脂肪酶微乳液的凝胶固定化研究
固定化脂肪酶的研究进展
固定化脂肪酶的研究进展摘要固定化脂肪酶是一种重要的酶类生物催化剂，因其具有高效、高选择性、环保等优势而备受关注。
本文将对固定化脂肪酶的研究进展进行综述，主要包括固定化技术、载体种类、酶固定化方法、应用领域等方面，旨在为深入研究和开发固定化脂肪酶提供参考。
引言脂肪酶（Lipase）是一种重要的酶类生物催化剂，广泛应用于食品加工、制药、化工等领域。
传统的脂肪酶生产方式多为分离和提纯天然来源的酶，其成本高、效率低、质量难以稳定。
为了克服这些缺陷，人们通过基因工程技术获得了大量高度纯化的重组脂肪酶，这些酶具有更高的活性、热稳定性和抗丝氨酸等性质，但其应用领域仍然受到限制。
与传统的脂肪酶生产方式相比，固定化脂肪酶因具有高效、高选择性、易回收等优势而受到广泛关注。
本文将从固定化技术、载体种类、酶固定化方法、应用领域等方面对固定化脂肪酶的研究进展进行综述。
固定化技术固定化技术是将酶固定在载体上，形成固定化酶，以提高其催化效率和稳定性的一种生物技术。
固定化脂肪酶通过固定化技术制备而成，其固定化技术主要有物理吸附、交联固定、共价固定、包埋固定、磁性固定等多种方法。
这些方法的选择取决于酶的性质和产物特性以及应用需求等因素。
载体种类载体是将酶固定化在其表面的材料，其种类主要有聚合物、无机材料、金属有机框架（MOFs）、磁性材料等。
聚合物是最常用的载体材料之一，主要包括聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚酰胺等。
无机材料则包括硅胶、陶瓷、玻璃等，其中硅胶是最常用的载体材料之一。
MOFs是一种新型的多孔有机-无机化合物，可以提供大量的活性位点和大表面积，因此受到研究者的关注。
磁性材料通常是由铁磁性物质和非磁性材料组成的，其具有磁性和化学稳定性，因此可以在固体和液体之间实现快速分离。
酶固定化方法1.物理吸附法物理吸附法是将酶直接吸附在载体表面，主要依靠静电作用力和范德华力等物理力作用固定酶，其优点是操作简便、成本低廉，缺点是载体表面吸附作用力比较弱，酶结合不稳定。
固定化脂肪酶的研究进展
固定化脂肪酶的研究进展固定化酶是一种将酶固定在一定载体上的技术，它可以有效地提高酶的稳定性、重复利用性和操作性，从而广泛应用于食品、制药、生物工程等领域。
其中，固定化脂肪酶是一种重要的酶制剂，具有广泛的应用前景。
本文将对固定化脂肪酶的研究进展进行介绍。
固定化脂肪酶最早应用于生产特定脂肪酸酯的催化反应。
通过将脂肪酶固定在载体上，可以有效地提高其催化活性和稳定性，从而使脂肪酶在催化作用中具有更长的寿命。
同时，固定化脂肪酶还可以简化生产过程，提高产品质量。
在固定化脂肪酶的载体选择上，常用的载体包括无机载体和有机载体。
无机载体主要包括多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶等，这些载体具有较大的比表面积和孔隙结构，可以提供较好的活性位点和固定脂肪酶的空间结构。
有机载体主要包括聚合物材料和纤维材料，通过调整聚合物的化学结构和纤维材料的纤维结构，可以实现对脂肪酶的有效固定，提高其催化活性和稳定性。
固定化脂肪酶的制备方法主要包括物理吸附、化学交联和共价连接。
物理吸附是将脂肪酶与载体之间的非共价相互作用力用于固定酶，例如静电引力、范德华力等。
化学交联是在载体上引入交联剂，使酶与载体之间形成共价键，从而实现酶的固定。
共价连接是通过化学反应在载体上引入活性基团，然后将酶与载体上的活性基团通过共价键连接。
固定化脂肪酶的应用主要包括生产特定脂肪酸酯、脂肪酸的转化、生物柴油的合成等。
在生产特定脂肪酸酯方面，固定化脂肪酶可以通过酯交换反应和酶解反应实现。
通过固定化脂肪酶催化，可以有效地控制反应条件，提高反应速率和产物选择性。
在脂肪酸转化方面，固定化脂肪酶可以催化饱和脂肪酸的脱饱和反应和反硝化反应，从而实现对脂肪酸的功能性改造。
在生物柴油的合成方面，固定化脂肪酶可以有效地催化酯交换反应和脂肪酸甲酯化反应，从而提高生物柴油的产率和质量。
除了以上应用外，固定化脂肪酶还可以应用于废水处理、食品加工、药物合成等领域。
通过固定化脂肪酶催化，可以实现废水中脂肪酸的降解，减轻环境污染。
固定化脂肪酶研究进展
菌 D?DG! 溶液中， 静置固化 /0)9: ， 经过滤、 洗涤和干 燥后得到球状固定化酶。固定化酶的活力回收约为 8/’7" 。酶学性质研究表明， 此固定化酶的热稳定性 较好。游离酶在 3&1 下保温 7, 已完全丧失活力， 而 固定化酶在 7&&1 下保温 7, 仅损失 83’!" 的活力， 在 7&&1 下保温 3, 仍可保持 /3’+" 的酶活力。酶经 固定化后， 其橄榄油水解反应的最适温度由 /&1 上 升至 (&1 ， 2 ) 值 由 78’+)5 $ )* 降 为 +’7)5 $ )*。常 见有机溶剂对固定化酶的活力影响较小。将该固定 化脂肪酶用于非水溶剂中正戊酸异戊酯的合成， 重 复使用 3 次后， 固定化酶仍保持 (0" 的酶活力。
［B ］ 等从 =# 种不同来源的树脂中筛选出固 李南薇
催化技术虽然成熟， 但酶分离困难， 不能重复使用， 难以实现过程连续化， 因此脂肪酶催化技术工业化 很大程度上取决于酶的固定化
［! ］
。当底物和产物是
小分子的可溶性物质时， 固定化酶更占优势。所 谓 固定化酶 就 是 指 在 一 定 空 间 内 呈 闭 锁 状 态 存 在 的 酶。固定化酶 的 两 个 最 大 的 优 点 是 酶 易 与 产 物 分 离， 可重复使用。通过固定化操作， 可以改变酶的一 些性质， 例如 K2:02+L2 K+)4/M.). 等
!"%$ 包埋法
包埋法 是 不 需 要 化 学 修 饰 酶 蛋 白 的 氨 基 酸 残 基， 反应条件温和， 很少改变酶结构的固定化方法。 其基本原理是单体和酶溶液混合， 再借助引发剂进
脂肪酶固定化的新方法研究及其应用的开题报告
脂肪酶固定化的新方法研究及其应用的开题报告一、选题背景脂肪酶（Lipase）是广泛应用于食品、医药、化工等领域的一类重要酶。
目前，大多数的脂肪酶分离纯化方法采用离子交换色谱、凝胶过滤、透析等传统方法，但这些方法存在分离纯化周期长，成本高，难以大规模生产等问题。
因此，对脂肪酶固定化的研究具有重要意义。
脂肪酶固定化可以提高催化活性和稳定性，减少废弃物污染等优点，成为了研究的热点。
目前常见的固定化方法有包埋法、吸附法、凝胶法等。
但这些方法还存在着单一、操作困难等问题。
因此，本研究旨在探究一种新的脂肪酶固定化方法，使其具有更高的效率和实用性。
二、研究内容与目的本研究将探究一种新的脂肪酶固定化方法，该方法是基于金属有机骨架材料（MOF）的。
