组织切片HE染色发灰的原因分析及对策

he染色常见问题及解决办法 (3)

HE染色常见问题及解决办法问题一：染色不均匀问题描述染色结果不均匀，导致在组织切片中出现深浅不一致的染色效果。

可能的原因1.组织固定不充分：染色前，组织可能没有充分固定，导致染色时组织颜色不均匀。

2.染色时间不足：染色时间不足，可能会导致染料在组织中未完全着色。

解决办法1.可以尝试使用更加强力的组织固定剂，确保组织得到充分固定。

2.增加染色时间，确保染料充分渗透并与组织结合。

问题二：颜色过深问题描述染色结果过深，导致组织切片中细胞结构难以观察。

可能的原因1.染色时间过长：染色时间过长可能导致染料过度渗透，造成颜色过深。

2.染液浓度过高：染液浓度过高也会导致染色结果过深。

解决办法1.缩短染色时间，适当减少染色时间可以使染料渗透达到合适的程度。

2.调整染液浓度，根据实际情况尝试减少染液浓度。

问题三：背景杂色问题描述染色切片的背景出现杂色，影响组织结构的观察。

可能的原因1.去脱水不充分：组织在染色前的去脱水处理可能不充分，导致背景杂色。

2.染液污染：染液可能被外部杂质污染，导致出现背景杂色。

解决办法1.确保去脱水过程充分，使用足够的次数进行去脱水处理，确保组织完全脱水。

2.尽量避免染液的污染，严格控制实验操作的卫生条件。

问题四：细胞核染色不明显问题描述细胞核染色效果不明显，导致细胞核结构难以观察。

可能的原因1.染料浓度过低：染料浓度过低可能会导致细胞核染色效果不明显。

2.染色时间过短：染色时间过短，染料可能无法充分染色细胞核。

解决办法1.调整染料浓度，根据实际情况尝试增加染料浓度。

2.增加染色时间，确保染料充分染色细胞核。

问题五：组织失真问题描述染色后，组织出现失真现象，形状和结构不正常。

可能的原因1.组织切片过厚：组织切片过厚可能会导致在染色过程中组织形状出现失真。

2.染色时间过长：染色时间过长，细胞可能会发生变形和退缩，导致组织失真。

解决办法1.控制组织切片的厚度，尽量保持切片均匀薄片。

2.控制染色时间，避免过长的染色时间导致组织失真。

病理组织切片染色中的常见问题及解决方法

条例能够浇实到位，随时检查监督。规定凡是进入ＮＩＣＵ的人员一律
要先洗手、更衣、换鞋、戴口罩和帽子】。尤其强调对手的清洗和消毒，在每个温箱旁边都要放置一瓶洗手消毒剂，医生和护士在对患儿进行常规检查之前和检查之后一定要记得洗手消毒。对每个患儿的用品做到一婴一用一消毒；保持空气清新，无致病菌生长。有研究表明手的清洁和物体表面的清洁在控制医院感染中起到了重要的作用，在常规的手清洁和环境清洁的基础上适量使用消毒剂消毒杀菌能达到较好的控制医院感染的作用。医院感染科要求对整体医院每月进行至少一次以上的环境卫生监测，其中包括空气、物体表面
程序、可能出现的问题及相应的解决方法进行了归纳总结，并对一些实验步骤与操作方法进行了改进，使组织脱水彻底、固定完全、切片
较薄、染色效果较好，提高切片的质量水平。【关键词】病理组织切片；染色；常见问题；解决方法
中图分类号：Ｒ３６１．２
文献标识码：Ａ
文章编号：１６７１－８１９４（２０１３）２８－０５７８－０２
应该保存密封容器内，并且在容器外贴上标签，及时注明材料来源、固定液以及日期等主要信息。材料固定之后，除了乙醇之外，其他固定液必须冲洗干净，否则残留在组织材料内的固定液可能会产生结晶

常规HE染色易出现问题原因解决办法

常规HE染色易出现的问题原因及解决办法【关键词】he染色；问题；方法【中图分类号】r361 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）03-0708-01常规he染色切片质量的好坏是病理技术人员时刻关注问题。

影响he染色切片质量的因素是多方面的，本文从以下几个方面详细分析原因并提出具体解决方法供大家参考。

1 切片染色不匀原因补救办法1.1 组织取材固定不当。

如组织取材过大或过厚，不能将组织完全固定，组织切片染色后出现外周固定好的部分易着色，而中间未固定好的组织，细胞着色模糊，使染色不均。

在送检的标本中，及时用4%中性甲醛对标本固定，固定液应是标本的4倍。

大标本应切开固定。

1.2 切片薄厚不均或有横纹。

切片刀有缺口时，易造成断裂，破碎和不完整。

切片刀倾角过大上卷，不能连在一起，过小则切片皱起。

或因螺丝松动产生振动切片易造成厚薄不均或技术人员手臂摇动切片机头力量不均易造成横纹。

切片时检查切片机螺母是否拧紧。

切片刀角度是否过大或过小即可。

1.3 组织脱水，透明和浸腊处理不当（1）组织脱水用的各级乙醇未能保证相应浓度使组织脱水不彻底（2）二甲苯内的时间过长组织易碎也无法切出好片子。

（3）浸腊温度过高，组织变脆也不利切片染色。

1.4 染色过程处理不当（1）组织切片脱腊不彻底，如二甲苯时间过久，无水乙醇不纯或时间过久，室温低，组织切片上的石蜡没有全部除掉时，含腊部分不着色或着色过浅染色液试剂量少，组织切片没有全部浸到。

