动物细胞培养技术思考题
《动物细胞培养》思考题
《动物细胞培养》思考题
1、细胞培养的一代生长过程如何？
答：原代培养的过程就是动物细胞培养的第一代细胞。原代培养是这样的：取出动物胚胎或者幼龄动物组织或器官后用胰蛋白酶使其分散为单个细胞，然后配置成一定浓度的悬浮液放入培养瓶（其液体培养基含动物血清）中置于培养箱中培养。
2、什么是原代培养、传代培养？
答：原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。传代培养是指当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。
3、细胞生长需要满足哪些条件？
4、操作人员如何保持无菌？
5、无菌操作的要点是什么？
6、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？
7、器材包装有何要求？
8、叙述超净工作台的工作原理？
9、正压过滤器为何会除菌？
10、配制后液体呈黄色意味着液体的ph发生了什么变化？
11、用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D－Hanks液或PBS液配制？
Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。
12、L－谷氨酰胺在营养液中有何作用？
L－谷氨酰胺属于生长因子的一种，是细胞生长所必需的。
13、营养液配制后为什么要小剂量分装？
避免污染后全军覆没。
14、你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？
1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。用筛网滤掉未消化的组织块。
动物细胞培养
动物细胞培养、动物细胞核移植、 动物细胞培养、动物细胞核移植、 动物细胞融合、 动物细胞融合、生产单克隆抗体等
动物细胞培养技术是其他 动物细胞工程技术的基础
问题探讨
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病 人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想 如何来治疗该病人？
３、某生物制药厂利用动物细胞培养的方法，生产细胞 某生物制药厂利用动物细胞培养的方法， 产物－－生长因子。这样的细胞培养属于（ －－生长因子 产物－－生长因子。这样的细胞培养属于（ ） A、原代培养 B、传代培养 、 、 培养 C、直接培养 、 D、间接 、
４、在动物细胞培养中，有部分细胞可能在培养条件下 在动物细胞培养中， 无限制的传代下去，这种传代细胞被称为（ 无限制的传代下去，这种传代细胞被称为（ ） A、原代细胞 、 B、传代细胞 、 C、细胞株 、 D、细胞系 、
动物细胞培养技术的应用
•（1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、 （ 生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体等。 干扰素、单克隆抗体等。 •（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于 （ 获得大量自身的皮肤细胞， 植皮。 植皮。 •（3）用于检测有毒物质 （ •（4）用于生理、病理、药理等方面的 （ 用于生理、病理、 研究， 研究，为治疗和预防疾病提供理论依据
贴壁生长
大多数组织细胞不适应悬浮生长， 大多数组织细胞不适应悬浮生长， 必须在固定的表面生长和分裂。 必须在固定的表面生长和分裂。
动物细胞培养doc
实验一动物细胞培养
细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等
为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。
本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。
Ⅰ清洗与灭菌
一、实验目的
能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理
清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
动物细胞培养
一、任务：小组内部讨论动物细胞培 养过程中的有关问题 1. 动物细胞培养的原理是什么？ 保存 10代以内的细胞，因为 催化蛋白质水解。细胞间的 因为这些组织或器官，分裂
单个细胞 细胞悬浮液 原代培养