MOF具有稳定的多孔结构和良好的吸附性能，易于构造多种功能化材料，在催化应用方面具有广泛的应用前景。
本研究的目的是通过MOF固定化脂肪酶，提高其酶活性，稳定性和重复使用次数，拓展其在食品、医药等领域的应用。
具体研究内容包括：1. MOF的制备和表征2. MOF固定化脂肪酶的制备和表征3. 固定化脂肪酶的催化性能研究，包括酶活性、稳定性和重复使用次数等方面的研究4. MOF固定化脂肪酶在食品、医药等领域的应用实验三、研究意义本研究将探究一种新的脂肪酶固定化方法，对脂肪酶的高效、稳定和重复使用具有重要的意义。
该方法具有以下几个扩大应用的优点：1. MOF材料生产成本低廉，有望实现在大规模生产中的应用2. 脂肪酶的稳定性和催化活性得到提升，可支持更多化学反应的进行3. 固定化脂肪酶的重复使用次数增加，节约成本，提高效率4. 有望广泛应用于食品、医药和化工领域四、研究方法和技术路线1. 实验用具的准备，如摇床、离心机、pH计、紫外分光光度计、荧光分光光度计等2. MOF材料的制备和表征3. 脂肪酶的生物学特性分析4. MOF固定化脂肪酶的制备和表征5. MOF固定化脂肪酶的催化性能研究，包括酶活性、稳定性和重复使用次数等方面的研究6. MOF固定化脂肪酶在食品、医药等领域的应用实验七、论文结构本研究将完成以下部分的论文：1. 绪论2. 相关理论和方法3. MOF固定化脂肪酶的制备和表征4. 固定化脂肪酶在催化反应中的应用5. 结论6. 参考文献以上是本研究的开题报告，目前仍需在实验数据上进行更深入的探究和研究。
开题报告 脂肪酶的固定化研究
毕业论文开题报告一．选题背景和意义一．选题背景（1）脂肪酶的应用脂肪酶是一类特殊的酰基水解酶，它能在油水界面上催化酯水解和醇解、酯合成、酯交换、内酯合成、多肽合成、高聚物合成及立体异构体拆分等有机合成反应，是目前被重点研究的酯催化剂。
脂肪酶也是一种重要的工业酶类，应用于油脂水解、食品风味和香味的改进、医疗医药、皮革绢纺脱脂等优质化工和有机合成工业中。
脂肪酶催化的反应具有条件温和、耗能低、原料要求低、成品质量高等优点，尤其是1，3一专一性脂肪酶，可用于特殊脂肪酸、单甘酯的合成及立体选择性化学合成和分解，具有巨大的应用潜力。
随着人们生活水平的提高，在食品、牛奶、香水、化妆品和医药中添加天然成分的产品越来越受消费者青睐。
由天然底物生物合成的化合物被认定为天然产物，而同样的原料用化学法生产的产物则不受欢迎。
因此，天然成分在今后将会具有很大的需求，这使生物催化剂极具吸引力，所以说，脂肪酶在油脂、食品、医药、化妆品等领域具有光明的应用前景。
（2）应用中出现的问题在利用脂肪酶催化反应进行工业化生成遇到了一些问题，归纳起来主要有以下几个方面：1)酶的分离困难，反应结束后难以从反应液中回收尚未变性的脂肪酶加以重复利用，难以实现过程的连续化。
2)酶在非水溶液中不溶解，反应过程中容易结块，大大降低了酶的利用率。
3)脂肪酶催化反应的底物油脂不溶于水，因而必须加入合适的溶剂或乳化剂使酶分子与底物分子紧密接触。
这样易使产品被残余酶活污染，不易储存，必须进行后处理。
4)对单级反应器，脂肪酶的使用寿命受反应器空时的制约，使脂肪酶的部分潜在酶活受到损失。
5)脂肪酶价格昂贵，使用一次就废弃，对酶的利用很不经济，成本太高。
二．选题意义正是由于游离脂肪酶在催化反应中存在缺点，因此难以实现工业化应用。
为此，许多研究者展开了对脂肪酶进行固定化的研究，寻找解决脂肪酶的工业化应用问题。
同时，固定化技术一直也是学术界和工业界的接触点和共同热点。
脂肪酶固定化及固定化脂肪酶的应用研究进展
物膜 腔 中 ，以达 到 固定 化 酶 。它 包 括 网 格 型 和微 囊 型 ２种 。 网格 和 微 囊 的 结 构 可 以 防止 酶 渗 出 到周 围 脂 肪 酶 （ｐｓ，ＥＣ３１１ ，甘 油酯 水 解 酶） 是 介质 中，但底物仍能渗入到网格或微囊 内与酶接触。 １ ａｅ ．．．．． ｉ ３ 类 特 殊 的 酯 键 水 解 酶 ，能 分解 生 物 产 生 的 各 种 天 所 以包 埋 法 只 适 合作 用 于小 分 子 底 物 和产 物 的酶 ［ ３ １ 。 然 油脂 ，主要 水 解 由甘 油 和 １ ２碳原 子 以上 的长 链 脂 包 埋 法 一 般 不 需 要 与 酶 蛋 白的 氨基 酸残 基 进 行 结 合 肪 酸 形 成 的甘 油 三 酯 。 其 重 要 特 征 是 在 异 相 系 统 反应 ，很少改 变酶 的高级结构 ，酶活 回收率较高 ， （ 油一 水 ） 界 面 上水 解 特殊 酯 （ 肪 酸 甘 油 酯 ） 类 。 该 方法 可应 用 于许 多酶 、微生 物 和细胞 器 的 固定 化 。 脂 作 为重 要 的工 业用 酶 广 泛应 用 于 食 品 、制 革 、饲 料 、 １ 吸 附法 ． ２
ｅｔｒ （ａｔ ａｉ ｌ ｅ ｄｓ ｉ ｔｅｈ ｔ ｏｅｅｕ ｙｔｍ （ｉ－ ｔ ） ｉｔ ｆｃ．ｔ ａ ａ ｍ ｏｔｎ ａｄａｗｄ ｎ ｅｏ ｓ ｓ Ｆｔ ｃｄｇ ｃｒ ｅ） ｎ ｈ ｅ ｒｇｎｏ ｓｓｓ ｅ ｙ ｙ ｉ ｅ ｅ ｏ Ｗａ ｒ ｎｅ ａｅ Ｉ ｈｓ ｎｉ ｐｒ ｔ ｎ ｉｅｒ ｇ ｆ ｌ ｅ ｒ ａ ａ
０ 引言
一
吸 附法 是 利 用 离 子 键 和物 理 吸 附等 方 法 ，将 酶 固定在 纤 维素 、琼脂 糖等 多糖 或多孔 玻璃 、离子 交换 １ 脂肪 酶 的 固定 化方 法 树脂 等 载体上 的 固定 方式 。其 优点 为 ：载体 选择 范 围 固 定 化 酶 是用 物 理 或 化 学 方 法 使 酶 与 水 不 溶 性 较广 ，操 作过程 简单 ，处 理条 件温 和 ，对酶 的损 害作 大 分 子 载 体 结 合 或 把 酶 包 埋 在 水 不 溶 性 凝 胶 或 半 透 用小 。但是 ，酶与载体 的吸 附力 比较 弱 ，容 易在不 适 膜 的微 囊 体 中制 成 的。酶 固定 化后 一 般 稳定 性 增 加 ， 宜 的 ｐ Ｈ值 、高盐 浓度 、高底 物浓 度 以及 高 温条件 下 易 从 反 应 系 统 中分 离 ，便 于 运输 和贮 存 ，且 易 于 控 解 吸脱 落 『 ３ ＿ ，故很 少有 大规 模工 业化 的报 道 。 制 ，能 反 复多次 使 用 ，有利 于 自动 化生 产 。 吸 附 载 体 包 括无 机 载 体 和 有 机 载 体 。无 机 载 体 脂肪酶作为酶 的一种 ，其 固定 化方法与其他酶 包 括 多 孔 陶 珠 、多 孔 玻 璃 、氧 化 铝 、活 性 炭 、硅 相 同 ，大 致 可 分 为 ：包 埋 法 、吸 附法 、共 价 结 合 法 和交 联 法等 。 １１ 包 埋 法 ． 将 酶 分 子 包 埋 于 凝 胶 的 网 眼 中或 半 渗 透 的 聚 合
脂肪酶膜固定化方法的研究
脂肪酶的固定化