（2）组织切片上在捞片时有气泡，则气泡内组织可能染色不均。

2 切片染色模糊不清原因2.1 取材：组织标本已发生自溶或取材后没及时固定或固定液浓度不够；另固定前干枯标本，染色后易出现灰染现象，很难补救。

2.2 固定（1）固定剂对组织有一定媒染作用，它既可与蛋白结合又能与染料结合，可增强着色能力，同时能沉淀和凝固细胞内成分，使细胞内成分产生不同折光率造成光学差异。

故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因（2）在日常病理制片中淋巴结处理不当造成切片染色后组织见发灰现象，其主要原因由于细胞密集，结构复杂导致固定液难以渗透到组织深部，从而造成组织中央固定不佳，而出现彻底发灰现象。

HE染色不良的常见问题与对策

十一、水和玻片呈现乳白色混浊改变原因:切片从脱蜡的二甲苯经过梯度乙醇进入水溶液时,水和玻片呈现乳白色混浊改变，是用于脱蜡的二甲苯没有被乙醇洗干净。对策:更换洗涤二甲苯的乙醇液体,把切片重新放回无水乙醇,脱去玻片上的水分。
十二、细胞核灰蓝
原因:可能的原因是由于组织处理温度过高、过热,在石蜡停留的时间过长；或者固定时间太短,接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水处理。对策:理论上来说,加热处理仅在组织浸蜡步骤才使用,组织不能在热的蜡液中停留过长时间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处理,完成浸蜡处理后的组织,可将组织连同塑料包埋盒一并放置在室温空气中,冷却凝固, 以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良好,脱水最好能从低浓度的乙醇开始。
原因:伊红染液的pH值可能大于5；也可能是蓝化液残留过多；切片太薄；或切片经伊红染色后在乙醇脱水时间过长。对策:检查伊红染液的pH值,如果必要的话,用乙酸将其调节在416～510之间,从而使伊红染色色彩艳丽。确保每次蓝化步骤完成后,使用的弱碱性溶液被充分洗去,玻片上没有残留的弱碱性溶液。检查切片的厚度。脱水时不要让切片在低浓度乙醇停留时间过长,因为含水多的低浓度乙醇会将伊红的颜色分化掉。
四、细胞核呈红、棕色改变
原因:主要有苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。对策:首先,每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力,发现氧化过度应及时更换。其次,可用流水、温水或弱碱性溶液如稀氨水、0. 2%碳酸氢钠等,在苏木精染色后,给切片以足够的蓝化时间。
五、伊红着色淡
二、细胞核染色苍白、暗淡
原因:即苏木精染色太淡，此类问题可能有3个影响因素,切片在苏木精染色液停留时间太短；苏木精染色液过度氧化,失去染色能力,不能再继续使用；分化步骤处理时间过长。如果是骨组织细胞核暗淡,则多数是由于脱钙过度造成。对策:切片重新染色。如果组织在酸性固定液如 Zenker、Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过长,细胞核染色能力将减弱,须增加其在苏木精染色液的时间,或用一些方法增加组织的嗜碱性,以改善细胞核的着色。

HE染色经验总结

HE染色经验总结优质的HE染色切片应该具备切片完整、无皱褶、细胞核着色清晰呈蓝色、细胞质呈鲜红色、核仁核膜核内染色质颗粒清晰，核质蓝红分明、对比清晰、透明度好等属性；劣质的HE染色切片会出现切片不完整，染色灰暗，红蓝对比不明显，有甚者染色后的切片镜下呈云雾状、组织结构不清楚等状况，对于科研党和病理检验工作者来说，想要一张好的组织HE染色图，看似简单但也不简单。

目前，我们收集了一些导致组织切片染色不佳的原因及解决办法，希望对大家的科研工作有一定的帮助。

1．切片污染：包括染液的污染和组织污染所谓染色的污染，是由于苏木精染液的氧化膜或伊红染液的絮状沉淀和其他试剂中的沉淀物所致。

污染物遮盖该部位的细胞或组织而难以观察期形态改变。

这种污染可通过定期的过滤各种染液和试剂而避免。

而所谓的组织污染是由于切片和贴片过程中，被其他病例的组织和细胞污染。

如果是不同类型的组织，容易在显微镜下发现；如果是相同类型而不同病变的组织污染，不容易在镜下发现，可导致误诊。

因此在摊片时要非常小心，恒温贴片盆的水要常常更换或于每例贴片后用纸在水面及时把残余的蜡片拖走，以保证不污染。

还有，取材时也可能造成组织污染，在甲例取材后，如不及时把取材台和刀剪冲洗干净，若留下残余组织，在乙例取材时把甲例的残余组织误作为乙例取材，同时放进脱水盒内，这样同一切片内，包括甲乙两例组织，这种组织污染也可产生严重后果。

