01-5微生物检验室沉降菌测试记录表
沉降菌测试标准操作规程
版本号
修订原因
修订日期
01
新订
附录
测试区域 测试依据 测试日期
沉降菌测试记录
编码：SOP-ZL-HJ-006-01-R1
测试人员 培养基用量
测试状态
培养时间
培养温度
报告日期
测试房间
现场操 采样点
房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
符合规定
更鞋间
PLES123
8.1将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个
打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
8.2静态测试时，培养皿暴露时间为30min，动态测试时，培养皿暴露时
间为不大于4h。
9、培养：取样结束后将平皿倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并
以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
10、结果计算
培养时间
报告日期现场操 采样点Fra bibliotek房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
更衣 PLEQ003
缓冲间1 PLEQ004
取样间 PLEQ005
缓冲间2 PLEQ006 阴性对照
洁净度级别
AB
C
标准
＜1 5
50
沉降菌
警戒限
-- 3
40
cfu/4小时
纠偏限
-- 4
二更2 PLEZ122
缓冲间1 PLEZ123
缓冲间2 PLEZ124
微生物限度 室
PLEZ125
净化操作台 PLEZ125
阳性对照室 PLEZ126
EKSOP-QC9007车间洁净区悬浮粒子和沉降菌检查操作规程
方法。
二、范围：本规程适用于车间洁净区悬浮粒子和沉降菌检查项的检测操作。
三、职责：化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程微生物室检验员：负责对本规程的实施。
四、内容：1、悬浮粒子1.1、测定目标车间洁净区悬浮粒子1.1.1悬浮粒子可悬浮在空气中的尺寸一般在0.001～1000um之间的固态和液态或两者的混合物质1.1.2洁净度洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
1.2、测定方式：静态测试洁净区(室)净化空气调节系统已处于正常运行状态，洁净区(室)内没有工作人员的情况下进行的测试。
1.3、测试方法：本测试方法采用计数浓度法，即通过测定洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径的悬浮粒子数，来评定洁净区(室)的悬浮粒子洁净度等级。
1.3.1仪器：悬浮粒子计数器1.3.2工作原理本仪器根据悬浮粒子的光散射原理，即空气中的尘埃粒子在一定强度的光束照射下，向其周围空间散射出与其粒径成一定比例关系的光通量的原理而设计的。
1.3.3使用要点：使用仪器时应严格按照仪器说明书操作。
1.3.3.1仪器开机，预热至稳定后，方可按说明书的规定对仪器进行校正。
1.3.3.2采样管口置采样点采样时，在确认计数稳定后方可开始连续读数。
1.3.3.3采样管必须干净，严禁渗漏。
1.3.3.4采样管的长度应根据仪器的允许长度。
1.3.3.5计数器采样口和仪器工作位置应处在同一气压和温度下，以免产生测量误差。
1.3.3.6必须按照仪器的检定周期，定期对仪器作校准，以保证测试数据的可靠性。
1.3.4测试条件1.3.4.1温度和相对湿度洁净区(室)的温度控制在18～26℃，相对湿度控制在45％～65％之间为宜。
空气洁净度不同的洁净区(室)之间的压差为≥10Pa，空气洁净度级别要求高的洁净区(室)对相邻的空气洁净度级别低的洁净区(室)一般要求呈相对正压。
1.3.5测试状态1.3.5.1静态测试时，室内测试人员不得多于2人，其设备设施处于静止状态。
药企洁净区沉降菌测定操作规程
范围：各生产车间、化验室。
责任人：质控部检验员。
正文：1 标准依据：ISO14644-1,新版《药品生产质量管理规范》。
2 微生物监测的标准：为评估无菌生产的微生物状况，应对微生物进行动态监测，监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如：棉签擦拭法和接触碟法）等。
动态取样应避免对洁净区造成不良影响，对表面和操作人员的监测，应在关键操作完成后进行。
在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。
2.1 微生物监测的动态标准洁净区微生物监测的动态标准如下：（2）单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。