#"!"$ 酶的浓度对固定化酶活的影响 将氧化的 滤纸悬 浮 于 不 同 酶 浓 度 的 磷 酸 盐 缓 冲 溶 液 中， 于 结果如图 #。图 # 表明， 当酶的 ,1 进行交联反应， 浓度 为 )"))4 - = *+ 时 效 果 最 好。当 酶 的 浓 度 低 于 固定化酶的酶活随酶浓度的增大而增 )"))4 - = *+时， 加， 而高于此值固定化酶的酶活不再增加。因此， 确 定酶的浓度为)"))4 - = *+。
［’］ 壳聚糖涂层法
猪胰脂肪酶 （ 345.678 397.589: ;6<9:8） ， =6>/9 公 司； 滤纸， 杭州新华滤纸厂； 高碘酸钠， 分析 !& ./，
河北省自然科学基 !本项目得到国家自然科学基金、 金、 山东大学微生物技术国家重点实验室资助 现工作单位为河北师范大学化学系 !!彭立凤： 收稿日期： !"""—#!—#$ 万方数据
!,(,%,! 壳聚糖涂层方法 将壳聚糖用 $0 醋酸溶 液溶解， 用纱布过滤。将预先烘干称重的滤纸浸渍 在上述溶液中， 于 *#C 以下烘干 (* H， !( H 后取出， 再进行第二次涂层。干燥后称重， 记录涂上去的壳
#))) 年第 #4 卷第 ! 期
中
国
油
脂
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聚糖的质量。 !"#"$"# 脂肪酶的固定化 将壳聚糖涂层滤纸在 室温下浸渍在戊二醛溶液中， 在摇床中摇动一定时 间进行活化， 然后取出滤纸， 以去离子水冲洗数次至 中性。用 %&’"( 的磷酸盐缓冲溶液配制酶液， 然后 离心除去悬浮物， 将上述活化的滤纸再与 #) *+该酶 液混合， 在摇动下进行交联反应。反应完毕， 用去离 子水充分洗涤， 测定固定化酶的酶活。 !"#",
脂肪酶微乳液的凝胶固定化研究
微乳液是由有机溶剂 5 油6 水及表面活性剂等 B 构成的宏观均匀B 微观多相的热力学稳定体系L 低水 含量的油包水5 微乳液也叫反胶束L 由于反胶 6 QJ 束体系能够较好地模拟酶的天然环境3 因而3 在此体 系中大多数酶能保持催化活性和稳定性3 有的甚至 表现出超活性L1 国内外有 1 2多年来3 2多个实验室 对= 2多种酶在反胶束中的酶学性质进行了广泛而 深入的研究3 并由此形成了一个新的跨学科的交叉
% @ R* #5 N J P J N Q8 L N 4 MJ 228 R J 9 J S M T9 J D @ V M8 O2J 5 W 8 M 2X 9 U
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H N I
V W X Y Z Y W[ \ ] ^ _ W脂 肪 酶 5 ‘ * / %#公 司 标 示 的 比活性为 ; 橄榄油作底物6 琥珀酸二 O NaJ 5 6 3 %/ 辛酯 磺 酸 钠 5 正庚烷5 含水量d 5 b8 8 c6 3 CDE6 以及明胶5 皆购自 ‘ 2 M 2 1 c6 2 2 6 , + %9 * / %#公 司 L 其他为国产或进口分装试剂 L
万方数据
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生
物
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脂肪酶的固定化及其性能研究
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 原料 与试 剂
酶的性质更加稳定 ， 且反应条件温和 ， 副产物少 ， 易
于分 离ｆ ５ 】 。 目前 固定 化脂 肪酶 的制 备上 还存 在一 些 限
（ 黑龙江八一农垦大学食品学院 ， 大庆 １ ６ ３ ３ １ ９） 摘 要： 以脂肪酶为原料 ， 通过单 因素试验对影响脂肪酶固定 化的因素进行分析 ， 并运用响应面方法优化最佳工艺条件 。结果
表 明： 硅烷化试剂添加量 ０ ． ３ ５ ％、 硅藻土与酶 的质量 比 ３ ． ５ ： １ 、 温度 ２ ９℃和时间 ４ ． ５ ｈ为脂肪酶 的固定化最佳工艺组合 ， 固定后 的脂肪酶活力为 ２ ２ ０ ６ ． ６ ７ Ｕ・ ｇ ～ 。 关键词 ： 脂肪酶 ； 酶法 ； 固定化 中图分 类号 ｉ ￥ ８ ７ ９ ． ６ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ２ — ２ ０ ９ ０ （ ２ ０ １ ５ ） ０ １ — ０ ０ ４ ５ — ０ ６
ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｉ ｍｍｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄ ｌ ｉ ｐ ａ ｓ ｅ ｗ ａ ｓ ２ ２ ０ ６ ． ６ ７ Ｕ‘ ｇ ～ ．
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： ｌ ｉ ｐ ａ ｓ ｅ； ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ； ｉ ｍｍｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
（ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｈ ｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｂ ａ ｙ ｉ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｄ ａ ｑ ｉ ｎ ｇ １ ６ ３ ３ １ ９ ）
脂肪酶固定化技术的研究进展_张闻修
摘 要：脂肪酶是一种羧酸酯水解酶，被广泛应用于食品，制药，洗涤剂和化妆品工业上。而酶的固定化是在催化过程 中提高酶的稳定性和重复利用性的一种技术。本文综述了脂肪酶的固定化以及固定化脂肪酶的酶学性质的研究进展。 关 键 词 ：脂肪酶，固定化，吸附，包埋，交联，共价结合
Research progress in immobilized lipase technology
酶的固定化就是在催化过程中提高酶的稳定性 和重复利用性的一种技术。经固定化后，脂肪酶具有 稳定性高、连续性好、回收方便、易于控制、可反复使 用、成本降低等优点[3]，为大规模的工业应用提供了 技术上和经济上的支持。因此酶的固定化技术研究 已成为酶应用领域的一个重要研究方向。本文围绕 脂肪酶的固定化方法及固定后酶学性质的研究方面 进行初步的探讨。
immobilized lipase were summaried in this paper.