2．细胞核染色苍白、暗淡，苏木素染色过浅造成此类问题的原因可能有3个，切片在苏木精染色液停留时间过短，苏木素染色液过度氧化，失去染色能力，盐酸酒精的分化步骤处理时间过长。

此类问题可以更换新的苏木素及调节染色和分化时间来解决。

3．染色不均匀不透亮呈雾化状态即部分组织和细胞染色尚可，部分组织模糊不清楚，这种染色组织无法诊断。

其原因是由于染色时二甲苯脱蜡不彻底，导致组织处理不当。

常见于冬季室温低时，二甲苯的脱蜡能力降低，或使用多次脱蜡的二甲苯所致，克服办法是在冬季室温低时(14℃以下)，把二甲苯缸在水浴缸中适当加温到30℃再脱蜡，或更换新的二甲苯。

常规HE染色易出现的问题、原因及解决方法

常规HE染色易出现的问题、原因及解决方法
作者：刘燕
作者单位：解放军第401医院病理科青岛 266071
1.田玉旺.李琳.苗金红.邢宜.朱红艳常规HE染色切片易出现的问题、原因及解决方法[会议论文]-2009
2.田玉旺.李琳.朱红艳.邢宜.苗金常规HE染色易出现的问题、原因及解决方法[期刊论文]-诊断病理学杂志2008,15(6)
3.杨艳丽.徐戬常规石蜡切片制作过程及HE染色的体会[会议论文]-2009
4.章克萍.龙飞.汪雁常规HE染色过程中分色蓝化透明方法的改良[期刊论文]-江西医学院学报2008,48(4)
5.马恒辉.周晓军HE染色常见问题与对策[期刊论文]-临床与实验病理学杂志2008,24(4)
6.王永军.刘世正.杨会钗.王小玲.吴国祥常规HE染色中蓝化方法的改进[期刊论文]-诊断病理学杂志2005,12(6)
7.徐戬.杨艳丽.王域平常规石蜡切片制作过程及HE染色[期刊论文]-中国实用医刊2009,36(13)
8.陈宣世.刘俊才.陈勇.李霞斌.柴利HE染色两次分化法在病理制片技术中的应用与探索[会议论文]-2009
9.陈宣世.刘俊才.陈勇.李霞斌.柴利HE染色两次分化法在病理制片技术中的应用与探索[期刊论文]-重庆医学2010,39(22)
10.杨群.胥维勇.何娟.徐科伟.胥颖.杨红不同固定液冷冻切片HE染色质量的对比观察[期刊论文]-实用医院临床杂志2010,7(3)
本文链接：/Conference_7188717.aspx。

HE染色常见问题与对策

HE染色常见问题与对策HE是最基本的也是最重要的病理学染色技术。

一张质量上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。

许多所谓的“疑难病理案例”,大多数是由于制片质量差所造成的。

制片质量差不仅在中小医院病理科会发生,有些大医院也会出现。

因为, HE染色是一种多步骤、多因素决定的实验方法,无论是手工还是机器操作,都存在着许多影响因素,甚至会出现不理想的染色结果,从而导致误判和误诊。

所以,除提高病理医生的诊断水平外,培训病理技术人员、提高技术人员的业务素质也是当务之急。

本文对HE染色中常见的几个问题及其对策,进行分析与讨论如下。

1切片在脱蜡后出现大片白色的斑点原因:由于烤(烘)片温度太低,玻片在脱蜡前没有充分烤(烘)干;切片在二甲苯停留时间不足,或二甲苯使用过久,造成脱蜡不尽。

对策:如果玻片是由于没有烤(烘) ,先用无水乙醇处理去除玻片上的水分,然后重新用二甲苯脱去石蜡。

如果烤(烘)干不足的现象比较严重,可能导致切片脱落,则无法补救。

如果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成,或使用的二甲苯过久,切片则需退回到二甲苯停留时间相对长些,或更换二甲苯,脱色、漂白、重新染色。

2细胞核染色苍白、暗淡,即苏木精染色太淡原因:此类问题可能有3个影响因素,切片在苏木精染色液停留时间太短;苏木精染色液过度氧化,失去染色能力,不能再继续使用;分化步骤处理时间过长。

如果是骨组织细胞核暗淡,则多数是由于脱钙过度造成。

对策:切片重新染色。

如果组织在酸性固定液如Zenker、Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过长,细胞核染色能力将减弱,须增加其在苏木精染色液的时间,或用一些方法增加组织的嗜碱性,以改善细胞核的着色。

例如:建议上述组织切片最好使用Weigert铁苏木精染色液;如果组织是用Zenker液固定的,可将切片脱蜡后放在5%碳酸氢钠溶液3～4 h,流水冲洗5 min后染色;如果组织是用Bouin液固定的,可将切片脱蜡后放在5%碳酸锂1 h,流水冲洗10 min后染色。

