炮制对酒胡芦巴中多糖含量的影响

炮制对酒胡芦巴中多糖含量的影响
刘颖;谢超;郑彧;郭忠成;阚丽斌;张亚楠
【摘要】目的探讨炮制对酒胡芦巴中多糖含量的影响.方法测定不同的烘制温度,烘制时间,黄酒加入量对酒胡芦巴中多糖含量的影响,并筛选出酒胡芦巴的最佳炮制工艺.再将酒胡芦巴与烘制水润、烘制胡芦巴中多糖含量进行对比,探讨辅料对酒胡芦
巴中多糖含量的影响.结果烘制温度和黄酒加入量对酒胡芦巴中多糖含量有显著影响,酒胡芦巴中多糖的含量随着烘制温度和黄酒加入量的升高而升高.酒胡芦巴的多
糖含量与烘制水润胡芦巴相近,优于烘制胡芦巴.结论加热和辅料中的水可以促进酒
胡芦巴中多糖的溶出.
【期刊名称】《药学研究》
【年(卷),期】2016(000)003
【总页数】4页(P142-144,174)
【关键词】胡芦巴;多糖;炮制
【作者】刘颖;谢超;郑彧;郭忠成;阚丽斌;张亚楠
【作者单位】[1]辽宁中医药大学,辽宁大连116600;[2]暨南大学药学院中药及天然药物研究所,广东广州510632
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
胡芦巴为豆科植物胡芦巴（Trigonella foenum-graecum L.）的干燥成熟种子［1］。

在我国多地都有分布，现主要分布于河南、安徽、河北、宁夏等地［2］。

胡芦巴具有很好的降糖功效，其中多糖是主要的降糖成分之一［3］。

中医理论认为糖尿病的重要致病机理是肝失疏泄以致气滞血瘀。

而酒可入肝经，可增强中药发挥行气活血作用增强，可缓解消渴之症［4-5］。

故本试验以多糖为指标，探讨炮制对酒胡芦巴中多糖含量的影响，并优选出酒胡芦巴的最佳炮制工艺，为临床上合理使用酒胡芦巴治疗糖尿病提供一定的理论依据。

UVmini-1240紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；OB-型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂）；LD5-10低速离心机（北京医用离心机厂）；
SHA-C恒温振荡器；FW-100高速万能粉碎机（电压220 V，频率460 W）；SHB-3循环水多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）；石油醚（沸程范围60～90℃）、95%乙醇、正丁醇、氯仿、浓硫酸（分析纯，天津市大茂化学试剂有限公司）；
苯酚（分析纯，北京市旭东化工厂，110℃减压蒸馏自制）；塔牌黄酒（浙江塔牌绍兴酒有限公司，批号：GB/T13662，酒精度：13.0%vol）；胡芦巴种子，经辽宁中医药大学王冰教授鉴定为豆科植物胡芦巴（Trigonella foenum-graecum L.）的干燥成熟种子。

2.1 胡芦巴炮制品制备
2.1.1 酒胡芦巴取胡芦巴20 g于烧杯中，加入不同质量的黄酒，用保鲜膜密封，闷润70 min，在设定的温度下烘制相应的时间。

2.1.2 烘制胡芦巴取胡芦巴20 g于烧杯中，180℃烘制15 min。

2.1.3 烘制水润胡芦巴取胡芦巴20 g于烧杯中，加入6 mL水，用保鲜膜密封，闷润70 min，用保鲜膜密封，180℃烘制15 min。

2.2 多糖的提取与精制［6］称取胡芦巴粉末10 g，用10倍量90%乙醇90℃加热回流3次，每次2 h，抽滤，将药渣于60℃烘干至恒重。

精密称取1 g已烘干
至恒重的药渣，用30倍量的水加热回流提取2次，每次1 h，抽滤合并滤液。

滤
液用Sevage法（正丁醇∶氯仿＝1∶4）除蛋白3次，再用3倍体积95%乙醇沉
淀24 h，用无水乙醇，丙酮洗涤沉淀，得到白的粉末，60℃烘干至恒重，即得精制胡芦巴多糖。