二、展示交流：小组代表回答问题 无限传代 （遗传物质已改变）
10代细胞 传 分瓶培养 代 培 50代细胞 养
细胞增殖 2. 为什么要选取动物胚胎和幼龄动物 超过 10代部分细胞的细胞核 物质主要是蛋白质 能力旺盛，易于培养。 (胶原蛋白 的组织和器官？ 型可能发生变化。 等 )。不能，因为两者的最适 3.胰蛋白酶的作用是什么呢?由此可说 PH不同，而正常组织细胞的 明细胞间的物质是什么成份？用胃 生存环境与胰蛋白酶的最适 蛋白酶行吗？ PH 较接近 4.人类一般保存的是哪类细胞呢？为
什么？
课堂小结
1.概念： 就是从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞， 然后,放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖 2.过程：
动 物 组 织 剪碎 胰蛋白酶
单 加培养液 个 细 胞
细 胞 悬 液
适宜条件
50 10 代 代 细 分瓶培养 细 胞 胞
无 限 传 代
原代培养
传代培养
3.条件
无菌无毒，营养，温度、PH，气体环境 （2）基因工程的受体细胞 （3）细胞的生理、药理、病理研究
学习目标
1.简述动物细胞培养的过程、条件。
(整理)动物生物学思考题-无脊椎动物部分
动物生物学思考题
动物的细胞和组织
1 简述细胞组成和基本结构。
2 原核细胞和真核细胞有什么区别？
4 什么是细胞周期？
6 什么是动物的组织？动物有哪几类基本组织？
7 简述不同动物组织的结构和特点？
多细胞动物的胚胎发育
1 动物的完全卵裂有哪2种主要形式？简述2种卵裂的不同。
2 无脊椎动物的早期胚胎发育经历哪几个阶段？简述这几个阶段的发育过程。
3 动物的中胚层是如何发生的？
4 何为假体腔？何为真体腔？
6 请比较原口动物与后口动物的差别。
动物的类群及其多样性
1．什么是种的概念？
2．何为二名法？举例说明。
3．叙述生物的5界系统。
4．何谓真体腔动物？
单细胞真核生物 原生生物类（Kingdom Protista ） 11 原原生生动动物物的的主主要要生生物物学学特特征征有有哪哪些些？？在在生生物物进进化化中中的的地地位位如如何何？？
22 如如何何区区别别纤毛虫纲、鞭毛虫纲、肉足虫纲3类原生动物？ 4 纤毛和鞭毛的结构是什么样的？它们在原生动物的生活中起什么作用？ 5 原生动物的水分和排泄是如何进行的？ 7原生动物如何获得营养？消化过程怎样进行？ 8原生动物的无性生殖的方式有哪几种？区别是什么？ 14自然界里原生动物分布在什么样的环境中？ 15原生动物在污水的生物处理中起什么作用？ 侧生动物——海绵动物门（Spongia ）
11 为为什什么么说说海海绵绵动动物物是是多多细细胞胞动动物物进进化化中中的的一一个个侧侧枝枝？？ 22 描描述述海海绵绵动动物物的的体体壁壁结结构构？？ 3 阐明海绵动物水沟系统的结构和功能？ 5 以钙质海绵纲为例说明海绵动物早期胚胎发育的过程。 7海绵动物门分为哪几个纲？它们之间的主要区别是什么？ 8 海绵动物的体制与它们的生活方式有什么样的适应关系？
安立国第二版动物细胞工程思考题参考答案
哺乳动物的克隆方法：胚胎干细胞核移植、胚胎细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植、体细胞核
移植。
第一章绪论课后习题答案
1. 动物细胞工程主要有哪些内容？这些技术有何用途？
答：1. 组织和细胞培养技术2. 细胞融合与单克隆抗体技术3. 细胞核移植技术4. 胚胎工程技术5. 干细胞技术6. 转基因技术7. 染色体工程
细胞工程的应用有：A. 单克隆抗体的应用：疾病诊断与治疗、微量大分子物资的检测、贵重生物活性物的分离与提纯、特殊疾病治疗、与药物交联治疗疾病；B. 转基因技术的应用：建立疾病的动物模型、品种改良和抗病育种、“乳腺生物发应器”、基因代替治疗、异种器官移植、基因功能研究；C. 细胞与组织替代治疗；D. 治疗人类不孕症；E. 优良品种繁育；F. 生产转基因家畜；G. 保护濒危动物。
2.追踪动物细胞工程研究与应用的最新进展，并预测其发展趋势。
第二章细胞培养
1、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？
答：体外培养的细胞根据其生长方式，主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。离体细胞必须贴附于底物上才能生长的细胞称为贴壁生长型细胞。有机体的绝大部分细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长。动物细胞培养中，大多数细胞必须贴附在固相表面才能生长，当细胞布满表面后即停止生长。从生长表面脱落进入液体得细胞通常不再生长而逐渐退化，这种细胞称为单层附壁细胞。贴壁生长的细胞在活体体内时，形态各异，而体外培养状态下则在形态上比较单一而失去其在体内时原有的特征。