常规HE染色易出现的问题、原因及解决方法

??技术交流??常规染色易出现的问题、原因及解决方法田玉旺李琳朱红艳邢宜苗金红北京军区总医院病理科北京关键词】染色问题方法中图分类号文献标识码】文章编号——一常规染色切片质量的好坏是病理技术人员时刻关注的问题。

影响染色切片质量的因素是多方面的本文从以下几个方面详细分析原因并提出具体的解决办法供同行参考。

染色中组织切片脱落的原因组织自身原因及处理不当①组织自身原因如凝血块、血栓、干涸或过硬的组织及组织碎屑等其切片染色时易脱落②组织脱水、透明不足以致石蜡不能浸入勉强切出的片子脱蜡时收缩入水或染色后又膨胀因而易脱落③组织脱水、透明过度浸蜡时间过长或温度太高引起组织收缩硬脆导致切片不完整染色时导致脱落。

对发脆的组织可选用下面方法处理使切片完整、不易脱片①用棉球蘸氨水或冰醋酸涂抹蜡块组织表面左右②蜡块修出组织面放人冰水混合液中几分钟或用冰块贴敷组织面。

切片①切片过厚组织附贴在载玻片上不平使切片与玻片之间存有一定间隙切片与玻片之间的吸附力减弱②破碎不整齐的切片③展片水温低切片有皱褶、附贴不牢或附贴时切片下含有气泡④烤片时间短或温度低、烤片温度过高或时间过长、组织被烤焦或收缩变形发生皱褶均易脱片⑤载玻片清洗不洁净含有油脂或混入脏东西等。

故载玻片应先放人清洗液内浸泡捞出后彻底水洗乙醇进一步脱脂而后干燥箱烘干备用。

现多采用免洗载玻片效果较好。

对于特殊组织要进行特殊处理如脑、脊髓等组织捞片后不能马上直接烤片待切片与载玻片之间水分充分沥干后再放到烤片箱的铁板上进行烤片以避免切片出现气泡。

染色①脱蜡后未经自高至低的各级乙醇缓冲调解逐渐入水②染色时用水冲洗过猛或振荡过度致切片与载玻片脱离③染液或试剂的酸碱度不适宜或在其中停留时间过久如染色所用的返蓝液碱性过大时易引起切片脱落。

针对这种现象我们可以采用自来水返蓝因为自来水多呈弱碱性同样可达到返蓝目的④染色过程中切片多用盐酸乙醇进行分化工作中发现脱片也易发生在盐酸乙醇分化后。

病理HE切片常见的质量问题及处理方法

病理HE切片常见的质量问题及处理方法【摘要】目的探索病理HE切片常见的质量问题,并提出相应的预防和处理方法,提高HE切片质量。

方法回顾性地复习一定时期内本科所有的病理HE玻片,按照病理HE玻片中出现的质量问题进行总结、分析和分类,然后归纳。

结果病理HE切片常见的质量问题基本上都是由于病理技术员经验不足、操作不当、责任心不强所造成。

结论应加强从业病理技术员的系统而严格的工作培训,病理技术员要积极主动认真地工作,积累工作经验,端正工作态度,寻找出现质量问题的根源,提高HE切片的质量水平。

【Abstract】Objective To investigate the common quality problems on HE seetiong, and propose prevention and managements to improve the quality of HE stainings. Methods A retrospective review of all HE slides at a certain period of time were done to sum up, analysis and classify the quality problem in accordance with slides.Results The most common problems on quality are basically due to the inexperience of pathology technicians, improper operation,and poor responsibility. Conclusion Pathology technician practitioners should be trained strictly andsystemically. Theyshould take the initiative to work seriously, accumulate work experience, correct work attitude, look for the root causes of quality problems to improve the quality of HE sections.【Key words】HE sections;Quality;Management;Prevention; Retrospect苏木精(Hatmatoxylin)伊红(Eosin)染色法,简称HE染色法,是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法[1]。

