苯肽胺酸原药和可溶液剂高效液相色谱分析方法

农药研究Pesticide Science and Administration2020,41(7)
苯肽胺酸原药和可溶液剂高效液相色谱分析方法
孟灿，马杜康，原万玲，赵鹏跃*，黄啟良*
(中国农业科学院植物保护研究所，北京100193)
Analysit of PhtUalamic adn TC and SL by HPLC
Meng Can,Ma Dukang,Yuan Wanting,Zhao Pengyue,Huang QUang(Institute of Plant Pro­
tection,Chinese Academy of Agacultuol Sciences,Beijing100139,China)
Abstrad:A high perfooiance liquid chromatography(HPLC)method was established for W z de-
teoiination of phthalamic acid in technical material(TC)and soluble concenhate(SL)foanula-
tion.Agilent ZORBAX SB-C18column and UV一vis(61601x0was used.Methanol and 0.1%
phosphoac acid aqueous solution were e mployed as mobile phase.Phthalamic acid in TC and SL
ooomuaaioon wattepaoaied and quanioiaioeeayanaayeed aiihewaeeaengih oo254nm.Theaoneaooe-
gossion equation of phthalamic acid is y=10.892a一35.057with the correlation coefficient of
1.0000.The standard deviations of98%phthalamic acid TC and20%SL were0.35%and
0.11%,respectively.The average receveo of20%phthalamic acid SL was100.38%.The results
showed that the above HPLC method was sensitive and rapid enough C z phthalamic acid TC and for­
mulation analyses.
Key word;:phthalamic acid；HPLC；analysis
摘要：本文采用高效液相色谱法，以甲醇+0.1%磷酸水溶液为流动相，使用AgiUnt
ZORBAX SB-C18色谱柱和紫外-可见光检测器，在254nm波长下对98%苯肽胺酸原药和
20%苯肽胺酸可溶液剂试样中有效成分进行分离和定量分析。

结果表明，苯肽胺酸的线性
回归方程为y二10.892a-35.057，相关系数为1.0000；98%苯肽胺酸原药和20%苯肽胺酸
可溶液剂的标准偏差分别为0.35%和0.11%(苯肽胺酸可溶液剂的平均回收率为
100.38%。

该方法灵敏高、操作简便快速，适用于苯肽胺酸原药及制剂产品的含量检测。

收稿日期：2020-7-2
基金项目：国家重点研发计划(2017YFD0200300)
作者简介：孟灿，女，科研助理，主要从事农药剂型加工与质量控制技术研究＞E-mail：770653725@qq.tm＞
通讯作者：朗!跃，女，博士，畐!］研究员，主要从事农药剂型加工与质制技术研究＞E-mail:zhaopengyue@caas..110通讯作者：黄啟良，男，博士，研究员，主要从事农药剂型加工与质量控制技术研究＞E-mail:qlhuang@ippcas.
农鬲钾冷"质巩Pesticide Science and Administration2020,41（7）农药研究关键词：苯肽胺酸；高效液相色谱；分析
中图分类号：S482.8；0657.7+2文献标识码：A文章编号：1002-5480（2020）7-32-6
苯肽胺酸（phthalamic acid）,化学名称N-苯基邻苯二甲酸单酰胺，CAS号4727-29-1,是一种白色针状晶体，微溶水、氯仿、四氯甲烷等，溶于乙醇、丙酮等有机溶剂+门。

原药外观为淡黄色或白色粉状固体。

研究表明，苯肽胺酸能够增强雌花柱头的活性，促进作物开花和结果，尤其是在果树上使用具有较好的效果。

在温室或大田状态下，苯肽胺酸可以诱导作物产生抗逆性，增强对逆境的适应性+2,。

苯肽胺酸1982年创制于匈牙利N/iki化工工业研究所，2018年在我国以植物生长调节剂获得正式登记。

开展苯肽胺酸农药产品中有效成分定性定量分析方法对于产品质控和行业监管具有重要的意义。

有文献报道了苯肽胺酸含量测定的紫外-可见分光光度法，该方法线性相关性好，重复性和准确性高+3打吴厚斌等以邻苯二甲酸二环己酯为内标物，建立了苯肽胺酸原药的气相色谱分析方法，该方法具有较好的线性、精密度和准确度+4,。