3 测试方法3.1 方法概述本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
3.2 所用的仪器和设备3.2.1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器标准操作维修保养规程。
3.2.2 恒温培养箱定期对培养箱进行检定。
3.2.3 培养皿一般采用 90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
3.2.4 培养基普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。
其配制方法见附录A（标准的附录）。
3.3 测试步骤3.3.1 采样方法将已制备好的培养皿按4.4.1的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
3.3.2 培养3.3.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
3.3.2.2 在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。
3.3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照培养。
3.3.3 菌落计数3.3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不得遗漏。
沉降菌检验标准操作规程
01.0目的01.1阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。
02.0适用范围02.1适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。
03.0人员职责测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。
04.0内容04.1术语和定义下列术语和定义适用于本规程。
04.1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表示。
04.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。
04.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表示。
04.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。
04.4测试方法：04.4.1使用设备与材料高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。
恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。
培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好的培养基平皿应放在2-8℃的环境中存放。
清洁剂：75%酒精04.4.2测试时间：（1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
（3）培养皿的采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4小时。
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室
无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室验证方案编号：无菌检验室微生物限度检验室阳性对照检验室空气净化系统验证方案验证方案起草人：日期：验证方案批准人：日期：企业名称年月目录1．引言1．1概述1．2验证的目的2．验证标准3．检验室的自净器和层流罩安装确认4．检验室的自净器和层流罩运行确认4．1风速测定4．2压差测定4．3温湿度测定5．洁净度测定5．1悬浮粒子测定5．2沉降菌测定6．验证结果及评价7．责任8．时间安排1．引言1．1概述无菌检验室是专供医疗器械无菌检验用，微生物限度检验室是专供医疗器械微生物检验用，阳性对照检验室是专供医疗器械菌检时阳性对照实验用，这三个实验室专用。
,检验室顶棚安装自净器一台,向室内送洁净空气,洁净级别为10000级,室内还安装层流罩一个,层流罩下洁净级别为100级。
1．2验证的目的1.2.1检查并确认检验室的自净器层流罩的安装符合设计要求。
1.2.2检测并确认检验室的自净器层流罩的运行性能应能达到药品菌检要求及验证标准。
1.2.3洁净度测试,确认检验室能达到规定的洁净度。
