肥达氏、外斐氏实验简易操作规程
临床检验标本采集、运输、保存操作规程
临床检验标本采集、运输、保存操作规程临床检验标本采集、运输和保存操作规程第一章体液标本的采集、运输和保存操作规程一、尿液标本的采集、运输和保存尿液标本的采集、运输和保存是临床检验中非常重要的一环。
尿液干化学测定的检查项目包括尿液比重、pH值、尿胆原、胆红素、潜血、酮体、蛋白质、白细胞、亚硝酸盐、葡萄糖和抗坏血酸等。
同时也需要检测尿液有形成份，如红细胞和白细胞形态等。
此外，还需要检测24小时尿总蛋白、尿肌酐和尿尿酸等。
二、脑脊液标本的采集、运输和保存脑脊液标本的采集、运输和保存也是非常重要的。
在采集脑脊液标本时，需要注意消毒和无菌操作。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
三、浆膜腔积液标本的采集、运输和保存浆膜腔积液标本的采集、运输和保存需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
四、分泌物标本的采集、运输分泌物标本的采集、运输需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温。
五、分泌物革兰阴性双球菌检测标本的采集、运输分泌物革兰阴性双球菌检测标本的采集、运输需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温。
六、标本的采集、运输和保存标本的采集、运输和保存需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
七、前列腺液标本的采集、运输和保存前列腺液标本的采集、运输和保存需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
八、粪便采集、运输和保存粪便采集、运输和保存需要注意消毒和无菌操作。
采集时需要避免污染和空气污染。
运输时需要保持标本的低温，保存时需要在低温环境下保存。
第二章血液一般检验的标本采集、运输和保存操作规程一、未梢血标本采集未梢血标本采集需要注意消毒和无菌操作。
肥达试验和外斐氏反应临床意义
肥达试验和外斐氏反应临床意义在医学领域中，肥达试验和外斐氏反应是两个与自身免疫性疾病相关的常用检测方法和评估指标。
它们作为衡量免疫系统功能和疾病严重程度的重要工具，被广泛应用于临床实践中。
本文将深入探讨肥达试验和外斐氏反应的原理、操作方法、临床意义及相关疾病。
一、肥达试验（P-D反应）的原理和应用1. 肥达试验的原理和操作方法肥达试验是通过检测患者血清中对肥达菌（属于结核分枝杆菌复合体）的特异性IgG抗体来评估机体对结核分枝杆菌的感染程度及免疫应答情况。
具体操作方法为将患者血清与肥达菌抗原混合，观察是否发生可见的沉淀反应。
2. 肥达试验在结核病诊断中的应用肥达试验在结核病的诊断和鉴别诊断中具有重要价值。
阳性的肥达试验提示患者体内存在结核分枝杆菌感染，并能帮助评估感染的程度。
该试验可用于判断结核病是否处于活动期，对于携带者的筛查、结核性脑膜炎的辅助诊断等方面也有一定的临床意义。
二、外斐氏反应的原理和应用1. 外斐氏反应的原理和操作方法外斐氏反应是评价机体非特异性免疫功能的一种方法，通过检测患者血清中与人类红细胞（RH阴性）凝集反应的自然发生来反映血清中抗凝集抗体的含量。
具体操作方法为将患者血清与RH阴性人类红细胞混合，观察是否发生凝集反应。
2. 外斐氏反应在自身免疫疾病中的应用外斐氏反应被广泛应用于各种自身免疫性疾病的辅助诊断和疾病活动性评估中，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、干燥综合征等。