Key words：lipase；immobilized；adsorption；entrapment；cross-linking；covalent binding
中 图 分 类 号 ：TS201.1
文 献 标 识 码 ：A
表2 几种固定方法的比较 Table 2 Comparison of different immobilization methods
性质
吸附 包埋 交联 共价结合
固定酶制备 简单 困难 困难
困难
酶与载体结合力 弱Fra bibliotek强强
强
酶活力
高
高
中
中
底物专一性 不变 不变 有变化 有变化
固定酶的再生 可能 不可能 不可能 不可能
表1 微生物脂肪酶种类及其最适条件 Table 1 Types of microbial lipases and their optimum conditions
脂肪酶固定化方法的研究进展
脂肪酶固定化方法的研究进展脂肪酶是一种可以催化脂肪水解的酶类，对于脂肪的降解具有重要的应用价值。
脂肪酶固定化是一种重要的手段，可以改善脂肪酶的稳定性、降低酶的负担、提高反应产率。
本文将对脂肪酶固定化方法的研究进展进行探讨。
脂肪酶固定化的方法主要包括物理吸附、交联固定化、共价固定化和包埋固定化等。
物理吸附是一种简单易行的方法，通过静电作用或氢键等力使酶分子吸附于载体表面。
物理吸附固定化方法操作简单，但稳定性较差，容易发生脱附。
交联固定化是一种常用的方法，通过交联剂将酶分子固定于载体上。
交联固定化能够提高酶的稳定性和重复使用次数，但可能会降低酶的催化活性。
共价固定化是将酶与载体之间形成共价键，具有较高的稳定性和催化活性，但操作复杂且成本较高。
包埋固定化是将酶包藏于聚合物中，形成固定化酶粒子，具有较好的稳定性和催化活性。
随着生物技术的发展，脂肪酶固定化方法不断得到改进和完善。
例如，一些研究者采用纳米材料作为载体，通过调节纳米材料的物理化学性质，改善酶的固定化效果。
金属纳米材料如金纳米颗粒、银纳米颗粒等具有较大的比表面积和活性位点，可以显著提高酶的固定化效果和催化活性。
同时，这些纳米材料还可以通过表面修饰，提高载体与酶之间的亲和性，进一步增强酶的固定化效果。
另外，一些研究者采用分子印迹技术固定化脂肪酶。
分子印迹技术是一种特异性识别和绑定分子的方法，通过将目标分子与功能单体结合，形成高选择性和亲和力的识别位点。
利用分子印迹技术固定化脂肪酶，可以大大提高酶对底物的选择性和催化活性。
此外，一些研究者还采用双酶固定化方法，将脂肪酶与其他酶共同固定在载体上。
双酶固定化方法可以形成多酶复合体，提高酶对底物的转化效率。
例如，将脂肪酶与脱氢酶固定化，可以实现脂肪的选择性酸化。
总之，脂肪酶固定化是一种重要的手段，可以改善酶的稳定性、降低负担、提高反应产率。
随着生物技术的发展，脂肪酶固定化方法不断得到改进和完善，例如利用纳米材料作为载体、分子印迹技术固定化和双酶固定化等。
固定化脂肪酶的研究进展
固定化脂肪酶的研究进展固定化酶技术是一种将酶固定在一种载体上，从而提高其稳定性和重复利用性的方法。
固定化酶技术在工业生产和生命科学研究领域具有广泛的应用前景。
其中，固定化脂肪酶作为一种重要的酶类，在食品工业、制药工业、生物燃料生产等领域有着广泛的应用。
首先，固定化载体的选择。
固定化载体是固定化酶技术中至关重要的一环，它直接影响到酶的稳定性和重复利用性。
常见的固定化载体包括凝胶、纤维素、磁性材料等。
目前，研究者对于固定化脂肪酶的载体选择进行了大量的尝试和优化。
例如，一些研究表明，以凝胶为载体的固定化脂肪酶具有较高的活性和稳定性，并且可以通过改变凝胶的孔径和化学性质来调控酶的催化性能。
其次，固定化方法的优化。
固定化脂肪酶的固定化方法多种多样，包括物理吸附、化学交联等。
研究者通过比较不同的固定化方法，优化固定化过程，以提高固定化脂肪酶的活力和稳定性。
例如，一些研究表明，采用化学交联的方法固定化脂肪酶可以在较宽的温度和pH范围内保持较高的活性。
第三，固定化脂肪酶的特性研究。
固定化脂肪酶的特性研究旨在揭示固定化过程对酶的结构和功能的影响。
通过比较固定化脂肪酶与游离酶的特性差异，可以了解固定化过程中酶的构象变化、活性中心的可用性以及固定化载体对酶的稳定性和催化性能的影响。
例如，一些研究表明，固定化脂肪酶的活性中心由于受限于固定化载体的孔径而发生改变，从而导致酶的催化性能发生变化。
最后，固定化酶反应机制的解析。
固定化酶的反应机制是研究者关注的另一个重要问题。
通过研究固定化脂肪酶的反应机制，可以深入了解固定化过程中酶与底物的相互作用、反应路径以及固定化载体对反应过程的影响。
例如，一些研究采用动力学分析方法，揭示了固定化酶反应速率与温度、底物浓度、pH值等因素之间的关系。
总之，固定化脂肪酶的研究进展涵盖了固定化载体的选择、固定化方法的优化、固定化酶的特性研究和固定化酶反应机制的解析。
这些研究为进一步优化固定化酶的性能，推动其在工业生产和生命科学研究中的应用提供了重要的理论和实验基础。
微乳液凝胶固定化脂肪酶催化消旋布洛芬辛酯水解反应的研究
摘要 ： 初步 研究了 Ａ Ｔ一正庚烷 一明胶微乳液 凝胶 固定化脂肪 酶催化消旋布 洛芬辛酯水解反应 的影 响因素 。结果 Ｏ 表明 ： 在正庚烷 中 ， 布洛芬辛 酯水解反应 能够顺利进 行 ， 产物 为光学 纯 度很 高的 ｓ一构 型布洛 芬 ， 转化率 为 ０ ３ １ ． ２７ 时， 其对映 体过量值为 ０９ ２ ； ．８ ６ 凝胶 Ｒ值 （ 与 Ａ Ｔ的摩 尔数之 比 ） 水 Ｏ 对酶催 化反 应有较 大影 响 ， 佳 Ｒ值为 ７ ； 最 ３ 当 酶含 量固定 ， 物浓度为 ０ １ ］Ｌ时 ， 底 ．０ｍｏ ／ 转化率最大并 能得到较高对 映体过量值 的产 物 ； 当反应时 间超过 １ ， ６ ｈ时 水解 反应达到平衡 ； 固定化酶 的重复使用次数 与溶剂 中的含 水量 有关 ， 庚烷 中少 量的水有 助 于增 加酶 的重 复使 正
（ ．Ｃ ｌｇ ｆＣ ｅ ｉｒ ｎ ｔｒ ｌ ｃｅｃ ，Ｓ ａｄｎ ｒｃｌ ｒｌ ｎｖｒｔ ， ａａ ７ ０ ８， ｈｎ ； １ ｏｌ ｅｏ ｈ ｍ ｓｙａｄＭａ ｉ ｉ ｅ ｈｎ ｏｇＡｇｉ ｔ ａ ｉ ｓｙ Ｔ ｉ ２ １ １ Ｃ ｉａ ｅ ｔ ｅ ａＳ ｎ ｕｕ Ｕ ｅｉ ｎ ２ ｎｔｕｅｏ Ｐ ａｍａ ｕｉｓ Ｓ ｈｏ ｏ Ｐ ａｍ ｃｕｉ ｌ ｃ ｎｅ ｈｎ ｏｇＵ ｉ ｒｉ ，Ｊ ａ ２ ０ １ ．Ｉｓｔｔ ｆ ｈｒ ｃ ｔ ， ｃ ｏｌ ｆ ｈｒ ａｅ ｔａ ｉ ｃ ，Ｓ ａｄｎ ｎｖｓｔ ｉ ｎ ５０ ２，Ｃ ｉａ ｉ ｅ ｃ ｃ Ｓｅ ｅ ｙ ｎ ｈｎ ）
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固定化脂肪酶的研究进展