2．验证标准洁净级别项目10000级100级压差Pa5Pa尘埃粒子/M3≥0.5μm ≥5μm ≤3500000≤20000≤3500沉降菌CFU/皿≤10≤1温度/相对湿度18～26℃/45～65%3．检验室的自净器和层流罩安装确认3．1部件安装确认部件名称设计要求安装情况风机风量 1000m3/h 风压 150Pa电机功率 2.2kw高效空气过滤器480×4804个层流罩BCZⅡ-1220/6101个部件名称设计要求安装情况风机风量 1000m3/h 风压 150Pa 电机功率 2.2kw高效空气过滤器480×4804个层流罩BCZⅡ-1220/6101个部件名称设计要求安装情况风机风量 1000m3/h 风压 150Pa 电机功率 2.2kw高效空气过滤器480×4804个层流罩BCZⅡ-1220/6101个检查人: 日期:3．2高效过滤器的检漏测试采用尘埃粒子计数器对高效过滤器进行检漏测试，采样头离过滤器距离约2cm，沿过滤器出风侧及内边框来回扫描。
沉降菌测试方法
三、钙盐
1、配制标准溶液：
称取分析纯草酸铵3.5g，定溶至100ml容量瓶，贴标签。
2、分析：取样50ml平等样2份，倒入试管中，加2ml草酸铵溶液，均不得发生浑浊。
四、二氧化碳
1、配制标准溶液：
称取分析纯氢氧化钙0.3g，定溶至100ml容量瓶，用橡皮塞塞紧，用力振摇，放置1小时，用时取清液。
2、硫乙醇酸盐流体培养基（细菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水，煮沸，摇匀，分装至适宜的容器中，瓶塞封口，灭菌。硫乙醇酸盐流体培养基置33℃培养48小时，应无菌生长。
改良马丁培养基（真菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水，煮沸，摇匀，分装，灭菌。改良马丁培养基置24℃培养72小时，应无菌生长。
一、氯化物
1、配制标准溶液：0.1mol/L硝酸银溶液。
称取1.6987g分析纯硝酸银，定溶至100ml容量瓶中，转入棕色试剂瓶中，避光保存，贴标签。
2、取样，量取50ml样品水平行样（2份）倒入试管中，加5滴硝酸，再加入1ml硝酸银。均不得发生浑浊。
二、硫酸盐
1、配制标准溶液：称取5±0.5g氯化钡（分析纯），定溶至100ml容量瓶，倒入试剂瓶，贴标签。（如果浑浊，把蒸馏水烧开，放凉再用）
临用前，精确量取铅标准贮备液稀释至所需浓度。
2、分析：取样40ml，加醋酸盐缓冲液2ml，加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟。取38ml样品水加2ml铅标液加醋酸盐缓冲液2ml加硫代乙酰胺2ml，对比颜色；40ml样品水的颜色不得比铅标液的对照管深。（铅的含量0.00005%）
八、不挥发物：
1、取干净蒸发皿200ml2个，分别标号放入105℃干燥箱中。
三大系统微生物检测时间
男二更
手消毒
洗衣间
收膏一
收膏二
称量装桶
前室一
收药间
气锁一
混合间
暂存间
称量装桶二
干燥一
浸膏粉碎
干燥二
干燥三
内包材存放
洁具清洗存放
消毒液配制
容器具清洗
容器具存放
检验时间
检测安排时间
培养基配制时间
微生物报告时间
培养基配制数量
菌种的传代时间
2016年02月16日
2016年02月12日
2016年02月21日
干燥后室
冲浆
包衣
包衣
配浆
中检
洗衣
总混
第一周期，第二周期，分别以一周七天为一周期，每个纯化水取样点一天一次，每个取样点做两个平行样。第三周期为一年监测期，每周总送、总回、总出检测一次，每个月内检测所有的剩余的纯化水点
检验时间
第一周期（第一个星期）
检测安排时间
培养基配制时间
微生物报告时间
培养基配制数量
菌种的传代时间
7000ml(沉降菌、浮游菌、表面微生物检测)
微生物挑战实验2015年11月29日
2015年12月02日
2015年11月28日
2015年12月07日
7000ml(沉降菌、浮游菌、表面微生物检测)
微生物挑战实验2015年11月30日
2015年12月03日
2015年11月29日
2015年12月08日
7000ml(沉降菌、浮游菌、表面微生物检测)
微生物挑战实验2015年12月01日
2016年03月03日(日常监测)
2016年02月28日
2016年03月08日
微生物检验室确认方案资料
微生物限度检测室确认方案文件编号：STP-QR-CF-002-00微生物限度检测室确认方案1 概述微生物限度检查的全过程，均应遵守无菌操作，严防再污染。
因此，微生物限度检査宜在环境洁净度C 级下的局部洁净度A 级的单向流空气区域内进行；限度检查实验室应配有相应的人流和物流缓冲间或传递窗（柜），并定期作环境监测。
将确认的微生物限度检测室是按GMP（2010年修订）的要求在原有微生物限度检测室基础上改建而成的，原洁净级别为一万级。
在前验证及再验证中，原微生物限度检查室空调净化系统在运行过程中已被证实可完全符合一万级洁净级别要求，现该系统经改造后其性能是否能符合GMP（2010年修订）的要求，我们需通过再验证加以确认。
1.1 验证目的确认微生物限度检测室空气净化系统在改造后其性能是否已优化，在运行过程中和灭菌后洁净度是否符合规定的洁净级别要求。
1.2 验证形式再验证。