阳性的外斐氏反应提示患者体内存在过多的抗凝集抗体，与自身免疫反应有关。
外斐氏反应可以帮助医生评估疾病的严重程度、指导治疗方案的制定和疾病的预防控制。
三、肥达试验和外斐氏反应临床意义的总结回顾1. 肥达试验和外斐氏反应在临床中的重要性肥达试验和外斐氏反应作为常用的免疫功能评估工具，帮助医生了解机体对结核分枝杆菌感染的情况以及自身免疫性疾病的发展程度和活动性。
它们不仅有助于疾病的早期诊断和鉴别诊断，还可以指导治疗方案的制定、疾病的预后判断和预防控制措施。
外斐氏反应胖达氏反应[精华]
![外斐氏反应胖达氏反应[精华]](https://img.taocdn.com/s3/m/1310517c9a6648d7c1c708a1284ac850ad020489.png)
外斐氏反应肥达氏反应外斐氏反应[定义]外斐氏反应：用与立克次体有共同菌体抗原的变形杆菌OXl9、OX2、OXK进行非特异性凝集反应，检测病人血清中有无立克次体抗体。
外-斐氏反应亦称变形杆菌凝集试验,用以诊断流行性斑疹伤寒,恙虫病等急性传染病.[英文缩写]WFR[标本采集]静脉血2ml，不抗凝，分离血清进行测定。
[正常参考值]变形杆菌OX19、OX2、OXK凝集价<1：80。
[临床意义]人体被立克次体感染后，血清中逐渐产生相应抗体，该抗体在发病后5～12天出现，至数月后基本消失，一般凝集价在1：160以上或病程中效价明显上升有诊断意义。
我国常见的立克次体病上要为斑疹伤寒和恙虫病，流行性斑疹伤寒主要为OX19凝集价升高，恙虫病主要表现为OXK升高明显。
流行性斑疹伤寒(OX19阳性率100%)；地方性斑疹伤寒(OX19部分可在1：200～1：800)；恙虫病患者(患病后第一周Oxk有14%在1：80以上，第4周可达80%)；布氏杆菌病、回归热病人；孕妇稍有增高。
恙虫病又称丛林斑疹伤寒，是由恙虫病立克次体（亦称东方立克次体）所致的急性传染病。
其基本病变为全身性小血管炎、血管周围炎及网状内皮细胞增生。
临床上以发热、焦痂（或溃疡）、淋巴结肿大、皮疹和肝脾肿大等为特征。
本病是一种自然疫源性传染病，在我国东南、西南地区的沿海岛屿发病率较高。
鼠类是主要传染源，通过恙J叮咬而传播给人。
发病季节多见于临床表现 1.起病急，有畏寒或寒战、高热、全身酸痛、疲乏、食欲减退等急性感染症状。
2.颜面潮红、结膜充血、焦痂或溃疡、淋巴结肿大、皮疹、肝脾肿大等。
3.在病程的第2周，病情常会加重，可有表情淡漠、重听、谵妄甚至抽搐或昏迷，并可有脑膜刺激征或心肌炎症状，或有咳嗽、胸痛、气促等肺炎症状。
诊断依据 1.流行病学资料：起病前3周内有野外接触鼠类活动或恙虫孳生环境史。
2.临床表现：突起畏寒，持续高热，伴结膜充血、皮疹、淋巴结肿大尤其是局部淋巴结明显肿大压痛、肝脾肿大。
综合性实验三、抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定
西安医学院教案（专业课程）课程名称临床免疫学与检验班级检本1008 专业，层次检验，本科教师武永红专业技术职务讲师授课方式（大，小班，实习）实验学时9学时授课题目（章，节）抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定基本教材或主要参考书王兰兰，许化溪主编.临床免疫学检验.第5版：人民卫生出版社，2012 刘辉．临床免疫学与检验实验指导第3版：人民卫生出版社，2009 曹励民．免疫学检验实验指导．自编教材，2011教学目的：1.掌握：细菌接种培养的操作能力，加强细菌性抗原免疫动物的实验操作能力，肥达氏反应的模拟操作及间接血凝实验测定细菌性抗体的效价，2.熟悉：临床用于诊断细菌或病毒感染的凝集反应测定效价试验的原理。