固定化脂肪酶的研究进展固定化脂肪酶的研究进展摘要：将脂肪酶固定化，可以提高酶的专一性及稳定性等，使酶的性质更加稳定，且反响条件温和，副产物少，易于别离。
本文综述了常用的固定化方法，包括物理吸附法、共价交联法和包埋法等，研究了不同的固定化方法对酶的性质的影响。
关键词：脂肪酶固定化方法脂肪酶是一类广泛用于催化甘油三酯水解的酶类。
除了具有水解的功能外，它还可以催化醇解、酯化、酯交换等反响，但在实际使用过程中，游离脂肪酶存在易失活、催化反响不稳定、与产物别离困难或别离本钱高等缺点【1】，因此限制了脂肪酶的进一步应用，然而通过选择适宜的载体及固定化方法，将脂肪酶固定化，可以有效解决上述问题。
本文介绍了近几年不同学者研究脂肪酶固定化的方法和研究成果，以期为固定化脂肪酶的生产及应用提供参考。
1.固定化脂肪酶的方法1.1吸附法吸附法通过氢键、疏水键、电子亲和力等分子间作用力完成酶的固定【2】。
吸附法具有工艺简单、酶剩余活力高、载体材料丰富的特点。
王冰【3】等以沙蒿多糖-壳聚糖复合磁性微球为载体，采用物理吸附法固定化脂肪酶，对固定化过程中对酶活力有影响的各种因素进行研究，同时对固定化酶的局部理化性质、最适IR、温度、酶的热稳定性和表观米氏常数等与游离酶做了比拟。
确定固定化脂肪酶的最正确条件为每0.1g 载体加2%的酶溶液0.9 ml，固定8h，pH 8.4，温度为50℃。
纵伟【4】等以磁性壳聚糖微球为载体，用物理吸附法固定化脂肪酶，对影响固定化的各种因素进行考察，确定固定化的最适宜条件为加酶量600 U/g，温度5℃ ，pH 7.0，固定时间2h，固定化酶连续使用5 次，其相对酶活仍为使用前的57.8% ，具有较好的操作稳定性。
Liu等【5】采用吸附法将脂肪酶固定在经四乙氧基硅烷修饰的磁性纳米颗粒上，并用此催化橄榄油和甲醇制备生物柴油，发现在室温条件下，当水质量分数为10%、转速为200rpm、醇油比4：1时，反响12h后生物柴油的产率可达70%。
【2019年整理】固定化脂肪酶研究进展(2)
固定化脂肪酶研究进展毛满琴（生物工程一班，20091489）摘要：固定化脂肪酶由于其易与底物分离且可重复使用而备受关注。
综述了常用的固定化方法，包括吸附法、共价交联法和包埋法，不同的固定化方法对酶的性质有不同的影响。
关键词：固定化，脂肪酶，载体Research progress in lipase immobilizationMAO Man-qin(Class one, bioengineering, 20091489)Abstract: Immobilized lipase become a hotspot because its easy to separate and can be reused. The common immobilization methods were generally introduced including adsorption, covalent cross-linking method and entrapment method. Different immobilization methods had different effects on the enzyme.Key words: immobilization; lipase; carrier脂肪酶(Lipase EC3.1.1.3，甘油酯水解酶)是一类特殊的酰基水解酶，它的底物是油脂，其水解部位是油脂中脂肪酸和甘油相连接的酯键；脂肪酶能在油水界面上催化酯水解或醇解、酯合成、酯交换、内酯合成、多肽合成、高聚物合成及立体异构体拆分等有机合成反应，是目前被重点研究的酶催化剂。
脂肪酶与底物的作用过程包括：第一步，活化丝氨酸的酰基化（通过亲核攻击）和酯键裂解，甘油二酯释放后，四面体半缩醛中间产物形成；第二步，脱酰基作用（丝氨酸酰基化的逆反应），是活化水分子对酯进行攻击，接下来的裂解过程同样包括脂肪酸释放后四面体半缩醛中间产物结构的形成。
脂肪酶固定化研究
（ １ ） Ｔ ｂ ｅ 叩ｔ ｉ ｍ ａ １ ｔ ｅ ｍ ｅｒ ｐ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｆｔ ｏ ｉｓ ｈ ｌ Ｐ ｉ ｓ ａ ｅ ｎｇ ａ ｒ ｅｓ ｒ ｆ ｏ ｍ３ ０ Ｏ Ｃ ｏ３ ｔ ５ Ｏ Ｃ ． ｔ Ｉ ｈ ｓａ ａ ｉ ｈ ｇ ｈ ｅ ｒ
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和使用， 提高了 酶的利用效率，延长了酶的使用时间． 本文以非极性大孔吸附树脂Ｄ ３ ５ ０ 为吸附 ２ 载体，利用物理吸附 法来固 定化脂肪酶。
通过比较几种不同极性的大孔吸附树脂的固定化效率和水解活力， 优选了树脂， 优化了
固定化脂肪酶的研究进展
固定化脂肪酶的研究进展酶是活细胞内产生的具有高度专一性和催化效率的蛋白质，又称为生物催化剂。
酶作为生物催化剂，具有很高的催化功能、底物特异性和反应特异性。
近十年来，随着生物技术的发展，酶催化反应作为一种有效的手段越来越多地被有机化学家用于有机合成，并应用于医药、农药、日用化学品等部门。
目前，有2000种以上的酶已被人们认识，其中200多种已有市售。
用于有机合成中的酶大多数是脂肪酶和蛋白酶，尤以脂肪酶的应用更引人注目。
脂肪酶，三酯酰甘油酰基水解酶，催化油脂水解的一类酶的总称。
最初用于酯键的水解，广泛存在于动物、植物和微生物中。
由于水解底物是不溶于水的油脂，而脂肪酶本身是溶于水的蛋白，因此催化反应只能发生在油水相接触的界面（即油—水界面），这是脂肪酶特有的性质，最初由sarda和Desnuene发现并提出。
研究发现，来源不同的脂肪酶在一级结构上具有同源性，它们有着相似的结构序列，His-X-Y-Gly-Z-Ser-W-Gly 或Y-Gly-His-Ser-W-Gly（X、Y、Z和W表示非专一性的氨基酸残基），处于活性位点的丝氨酸残基被一个盖子（a-螺旋盖子）保护，当脂肪酶与界面接触时盖子打开，此时在丝氨酸附近产生电位区域而导致脂肪酶结构重排，疏水残基暴露，亲水残基被掩盖，从而增加了脂肪酶与脂溶性底物的亲和性，并且增加了反应过程中中间过渡态的稳定性。
脂肪酶的天然底物是甘油酯类。
然而研究表明，脂肪酶除了能够催化甘油酯类化合物的水解和合成之外，还可以用于催化酯交换反应、生物表面活性剂的合成、多肽合成、聚合物的合成和药物的合成等，尤其是利用某些脂肪酶的立体专一性，催化旋光异构体的拆分和手性药物的合成成为酶工程领域研究的新热点。
因而脂肪酶及其改性制剂在食品与营养、油脂化学品工业、农业化学工业、造纸工业、洗涤和生物表面活性剂的合成以及药物合成等许多领域得到广泛应用。
虽然脂肪酶能够催化多种化学反应，已应用于精细化工，生物柴油，传感器等领域，但用于大规模工业催化仍存在缺陷和不足。
脂肪酶固定化方法的研究进展