1.3 风险评估与验证范围1.3.1 系统影响性评估根据《确认与验证风险评估管理规程》，我们对微生物限度检测室进行系统影响性评估。
经评估，因微生物限度检测室的正常运行或控制用于提供判定产品放行的数据，故微生物限度检测室为直接影响系统，需按GMP的要求进行确认。
1.3.2 微生物限度检测室部件关键性评估及关键性部件风险评估1.3.2.1评估目的1.3.2.1.1 对直接影响系统的部件进行关键性评估，以确定哪些部件是关键的。
1.3.2.1.2 通过对“直接影响系统”的关键性部件（对判定产品放行数据有影响）进行风险评估，确定其在整个系统中的风险程度，并建议控制措施降低其风险,。
1.3.2.1.3 根据评估结果确定确认中的测试项目、范围和程度。
1.3.2.2 评估依据1.3.2.2.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）；1.3.2.2.2《调试与确认基准指南》（国际制药工业协会（ISPE）发布）；1.3.2.2.3《确认与验证风险评估管理规程》。
医疗器械微生物检验
18
菌种 #2022
• 大肠埃希菌
［CMCC（B）44 102］
• 金黄色葡萄球菌 ［CMCC（B） 26 003］
• 枯草芽孢杆菌 ［CMCC（B） 63 501］
计数培养基 • 白色念珠菌
大肠埃希菌2个平皿
枯草芽孢杆菌2个平皿
计数培养基适用 玫瑰红钠琼脂培养基
白色念珠菌2个平皿
性检查
黑典霉2个平皿
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基：白色念珠菌2个平皿 用相同的对照培养基替代被检培养基做对照
21
计数培养基适用性检查
结果判定
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落 平均数的70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落 一致，判该培养基的适用性检查符合规定。
14
培养基
标准菌株处理及增菌用培养基
选择性培养基
鉴别培养基
15
培养基
培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效 果及不损失培养基的必需营养成分。
制成的培养基应透明 ，以便观察细菌生长 性状以及其他代谢活 动所产生的变化。
培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应按各种 培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长 的适宜pH值为7.2～7.6。酵母菌霉菌（6.0～ 6.5）。调节可用1N HCl或NaOH。
显微镜、 恒温培养箱、压力蒸汽灭菌 器、薄膜过滤装置、比浊仪
等。
仪器 用具
试管、注射器、三角瓶、刻 度吸管、移液器、精密PH试 纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊 子、无菌服、牛皮纸等。
11
实验准备
沉降菌测试原始记录
RSB60-00 微生物检验室沉降菌测试原始记录测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB64-00 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（2）测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB63-00 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（1）测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB61-00 原料车间沉降菌测试原始记录测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB62-00 原料车间沉降菌测试原始记录测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB61-01原料车间沉降菌测试原始记录编 号 测试单位 测试依据 SPG108-01 测试状态 环境温度 °C 相对湿度% 培养基批号 培养温度 °C静 压 差 检测日期 报告日期评定标准： 十万级≤10CFU/皿； 万级≤3CFU/皿； 百级≤1CFU/皿 结 论 检 验 者 复核者。
检验室洁净区沉降菌测试记录表
检验室洁净区沉降菌测试记录表1次/季
测试依据
GB/T16294-2010医药工业洁净室悬浮粒子的测试方法,卫生部《中国生物制品规程》制定
测试状态
□静态□动态
其他测试合格Βιβλιοθήκη 况温湿度：压差:换气次数:
操作方法
1、采用平板暴露法：将姨酪大豆胨琼脂平板（9cm直径）按检测点中间直线的1/4和3/4布放，打开培养皿盖，使培养基表暴露30分钟后，将培养基皿盖上后倒置.