刘同金等采用气相色谱建立了苯肽胺酸在小麦及土壤中的残留分析方法+5打秦旭等采用高效液相色谱法测定了棉花中苯肽胺酸的残留+6,。

韦思华等建立了生物样品大鼠血样和组织样本中苯肽胺酸含量测定的高效液相色谱分析方法+7,。

目前关于苯肽胺酸原药和制剂产品的高效液相色谱分析方法尚未见报道%本文建立了在同一液相色谱条件下测定苯肽胺酸原药和可溶液剂的方法，为苯肽胺酸农药产品质量检测提供依据％
1材料与方法
1.1仪器与试剂Agilent1260-DAD高效液相色谱仪（自动进样器）；色谱柱：Agilent ZORB-AX SB-C18不锈钢柱（250mmU4.6mm,5#m）；KQ3200B超声波清洗器；有机过滤器（微膜孔径0.45#m）%
甲醇（色谱纯）；二次蒸憎水；磷酸（分析纯）；苯肽胺酸标准品（质量分数99.90%）；98%苯肽胺酸原药；20%苯肽胺酸可溶液剂。

1.2液相色谱操作条件流动相：甲醇+ 0.1%磷酸水（体积比50:50）；柱温：30r；流速：LOmL/min；检测波长：254nm；进样体积：5#L；保留时间：苯肽胺酸约6.0min%上述液相色谱操作条件是典型的操作参数，可以根据不同仪器特点和温度条件，对给定的操作参数进行适当的调整，以获得最佳效果%典型的苯肽胺酸标准品、98%苯肽胺酸原药和20%苯肽胺酸可溶液剂样品高效液相色谱图（图1〜3）%
农药研究Pesticide Science and Administration2020,41(7)
图298%苯肽胺酸原药高效液相色谱图
苯肽胺酸
6.004mm
图320%苯肽胺酸可溶液剂高效液相色谱图
1.3测定步骤
1.3.1标准溶液的配制称取0.025/（精确至0.00001/）苯肽胺酸标准品于25mL容量瓶中，加入10mL甲醇，超声波振荡5min,冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

1.3.2试样溶液的配制分别称取98%苯肽胺酸原药试样0.025/、20%苯肽胺酸可溶液剂试样0.1/（精确至0.00001/）于100mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超声波振荡5min,冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤待测。

1.3.3测定在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针苯肽胺酸峰面积相对变化＜1.2%后，按照标样溶、试、试、的
行测定。

1.3.4计算将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中苯肽胺酸峰面积分别进行平均。

试样中苯肽胺酸质量分数按公式（1）:
82X41L!
!1K81L42（1# :
!1——试样中苯肽胺酸质量分数,％；
8——试样溶液中苯肽胺酸峰面积的平均；
41——苯肽胺酸标样的质量，g；
!——标样中苯肽胺酸质量分数,％；
8——标样溶液中苯肽胺酸峰面积的平均；
42---------试样的质量，g o
Pesticide Science and Administration 2结果与讨论
2.1流动相的选择由于98%苯肽胺酸原药
中有一定的杂质干扰，为使有效成分得到良好
的分离效果，并且峰，保留时间适中,
根据苯肽胺酸物化性质和溶剂的紫外吸收波
长，选择甲醇作为溶剂溶解样品，并以甲醇和
0.1%磷酸水作为流动相，并按不同的比例在
色谱柱上进行条件优化％随着甲醇比例的增
加，保留时间减小，当甲醇与0.1%磷酸水体
积比为60:40时，杂质峰干扰苯肽胺酸，峰
纯度达不到试验要求，最终选择甲醇+0.1%
磷酸水（体积比50:50）作为流动相，流速2020，41（7）农药研穽
l.OmL/mU。