脂肪酶固定化方法的研究进展生物工程2班周明 20091525摘要：酶的固定化是生物技术中最为活跃的研究领域之一。
脂肪酶能发生催化水解、醇解、酯化、酯交换等反应，是一种重要的生物催化剂。
而由于脂肪酶的特性，其能否工业化利用很大程度取决于固定化技术的成功与否，酶的固定化方法是酶固定化技术的重要研究内容。
固定化脂肪酶由于其易与底物分离且可重复使用而备受关注。
为此，本文综述了常用的固定化方法，包括物理吸附法、共价结合法、交联法和包埋法，不同的固定化方法对酶的性质有不同的影响。
本文对近年来固定化脂肪酶方法的研究进行了综述，为固定化方法的进一步探讨提供了研究基础。
关键词：固定化；脂肪酶；载体材料The research progress of lipase immobilized Abstract：Of enzyme fixed is in the biotechnology research field of the most active.Fat enzymes would happen catalytic water and alcohol, ester, ester exchange for is a major catalyst of biological.And the fat, the enzymes can be very much depends on the use of technology on the success of the enzyme is a fixed set of the technical content of important research.Into a fatty because of the enzymes that are and separate and can reuse have a major concern.The common immobilization methods were generally introduced including physical adsorption, covalent cross-linking method and entrapment method. Different immobilization methods had different effects on the enzyme.Of the few years, the enzymes a study of the review, as a further explore the method provides research.Keywords：immobilization; lipase; carrier脂肪酶（Lipase EC3.1.1.3，甘油酯水解酶）是一类特殊的酰基水解酶它的底物是油脂其水解部位是油脂中脂肪酸和甘油相连接的酯键[1]；人们对脂肪酶的研究已有上百年的历史，是最早被研究的酶类之一[2]。
脂肪酶固定化及其催化性能研究
反应过程。 通过对油脂与醇的比 例， 含水量，甲 醇添加方式等对反应结果的 影响研究， 得出了 最佳的 转醋化体系。 在反应器中， ３ ０小时内 可达到 ８ ６ ％ 的转酷率。固定化酶反 应器反应 １ ２批次后仍然保持较高的催化活性。本论文同时研究了 大豆油与乙酸乙酷、 乙酸甲 酷等短链酷的转酷化研究， 通过对反应过程控制达到了一定的转化效果， 但其最 终转化率偏低 （ ５ ０ ％ 左右）的原因还需进一步的 研究．
Ｉ ｎ ｔ ｈ ｉ ｓ ｐ ａ ｐ ｅ ｒ ， ｔ ｈ ｅ ｉ ｍ ｍ ｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ ｌ ｉ ｐ ａ ｓ ｅ ｏ ｎ ｃ ａ ｎ ｖ ａ ｓ ｆ ｉ ｂ ｅ ｒ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ｓ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｙ ｔ ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｉ ｓ ｃ ｕ ｓ ｓ ｅ ｄ ． Ｎ ａ Ｉ ０ ４ ｗ ｓ ａ ｅ ｍ ｐ ｌ ｏ ｙ ｅ ｄ ｔ ｏ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ａ ｄ ｊ ａ ｃ ｅ ｎ ｔ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｙ ｌ ｉ ｎ ｔ ｏ ａ ｌ ｄ ｅ ｈ ｙ ｄ ｅ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ． Ｔ ｈ ｅ ｃ ｒ ｏ ｓ ｓ － ｌ ｉ ｎ ｋ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍ ｅ ｎ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｐ ａ ｓ ｅ ｄ ｅ ｎ ｓ ｉ ｙ ｔ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｃ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｒ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｂ ｅ ｒ ａ ｉ ｓ ｅ ｄ ３ ０ ％ ｂ ｙ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ｃ ｒ ｏ ｓ ｓ － ｌ ｉ ｎ ｋ ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｉ ｎ ｇ ｗ ｉ ｔ ｈ ｏ ｎ ｅ － ｏ ｆｃ ｒ ｏ ｓ ｓ － ｌ ｉ ｎ ｋ ． Ｔ ｈ ｅ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｙ ｔ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｉ ｍ ｍ ｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄ ｌ ｉ ｐ ｓ ａ ｅ ａ ｌ ｓ ｏ ａ ｇ ｒ ｅ ｅ ｄ ｗ ｅ ｌ ｌ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ａ ｂ ｏ ｖ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ． Ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｒ ｆ ｅ ｅ ｌ ｉ ｐ ｓ ａ ｅ ， ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｉ ｍ ｍ ｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄ ｌ ｉ ｐ ｓ ａ ｅ ｔ ｏ ｐ Ｈ ａ ｎ ｄ ｔ ｅ ｍ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｈ ａ ｄ ｂ ｅ ｅ ｎ ｒ ａ ｉ ｓ ｅ ｄ ｉ ｎ ｓ ｏ ｍ ｅ ｄ ｅ ｇ ｒ ｅ ｅ ． Ｔ ｈ ｅ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｓ ｏ ｙ ｂ ｅ ａ ｎ ｏ ｉ ｌ ｂ ｙ ｉ ｍ ｍ ｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄ ｌ ｉ ｐ ａ ｓ ｅ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ６ ４ ％ ｏ ｆ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｌ ｉ ｐ ｓ ａ ｅ ｗ ａ ｓ ｓ ｔ ｉ ｌ ｌ ｋ ｅ ｐ ｔ ａ ｔ ｆ ｅ ｒ ７ ｂ ａ ｔ ｃ ｈ ｅ ｓ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｔ ｈ ｅ ｈ ａ ｌ ｆ － ｌ ｉ ｆ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｉ ｍ ｍ ｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄ ｌ ｉ ｐ ｓ ａ ｅ ｉ ｓ ｌ ｏ ｎ ｇ ｅ ｒ ｔ ｈ ａ ｎ
固定化脂肪酶的研究进展
固定化脂肪酶的研究进展xx年xx月xx日•引言•脂肪酶的固定化方法•固定化脂肪酶的性能研究目录•固定化脂肪酶的发展趋势•结论01引言脂肪酶定义脂肪酶是一种能够水解脂肪酸和酯类化合物的酶，属于羧基酯水解酶类。
脂肪酶作用脂肪酶主要作用是催化酯类物质水解，生成脂肪酸和醇类，具有广泛的工业应用前景，如生物柴油、洗涤剂、纺织品助剂、药物、香料等生产领域。
根据作用方式不同，脂肪酶可分为水解酯键的水解酶和催化酯合成的合成酶。
脂肪酶在油脂工业、食品工业、生物柴油生产、医药和生物技术等领域有着广泛的应用。
脂肪酶分类脂肪酶应用研究目的本研究旨在探究固定化脂肪酶的制备及其在生物柴油生产领域的应用，为提高生物柴油的产量和降低生产成本提供技术支持。
研究意义固定化脂肪酶具有催化活性高、可重复使用、易于分离等优点，对于降低生物柴油生产成本和提高生产效率具有重要作用，同时也有助于推动生物柴油产业的发展和环境友好型社会的建设。
研究目的和意义02脂肪酶的固定化方法1包埋法23采用微生物细胞作为载体，将脂肪酶包埋在其中。
微生物细胞固定化将脂肪酶用微胶囊材料包埋，提高酶的稳定性和催化效率。
微胶囊固定化将脂肪酶凝胶化，将其包裹在三维网络结构中。
凝胶包埋将活性炭作为载体，将脂肪酶吸附在其表面。
活性炭吸附将硅胶作为载体，通过物理吸附作用将脂肪酶固定化。
硅胶吸附将高分子材料作为载体，通过静电作用将脂肪酶吸附在其表面。
高分子吸附辐射交联利用辐射作用将脂肪酶分子之间交联在一起。
酶与配体交联将脂肪酶与特定配体进行交联，提高酶的催化效率和稳定性。
化学交联利用化学反应将脂肪酶分子之间交联在一起。
将脂肪酶分子与其他分子通过相互作用包覆在一起。
分子包覆将脂肪酶纳米粒子与其他纳米粒子通过相互作用包覆在一起。
纳米粒子包覆将脂肪酶高分子材料通过相互作用包覆在一起，提高其稳定性和催化效率。
高分子包覆包覆法03固定化脂肪酶的性能研究03pH对稳定性的影响pH对固定化脂肪酶的稳定性有很大影响。
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U 材
料
因而有必要对含酶微乳液进行固定化 L? 2年代末 期3 胶体化学家发现 QJ -微乳 液体系 可 以 发生 胶 凝 作 用3 并对微乳液凝胶进行了一系列物理表 等人便开始尝试对含酶微 L8 2年代初 3 S ’ ’ T H = 3 ; 乳液进行凝胶固定化 IL 实验表明 3 微乳液凝胶
万方数据
黄锡荣等 ] 脂肪酶微乳液的凝胶固定化研究 ! " #$ % & & ’ ( ) * & ) + ’, " ) ** & . ’ / " ) 0) *1" ) ’ ,* 0) + ’" ( 2 ) 3 ) 4* & ) + ’55* # / 6 ’ 7/ 8 " 9 ’ ;:1" :. ’ / " ) 0 ) ’ , $ A B ;B A C $ A F ;E A G E A $ ;E A $ E A G ;$ A F B A C ;$ A B @ = <( ) 3 ) 4 >? 5. D $ E A B D E H A E D E C A C D D I A F D C D A I
万方数据
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物
技
术
第 .卷第 (期
图! 在微乳液区域选点 ! 根据所选点的重量百分组 计算出各组分的 成 及需配 制 的 微 乳 液 的 总 重 量 ! 重量 "称一定量的 #$% 于一定量的正庚烷中 ! 溶 加入一定量的水 & 水用磷酸缓冲液代替 ’ 轻 解后 ! ! 摇数十秒后即成透明的油包水微乳液 " 称取明胶 + ) , -于烧杯 中! 加入水 . 加热溶解后在 水浴中保温 ) ( ! + + / 0 加* 脂肪酶于在 水浴中预 保温 的 1 + + / ( 1 ) 1 2某个配比的微乳液中 ! 搅拌溶解后 ! 立即倒入预保 温的明胶水溶液中 ! 用力搅拌均匀后 ! 取出冷至室 温! 然后放入冰箱冷冻 ( 再取出用刀切成 * 3 ! 4 6 5 2 小块备用 " 按上 ( ) ( ) ( 水固定化酶 用缓冲液代替微乳液 ! 法可制得明胶包埋水固定化酶 " ( ) 6 酶活力测定方法 ( ) 6 ) * 酶活定义 每毫克脂肪酶在 * 4内 消 耗 正己酸被定义为 *个酶活单位 & * " 7 28 9 :’ 称重 ( ) 6 ) ( 测定方法 从冰箱取出切好的酶块 ! 后放入在 ( + /下 预 保 温 的 有 + ) 1 1 ) (28 ; 29 9 < 正己酸和 + 具 ) 129 1 ) (28 ; 1 1 9 <正 辛 醇 的 * 29 塞锥形瓶中 ! 反应 3 取出用 ( 正庚烷洗 ) +29 4后 ! 加 涤两次 3 / 冰箱中保存 "合并洗涤液与反应液 ! 入* 乙醇和 滴 酚酞指示剂 用已标 +29 = + > 6 ( > ! 定的 1 ) 1 +28 ; 9 <的 ?@ $A 滴至粉红 " 以 不 加 酶 计算酶活& 取6 块 的 三 角瓶为空 白 对 照 ! B +次 平 均值 ’ "
