高效液相色谱法测定水产养殖底泥中呋喃西林的研究.

72
南 方 水 产 科 学
第 10 卷
相应的 替 代 药 物 , 但 是 由 于 此 类 药 物 价 格 低 廉、 治疗效 果好 、市 场上 容 易 买 到 , 尤 其 是 用 户 使 用 习惯、 有效 替代 药物 难 寻 等 原 因 , 导 致 了 屡 禁 不 止、产 品药 残 时 有 检 出 的 问 题
[ 1 8] - 1 - 1
。要 解决 这
一问题 , 在 加强 开发 效 果 良 好、 价 格 低 廉 的 新 渔 药的同 时 , 也需 要加 强 养 殖 过 程 的 监 管。 光 照 对 呋 西林的 降解影 响较 大
[ 1 3 - 14 ]
, 通 常呋
西林
以拌入 饲料 投喂 或 者 通过 药 浴 的 方 式 用 药 , 达 到 治疗或 预防 疾病 的 目 的 , 过程 中 会 造 成 池 塘 环 境 污染 , 尤其 在池 塘底 部 光 照 较 弱 , 呋 西林降解 缓慢 , 原药 底泥 中会 有 一 定 程 度 的 残 留。 目 前 呋 西林 原 药 的 检 测 主 要 以 水 体 和 饲 料 为 研 究 对 象
第 10 卷第 1 期 2014年2 月 doi: 10. 3969 / j. issn. 2095 - 0780. 2014. 01. 011
南 方 水 产 科 学
South China Fisheries Science
Vol. 10, No. 1 Feb. , 2014
高效液相色谱法测定池塘底泥中呋
( Key Lab. of Aquatic Product Processing, Ministry of Agriculture; National R&D Center for Aquatic Product Processing; South China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou 510300, China)
ultrasonic-assisted heating extraction, finding that the latter extracted more. The HPLC chromatographic conditions had been optimized. Isolated on a C18 reversed-phase column, gradient elution obtained better peaks and better separation than isocratic elution. With methanol-methylene chloride ( 3 the detection limit reached 0. 250 μ g ・kg
Abstract: This paper studies the extraction and detection methods for nitrofurazone residues in sediment of aquaculture pond. The extraction by methanol-methylene chloride ( 3 7 ) mixed solvent achieved good effects. We compared oscillation extraction with
-1
7) as extraction solvent, the ultrasonic-assisted heating method ( 35 kHz, intensi-
ty of 100% , 40 ℃ ) for extraction obtained 80 % ～ 95 % recovery, and the relative standard of deviation was less than 10 % and . The user-friendly method has high recovery, good stability and high sensitivity.
通 信 作 者 : 李 来 好 ( 1963 - ) , 男 , 博士 , 研究 员 , 博士生 导师 , 从事 水产 品加工 与质量 安全 研究。 E-mail: laihaoli@ 163. com
All Rights Reserved. South China Fisheries Science
提取 , 提取效果较好 ; 比较了振荡提取和超声波辅助 加热提 取法 , 后者 提取能 力较强 ; 优 化了高 效液相 色谱测 定的色谱条件 , 在 C18 反 相 色谱 柱 上 分离 , 梯度 洗 脱 比等 度 洗 脱能 获 得 更 好峰 形 , 分 离 效果 更 好。 以 V( 甲 醇) 便。 关键词 : 底泥 ; 呋 中图分类号 : X 832 西林 ; 超声波提取 ; 高效液相色谱 ; 文献标志码 : A 文章编号 : 2095 - 0780 - ( 2014) 01 - 0071 - 07 V( 二氯甲烷 ) = 3 7 作为提取溶剂、超声波辅助加热法 ( 35 kHz, 强度 100% , 40 ℃ ) 提取, 回收率为 80%
( mL) ; M 为样品的称取质量 ( g) 。
2
结果 与分析
2. 1 提取液的选择 样品 提取液 为取 甲醇与 二氯 7) 混合 ; 标 准品 储备溶 液 : 100 西 林 标 准 品 10. 0 mg, 加 入 - 20 ℃保 2. 1. 1 单溶剂提 取 使 用超 声 波 加 热 法提 取 2 次 , 不同溶剂提取过程的 现象和 结果 列于表 1。单 溶剂提取回收率均较低 , 乙腈回收率最高 , 其次是 丙酮、甲醇 , 二 氯甲 烷 回 收 率 最 低 ( 10% ) , 这 可 能与底泥在溶剂中的分散度有关。提取过程中 , 底 泥在乙腈等溶剂中分散均匀 , 可以充分接触 , 而底 泥在二 氯甲 烷 或 乙 酸 乙 酯 中 则 难 以 分 散 , 凝 聚 成 团。另外 , 浓缩时 乙酸 乙酯、 甲醇 的提 取液 55 ℃ 较难蒸馏干 , 试验中发现蒸馏温度太高会造成目标 物质的损失。