2、全部采样结束后，将培养皿倒置于培养箱中培养。
3、在30℃—35℃培养箱中培养，时间不少于48小时。
4、每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。每批选定3只培养基作空白对照培养。
检测点分布及编号
阳性对照室二更
S1
S2
阴性对照室二更
S9
S10
微生物限度室
S17
S18
阴性对照
阳性手消间
S3
S4
阴性手消间
S11
S12
微生物限度室工作台
S19
S20
阳性对照室
S5
S6
无菌室
S13
S14
1＃
2＃
3#
生物安全柜
S7
S8
无菌室工作台
S15
S16
洁净度级别
300，000级
100,000级
10，000级
100级
判定标准
-----
≤10个/皿
≤3个/皿
≤1个/皿
培养温度
℃
培养时间
月日时至月日时
测试点名称
阳性对照室二更
阳性手消间
药品微生物限度检查不合格的原因及预防措施
药品微生物限度检查不合格的原因及预防措施作者：蒲艳来源：《科技资讯》 2015年第5期蒲艳（黑龙江哈星药业有限公司黑龙江鹤岗 154101）摘要:众所周知，药品不同于其他商品，国家对药品的控制非常严格，各项指标都要合格才允许出厂，微生物限度检查就是其中之一。
近年来，新版GMP为了更好地保证药品的质量，对微生物限度的检查也越来越严格，药品生产企业也加大力度，严格把关，一旦微生物限度检查不合格，就要立即分析其原因，并要时刻做好预防措施，避免不合格情况的发生。
关键词:药品微生物限度检查不合格原因预防措施中图分类号:R927文献标识码:A文章编号:1672-3791（2015）02（b）-0210-01微生物限度检查法是检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
药品检验结果出现不合格现象，大多出现在每个剂型的初次配制后，原因有很多。
通过多年在药品生产与检验工作中的学习，总结出了一些药品微生物限度检查不合格的原因及预防措施。
1 药品微生物限度检查不合格的原因1.1 生产设备经常使用的生产设备清洗不彻底，灭菌不充分，这些都会使生产的药品受到污染。
1.2 生产工序在药品生产中，要经过配料、制粒等许多个环节，会受到各种因素的影响，容易使药品的质量发生改变。
如湿度太大，不利于制粒，也易使微生物繁殖；灭菌方法不当，会使微生物限度检查受到影响。
1.3 中药材中药制剂多以生药材粉制备。
生药材粉没有经过消毒处理，所以在对微生物限度检查过程中，常会出现不合格现象。
1.4 人员生产操作人员在药品生产过程中及微生物检验员在微生物检查过程中，如果操作不当都有可能污染药品，导致药品微生物限度检查不合格。
1.5 检验方法微生物检验方法出现了错误导致无法得出真实的结果。
1.6 环境药品生产的洁净区和药品检验的微生物限度检查室及操作台的环境监测必须符合规定，环境监测的项目包括沉降菌检测和悬浮粒子检测等，如果有一项不合格，都有可能导致微生物限度检查不合格。
化妆品洁净区洁净度内控标准
文件内容：一、目的 (2)二、适用范围 (2)三、责任 (2)四、内容 (2)五、记录 (5)六、参考文件 (5)七、培训 (5)八、变更记载及原因 (6)1.目的建立洁净室（区）内控质量标准，使洁净室（区）的检测有据可依。
2.适用范围适用于本公司洁净室（区）的检测。
3.责任3.1 质量部负责本标准的编制、修改。
3.2 质量部检验员依据本标准的要求对洁净室（区）的检验结果进行判断。
4 .内容4.1洁净室（区）内控标准见下表洁净区内控标准4.2洁净区域分布图4.2.1超净工作台（百级）4.2.2微生物室（万级）4.2.3缓冲间/二更/一更（十万级）4.3测试方法4.3.1测试步骤a.测试前培养皿外表面必须严格消毒。
b.将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，采样点位置的详细规则详见附录B ,然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
c.静态测试时，暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间不大于4h。
d.全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
e.采用卵磷脂吐温-80培养基配制的培养皿经采样后，在36℃±1℃培养箱中培养，时间不少于2d（天）；采用虎红琼脂培养基配制的培养皿经采样后，在28℃±1℃培养箱中培养，时间不少于5d（天）；。
f.每批培养基应有对照试验，检验培养基是被否污染，每批选定3只培养皿做对照培养。