教学内容：1.细菌培养与免疫原的制备2.“O”和抗“H”血清的制备3.试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价4.间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价教学方法：启发式教学；讲授重点内容。
教具：板书示教教学重点、难点：1. 间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价教研室审阅意见（教研室主任签名）年月日教学内容教学手段时间分配抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定（一）细菌培养与免疫原的制备（二）“O”和抗“H”血清的制备（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价（四）间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价（一）细菌培养与免疫原的制备伤寒沙门菌标准菌株干粉→生理盐水溶解→接种肉汤培养基→接种普通平板→生理盐水菌液（100℃水浴制备O抗原，甲醛处理制备H抗原）（二）“O”和抗“H”血清的制备Ag伤寒沙门菌O和H抗原→分别免疫两组家兔→抗O血清和抗H血清O/H抗原的免疫程序：日序（天）免疫剂量（ml）免疫途径1 1 皮内五点注射8 1.5 耳静脉注射15 1.5 耳静脉注射22 1.5 耳静脉注射放血方法：颈动脉采血试血方法：试管凝集试验（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价试管凝集试验的原理：在试管内，用已知颗粒性抗原作为诊断试剂，与一系列倍比稀释的待检血清混合反应，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集现象。
临床微生物标本采集及运送
采血量：
血液中细菌和真菌的检出率依赖于足够的血量，但并非越多越好，超过一定 数量的采血量会稀释培养基内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质 （补体、抗体、抗生素）。血量与培养液的比例以 1：10为宜，但对已接受 抗菌药物长达 10 天以上的患者， 采血量与培养基的比例应为 1：20 或大 于 1：20 为宜。 成人 10~15ml 儿童 3~5ml 婴幼儿 1~2ml 骨髓 1~2ml
标本质量
合格标本的判断标准
外观：观察颜色、粘度、有无 血丝或脓。若标本为水状且很 明显是唾液，则应拒收。
为了判定是否来自下呼吸道的 痰，需检查是否为合格的痰标 本：WBC>25个/低倍视野， 鳞状上皮细胞<10个/低倍视 野为合格标本。采集合格标本 对细菌的诊断极为重要。
注意事项
在抗生素应用前采集痰标本 对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2~3天；不
取样部位应准确，反复涂抹数次，避免接触口腔、舌粘膜和唾液。 口腔表面组织的标本不适于细菌学评价。 咽拭子禁用于会厌发炎患者。 检查白喉棒状杆菌，应取疑为白喉假膜边缘部的分泌物；扁桃体部位
标本取扁桃体小窝处为宜。
下呼吸道（痰培养）标本
采集的临床指征
咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状。 咯血包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等 呼吸困难，呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛 发热伴WBC增高尤其是中性粒细胞或CRP明显增高 胸部影像学检查提示感染可能
