生物化学逆转录培训课件

3/9/2021
生物化学逆转录
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逆转录酶催化的cDNA合成
生物化学逆转录
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试管内合成cDNA:
cDNA complementary DNA
以mRNA为模板，经逆转 录合成的与mRNA碱基序列互 补的DNA链
分子生物学研究可应用逆 转录酶，作为获取基因工程目 的基因的重要方法之一，此法 称为cDNA法
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•1、DNA复制的基本特点 •2、原核生物的复制过程包括起始、延长和终止 •（1）起始是将DNA双链解开形成复制叉 •（2）复制的延长由引物或延长中的子链提供3′-OH，供dNTP掺入生成磷酸二酯键，延 长中的子链有前导链和后随链之分，复制产生的不连续片段称为冈崎片段 •（3）复制的终止需要去除RNA引物、填补留下的空隙并连接片段之间的缺口使成为连续 的子链
一、逆转录病毒的基因组RNA以逆 转录机制复制
➢逆转录(reverse transcription) ➢逆转录酶(reverse transcriptase)
逆转录酶
RNA
DNA
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逆转录病毒细胞内的逆转录现象:
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逆转录酶 RNA酶 逆转录酶
RNA 模板
DNA-RNA 杂化双链 单链DNA
原核生物复制
真核生物复制
起始：DNA的解链；引物合成和引发体形 成 延长：复制的延长指在DNA-pol催化下， dNTP以dNMP的方式逐个加入引物或延长 中的子链上，其化学本质是磷酸二酯键的不 断生成 终止：双向复制的复制片段在终止点处汇合
起始：与原核生物基本相似 延长：DNA聚合酶转换；核小体组蛋 白的分离和重新组装 终止：需要端粒酶延伸端粒DNA
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AAAA
逆转录酶
A AA A TTTT
碱水解
TTTT
DNA聚合酶Ⅰ
SI核酸酶
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二、逆转录的发现发展了中心法则
➢逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现 ➢逆转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样兼有遗传 信息传代与表达功能 ➢对逆转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意到的病毒 致癌理论
双链DNA
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RNA病毒在细胞内复制成双链DNA的前病毒(provirus)。前 病毒保留了RNA病毒全部遗传信息，并可在细胞内独立繁殖 。在某些情况下，前病毒基因组通过基因重组 (recombination)，参加到细胞基因组内，并随宿主基因一 起复制和表达。这种重组方式称为整合(integration)。前病 毒独立繁殖或整合，都可成为致病的原因
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•3、真核生物复制发生于细胞周期的S期，其过程与原核生物相似，但更为复杂和精致。复 制的延长和核小体组蛋白的分离和重新组装有关。复制的终止需要端粒酶延伸端粒DNA
•4、非染色体基因组采用特殊的方式进行复制
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• 本章知识点框架图 ：
DNA复制