2.3 葡萄糖标准品溶液的配制精密称取葡萄糖标准品约10 mg，纯净水定容至100 mL，即得浓度为0.101 4 g·L-1葡萄糖对照品溶液。

2.4 供试品溶液的配制称取胡芦巴生品及炮制品粉末各10 g，用10倍量90%乙醇90℃加热回流3次，每次2 h，抽滤，将药渣于60℃烘干至恒重。

精密称取1 g已烘干至恒重的药渣，用30倍量的水加热回流提取2次，每次1 h，抽滤合并滤液。

滤液用Sevage法（正丁醇∶氯仿＝1∶4）除蛋白3次，将液体移至100 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5 标准曲线的制备精密吸取“2.3”项下的葡萄糖标准品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.0 mL，分别置于具塞试管中，依次加纯水使最终体积为2 mL，然后分别加入5%的苯酚1 mL，再加入浓硫酸5 mL。

静置5 min，放入沸水浴中反应5 min，迅速放入冰水浴中，冷却至室温，用2 mL纯净水按上述操作制得空白溶液，于波长490 nm处测定吸光度。

以葡萄糖的浓度为横坐标X（mg·L-1），吸光度为纵坐标Y，绘制标准曲线，得到回归方程Y＝0.028 46X ＋0.090 64（r＝0.999 5）。

表明样品在1.27～25.4 mg·L-1浓度范围内线性良好。

2.6 换算因子的测定精密称取胡芦巴多糖约10 mg置于100 mL容量瓶中，加纯净水溶解，配制成浓度为0.101 1 g·L-1的胡芦巴多糖溶液。

按“2.5”项下的方法操作，测定吸光度。

代入回归方程计算出胡芦巴多糖溶液中葡萄糖的浓度，按公式：换算因子（f）＝m/（C×D），计算换算因子。

式中m为胡芦巴多糖的质量（mg），C为胡芦巴多糖溶液中葡萄糖的浓度（g·L-1），D为胡芦巴多糖溶液的稀释因数。

求得f为
3.18，RSD为1.87%（n＝5）。

2.7 方法学考察
2.7.1 精密度试验取同一供试品溶液2.0 mL，按“2.5”项下的方法操作，连续
测5次，得吸光度，RSD为0.20%，结果表明精密度良好。

2.7.2 稳定性考察取同一供试品溶液2.0 mL，按“2.5”项下的方法操作，分别
在放置0、15、30、60、90、120 min，测定吸光度，RSD为0.18%，结果表明在2 h内供试品溶液显色稳定。

2.7.3 重复性试验取胡芦巴粉末5份，按“2.4”和“2.5”项下的方法制备供试
品溶液并测定吸光度，计算出多糖的含量，RSD为1.36%，结果表明重复性良好。

2.7.4 加样回收率试验精密称取葡萄糖标准品约0.3 g，置于100 mL的容量瓶中，即得浓度为
3.115 g·L-1的葡萄糖标准品溶液。

分别精密称取胡芦巴粉末0.5 g，吸取葡萄糖标准品溶液10 mL于圆底烧瓶中，按“2.4”和“2.5”项下的方法制备供试品溶液并测定吸光度，计算多糖含量。

按公式：加样回收率＝m测/m实×100%，计算加样回收率，得加样回收率平均值为99.22%，RSD为1.13%。

2.8 胡芦巴中多糖含量测定按“2.4”和“2.5”项下的方法制备供试品溶液并测定吸光度，代人回归方程计算出供试品溶液中葡萄糖的浓度，按公式多糖含量＝
C×D×f×100/W，计算多糖含量。

式中C为胡芦巴供试品溶液中葡萄糖的浓度，
D为胡芦巴多糖的稀释因数，f为换算因子，W为样品的质量。

2.9 单因素试验基于本课题组前期的试验基础，以烘制温度、烘制时间和黄酒加入量为考察因素，进行单因素试验［7］。

单因素试验及结果见表1。

2.10 正交试验及工艺优选根据单因素试验结果，选择烘制温度为160、180、200℃，烘制时间为10、15、20 min，黄酒量为10%、20%、30%，进行L9（34）正交试验，因素水平表见表2，正交试验结果见表3，方差分析结果见表4。