按照培养细胞的形态，主要可分为以下几类：成纤维细胞型、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞；少数细胞类型在体外培养时不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，如血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞等，这些细胞在悬浮中生长良好，可以是单个细胞或为细小的细胞团，观察使细胞呈圆形。由于悬浮生长于培养液中，因此其生存空间大，具有能够提供繁殖大量细胞、传代方便、易于收获细胞等优点，易于大规模生产，便于过程的控制。
动物细胞工程思考题
1.动物细胞工程研究的主要内容？重要意义？
2.什么是动物细胞、组织培养技术？其关键条件包括哪些？
3.什么是细胞系、细胞株？建立细胞系的主要技术环节包括哪
些？
4. 体外培养的动物细胞主要分哪几类？请举例说明各种这几种
细胞类型。
5. 简述酶消化法进行动物细胞原代培养的基本过程
6.什么是动物细胞的传代培养，动物细胞培养过程中为何要进
行传代培养？贴壁细胞传代时采用何种方法？其技术原理是什么？
7.细胞传一代后，一般要经过那几个阶段？各阶段的细胞形态
和增殖能力有何特点？影响培养细胞生存的主要环境因素有哪些？玻璃器皿和培养液常用的消毒方法有哪些？
10.每代细胞的生长曲线包括哪几个主要时期？各期细胞有何
特点？
11.常用的细胞克隆培养法有哪些？简述其主要技术环节。
12.组织分离的常用方法有哪些？特点如何？
13.简述细胞冻存的基本程序和注意事项
14.引起培养细胞污染的生物因素主要包括哪些？应如何避免
培养细胞的污染？
15.动物细胞大规模培养的方法有哪些？其各自特点是什么？
16.常用的细胞融合方法包括哪些？其主要原理是什么？
17.什么是单克隆抗体技术，其主要技术包括哪些？
18.利用HAT筛选法进行杂交瘤细胞的基本原理是什么？在正
常细胞培养基中添加氨基喋呤或氨甲喋呤会产生怎样的结果，原因？目前基因工程抗体主要有哪些技术？试比较其异同点。制备转基因动物有哪些主要方法？简述其主要原理和技术过程。试比较这些方法的优劣。
22. 何为基因敲除，基因敲除的主要技术过程包括哪些？
23.依据细胞的分化潜能干细胞可分为哪几种类型？各类干
《动物细胞培养》一节教学设计及实践反思
《动物细胞培养》一节教学设计及实践反思
导读：学校每学期每位老师都有一节校内公开课。本学期我选择了《2.2.1动物细胞培养和核移植技术（第一课时）》即《动物细胞培养》作为公开课即录像课的教学内容。在课前经过了自己精心准备但是具体实施的教学结果却不令人满意。通过“有效上课”专题的学习研究，我认真反思了自己这节课不成功的原因，与大家交流。
说明：第一部分公开课时《动物细胞培养》的教学设计
第二部分课后的几点教学反思
第三部分反思后的《动物细胞培养》教学设计
一、教学目标
简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
二、教学重点、难点
1. 教学重点
动物细胞培养的过程及条件。
2. 教学难点
动物细胞培养的过程及条件
三、教材分析
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。在动物细胞培养技术之后介绍的核移植技术、动物细胞融合技术、生产单克隆抗体以及胚胎工程都要用到动物细胞培养技术。掌握好这项技术才能为其他技术打好铺垫。所以把动物细胞培养讲的清清楚楚、明明白白就十分重要了。在动物细胞培养的教学中，可把这部分内容归纳成三个问题：（1）为什么要进行动物细胞的培养？——即培
养的用途（2）什么是动物细胞的培养？（3）怎样进行动物细胞的培养？第三个问题是本节课的重点。
四、学情分析
动物细胞在体内的增殖学生是了解的，在体外如何实现细胞增殖的，有什么特点以及培养后的细胞有什么用途都是可以激发学生的学习兴趣。对于动物细胞培养的条件，则要从学生已有的内环境的知识出发，启发学生自己动脑思考这个问题，以加深对培养条件的理解。学习了植物细胞工程的基础上再去联系动物细胞培养技术，并能作出二者的比较。
第二节 动物细胞工程 (含答案)
第二节 动物细胞工程
1.动物细胞培养
(1)过程：
(2)思考下列问题:
原代培养： 传代培养：
细胞株和细胞系的区别?
(细胞株的遗传物质与原细胞相比并没有发生改变，而细胞系的遗传物质发生改变，并带有癌变的特点) 动物细胞培养液的成分?