临床微生物标本采集、 转运与处理
微生物标本规范化采集的重要性
细菌培养鉴定和抗生素敏感性试验
临床微生物实验室以细菌培养鉴定和抗生素敏感性试验为主，为临床提供各种体液、分泌物的细菌培养鉴定与抗生素敏感性试验、支原体检测与抗生素敏感性试验、肥达氏、外斐氏试验等项目的检测服务。
并承担医院的院内感染监控工作。
细菌培养样本的收集方法总则：用于细菌培养的样本收集时应注意无菌操作，特别是无菌部位的样本。
病人在采集样本做细菌培养项目时，如果怀疑细菌感染，应在使用抗生素前，并采样进行送检；如果患者已使用抗生素进行治疗，至少停用抗生素一周以上。
采样时，如果使用干燥的棉拭子，可在采集前先将棉拭子沾少许营养肉汤或无菌生理盐水以保持标本湿度，让细菌能存活更长的时间。
所有的标本要保证储存容器的密闭性，以防止污染，导致检测结果不准。
1、粪便：取有粘液、脓血部分粪便置无菌塑料盒中，如为稀水便。
可直接收集于无菌塑料盒中，置2~8℃冰箱待检。
2、眼、耳、鼻、咽拭子：将棉拭子沾取少许无菌生理盐水（如沾取的太多，可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒悬于无菌试管内放2~8℃冰箱内待检。
3、脓液组织或液体优于拭子标本,尽可能在用药前采集标本。
标本采集前先用无菌生理盐水冲洗表面污染菌，用拭子采取脓液及病灶深部的分泌物。
为防止拭子干燥，可在采集前先将棉拭子沾少许营养肉汤或无菌生理盐水以保持标本湿度。
脓性分泌物较多时，先用无菌棉拭子擦拭，再取流出分泌物置无菌管内送检。
4、血液：A、凡怀疑菌血症和败血病的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，假如病人每天静脉滴注抗菌素时，应该在病人第二天使用抗菌素之前采血培养。
如果病人每8小时用药一次，应该在病人第二次用药之前采血，尽量避过抗菌素在体内浓度的高峰期。
B、成人每次采血5-10ml，小儿采血2-3ml。
C、常规消毒病人采血部位：抽一定量血液后，另换一无菌针头，消毒接种瓶口后将血接种在瓶内，轻轻摇匀。
外斐氏反应肥达氏反应
外斐氏反应[定义]外斐氏反应：用与立克次体有共同菌体抗原的变形杆菌OXl9、OX2、OXK进行非特异性凝集反应，检测病人血清中有无立克次体抗体。
外-斐氏反应亦称变形杆菌凝集试验,用以诊断流行性斑疹伤寒,恙虫病等急性传染病.[英文缩写]WFR[标本采集]静脉血2ml，不抗凝，分离血清进行测定。
[正常参考值]变形杆菌O X19、O X2、OX K凝集价<1：80。
[临床意义]人体被立克次体感染后，血清中逐渐产生相应抗体，该抗体在发病后5～12天出现，至数月后基本消失，一般凝集价在1：160以上或病程中效价明显上升有诊断意义。
我国常见的立克次体病上要为斑疹伤寒和恙虫病，流行性斑疹伤寒主要为OX19凝集价升高，恙虫病主要表现为OX K升高明显。
流行性斑疹伤寒(OX19阳性率100%)；地方性斑疹伤寒(OX19部分可在1：200～1：800)；恙虫病患者(患病后第一周Oxk有14%在1：80以上，第4周可达80%)；布氏杆菌病、回归热病人；孕妇稍有增高。
恙虫病又称丛林斑疹伤寒，是由恙虫病立克次体（亦称东方立克次体）所致的急性传染病。
其基本病变为全身性小血管炎、血管周围炎及网状内皮细胞增生。
临床上以发热、焦痂（或溃疡）、淋巴结肿大、皮疹和肝脾肿大等为特征。
本病是一种自然疫源性传染病，在我国东南、西南地区的沿海岛屿发病率较高。