2.11 工艺验证试验以酒胡芦巴最佳工艺A2B2C3平行制备3组样品，测得多糖含量分别为10.63%、10.55%、10.89%。

结果表明确定的最佳工艺稳定可行。

2.12 酒烘与水润烘制和烘制胡芦巴的对比试验为了进一步探讨辅料对酒胡芦巴多糖含量的影响，对黄酒烘制，水润烘制和烘制胡芦巴中多糖含量进行对比，试验结
果见表5。

3.1 本试验以烘制温度、烘制时间、黄酒加入量为考察因素进行单因素试验，初
步探讨烘制温度、烘制时间、黄酒加入量对酒胡芦巴中多糖含量的影响。

由单因素试验结果我们可以看出烘制温度、烘制时间和黄酒加入量对酒胡芦巴多糖的含量均有影响。

酒胡芦巴中多糖的含量随烘制温度的升高而升高，当温度为180℃时酒
胡芦巴中多糖含量最高，温度为200℃时多糖含量与180℃时近似，但200℃时
酒胡芦巴有点焦煳，故烘制最佳温度初步定为180℃。

当烘制时间为10 min时多糖含量最高，明显高于烘制时间为5 min，烘制时间再延长时，多糖含量变化不大，从节约能源的角度，将烘制时间定为10 min。

酒胡芦巴中的多糖含量随着黄酒加入量的增加而增加，当黄酒加入量为30%时，多糖含量最高。

2015年版《中国药典》的炮制通则中规定，酒制法除另有规定外，每100 kg待炮制品用黄酒10～
20 kg。

本课题组对黄酒加入量进行考察，当黄酒加入量为30%时，黄酒可完全渗入到胡芦巴种子中，故黄酒加入量30%合理，将黄酒最佳加入量定为30%。

由方差分析结果可知，烘制温度和黄酒加入量对酒胡芦巴中的多糖有显著影响。

将酒烘与水润烘制和烘制胡芦巴中多糖含量进行对比发现，酒烘与水润烘制胡芦巴中多糖含量近似，而高于烘制胡芦巴中多糖的含量。

黄酒加入量的增加变相的增加了水分的含量，推测加热和辅料中水的共同作用可促进酒胡芦巴中多糖的溶出。

3.2 胡芦巴有很好的降糖作用，在美国已被批准作为降糖保健产品，常与降糖药
合用，增强药物的降血糖效果［8］。

胡芦巴是我国传统的降糖中药，而迄今为止关于胡芦巴的降糖保健品尚未得到很好的开发和利用。

据中医古籍记载，胡芦巴经酒制后有很好的降糖功效。

故本试验结合传统中医理论，充分发挥中药用药特色，以多糖含量为指标，对影响酒胡芦巴中多糖含量的炮制因素进行了一系列的研究，并优选出酒胡芦巴最佳工艺。

这可为更好的开发酒胡芦巴作为降糖保健产品提供一
定的理论依据。

【相关文献】
［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：242.
［2］张广伦，张卫明.胡芦巴及其综合利用［J］.中国林副特产，2011（4）：96-98.
［3］石艳，王路飞，李相军，等.胡芦巴多糖A2对糖尿病大鼠肾脏CTGF表达的影响［J］.中国
实验诊断学，2006，12（9）：1093-1096.
［4］祝谌予.用活血化瘀法为主治疗糖尿病病例报告［J］.新医药学杂志，1978，19（5）：8-9. ［5］李中南，方朝晖，张进军，等.糖尿病从瘀论治探析［J］.中医药临床杂志，2012，24（2）：154-157.
［6］宋利华，萧伟，鹿丽丽，等.正交试验优选人参多糖的提取工艺［J］.中草药，2012，43（2）：283-287.
［7］郑彧，肖洪贺，常成栋，等.正交法优选酒制胡芦巴炮制工艺［J］.中成药，2013，35（8）：1733-1736.
［8］陈挚，雷亚亚，黑晶，等.胡芦巴多糖及低聚糖调血脂活性研究［J］.中草药，2015，46（8）：1184-1189.。