he染色细胞核发灰的处理方法

he染色细胞核发灰的处理方法在生物实验中，HE染色是一种常用的细胞染色方法。

然而，有时会遇到细胞核发灰的情况，这可能是由于染色时间、染色剂浓度、温度控制、缓冲液使用、细胞固定、染色后清洗等方面的不当处理所致。

下面将介绍如何处理HE染色细胞核发灰的方法。

1.染色时间控制染色时间是影响HE染色效果的重要因素。

染色时间过短会导致细胞核未充分染色，而染色时间过长则可能导致细胞核过度染色。

因此，需要控制好染色时间，根据实际情况选择合适的染色时间。

2.染色剂浓度染色剂浓度也是影响HE染色效果的关键因素。

浓度过高会导致细胞核过度染色，而浓度过低则会导致细胞核未充分染色。

因此，需要调整好染色剂浓度，以获得最佳的染色效果。

3.温度控制温度对HE染色的影响也很大。

不同温度下染料的溶解度和分散度不同，会影响染色效果。

因此，需要控制好染色温度，以保证染料在细胞核中均匀分布。

4.缓冲液使用使用适当的缓冲液可以避免染料直接接触细胞核导致的效果。

因此，在HE染色过程中，需要使用适当的缓冲液，如磷酸盐缓冲液等。

5.细胞固定细胞固定是HE染色前的重要步骤，固定剂的使用时间、浓度和温度等参数都需要仔细控制。

不合适的固定剂会导致细胞核发灰或过度收缩。

因此，需要选择合适的固定剂，并严格控制固定剂的使用条件。

6.染色后清洗染色后清洗不彻底会导致染料过多地嵌入细胞核，影响观察效果。

因此，需要彻底清洗细胞核，以去除多余的染料。

7.光学显微镜观察在光学显微镜下观察处理结果，并根据观察结果进行调整。

如果细胞核仍然发灰，可能是由于染色时间或染色剂浓度不当所致，需要进一步调整。

8.染色失败处理如果经过上述处理后细胞核仍然发灰，可能是由于染色失败所致。

此时，可以尝试以下方法：更换染色剂或缓冲液、增加固定剂的使用时间、降低染色温度等。

如果以上方法仍然无法解决问题，可能需要重新制备样品并重新进行HE染色。

总之，在HE染色过程中，需要注意多个因素的控制，包括染色时间、染色剂浓度、温度控制、缓冲液使用、细胞固定、染色后清洗等。

常规HE染色背景及各种污染的常见情况及解决方法

常规HE染色背景及各种污染的常见情况及解决方法摘要：目的：病理石蜡切片及HE染色，也就我们所说的病理常规制片，这个工作是病理诊断中的一个非常重要的环节，制片的质量好坏直接影响病理诊断结果，从而影响该患者的后期诊疗。

方法：对于医院来讲，病理诊断的准确与否又与该医疗机构的总体医疗质量和医疗水平息息相关。

因此病理病理切片质量的坏坏是临床病理质量控制的关键环节和基础，高质量的病理切片能提高病理诊断水平，减少病理诊断中的差错的发生1。

病理切片的制作过程较为繁琐，在实际工作中常常会遇到各种各样的原因引起的质量不佳，甚至造成不良后果，每一个细小的环节出现问题，都会给后面的工作造成影响2。

结果：例如：固定不及时导致的组织细胞溶解，取材不仔细造成的细小病灶的遗漏，脱水不彻底造成的组织蜡块发软，染液不净造成的各种背景污染等等。

结论：很多环节出现的问题在后续工作中都是很难再得到纠正和补救的，尤其第一步组织固定不佳导致的各种问题，因此在实际工作中我们认真细致地对待每个环节，显得尤为重要。

这里将主要针对HE常规切片的背景及各种污染处理展开相关讨论，对各种潜在的影响加以分析和注意，在工作中不断总结经验教训，控制制片质量。

关键词：石蜡切片；HE染色；背景处理；影响因素1.资料与方法1.1相关流程及各个环节的背景污染控制1.2.固定充分、及时地固定手术标本是常规病理制片的关键和基础。

固定指的是固定液和组织内的蛋白质发生交联，使得标本组织内的蛋白质变性、组织硬化、结构固定①，固定也是苏木素和伊红燃料可以更好地着色组织切片的前提。

组织固定的意义在于能够使组织尽量保持在活体内原来的形态，是细胞内各种化学成分得以定位不可溶性，沉淀、凝固细胞内物质。

组织标本离开活体后，应该马上浸入固定液中，原则上要求在30 -60分钟内组织应该得到有效的固定，包括需要充足的固定液（一般要求固定液是组织标本5~10倍体积以上）。

一旦组织标本固定不佳在后续的工作中都是无法得到有效补救的。

常规HE染色质量控制

常规HE染色质量控制摘要：病理切片染色质量控制是一个多环节、多步骤的过程。

组织离体后从取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色全过程，其中某一环节出现问题均会影响切片的质量，而苏木素、伊红染色在切片过程中是关键的一个环节，首先，要配制好试剂，苏木素要变成真正的染料，氧化是关键的一步。

苏木素在氧化过程中，氧化剂量的控制对苏木素是非常关键[3]，氧化不足或未经过氧化的苏木素染色能力差，氧化过度，表面一层氧化膜，易引起切片污染和操作不便。

苏木素染液的配制在加入冰醋酸要适量，适量的加入抑制了苏木素对胞浆的着色力，加多了会影响细胞核着色，加少了引起核浆共染。

同时，在日常工作中把工作制度化，加强学习，现代病理技术已经不是单纯的大体标本和普通的he染色切片制作，而是多学科相互渗透，相互影响，综合性理论、技术性都很强的学科技术。

关键词：he染色质量控制【中图分类号】r9【文献标识码】b【文章编号】1671-8801（2013）03-0284-01苏木精和伊红染色方法，简称he染色方法，是生物学和医学的细胞和组织学最广泛用的染色方法。

he染色是石蜡切片最基本的染色方法，优质的he染色仍是临床病理诊断最可靠的依据。

组织制片过程中，组织需经过取材、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片后，he染色多种环节技术操作，制作一张优质的he染色切片，是每个病理实验技术人员必须掌握的一项基本技能。