鼠类是主要传染源，通过恙J叮咬而传播给人。
发病季节多见于临床表现1.起病急，有畏寒或寒战、高热、全身酸痛、疲乏、食欲减退等急性感染症状。
2.颜面潮红、结膜充血、焦痂或溃疡、淋巴结肿大、皮疹、肝脾肿大等。
外斐氏反应肥达氏反应(精)
外斐氏反应[定义] 外斐氏反应：用与立克次体有共同菌体抗原的变形杆菌OXl9、OX2、OXK进行非特异性凝集反应，检测病人血清中有无立克次体抗体。
外-斐氏反应亦称变形杆菌凝集试验,用以诊断流行性斑疹伤寒,恙虫病等急性传染病. [英文缩写] WFR [标本采集] 静脉血2ml，不抗凝，分离血清进行测定。
[正常参考值] 变形杆菌OX19、OX2、OXK凝集价<1：80。
[临床意义] 人体被立克次体感染后，血清中逐渐产生相应抗体，该抗体在发病后5～12天出现，至数月后基本消失，一般凝集价在1：160以上或病程中效价明显上升有诊断意义。
我国常见的立克次体病上要为斑疹伤寒和恙虫病，流行性斑疹伤寒主要为OX19凝集价升高，恙虫病主要表现为OXK升高明显。
流行性斑疹伤寒(OX19阳性率100%；地方性斑疹伤寒(OX19部分可在1：200～1：800；恙虫病患者(患病后第一周Oxk有14%在1：80以上，第4周可达80%；布氏杆菌病、回归热病人；孕妇稍有增高。
恙虫病又称丛林斑疹伤寒，是由恙虫病立克次体（亦称东方立克次体）所致的急性传染病。
其基本病变为全身性小血管炎、血管周围炎及网状内皮细胞增生。
临床上以发热、焦痂（或溃疡）、淋巴结肿大、皮疹和肝脾肿大等为特征。
本病是一种自然疫源性传染病，在我国东南、西南地区的沿海岛屿发病率较高。
鼠类是主要传染源，通过恙J叮咬而传播给人。
发病季节多见于临床表现 1.起病急，有畏寒或寒战、高热、全身酸痛、疲乏、食欲减退等急性感染症状。
2.颜面潮红、结膜充血、焦痂或溃疡、淋巴结肿大、皮疹、肝脾肿大等。
3.在病程的第2周，病情常会加重，可有表情淡漠、重听、谵妄甚至抽搐或昏迷，并可有脑膜刺激征或心肌炎症状，或有咳嗽、胸痛、气促等肺炎症状。
诊断依据 1.流行病学资料：起病前3周内有野外接触鼠类活动或恙虫孳生环境史。
2.临床表现：突起畏寒，持续高热，伴结膜充血、皮疹、淋巴结肿大尤其是局部淋巴结明显肿大压痛、肝脾肿大。
肥达实验与外斐试验、临床应用、检测标本培养及临床意义
肥达实验与外斐试验、临床应用、检测标本培养及临床意义肥达实验1、病原体——伤寒杆菌（1）沙门菌属，G-杆菌，有鞭毛；释放内毒素致病（2）三种抗原：菌体抗原“O”和鞭毛抗原“H”——抗原性较强，可刺激机体产生相应抗体有助于诊断表面抗原“Vi”——抗原性不强有助于发现带菌者2、病原体——副伤寒杆菌3种病原体：副伤寒甲杆菌、副伤寒乙杆菌、副伤寒丙杆菌,每种副伤寒杆菌均有“O”和“H”抗原3、肥达反应（1）伤寒杆菌凝集试验（WR）（2）伤寒、副伤寒诊断参考（3）一种血清凝集反应，用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙、丙型副伤寒杆菌H抗原，测定患者血清中相应抗体（4）“O”抗原为伤寒、副伤寒甲、乙杆菌的共同抗原，三者的鞭毛抗原（“H”、“A”、“B”）不同4、结果判定：“有病无病先看O，是什么菌看H”（1）感染后1周左右出现抗体，3-4周阳性率可达70-80%（2）阳性结果：“O”抗体≥1:80，或有4倍增高者更有意义“H”或其他鞭毛抗体≥1:160，或有4倍增高者更有意义“O”抗体(IgM)-出现早，消失快；“H”抗体(IgG)-出现迟，维持时间长（3）临床意义：（4）其他：假阴性：早期应用抗生素；营养不良者；抗体免疫功能缺陷者；免疫功能尚未完善的幼儿假阳性：其他疾病，如血吸虫，败血症，结核，传染性肝炎，结缔组织病，肿瘤，溃疡性结肠炎等5、伤寒确诊（1）临床：发热+体征+血RT/肥达伤寒临床六大特征：持续发热、相对缓脉、全身中毒症状、玫瑰疹、肝脾肿大、白细胞减少（2）确诊：发热+特异性抗体/病原学，病原学为诊断金标准外斐试验1、病原体—立克次氏体。
