肥达氏、外斐氏实验简易操作规程

肥达氏、外斐氏实验简易操作规程

一、试剂厂家：宁波天润生物药业有限公司。

二、试剂名称：伤寒、副伤寒及变形菌OX2、OX19、OXK诊断菌液。

三、试剂主要组成成份：

肥达氏诊断菌液5瓶：(10ml/瓶，7.0×109/ml) 伤寒O901、伤寒H901、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙型副伤寒诊断菌液，各一瓶。

外斐氏诊断菌液3瓶：(10ml/瓶，7.0×109/ml) 变形菌OX2、变形菌OX19、变形菌OXK诊断菌液，各一瓶。四、检验原理：

用甲醛溶液灭活的伤寒、副伤寒及变形菌分别制成，通过凝集试验原理供肥达氏（Widal）、或外斐氏（weil-Felix）反应用。

五、标本要求：疑似伤寒、副伤寒或斑疹伤寒病人的血清。

六、检验方法：

1、用10×6规格的试管架分别装入洁净的玻璃大试管：肥达氏试验玻璃大试管5列×6排；外斐氏试验玻璃大试管3

列×6排。

2、用生理盐水配制1：40倍的血清稀释液16 ml，置于洁净的锥形玻璃瓶内（即生理盐水15.6ml+血清400μl），旋转

摇动充分混匀。

3、用吸量管分别在试管架的第一排试管内（肥达氏5管、外斐氏3管）加入1ml 1：40倍的血清稀释液，在锥形玻

璃瓶内加入8 ml生理盐水，对倍稀释了1：40倍的血清稀释液，旋转摇动充分混匀1：80的血清稀释液；用吸量管分别在试管架的第二排试管内加入1ml 1：80倍的血清稀释液，在锥形玻璃瓶内加入8 ml生理盐水，旋转摇动充分混匀成1：160的血清稀释液；依此方法连续对倍至第五排试管1：640的血清稀释液，并分别加入1ml血清稀释液在相对应的试管内；在第六排的试管内分别加入1 ml生理盐水作为阴性对照。

4、轻轻摇匀诊断菌液，从第一列至第八列分别加入按O、H、甲、乙、丙、OX2、OX19、OXK顺序对应的菌液50

μl/管，并充分摇匀，把试管架平放置37℃的水浴箱内，18至24小时取出看结果。

七、结果判断：

1、观察时在斜射光光线下透视，观察试管中悬液的混浊程度及管底凝块的多少，先观察对照管，再分别观察各试管

的凝集情况并与对照管相比较。根据混浊程度及管底凝块的多少，以“4+”“3+”“2+”“1+”符号记录。

（1）4+：上清液完全澄清，细菌凝集块全部沉于试管底，呈大的凝块。

（2）3+：上清液澄清度达75%，大部分细菌凝集块沉于试管底，呈较大的凝块。

（3）2+：上清液澄清度达50%，约50%细菌凝集块沉于试管底，凝块较小，但仍明显可见。

（4）1+：上清液混浊，澄清度仅有25%，仅有部分细菌凝集成块沉于试管底，凝块很小，需仔细观察才能见到。（5）—：与对照管相同，液体均匀混浊，试管底无凝集块，但有细菌沉淀的圆形小团。

2、血清的凝集效价（即滴度）

（1）出现明显凝集（2+）的血清最高稀释度即为血清抗体的效价（滴度）。

（2）血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。一般认为，伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在1：80以上，“H”抗体在1：160以上，甲、乙型副伤寒沙门菌凝集效价在1：80以上才有诊断价值。

八、结果分析及临床意义：

1、首先应考虑当地人的凝集效价，凝集效价大于正常效价才有意义。

2、伤寒病人的“O”凝集素常较“H”凝集素出现早，存在于血清内的时间较短，而“H”凝集素出现较迟，但效

价较高，存在于血清内时间亦较长，可达数年。

3、因伤寒“H”凝集素在血内保持时间较久，而“O”凝集素较短暂，所以曾接种过伤寒菌苗者，“O”凝集效价在诊

断上较重要。

4、曾患过伤寒或曾戒接种过伤寒沙门菌，新近又感染流行性感冒或布氏杆菌等疾病时，可产生高度的“H”凝集素及

较低的“O”凝集素，这种反应称回忆反应。

5、确诊为伤寒的患者中约有10%的患者肥达反应始终为阴性，故阴性结果不能排除伤寒的诊断。

6、采血的时间不同，肥达反应的阳性率也不同，发病第1周阳性率为50%，第2周为80%，第4周为90%，恢复

期凝集价最高，以后逐渐下降，以致转阴。临床上一般以双份血清（疾病早期和恢复期）的凝集价有4倍增高作为新近是否感染该病的指征。而单份血清的凝集价应达1：160以上才有诊断参考价值。

7、本实验可用于辅助伤寒及副伤寒沙门菌引起的肠热症。

九、注意事项：

1、结果观察时先不要震荡试管，先把试管举起以观察试管内上清夜和下沉凝集物，然后，再轻摇试管使凝块从管底

升起，最后按液体的清浊、凝块的大小进行记录。观察结果时应首先观察对照管，此管应呈“—”（即不凝集）。

2、“H”凝集呈絮状，以疏松之大团沉淀于管底，轻摇试管即能荡起，而且极易散开。

3、“O”凝集呈颗粒状，以坚实凝片沉于管底，轻摇试管不易荡起，且不易散开。

4、菌液防止冻结，在有效期内使用，如果有摇不散的凝块时不能使用。