? 3 8 I 道H 遗憾的是这些研究报道缺乏有关酶 L 然而 3
微乳液是由有机溶剂 5 油6 水及表面活性剂等 B 构成的宏观均匀B 微观多相的热力学稳定体系L 低水 含量的油包水5 微乳液也叫反胶束L 由于反胶 6 QJ 束体系能够较好地模拟酶的天然环境3 因而3 在此体 系中大多数酶能保持催化活性和稳定性3 有的甚至 表现出超活性L1 国内外有 1 2多年来3 2多个实验室 对= 2多种酶在反胶束中的酶学性质进行了广泛而 深入的研究3 并由此形成了一个新的跨学科的交叉
< :9 I 研究领域 RR 胶束酶学H L 以往的研究多集中在
活性 及稳 定 性 的 具 体 数 据 3 更没有讨论有关微乳 液 的 百 分 组 成B F G值以及水与表面活性剂的摩 尔 比5 对 固 定 化 酶 的 活 性 及 机 械 强 度 的 影 响3 6 K 2 尤其是微乳液的百分组成 L 本文将系统研究以琥 珀 酸二辛酯磺酸钠5 水J 正庚烷所构成的 J CDE6 QJ -微乳 液的百分组 成 B F G 值B K 2 值 对以此 微乳 液为基底的明胶固定化脂肪酶的活性和机械强度 的 影响 3 并对此固定化酶的一些物理化学性质作 之所以选择脂肪酶是因为 5 有关报道 初步探讨 L < 6 已证实它在微乳液凝胶中有活性 3 它在微乳液 5 1 6 体 系 中 的 一 些 特 性 已 有 许 多 报 道3 它比较稳 5 9 6 定B 价格便宜 B 购 买 容 易3 它 在 不 对 称 合 成B 药 5 O 6
H N I
V W X Y Z Y W[ \ ] ^ _ W脂 肪 酶 5 ‘ * / %#公 司 标 示 的 比活性为 ; 橄榄油作底物6 琥珀酸二 O NaJ 5 6 3 %/ 辛酯 磺 酸 钠 5 正庚烷5 含水量d 5 b8 8 c6 3 CDE6 以及明胶5 皆购自 ‘ 2 M 2 1 c6 2 2 6 , + %9 * / %#公 司 L 其他为国产或进口分装试剂 L
6 ) * 微乳液参数对固定化酶活性及机械强度的影响 用 6 ) * ) * D A 对固定化酶活性的影响 1 ) 1 , , ; 28 9 <的 EA( F $3 及 ?@ AF $3 配 制 D A为 ( , ) G * ! , ) = G ! . ) * . ! . ) 6 G及 . ) . 6的磷酸缓冲液 "再 按重量百分 比 . 油 H 水 H #$%’ 配制 * H* ( H* . & 各D 加 酶 粉 分 别 制 胶! ( 3 4后 A 值对应的微 乳 液 ! 测酶活 " 有关结果见图 * " 由图 *可见 ! D A 对微乳液固定化酶活性的影 响 呈 钟 形 曲 线! 十分类似于 D A 对微乳液体系中 酶 活的 影响 " 在 D ) = G B. ) 6 G之 间 酶 活 较 大 ! A, 最佳 D ) * . " 6 ) * ) ( 含酶微乳液的配制方式 A为 . 对 固定化酶活性 的影响 加入酶粉 " 将微乳液配好后再 & * ’
< 山东大学微生物技术国家重点实验室 济南 山东大学胶体与界面化学教育部开放研究实验室 3 济南 1 = 2 < 2 2 A 3 1 = 2 < 2 2 6 5
摘 要 系统研究了由正庚烷B 水B 琥珀酸二辛酯磺酸钠5 所构成的油包水微乳液的百分组成B CDE6 F G 值B 的比值 等对以此微乳液为基底的明胶固定化脂肪酶的活性及机械 强 度 的 影 响 制 备 出 H J H 5 6 3 2 G1 DI CDEI K 了具有超高活性的微乳液凝胶固定化脂肪酶 L 此外 3 还对固定化酶的一些酶学特征进行了初步表征 L 最佳酶 活对应的 F 酶 活 随 CDE 百 分 比 的 增 加 而 提 高 3 但机械强度正好相 M < ; 3 N左右 L 在恒 定 K 2为 < 2值下3 K G为 ; 反 L酶以酶粉形式直接加入微乳液中所得固定化酶的活性要比酶以酶液形式加入到 CDE 的正庚烷中所得的 活性要高 L微乳液凝胶固定化脂肪酶的活力大约是水固定化酶的 < 且在 O 2倍 3 P 下其活性半个月内无明显变 化 L 对中长链的脂肪醇或酸同系物 3 该固定化酶所显示出的底物选择性差异不大 L 关键词 脂肪酶 A 微乳液 A 固定化 A 凝胶 A 酶学特性
药
物
生
物
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术
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脂肪酶微乳液的凝胶固定化研究 @ 黄锡荣 李越中 < 姜兴涛 < 韩学坤 张文娟 曲音波 <
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U & V J 8 O R @ V M TM 9 YZ [’D W M D @ W M TR @ V M T8 ON \8T J L L M W M O N 2M N 4 8 T & ’ #5 N J P J N Q :; 2YM N 4 8 T K O S Q 2MD 8 \T M W K O S Q 2MV 8 9 X N J 8 O ) = G D A, * * , ) 6 G 3 ) *
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由 表 *可 以 看 出 ! 将酶粉直接加入缓冲液中 配制含酶微乳液所得的固定化酶的活性较高 " 6 ) * ) 6 明胶与水的比例对凝胶强度及酶活性的 影响 按方式 & 配制含酶微乳液 " 微乳液的百分 * ’ 组 成为 . 油 H 水 H #$%’ 缓冲液的 * H* ( H* . & ! 固定明胶与水的总量为 , 改变两 ) * . " ) 3 ! D A为 . 者的相对比例制胶& 步骤见 ( ) ( ) * ’ ! ( 3 4后 在 重量比在 , ( + /下 测 酶 活"实 验 中 发 现! H* 1至 表( * 1 H,范围内制成的胶不坍塌而且均匀性好 " 列 出 了 此 范 围 内 不 同 胶; 水重量配比对应的酶活 数 据 " 由 表 (可 见 ! 最 佳 胶; 水重量比为 ( ) G H 6 ) , " 6 ) * ) 3 微 乳 液 百 分 组 成^ _ 1值对固定化酶活性 及 强度的 影 响 从 相 图 中 选 择 有 代 表 性 的 点 ! 配 制 不 同百 分比例 的微乳 液 & 水 相为 D ) * .的 磷 A. 酸缓冲液 ’ 按微乳液固定化方法制胶 ! 测酶活 " 有 ! 关结果见表 6 "