大小介于细菌与病毒之间，呈多形球杆状，Gram染色阴性，Giemsa染色紫色，寄生于真核细胞内，生物特性接近细菌，胞壁的脂多糖层有内毒素样作用。
2、病原体——变形杆菌（1）G-杆菌，无荚膜，有鞭毛（2）三个菌株：X19，X2，XK（3）三种抗原：菌体抗原“O”，鞭毛抗原“H”，抗原“K”3、外斐反应（1）变形杆菌O抗原凝集反应，（WFR）（2）变形杆菌用与立克次体有共同菌体抗原，进行非特异性凝集反应，检测病人血清中有无立克次体抗体4、结果判定（1）感染后5-12天出现抗体，至数月后基本消失（2）阳性结果：普氏立克次体：OX19凝集价≥1:160或病程中上升4倍以上，阳性率70-80%莫氏立克次体：OX19凝集价低滴度升高，阳性率70-85%（进一步诊断依赖于补体结合试验和立克次体凝集试验）恙虫病：OXK凝集价≥1:160或早晚期双份血清效价上升4倍以上，最早第4天出现阳性，3-4周达峰5、临床意义其他立克次体病：洛杉矶斑点热、立克次体痘、战壕热、Q热：（—）北亚蜱媒立克次体病：OX19、OX2（+），OXK（—）6、其他假阳性：变形杆菌性泌尿系感染；伤寒；钩端螺旋体病回归热；疟疾；布氏杆菌病；严重肝病；妊娠（轻度升高）肥达试验widal test1、正常效价。
费休氏法的操作流程
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费休氏法的操作流程
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以下是费休氏法的一般操作流程：1. 试剂准备费休氏试剂：由碘、二氧化硫、吡啶和甲醇组成。
肥达氏反应的操作规程
肥达氏反应标准操作规程[实验原理]肥达氏反应是用已知伤寒菌的菌体抗原（Ｏ）、鞭毛抗原（Ｈ）及甲型（A）、乙型（B）、丙型（Ｃ）副伤寒沙门氏菌的标准菌液与待检血清做凝集试验，以检测待检血清中有无相应抗体。
[操作方法]1.取12×100试管（要求透明，宜用玻璃试管，不宜用塑料试管）30支，排成5排×6列形式。
5 排分别编成O，H，A，B，C；每排左起第一管起分别标明40，80，160，320，640，对照。
2.稀释菌液：原诊断菌液浓度为7×109/ml，将此菌液用生理盐水作10倍稀释。
方法：取原诊断菌液0.3ml，加入2.7ml生理盐水，混匀。
3.另取15×100大试管一支，加入待检血清0.25ml，加入生理盐水4.75ml，混匀。
取2.5ml 该稀释血清于每排第一管内分别加入0.5ml；加完后大试管内余2.5ml稀释血清。
再取2.5ml 生理盐水把大试管内稀释血清作2 倍稀释，取2.5ml该稀释血清于每排第二管内分别加入0.5ml，以此类推直至第五管。
每排第六管加0.5ml生理盐水作阴性对照。
各稀释度分别为：1/20，1/40，1/80，1/160，1/320。
然后各管中加入1:10稀释的各菌液0.5ml，各管终稀释度：1/40，1/80，1/160，1/320，1/640。
4.充分混匀，于37℃静置16-20小时判定结果。
[结果判定]根据凝集反应的强弱和有无，分别以4+，3+，2+，1+，-，记录，以呈现（2+）的血清最高稀释度为终点效价。
4+：液体清澈透明，菌体全部被凝成块，沉于管底。
3+：液体较透明，大部分菌体被凝集而沉于管底。
2+：液体稍透明，管底有少量凝集沉淀物。
