晓菲;郑敏;邓兵;田杰2.利用Gateway技术构建神经元特异性人apoE4(1-272)真核表达质粒及鉴定 [J], 李子希;卢颖洁;刘晓峰;冯曾义;陈娟3.突变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定 [J], 李立;石小云;张登文;张传汉;姚文龙;4.突变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定*☆ [J], 李立;石小云;张登文;张传汉;姚文龙5.野生型和A294G突变型血管紧张素转换酶2基因真核表达质粒构建与鉴定 [J], 雷和平;姚轻舟;刘居理;林秋雄;邓春玉;朱杰宁;余细勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HBV YIDD变异株真核表达载体的构建及鉴定
HBV YIDD变异株真核表达载体的构建及鉴定徐维祯;李迪;李桂秋;张淑云;房勇;谷鸿喜【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2007(27)5【摘要】构建HBV C基因型YIDD拉米夫定耐药株的全基因真核表达载体,为进一步深入探讨乙型肝炎病毒拉米夫定耐药的分子机制,寻求耐药后的有效治疗奠定基础.以重组质粒PMD18T-HBV-C为模板,采用PCR扩增HBV C基因型YIDD变异株的全基因组DNA,并将其定向克隆于真核表达载体PcDNA3.1(+)中.获得的真核表达重组质粒PcDNA3.1(+)-HBV-C(YIDD)通过酶切后电泳及测序进行鉴定.琼脂糖电泳结果证实PCR产物大小约为 3.2 kb,与预期相同.酶切及测序结果证实,HBV C基因型YIDD拉米夫定耐药株全基因真核表达载体PcDNA3.1(+)-HBV-C(YIDD)构建成功.【总页数】4页(P39-42)【作者】徐维祯;李迪;李桂秋;张淑云;房勇;谷鸿喜【作者单位】哈尔滨医科大学,微生物教研室,黑龙江,哈尔滨,150081;哈尔滨医科大学,微生物教研室,黑龙江,哈尔滨,150081;哈尔滨医科大学,微生物教研室,黑龙江,哈尔滨,150081;哈尔滨医科大学,微生物教研室,黑龙江,哈尔滨,150081;哈尔滨医科大学,微生物教研室,黑龙江,哈尔滨,150081;哈尔滨医科大学,微生物教研室,黑龙江,哈尔滨,150081【正文语种】中文【中图分类】R512.6【相关文献】1.HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及在Cos7细胞中的表达 [J], 林裕龙;王战会;孙剑;阎丽2.HBV.CP—β—IFN真核表达载体的构建及鉴定 [J], 张斌;潘欣3.HBV A83点变异真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达 [J], 林裕龙;王战会;侯金林;孙剑;阎丽;骆抗先4.HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及对HBeAg表达的影响 [J], 林裕龙;侯金林;王战会;孙剑;阎丽;骆抗先5.1.3倍体HBV YIDD变异株真核表达载体构建及鉴定 [J], 郑立运;周玉冰;杨小昂;江金花;王宁;张艳;王庆端因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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列两端引入的酶切位点以及KOZAK序列，与预期相符。重组质粒pBluescript-Cdh1经EcoRⅠ和XbaⅠ
双酶切鉴定与预期结果符合。DNA测序比对发现Cdh1(BC162059.1)编码序列第930位碱基A在重组
收稿日期:2012-05-09
中图分类号:
R318
基金资助:国家自然科学基金(81000476)。
研究亮点:
实验通过定点突变技术将Cdh1的4个磷酸化位点(丝氨酸与苏氨酸)全部突变为丙氨酸，突变型Cdh1可避免细胞周期蛋白激酶的调节。经测序鉴定磷酸化位点突变型的Cdh1真核表达载体构建成功，为后续进一步研究Cdh1功能奠定了实验基础。
Abstract：
BACKGROUND:The activity of anaphase promoting complex-Cdh1 is regulated by phosphorylation.
Phosphorylated Cdh1 cannot be combined with anaphase promoting complex, thereby inhibiting the activity
Key words：tissue construction;cytological experiments of tissue construction;anaphase promoting complex;Cdh1;site-directed mutagenesis;PCR;eukaryotic expression plasmid;nervous system;development;nerve repair;gene therapy;National Natural Science Foundation of China;
质粒pBluescript-Cdh1上突变为G，但氨基酸无变化，为同义突变，其他DNA序列无突变。经测序鉴
定pBluescript-Cdh1-4A40、121、151、163突变质粒第40、121、151、163位氨基酸全部突变为丙氨酸。提
示实验成功构建磷酸化位点突变型Cdh1基因真核表达质粒。
关键词：组织构建；组织构建细胞学实验；细胞周期末期促进复合物；Cdh1；定点突变；聚合酶联反应；真核表达质粒；神经系统；发育；神经损伤修复；基因治疗；国家自然科学基金；
RESULTS AND CONCLUSION:The PCR product was about 1 500 bp by electrophoresis, including the entire coding sequence of Cdh1, restriction sites at both ends of Cdh1 and KOZAK sequence. The recombinant pBluescript-Cdh1 plasmid was identified by digestion with restriction endonuclease EcoR1 and Xba1, which was consistent with the expected results. DNA sequencing showed that A at the 930th base of Cdh1 (BC162059.1) coding sequence was mutated to G in the recombinant plasmid of pBluescript-Cdh1. But the sequence of amino acids was not affected. The 40, 121, 151, 163 amino acids in pBluescript-Cdh1-4A40, 121, 151, 163 mutant plasmids were all mutated to alanine. The mutated Cdh1 gene expressing plasmid at phosphorylation site was successfully constructed, which provides a good foundation for further studies of Cdh1 gene function.
中国组织工程研究 2013,Vol. 17 Issue (2): 315-319
DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.20变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定
Construction and identification of a mutated-Cdh1 eukaryotic expressing vector
of the anaphase promoting complex.
OBJECTIVE:To construct and identify a mutated-Cdh1 eukaryotic expressing vector.
METHODS:The entire coding sequence of the Cdh1 gene was amplified from rat hippocampal mRNA by reverse transcription-PCR. Then the PCR product of Cdh1 was cloned into pBluescript plasmid by double digestion with restrictionendonucleases EcoR1 and Xba1, and ligation. Based on site-directed mutagenesis, the pBluescript-Cdh1 plasmid containing Cdh1 coding sequence was used as a template. The 40, 151, 163 serine (S) and 121 threonine (T) in Cdh1 gene was mutated to alanine (A) by multiple PCR with four pairs of mutated primers. The mutated Cdh1 vector was identified by DNA sequencing.
全文:PDF
摘要
背景：细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1的活性受到磷酸化调节，磷酸化的Cdh1不能与细胞周期末期促进复合物结合，从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性。
目的：构建突变型Cdh1基因真核表达质粒及鉴定。
方法：采用RT-PCR方法，从大鼠海马组织扩增出Cdh1基因编码序列。通过限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切PCR回收产物和pBluescript质粒将Cdh1基因克隆到pBluescript质粒上。根据定点突变技术原理，以含Cdh1编码序列的pBluescript-Cdh1质粒为模版，针对Cdh1第40、151、163位丝氨酸(S)和第121位苏氨酸(T)设计4对突变引物，将4个氨基酸位点全部突变为丙氨酸(A)。最后通过测序鉴定。