该条件下，苯肽胺酸色谱峰峰形较好，与杂质能完全分离，具有良好的精密度和准确度，并且分析时间较短，提高了工作效率。

2.2检测波长的选择利用紫外-可见检测器对苯肽胺酸溶液在210-400nm范围内进行扫描。

苯肽胺酸的紫外光谱图（图4），从图中可以看到苯肽胺酸的最大吸收波长约235nm o然而，在该波长处检测苯肽胺酸有一定的干扰，峰纯度不能达到要求，而在波长254nm处干扰较少，峰纯度达到990以上，能够满足分析的要求，故将检测波长确定为254nm%
2.3分析方法的特异性本试验采用HPLC-dad峰纯度进行苯肽胺酸高效液相色谱分析方法特异性鉴别。

结果表明，苯肽胺酸标样、98%苯肽胺酸原药和20%苯肽胺酸可溶液剂中的苯肽胺酸HPLC-DAD峰纯度均〉990，有效成分处无其它物质干扰，符合定量分析要求。

2.4分析方法的线性关系按1.
3.1标准品的配制方法配制标样溶液，用甲醇以1:1的比例梯度稀释4次，获得5个浓度的有效成分线性相关溶液。

在上述操作条件下，待仪器稳定后,分体的，测定，2次测定的平均结果。

以苯肽胺酸质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

从图5可以看出，苯肽胺酸质量浓度在62.69〜1003.00my/L之间（进样体积5#L），与相应的苯肽胺酸峰面积呈现良好的线性关系，回归方程为y二10.892x-35.057，相关系数（R2）为
1.0000，可以满足定量分析要求。

2.5分析方法的精密度从同一样品中称取5个试，在上谱条件下分，测98%苯肽胺酸原药和20%苯肽胺酸可溶液剂的标准偏差分别为0.35%和0.11%（表1）% 98%苯肽胺酸原药中苯肽胺酸质量分数测定结果的相对标准偏差为0.35，小于修改的Howitr公式2（1-0-51oyC）x0.67二1.34（其中C为有效分量，数），有效
分分析方法精密度的测定结果符求。

20%苯肽胺酸可溶液剂中苯肽胺酸质量分
Pesticide Science and Administration2020,41(7)
农药研究
数测定结果的相对标准偏差为0.50，小于修改有效成分分析方法精密度的测定结果符合的H otw P z公式2(1-0-51ogC)x0.67=1.69，表明要求％
质量浓度(mg/L)
图5苯肽胺酸标准曲线
表1分法的
制剂产品
量分数(%)标准偏差
(%)
相对标准偏差
(%) 12345平均
98%苯肽胺酸原药98.8899.6799.6399.3599.7499.450.350.35 20%苯肽胺酸可溶液剂21.2021.3521.2121.2621.4521.290.110.50
2.6可溶液剂分析方法的准确度分别称取5个已知含量的可溶液剂试样于100mL容量瓶中,加入1.3.1中配制的苯肽胺酸标样溶液4mL,用甲醇超声溶解，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀。

苯肽胺酸的回收率按式(2)计算R=L100 (2)
c
式中)
R---回收率，%；
#---测定量，mg；
b——所称原药样品中待测组分量，mg；
c-----理论加入量，mg。

经测定，20%苯肽胺酸可溶液剂的平均回收率为100.38%，试验结果(表2)，表明有效成分分析方法准确度的测定结果符求。

表2苯肽胺酸可溶液剂分析方法的准确度试验结果
所称样品量(mg)理论加入量(mg)测定量(mg)回收(%)平均回收(%) 114.71 4.0028.4299.96
94.46 4.0024.19101.99
101.49 4.0025.5999.57100-38
110.20 4.0027.4699.96
110.49 4.0027.54100.42
3结论确度和精密度，并且操作简便、快速，是进行结果表明，本方法可用于98%苯肽胺酸原苯肽胺酸农药产品质量检测较理想的分析药和20%苯肽胺酸可溶液剂定量分析，具有良方法。