1材料与方法1.1材料。

组织块10%中性福尔马林（na2hpo46.5g，nah2po44g，40%甲醛10ml，加水至1000ml调至7.0ph）无水乙醇、95%乙醇、80乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡、苏木素染液、1%盐酸酒精、伊红染液等。

1.2方法。

常规组织处理。

①标本接受时，认真核对申请单与送检单是否一致，符合要求方可接受[1]，让送检人及接受人签字；②固定：标本离体后要及时固定（30min内），10%中性福尔马林，固定液量为组织块4-5倍，可达15-20倍，大块组织固定时间24小时（或以上），小块组织4-6小时；需把标本全浸在固定液中。

病理技术HE染色中的灰染现象和改善方法1

病理技术HE染色中的灰染现象和改善方法摘要：目的：探讨HE染色中细胞核灰染现象及改善方法,提高HE染色质量。

方法：收集30例HE 染色发灰的胃镜、肠镜和子宫内膜等不同类型的组织,重新切片,通过调整苏木素染色条件以及染色前对组织进行修复处理,设对照组,比较各种处理方法的染色效果。

结果：通过延长苏木素染色时间、1%冰醋酸及0.5%盐酸处理、水浴加热和PBS抗原修复液、EDTA抗原修复液分别采用水浴和高压修复处理，均能够不同程度地促进核染色,较好地改善HE 染色细胞核灰染现象,但以PBS高压处理法效果最佳。

结论：PBS高压处理法是HE染色细胞核灰染现象的一种有效处理方法。

[关键词] HE染色；细胞核灰染；改善方法；高压修复HE染色是病理形态学诊断最常用的方法。

一张优质的HE染色切片是正确诊断的前提，其细胞核和细胞质的对比染色必须是清晰的。

但在常规HE染色过程中，经常出现切片着色困难，细胞核着色淡、不着色或核染色发灰等,这些均属于灰染现象。

引起这种现象的原因有很多种［1-3］，如：术后新鲜组织未能及时固定导致组织有一定程度的自溶，从而改变细胞内的PH值；固定液种类和浓度的选择有误导致固定不充分；取材的组织块太厚或脱水时间不足引起脱水不彻底从而使组织发白发软；浸蜡时间过短、过久或浸蜡温度过高（特别是在包埋时，如果标本量太大，不能及时包埋极易引起组织块浸蜡时间过久），使细胞中蛋白质的酸、碱性物质均发生变性，同时组织固缩，其中的间隙变小，而不易被碱性染料染色；苏木素陈旧导致染色能力下降等。

经实验，对细胞核着色发灰的30例组织进行重新切片，采用多种不同的方法进行处理，染色后比较发现，PBS高温高压修复处理的切片染色效果最佳。

1.材料与方法1.组织材料收集浙江大学医学院附属第四医院病理科HE染色细胞核灰染的胃镜、肠镜、子宫内膜等30例标本，重新切片，切片厚度为3-4um。

1.2 仪器设备美的电磁炉（1000W）；苏泊尔家用高压锅（内径20cm）；耐高温塑料修复盒1个；耐高温塑料切片架1个。

H_E_染色切片质量影响因素分析

H.E.染色切片质量影响因素分析杜　辉1,王树迎2,徐淑敏2(1.泰山医学院组织胚胎教研室,山东泰安271000; 2.山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018) H.E.切片染色是生物学和医学领域中组织学和细胞学等学科中最常见的切片染色方法。

染色质量的好坏直接影响到细胞观察的科学性和病理学诊断的准确性。

经过长时间的组织胚胎学H.E.染色切片的制作实践,对影响石蜡切片H.E.染色质量的因素进行了如下分析。

1　取材固定　取材要新鲜、迅速、避免机械损伤、大小适宜、厚薄均匀。

固定要及时、充分。

固定液一般采用10%中性缓冲福尔马林溶液和Bo nin氏液,但是检查糖元、黏液、尿酸结晶类物质最好用无水乙醇固定,固定24～48h,最短不短于30～60min。

固定时间应根据取材大小、性质以及类型有关,视具体情况而定。

固定时间过长或固定液的浓度过高,会使组织变硬,减弱了固定液对组织的渗透能力或造成组织中间部分固定不好。

如浓度太低,在正常固定时间内,蛋白质的沉淀和凝固不够充分,由胶状物变为不溶性的固体,必然固定也不充分,使细胞成分产生的光学差异不够显著,影响媒染效果,导致染色片子发生灰染现象。