1+：液体较混浊，可见极少量凝集物。
-：液体混浊，细菌因重力下降于管底呈边缘光滑圆点（与对照管相似）。
[结果分析]1.首先应考虑当地正常人效价（正常效价）。
一般以单份血清凝集效价：Ｏ效价应达1：80以上.Ｈ效价应在1：160以上，PA、PB、PC应达1：80以上方有诊断价值；若病程中间隔1周复检第2次血清效价比第1次增高4倍以上有诊断价值。
肥达氏、外斐氏实验简易操作规程
肥达氏、外斐氏实验简易操作规程一、试剂厂家：宁波天润生物药业有限公司。
二、试剂名称：伤寒、副伤寒及变形菌OX2、OX19、OXK诊断菌液。
三、试剂主要组成成份：肥达氏诊断菌液5瓶：(10ml/瓶，7.0×109/ml) 伤寒O901、伤寒H901、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙型副伤寒诊断菌液，各一瓶。
外斐氏诊断菌液3瓶：(10ml/瓶，7.0×109/ml) 变形菌OX2、变形菌OX19、变形菌OXK诊断菌液，各一瓶。
四、检验原理：用甲醛溶液灭活的伤寒、副伤寒及变形菌分别制成，通过凝集试验原理供肥达氏（Widal）、或外斐氏（weil-Felix）反应用。
五、标本要求：疑似伤寒、副伤寒或斑疹伤寒病人的血清。
六、检验方法：1、用10×6规格的试管架分别装入洁净的玻璃大试管：肥达氏试验玻璃大试管5列×6排；外斐氏试验玻璃大试管3列×6排。
2、用生理盐水配制1：40倍的血清稀释液16 ml，置于洁净的锥形玻璃瓶内（即生理盐水15.6ml+血清400μl），旋转摇动充分混匀。
3、用吸量管分别在试管架的第一排试管内（肥达氏5管、外斐氏3管）加入1ml 1：40倍的血清稀释液，在锥形玻璃瓶内加入8 ml生理盐水，对倍稀释了1：40倍的血清稀释液，旋转摇动充分混匀1：80的血清稀释液；用吸量管分别在试管架的第二排试管内加入1ml 1：80倍的血清稀释液，在锥形玻璃瓶内加入8 ml生理盐水，旋转摇动充分混匀成1：160的血清稀释液；依此方法连续对倍至第五排试管1：640的血清稀释液，并分别加入1ml血清稀释液在相对应的试管内；在第六排的试管内分别加入1 ml生理盐水作为阴性对照。
4、轻轻摇匀诊断菌液，从第一列至第八列分别加入按O、H、甲、乙、丙、OX2、OX19、OXK顺序对应的菌液50μl/管，并充分摇匀，把试管架平放置37℃的水浴箱内，18至24小时取出看结果。
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肥达氏、外斐氏实验简易操作规程
一、试剂厂家：宁波天润生物药业有限公司。
二、试剂名称：伤寒、副伤寒及变形菌OX2、OX19、OXK诊断菌液。
三、试剂主要组成成份：
肥达氏诊断菌液5瓶：(10ml/瓶，7.0×109/ml) 伤寒O901、伤寒H901、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙型副伤寒诊断菌液，各一瓶。
外斐氏诊断菌液3瓶：(10ml/瓶，7.0×109/ml) 变形菌OX2、变形菌OX19、变形菌OXK诊断菌液，各一瓶。
四、检验原理：
用甲醛溶液灭活的伤寒、副伤寒及变形菌分别制成，通过凝集试验原理供肥达氏（Widal）、或外斐氏（weil-Felix）反应用。
五、标本要求：疑似伤寒、副伤寒或斑疹伤寒病人的血清。
六、检验方法：
1、用10×6规格的试管架分别装入洁净的玻璃大试管：肥达氏试验玻璃大试管5列×6排；外斐氏试验玻璃大试管3
列×6排。
2、用生理盐水配制1：40倍的血清稀释液16 ml，置于洁净的锥形玻璃瓶内（即生理盐水15.6ml+血清400μl），旋转
摇动充分混匀。
