甲醛变性电泳检测RNA完整性---科标化工分析

甲醛变性电泳检测RNA完整性---科标化⼯分析
甲醛变性电泳检测RNA完整性---科标化⼯分析
⼀、材料、试剂和仪器
1、材料：植物总RNA5-10µg
2、试剂：
1)加样运载缓冲液(Loadingbuffer)
50%⽢油
1mmol/LEDTA(pH8.0)
0.25%溴酚蓝
25%⼆甲苯氰FF
2)10×TAEBuffer
3)5×甲醛凝胶电泳缓冲液：
0.1mol/LMOPs(pH7.0)
40mmol/L⼄酸钠
5mmol/LDETA(pH8.0)
4)甲醛，甲酰胺
3、仪器：电泳装置，紫外透射观测仪
⼆、实验程序
1、甲醛变性的琼脂糖(Agarose)凝胶的配制
在250mL的锥形瓶中准确称量2gAgarose(Sigama)，再加20mL10×TAEBuffer，144mLDEPC
中⼼以化⼯⾏业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致⼒于搭建产研结合的桥梁。

以“专⼼、专业、专注“为宗旨，致⼒于实现研究和应⽤的对接，从⽽推动化⼯⾏业的发展。

处理过的双蒸⽔，微波炉中化胶，待冷却⾄50-60℃加EB⾄终浓度≤0.5µg/mL。

在通风橱中加⼊36mL甲醛，放置⼀段时间以减少甲醛蒸汽。

2、RNA的甲醛变性电泳
1)样品制备
RNA总量10µg
5×甲醛凝胶电泳缓冲液4µl
甲醛3.5µl
甲酰胺10µl
加⼊⽆菌离⼼管中混合，95℃⽔浴变性2min(或55℃，15min)，取出后放⼊冰中冷却。

2)加⼊2µl⽆菌的DEPC处理的加样运载液。

(使⽤加样运载液的⽬的有三：增⼤样品密度，以确保DNA均匀进⼊样品孔内；使样品呈现颜⾊，便于加样操作；能明确显现样品在电泳胶上的泳动位置。

以0.5XTBE作电泳液时，溴苯酚在琼脂糖中的泳动速率与长300bp的双链线状DNA 相同，⽽⼆甲苯氰FF的泳动速率与长4kb的双链线状DNA相同。

)
3)将胶板浸没在1×甲醛凝胶电泳缓冲液中，点样前5V/cm预跑5min。

点样后3-4V/cm电泳。

4)电泳结束后(溴苯酚蓝迁移到约8cm处)，紫外灯下观察，照相
中⼼以化⼯⾏业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致⼒于搭建产研结合的桥梁。

以“专⼼、专业、专注“为宗旨，致⼒于实现研究和应⽤的对接，从⽽推动化⼯⾏业的发展。