若组织块大而厚,可以固定一段时间后切开再固定,也可适当的延长固定时间。

总之,固定是切片制作过程中的重要一环,它直接会影响后面的脱水、浸蜡、切片、染色等步骤,并直接影响观察结果。

2　脱水、透明、浸蜡　组织经过固定冲洗,组织含有较多的水分,只有将水分除去才能进行石蜡包埋,因为石蜡与水不相溶。

将组织中的水分利用脱水剂除去的过程称为脱水。

脱水时间应根据组织大小、性质和类型而安排。

在多种脱水剂中最常用的是乙醇。

它可与水任意混合,脱水力较强,又可硬化组织,但高浓度的乙醇对组织有强烈的收缩和脆化作用。

因此乙醇脱水一般从低浓度过渡到无水乙醇,一般由通讯作者:王树迎70%→80%→95%Ⅰ→95%Ⅱ→100%Ⅰ→100%Ⅱ的浓度梯度脱水。

淋巴组织H·E染色“发灰”现象的纠正方法

淋巴组织H·E染色“发灰”现象的纠正方法第一【期蔡傻杰等.免疫组织化学染色技术EV二步法和LSAB法的应用比较463 应,保证了背景的清晰和干净.从几组实验中证明,LSAB法和EV法在这方面不相上下3.2从使用的方便方面设有差别.两种方法所使用的试剂盒,都为即用型抗体,对于初学者或者是免疫组化技术专家,都能顺利使用,手续方便,不为配制稀释抗体带来的麻烦3.3从时同和步骤上相比较.Ev法比LsAB法可省时30丹钟,减少两个步骤,可节省^力物力Ev二步法不需要第二抗体,从计算时间的角度讲.它不仅是第二抗体孵育的时间.还必须加上其前后PBS的冲洗操作所花费的时间.保守计算需s0甘钟从步骤上讲,它比LSAR法少了加^第二抗体和PBs冲洗两十步骤,节省了许多^力和物力,给免疫组化染色早出结果提供了方便.3从价格上相比较,EV二步法所用的试剂费用比LSAB法每倒多15元以某公司销售的试剂为倒,EV二步法的试剂盒18ml为1560元.而LSAB法中的同等量试剂盒为999元.相差561元,每项以50l一张切片计算,前者为4.3元.后者为2.8元.收稿2001—04侉日2001-09参考文献1HsuSM,RaineL,FrangerH,etalUseofavidln—biminperoxidasecomptex(AE)inimmunperoxldasetechniques:acomparisonbetweenABCandunlabeledantibady(PAP)procedures.】HistochemCytochem198】;29():5772蔡傻杰.邱红明,张盛.真空负压LSAB和ABC法的应用比较.中国癌症杂志1996;6(1):27—28淋巴组织H.E染色"发灰''现象的纠正方法田玉旺李琳丁华野邓永江(北京军区总医院病理科,北京100700)在常规病理制片拄术工作中.经常发现淋巴组织(如淋巴结,鼻咽部组织卫扁桃体等)由于处理不当.造成切片染色后组织中同出现发灰现象,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色.这样将给临库病理诊新带来很大困难为此. 我们经大量实验,对原组绸蜡块再切片后采用下述方法进行处理,收到了较好的染色效果.材料和方法1.标本来源:近取25例HE染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片,切片厚5p.m.2.切片的处理方法:(1)将原蜡块所制切片程^二甲苯【,Ⅱ脱蜡各5rain;(2)无水酒精I,I浸洗各2rain;(2)用无水酒精乙醚等量(1:1)混台液处理5—10min}(3)用95酒精,80酒精各洗1rain;(j)自来水洗1mln;(6)用3硫酸铁镀溶液补充媒染5rain,流水冲洗2min;(7)常规H.E染色=结果25捌淋巴组织切片经该法处理后,发灰现象基本消失.细胞棱和细胞浆染色清晰,对比鲜明(见母1,2)讨论在日常病理制片工作中,囡琳巴组织处理不当,切片HE染色发灰现象时有发生遇到这种情况,我们常规多采用对该组织重新取材制片的方法来弥补这一过失.此法对还有剩余的组织较为适用,但对已用完的较小组织无法重新取材.若重新取活检,将给患者带来很大痛苦,并且延误了临床病理诊断.我们经多次实验,认为淋巴组织切片容易出现发灰现象的主要原因可能是由于其细胞密集.结构复杂,导致固定渣较难渗透到组绸深部.从而造成组织中央固定不佳,结果染色不良.而出现切片发灰现象.实验在染色前,对原蜡块所制切片,经脱蜡至无水碴精,而后用等量无水酒精己醚混台液进行处理,加强了对细胞膜脂质的溶解作用.增强了细胞膜的通透性,同时也起到了对组织的追加固定作用,选样有年町于水溶性苏术素和伊红染液进^细胞并着色,从而提高了切片的染色质量.苏术素染料是一种有色的有机化台物,若无媒染荆存在时,不能使细胞内的嗜碱性物质着色.所以.一般情况下.我们在配制苏术素染液时.需加^硫酸铝钾作媒染剂.本法根据染色理论的媒染原理.对发灰的组织切片,在染色前.采用3硫酸铁铵溶液进行补充媒染,这样可以加强组织细胞与苏术素染液的结台力,利于细胞棱的着色.发灰的淋巴组织切片通过该法的处理后,H.E染色质量有了明显提高,细胞核及细胞浆染色清晰,对比分明,不需重新取活检制片,即可做出准确的临床病理诊断.收稿2001—03修回2001一l0(1-文围1.2见第470页)。