[ 4 - 10 ]
, 严 重 危害 人 体 健
廉的 广谱 抗菌 药 , 呋
康 , 世 界各国 已严 令 禁 止 在 食 用 动 物 中 使 用。 呋 类药 物 之 一 , 在 水 产 养 殖 中 主 要 用于 水生动 物 赤 皮、 烂 鳃、 肠 炎 等 疾 病 的 治 疗 和 预防 , 虽然 在中 国 批 准 使用 的 药 物 中 已 有 较 多
魏 涯 , 岑剑伟 , 郝淑贤 , 黄
西林的研究
卉 , 赵永强 , 辛少平 , 李来好
( 中国水产科学研究院南海水产研究所 , 农业部水产品加工重点实验室 , 国家水产品加工技术研发中心 , 广东 广州 510300) 摘要 : 文章研究了池塘底泥中呋 西林残留量的提取和检测 方法 , 以 V( 甲 醇 ) V( 二 氯甲烷 ) = 3 7 混 合溶剂
[ 14 - 1 8]
离心 5
min, 沉 淀 按 上 述 方 法 测 定 , 上 清 液 按 照 岑 剑 伟 的方法进行 检 测 , 结 果 为上 清 和沉 淀 两 部分 样 品提取方 式
- 1
含量之和。 1. 2. 3 振荡法的 振摇速 度为 230 r・ min 1. 2. 4 , 时 间 15 min; 超声 波 加 热 法 的频 率 在 确 定其 他色 谱条 件 下 , 选
- 1
取方法 , 优 化高 效液 相 色 谱 检 测 条 件 , 以 建 立 快 速、简 便、 准确、 灵敏 度 高 的 方 法 , 检 测 水 产 养 殖环境 底泥 中呋 西林 的残 留量。
1
1. 1
材料 与方法
主要仪器设备和试剂 仪器设备有高 效液 相色 谱 , 配有 DAD 检 测器
( AgiLent1100, 美 国安 捷 伦 公 司 出品 ) ; 旋 转 蒸 发 仪 ( N-1000, 日 本 产 ) ; 自 动 平 衡 离 心 机 ( TDZ5WS, 湖 南 湘 仪 仪 器 公 司 出 品 ) ; 超 声 波 清 洗 仪 ( Transonic TI-H10, 德国产 ) ; 振荡 仪 ( Eyela MMV1000W, 日本产 ) 。 药品 与试 剂 有呋 西林 标 准品 ( Dr. Ehrenstorfer 公 司 出 品 ) ; 甲醇 ( 分 析 纯 ) , 二 氯甲烷 ( 分析纯 ) , 丙酮 ( 分析纯 ) , 乙酸乙酯 ( 分析 纯) , 乙腈 ( 色谱纯 ) , 无水硫酸镁 ( 分析纯 ) ; 试验 用水应符合 GB/ T 6682 一 级 水 的 标 准。试 验 材 料 为池塘底泥。 1. 2 1. 2. 1 试验方法 试剂 配制
-1
～ 95% , 相对标准偏差小于 10% , 检测限达到 0. 250 μ g ・ kg
。该方法回收率高、稳定性 好、 灵敏度高、操作简
HPLC determination of nitrofurazone in sediment of aquaculture pond
WEI Ya, CEN Jianwei, HAO Shuxian, HUANG Hui, ZHAO Yongqiang, XIN Shaoping, LI Laihao
- 1 - 1
式中 X 为 样 品 中 呋 (μ g・mL (μ g・mL
- 1
kg ) ; C1 为 沉 淀 提 取 液 中 呋 ( mL) ; C2 为上清液提取液 中呋
- 1
) ; V1 为 沉 淀 提 取 液 最 终 定 容 体 积 ) ; V2 为 上 清 液 提 取 液 最 终 定 容 体 积
解 , 由 于 其 代 谢 物 氨 基 脲 ( SEM) 具 有 潜 在 的 致 畸、致 突变 和致癌 等的 危害 作 用 , 且 SEM 能 西 与蛋白 质稳 定结 合 而 难以 消 除 , 一 旦 使 用 呋
收 稿 日 期 : 2013 -01-07; 修回日 期 : 2013-09 -06 资 助 项 目 : 现 代 农 业 产 业 技 术 体 系 建 设 专 项 资 金 ( CARS-49 ) ; 国 家 科 技 支 撑 计 划 项 目 ( 2012 BAD28 B00 ) ; 茂 名 市 科 技 计 划 项 目 ( 2011A01002) 作 者简 介: 魏 涯 ( 1983 - ) , 女 , 硕士 , 助理 研究 员 , 从 事水 产品加 工及 质量安 全研究 。 E-mail: weiya1009 @ gmail. com
, 研究底泥 中呋
西林 检测 的方 法还 未 西林的提
见报道 。笔 者以 底泥 为 对 象 , 研 究 呋
为 35 kHz, 强度 100% , 温度 40 ℃ , 时间 15 min。 色谱条 件 择比较不同流动相 , 优化洗脱程序。色谱柱为 Agilent Zorbax SB-C18, 250 mm × 4. 6 mm( 5 μ m) ; 进 样量 20 μ L; 流 速 1. 0 mL ・ min ; 柱 温 30 ℃ ; 检 测信号 365 nm。 1. 2. 5 计算公 式 样品中 呋 西林质 量分 数计 算公式为 : X = C・ ・ 1 V 1 + C 2 V 2 ×1 000 M 西林 的质 量分数 ( μ g・ 西林的 质量浓度 西林 的质量 浓度
[ 11 - 1 2]
mL 离心管中 , 加提取液 20 mL, 再加入 5 g 无水硫 酸镁 , 充分摇匀 , 按规定方式提取后 , 于 4 500 r ・ min 离心 5 min, 取上清液 , 沉淀再加入 20 mL 提 取液重复提取 1 次。合并上清液于蒸馏瓶中 , 在旋 转蒸发仪上 45 ℃水浴减压蒸溜至近干 , 加 入 2 mL 50% 乙 腈 水 溶 液 洗 瓶 , 取 洗 液 过 0. 22 μ m 滤 膜, 于液相分析。以上所有操作均须避光。若底泥水分 含量较高 ( 呈 流 状 ) , 应 先 于 4 500 r ・ min 等
Key words: sediment; nitrofurazone; ultrasonic extraction; HPLC
呋
西 林 ( nitrofurazone, NFZ) 是 一种 较高效 、 西林 摄 入 体 内 后 迅 速 降
[ 1 - 3]
林 , 其 代谢产 物长 久残 留 西林 为硝基 呋