氯霉素眼药水的高效液相色谱分析参考课件
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色谱条件：
色谱仪 岛津LC-15C高效液相色谱 色谱柱 C18柱（5µm，150×4.6mm或250×4.6mm） 柱温 室温 流动相 甲醇∶水（60∶40）（150短柱）
甲醇∶水（80∶20）（250长柱） 流速 1.000ml/min 波长 272nm
7
3、色谱测试
泵
泵
用清洗溶剂清洗
柱
柱
微量进样针三次，用 待测溶液润洗三次， 吸取待测溶液25μL， 进样，得色谱图。
氯霉素 2
外标标准曲线法
眼药水稀 释液
成份 A
一系列已 知浓度的 氯霉素溶 液
峰面积A样品
成份 A
峰面积A对照
色谱定量： 峰面积与样品浓度 成正比。
Ai
பைடு நூலகம்
浓度： C1，C2，C3，C4，C5
峰面积：A1，A2，A3，A4，A5
3C
液相色谱的基本流程图
流动相 预备柱
进样阀 色谱柱
高压泵 泵输液 进样
2、眼药水样品配制 精密吸取眼药水0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至
刻度。 5
色谱操作步骤：
1、依次打开检测器、泵的开关 2、打开电脑主机，打开操作界面 3、排气泡 4、设置色谱条件，打开泵开关 5、让流动相冲洗色谱系统，至色谱基线水平，约半小时 6、基线调零，填写数据文件名及信息 7、进样并记录数据 8、数据处理及打印报告 9、冲洗色谱系统约半小时，关机。
药物分析实验十
氯霉素眼药水的高效液相色谱分析
1
眼药水中的氯霉素的测定
氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素， 辅料为硼酸、硼砂、氯化钠、防腐剂 等，为无色或几乎无色的澄明液体。
测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含 量，由于滴眼液中存在的辅料的干扰， 首先要分离得到氯霉素的纯样品。因 此，采用高效液相色谱法来进行测试， 用外标标准曲线法定量。
分离
检测器
AB C DE F G
检测
计算机 4
氯霉素含量的测定
1、对照品溶液配制
精密称取5.0mg氯霉素样品于10mL容量瓶中，用甲醇溶 解定容，配成0.1mg/mL母液。分别移取1mL，2mL，3mL， 4mL，5mL母液于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成 0.01，0.02，0.03，0.04，0.05mg/mL的标准溶液。
排放 进样
排放 进样
六通阀 定量环
Inject：插入针头
Load：打入样品
Inject：样品进入色谱
8
数据记录
标准曲线：隔两分钟进样一 次，浓度从低到高，记录在 一张谱图上。第二次进样时 断开六通阀进样感应。
样品曲线：单独进样，单 独记录谱图。
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色谱条件：
色谱仪 岛津LC-15C高效液相色谱 色谱柱 C18柱（5µm，150×4.6mm或250×4.6mm） 柱温 室温 流动相 甲醇∶水（60∶40）（150短柱）
甲醇∶水（80∶20）（250长柱） 流速 1.000ml/min 波长 272nm
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3、色谱测试
泵
泵
用清洗溶剂清洗
柱
柱
微量进样针三次，用 待测溶液润洗三次， 吸取待测溶液25μL， 进样，得色谱图。
氯霉素 2
外标标准曲线法
眼药水稀 释液
成份 A
一系列已 知浓度的 氯霉素溶 液
峰面积A样品
成份 A
峰面积A对照
色谱定量： 峰面积与样品浓度 成正比。
Ai
பைடு நூலகம்
浓度： C1，C2，C3，C4，C5
峰面积：A1，A2，A3，A4，A5
3C
液相色谱的基本流程图
流动相 预备柱
进样阀 色谱柱
高压泵 泵输液 进样
2、眼药水样品配制 精密吸取眼药水0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至
刻度。 5
色谱操作步骤：
1、依次打开检测器、泵的开关 2、打开电脑主机，打开操作界面 3、排气泡 4、设置色谱条件，打开泵开关 5、让流动相冲洗色谱系统，至色谱基线水平，约半小时 6、基线调零，填写数据文件名及信息 7、进样并记录数据 8、数据处理及打印报告 9、冲洗色谱系统约半小时，关机。
药物分析实验十
氯霉素眼药水的高效液相色谱分析
1
眼药水中的氯霉素的测定
氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素， 辅料为硼酸、硼砂、氯化钠、防腐剂 等，为无色或几乎无色的澄明液体。
测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含 量，由于滴眼液中存在的辅料的干扰， 首先要分离得到氯霉素的纯样品。因 此，采用高效液相色谱法来进行测试， 用外标标准曲线法定量。
分离
检测器
AB C DE F G
检测
计算机 4
氯霉素含量的测定
1、对照品溶液配制
精密称取5.0mg氯霉素样品于10mL容量瓶中，用甲醇溶 解定容，配成0.1mg/mL母液。分别移取1mL，2mL，3mL， 4mL，5mL母液于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成 0.01，0.02，0.03，0.04，0.05mg/mL的标准溶液。
排放 进样
排放 进样
六通阀 定量环
Inject：插入针头
Load：打入样品
Inject：样品进入色谱
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数据记录
标准曲线：隔两分钟进样一 次，浓度从低到高，记录在 一张谱图上。第二次进样时 断开六通阀进样感应。
样品曲线：单独进样，单 独记录谱图。
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