3、用吸量管分别在试管架的第一排试管内（肥达氏5管、外斐氏3管）加入1ml 1：40倍的血清稀释液，在锥形玻
璃瓶内加入8 ml生理盐水，对倍稀释了1：40倍的血清稀释液，旋转摇动充分混匀1：80的血清稀释液；用吸量管分别在试管架的第二排试管内加入1ml 1：80倍的血清稀释液，在锥形玻璃瓶内加入8 ml生理盐水，旋转摇动充分混匀成1：160的血清稀释液；依此方法连续对倍至第五排试管1：640的血清稀释液，并分别加入1ml血清稀释液在相对应的试管内；在第六排的试管内分别加入1 ml生理盐水作为阴性对照。
4、轻轻摇匀诊断菌液，从第一列至第八列分别加入按O、H、甲、乙、丙、OX2、OX19、OXK顺序对应的菌液50
μl/管，并充分摇匀，把试管架平放置37℃的水浴箱内，18至24小时取出看结果。
七、结果判断：
1、观察时在斜射光光线下透视，观察试管中悬液的混浊程度及管底凝块的多少，先观察对照管，再分别观察各试管
的凝集情况并与对照管相比较。
根据混浊程度及管底凝块的多少，以“4+”“3+”“2+”“1+”符号记录。
（1）4+：上清液完全澄清，细菌凝集块全部沉于试管底，呈大的凝块。
（2）3+：上清液澄清度达75%，大部分细菌凝集块沉于试管底，呈较大的凝块。
（3）2+：上清液澄清度达50%，约50%细菌凝集块沉于试管底，凝块较小，但仍明显可见。
（4）1+：上清液混浊，澄清度仅有25%，仅有部分细菌凝集成块沉于试管底，凝块很小，需仔细观察才能见到。
（5）—：与对照管相同，液体均匀混浊，试管底无凝集块，但有细菌沉淀的圆形小团。
2、血清的凝集效价（即滴度）
（1）出现明显凝集（2+）的血清最高稀释度即为血清抗体的效价（滴度）。
（2）血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。
一般认为，伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在1：80以上，“H”抗体在1：160以上，甲、乙型副伤寒沙门菌凝集效价在1：80以上才有诊断价值。
八、结果分析及临床意义：
1、首先应考虑当地人的凝集效价，凝集效价大于正常效价才有意义。
2、伤寒病人的“O”凝集素常较“H”凝集素出现早，存在于血清内的时间较短，而“H”凝集素出现较迟，但效
价较高，存在于血清内时间亦较长，可达数年。
3、因伤寒“H”凝集素在血内保持时间较久，而“O”凝集素较短暂，所以曾接种过伤寒菌苗者，“O”凝集效价在诊
断上较重要。
4、曾患过伤寒或曾戒接种过伤寒沙门菌，新近又感染流行性感冒或布氏杆菌等疾病时，可产生高度的“H”凝集素及
较低的“O”凝集素，这种反应称回忆反应。
5、确诊为伤寒的患者中约有10%的患者肥达反应始终为阴性，故阴性结果不能排除伤寒的诊断。
6、采血的时间不同，肥达反应的阳性率也不同，发病第1周阳性率为50%，第2周为80%，第4周为90%，恢复
期凝集价最高，以后逐渐下降，以致转阴。
临床上一般以双份血清（疾病早期和恢复期）的凝集价有4倍增高作为新近是否感染该病的指征。
而单份血清的凝集价应达1：160以上才有诊断参考价值。
7、本实验可用于辅助伤寒及副伤寒沙门菌引起的肠热症。
九、注意事项：
1、结果观察时先不要震荡试管，先把试管举起以观察试管内上清夜和下沉凝集物，然后，再轻摇试管使凝块从管底
升起，最后按液体的清浊、凝块的大小进行记录。
观察结果时应首先观察对照管，此管应呈“—”（即不凝集）。
2、“H”凝集呈絮状，以疏松之大团沉淀于管底，轻摇试管即能荡起，而且极易散开。
3、“O”凝集呈颗粒状，以坚实凝片沉于管底，轻摇试管不易荡起，且不易散开。
4、菌液防止冻结，在有效期内使用，如果有摇不散的凝块时不能使用。