关于HE染色细胞核发灰的补救方法

关于HE染色细胞核发灰的补救方法杨春青江苏省妇幼保健院病理科210036摘要目的探讨HE染色细胞核发灰的补救方法方法常规技术基础上增加磷酸盐缓冲液高温修复结果利用我科50例不合格切片重新染色修复，其中40例达到满意效果，核浆对比清晰结论磷酸盐缓冲液高温修复可以有效的补救常规HE染色发灰的情况。

关键词HE染色磷酸盐缓冲液高温修复病理技术工作主要是利用技术手段为病理诊断作出提供必要条件，而一张优质的病理切片，细胞核和细胞浆的对比染色必须是清晰的，在日常病理外检工作中，有时一些人为因素，比如脱水时间不够，固定不及时，会出现细胞核发灰现象，即细胞核内染色质和核仁不清，给诊断带来一定的困难，苏木素-伊红染色是最经典的常规染色方法，苏木素染色的关键是细胞核，而伊红染的是细胞浆，引起此现象的因素主要有以下几种，如术后固定不及时，细胞有自溶现象，取材的大小，影响组织的固定，脱水，浸蜡不足，组织在脱水机中固定，脱水，浸蜡时间不足，试剂浓度不够，处理时间不够，笔者主要针对脱水浸蜡时间不够，引起细胞核发灰，进行实践摸索，并找到一种正确的补救方法。

1.材料与方法1.1组织与材料：收集江苏省妇幼保健院病理科外检中，因为脱水和浸蜡时间不足，引起HE染色发灰的石蜡蜡块。

1.2仪器设备小天鹅高压蒸汽锅染色架一个塑料修复盒一个1.3试剂PBS磷酸盐缓冲液0.5%盐酸Harris苏木素醇溶性伊红1.4方法具体步骤（1）石蜡切片3-4微米厚，烘烤10-20分钟，脱蜡至水。

（2）将切片放入有PBS缓冲液，PH6.0-8.0，煮沸10-15分钟，自然冷却至常温，取出切片，用蒸馏水洗。

（3）切片入Harris苏木素5-8分钟，用自来水冲洗，（4）0.5%HCL分化，水洗兰花，直至细胞核内染色质及核仁清晰可见，细胞浆基本无蓝色为止。

（5）入伊红Y染色，梯度酒精，二甲苯透明，中性树胶封固，显微镜下观察。

2结果经磷酸盐PBS缓冲液为修复液，用高压蒸汽锅处理的切片，整个细胞的基本形态清晰可见，核，浆染色对比鲜明，清晰度好，HE染色效果好。

HE染色细胞核灰染的处理方法比较研究

HE染色细胞核灰染的处理方法比较研究摘要：目的观察及分析不同HE染色细胞核灰染的处理方法得到的效果，为获得更好的HE染色质量重要的依据。

方法选择HE染色发灰的胃粘膜、肠息肉、子宫内膜等不同类型的组织作为研究对象，重新实施切片，对于苏木素染色条件进行合理的调整，同时在染色前修复处理组织，通过设立参照组的方式，对于不同处理方法获得的染色成效进行对比观察。

结果通过对于苏木素染色条件进行调整，包括水浴加热、增加时间以及微波加热等，能够推动核染色，但是对于灰染的情况没有得到完全的解决掉。

以高压和微波修复处理举措应用到PBS、EDTA以及柠檬酸中，能够对于HE染色细胞核灰染现象进行良好的改善，而且效果最理想的就是PBS微波处理法。

结论有效处理HE染色细胞核灰染现象的举措就是PBS微波处理法，应用价值巨大。

关键词：HE染色细胞核灰染；处理方法；对比病理形态学诊断期间，HE染色属于一种普遍应用的举措，为了获得到准确的诊断结果，有赖于HE染色切片是否优质。

但是，平时的实际病理制片工作时，很容易由于某些因素受到影响导致HE染色以后产生细胞核灰染问题。

细胞核灰染也就是HE染色以后，核内染色质以及细胞的轮廓、核仁具有不清晰的显示，同时具有发灰的问题，比较细胞核以及细胞浆的颜色不明显，无良好的透明度[1-2]。

一旦产生HE染色细胞核灰染问题，则能够严重的影响到病理诊断工作。

本研究对于HE染色细胞核灰染处理方法进行观察，报告内容如下所示。

1资料与方法1.1一般资料研究对象是20例HE染色细胞核灰染的胃粘膜、肠息肉以及子宫内膜等，收集的时间是在2017年1月至12月期间。

重新实施切片，切片厚度是0.3um。

对于苏木素染色条件进行合理的调整，同时在染色之前展开修复处理好组织，之后实施HE染色，对于处理的效果情况进行观察及对比。

1.2方法首先，对于苏木素染色条件进行科学的调整，主要的方法总结为：切片脱蜡至水；以分组的方式，对于切片进行处理，设置一组为参照组，应用常规法，即于室温的状态下对切片浸润苏木素，时间控制为5分钟左右。