4.3.2采样方法a.静态测试：室内测试人员不得多于1人；动态测试：室内人员正常作业，需记录人数及机器运行状态及测试时间；测试状态的选择须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
b.最少采样点数目（参照表1）；5.记录c.培养皿应放在离地0.8m高度的水平面处进行采样；d.可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
e.每个监控点最少放2个平行平板。
4.3.3 菌落计数：a.用肉眼直接计数，标记，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。
b.若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。
微生物检验技术
高压蒸汽灭菌注意事项
灭菌时要排净高压锅中的空气。空气不排净，压力达到 预定值时，温度仍为100℃。 为了避免培养基营养成分受到破坏，在灭菌的过程中应严 格把握灭菌的温度与时间，不能随意地提高灭菌的温度或 延长灭菌时间。 由于高压灭菌会导致培养基的体积和浓度有所变化，在配 制培养基时，每100mL培养基可适量增加5mL左右的蒸馏水。 预防培养基在加热溶解、灭菌煮沸等过程中导致水分挥发、 损失而使培养基的浓度过大或体积减少。
取样注意问题
标记准确、牢固
及时保存 若不及时检测应保存在 4℃ 冰箱，最长不超 过24h。
3
培养基制备
玻璃器皿的清洗
新购的玻璃器皿
将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离
的碱性物质，最后用流水冲净。
常用旧玻璃器皿的洗涤
确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后， 可按常规用洗涤剂进行刷洗；
18
无菌操作
GLP（良好实验室规范）
工作区域
缓冲间不是储藏室；无菌操作室、超净台禁止存放堆积杂物； 缓冲间和无菌室的门错开开启，减少外界空气侵入；
紫外灯消毒台面、地面，不能同时开启鼓风；
门窗关闭，避免扬尘； 用75%乙醇消毒台面；
使用霉菌的操作台最好是专用，防止污染的操作。
间歇灭菌法：常压蒸汽灭菌，100℃×30～60min，连续3次，间 隔培养（28～37℃）24h。适合于不宜高压蒸汽灭菌的物品，可 杀灭芽孢。此法不需加压灭菌锅，适于推广，但操作麻烦，所 需时间长。
高压蒸汽灭菌：利用压力的增加，达到温度升高的目的。 121℃×20min，效果最好。用于液体培养基，无菌水等灭菌。 体积大，传热性差的物品，灭菌时间应适当延长。适用于一般 培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。
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文件号：KX/GL/PZ-JL-001-5编号：
测试依据
YY0033-2000
《无菌医疗器具生产管理规范》
测试状态
□动态□静态
环境温度
℃
相对湿度
%
培养基批号
静压差室内与室外
Pa
培养基制备及测试方法描述
称取克培养基溶于ml水中，℃min高压灭菌后分装至90mm培养皿中，待凝结后暴露放置测试点min，收集，倒置培养h。同法做空白对照。
阳性对照
≤3个/皿
个/皿
□合格□不合格
无菌检查
≤3个/皿
个/皿
□合格□不合格
微生物限度
≤3个/皿
个/皿
□合格□不合格
应为
100级
阳性对照局部
≤1个/皿
个/皿
□合格□不合格
无菌检查局部
≤1个/皿
个/皿
□合格□不合格
微生物限度局部
≤1个/皿
个/皿
□合格□不合格
检验结论
经测试，微生物检验室沉降菌测试结果
检验：检验时间：复核：复核时间：
培养
温度
℃
培养时间
月日时至月日时
皿号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
空1
空2
48h后
菌落数
皿号
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
48h后
菌落数
皿号
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
48h后
菌落数
皿号
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
48h后
菌落数
气闸
4○3○
二更
2○1○
一更
缓冲
5○
6○
阳性对照13～26○
7○8○
理化检验室
无菌检查27～40○
9○10○
微生物限度41～54○
11○12○
评定级别
所属区域
评定标准
平均菌落数
结果判定
应为
10，000级
二更
≤3个/皿
个/皿
□合格□不合格
气闸
≤3个/皿
个/皿
□合格□不合格
缓冲≤3个/皿来自个/皿□合格□不合格