好的分离效果，线性关系良好，具有高的准下转第41页
Pesticide Science and Administration2020,41(7)方法的正确度和精密度进行了研究%在3个添加
水平下，回收率及相对标准偏差均符合残留检测
标准+15打本方法便捷、高效，为甘蓝中虫｝a
及其代谢物的残留检测提供了可靠的方法%
参考文献
[1]伍灿-虫｝a环境安全性评价+d].湖南农业大
，2016.
[2]孙国强，陆贻通.漠虫a农药的作用机理、应用及开
发前景[J].安徽农学通报，2007,13(7)：69-71.
[3]Yuan J Z,Li QF,Huang J B,at al.Effect of chlorfc-
napyr on cypermethrin-resistant Culex pipiens patens
[J].Acte Tropica,2015,(143)：13-17.
[4]Raahavendre K,Barid T K,Bhlt R M,ct al.Evalua­
tion of the pyolo insecticide chlorfenapyr far the con-
Wcl of Culex quinquefasciatus Say+J].Acte Tropica,
2011,(118):50-55.
[5]FAO and WHO.Pesticide residues in food2018-Re­
port2018-Joint FAO/WHO Meeting on Pesticide Res­
idues+M].Rome：FAO and WHO,2019：39-55.
[6]中国农药信息网-首页-行业数据+DB/OL].
[2020-06-23]
http：/L lww.chinapesticide.ore，cn/hysj/index.jhtwl
[7]占秀萍，余淑红.液相色谱法测定蔬菜中咯菌a、农药研究
漠虫a和虱｝k等农药的残留[J].农药科学与
理,2012,33(4)：31-34
[8]伍灿，刘一平，熊兴明，等.虫｝a在大白菜和土壤
中的残留降解研究[J]•湖南农业科学，2016
(04)：72-75
[9]冯义志，梁林，张爱娟，等.虫｝a在姜中的残留量
及消解动态研究+J]•农药科学与管理，2020,41
(02):21-24+9.
[10]杜红霞，李慧冬，陈子雷，等.气相色谱法测定桃
中虫｝a残留量[J]•山东农业科学，2009
(3):113-114.
+11]吴迪，罗雪婷,潘洪吉,等.气相色谱法测定黄瓜、
苹果中的虫｝a残留量[J].食品科学，2010,
31(10):268-271.
[12]张芬，张新忠，陈宗懋，等.QuEChERS净化GC-
ECD测定茶叶与土壤中廛虫嗪、虫｝a及高效氯
氟氤菊酯残留[J]•分析测试学报，2013,32
(4)：393-400
[13]王兵，李斌，张媛媛，等.QuEChERS-高效液相色
谱法测定绿茶中虫｝a残留[J]•中国食品学
报，2017,17(01)：240-245.
[14]吴红，焦九英，蒋松锤，等.漠代毗咯a高效液相
色谱分析[J]•科技信息，2013(09)：59+78.
[15]NY/T788-2018.农作物中农药残留试验准则[S].
<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<< 36
参考文献
[1]刘长令.世界农药大全：除草剂卷[M].北京:
化学工业出版社，2002.119-120.
[2]吴琼.苯肽胺酸对辣椒生长发育及抗逆性的影响
[D]>北农林大，2019>
[3]程伟琴，冯明，王毅楠，王延花，霍二福.紫外-可
见分光光度法测定苯肽胺酸的含量[J]•广州化学，2018,43(5):44-48.
[4]吴厚斌，于荣，李国平，陈铁春，周蔚.苯肽胺酸的
气相色谱分析[J]•农药科学与管理，2006,25
(11)：5-7>
[5]刘同金，李瑞娟，于建垒,宋国春，高宗军，李如美,李
>苯肽胺酸在和的残安全用评[J].山东农业科学,2014,46(2):125-128.
[6]秦旭，徐应明，孙扬，赵立杰，王林，孙约兵，梁学
峰.QuEChERS/高效液相色谱法测定棉花田中苯肽胺酸及其代谢物的残留量[J]•分析测试学报，2014,12：1374-1379.
[7]韦思华，代玲玲，周峰，李龙.高效液相色谱法检测
生物样本中苯肽胺酸的含量[J]•农药，2016,55
(1)：33-35,38.。