(水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清，属于液体培养基) (3)动物细胞培养技术的应用
①生产一些蛋白质生物制品——病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体； ②检测有毒物质； ③烧伤病人的植皮。 例题1.下列有关动物细胞培养的叙述，不正确的是（ ） A.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织
B.将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞
C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液
D.动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞就会衰老死亡
2、动物体细胞核移植技术和克隆动物
动物体细胞核移植的原理是:细胞核的全能性，与植物组织培养一样属于无性生殖。虽然细胞核内具有发展成为完整个体所需的全套基因，但动物体细胞分化程度较高，因此很难表达全能性。卵细胞体积大，易于操作，含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。
3.动物细胞融合
原理：
促融手段：灭活的病毒、聚乙二醇、电激等
应用：制备单克隆抗体。
4.
(1)为什么要用经过免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融合？
(2)应用：
用于疾病诊断、治疗和预防，因其特异性强、灵敏度高，与常规抗体相比，优势明显。例题2.用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）
A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞
细胞生物学思考题（含答案）
细胞生物学思考题（含答案）
第一章细胞概述
1. 胡克和列文虎克发现细胞的动机是不同的，你对此有何感想?
答：胡克当时的目的只是想弄清楚为什么软木塞吸水后能够膨胀，并且能够堵塞住暖水瓶中的气体溢出而保温。列文虎克是为了保证售出的布匹质量，用显微镜检查布匹是否发霉。正是由于他们的观察力和对自然现象的好奇心，以及对事业的责任感才导致细胞的发现。
2. 证明最早的遗传物质是RNA而不是DNA的证据是什么?
答：核酶的发现。所谓核酶就是具有催化活性的RNA分子。
3. 举例说明细胞的形态与功能相适应。
答：细胞的形态结构与功能的相关性与一致性是很多细胞的共同特点。如红细胞呈扁圆形的结构，有利于O2和CO2的交换; 高等动物的卵细胞和精细胞不仅在形态、而且在大小方面都是截然不同的，这种不同与它们各自的功能相适应。卵细胞之所以既大又圆，是因为卵细胞受精之后，要为受精卵提供早期发育所需的信息和相应的物质，这样，卵细胞除了带有一套完整的基因组外，还有很多预先合成的mRNA和蛋白质，所以体积就大; 而圆形的表面是便于与精细胞结合。精细胞的形态是既细又长，这也是与它的功能相适应的。精细胞对后代的责任仅是提供一套基因组，所以它显得很轻装; 至于精细胞的细尾巴则是为了运动寻靶，尖尖的头部，是为了更容易将它携带的遗传物质注入卵细胞。
4. 真核细胞的体积一般是原核细胞的1000倍，真核细胞如何解决细胞内重要分子的浓度问题?
答：出现了特化的内膜系统，这样，体积增大了，表面积也大大增加，并使细胞内部结构区室化，一些重要分子的浓度并没有被稀释。
细胞生物学实验考考试样题及实验思考题答案
细胞生物学实验考考试样题及实验思考题答案
细胞生物学实验考试样题
一、填空题（2分/每空，共30分）
1、洗液由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水组成。
2、1640培养基包括RPMI1640培养液、谷氨酰胺、双抗、小牛血清。
3、鉴别活细胞的染液是0.4%台盼蓝溶液;鉴别细胞核的染液是甲基绿-派洛宁染液；
鉴别线
粒体的染液中性红-詹纳斯绿染液。
4、细胞核分离的基本步骤是组织匀浆、离心、纯化、鉴定。
5、细胞骨架中使蛋白质被保存的染料是1%Triton-100。
二、简答题（5+5+10共20分）
1.线粒体在分离提取过程中，为什么要在0~4℃中进行？
答：①为了保持组分的生理活性;
②防止线粒体中的酶被破坏，避免酶失活
2.什么我们在检测细胞渗透性时要用一定浓度的试剂？
答：①确保实验是在等渗条件下进行；
②防止物质的进出；
③同时避免由于渗透压不同而影响实验结果。
3.细胞的计数步骤和方法。
答：加等体积的染液与细胞悬液混合～把悬液滴在计数板上～底倍镜下观察，活细胞
无色，死
细胞为蓝色，找计数方格计四个方格的细胞总数。（压到大格线者“计左不计右，计上不计下”）计算。
Ⅰ：每毫升原液细胞数=4个大格细胞总数/4*100*稀释倍数
Ⅱ：细胞存活率(%)=(细胞总数-死细胞数)/细胞总数。
细胞生物学实验思考题答案
实验一利用各种显微镜观察细胞形态、结构
1、简述显微镜的主要结构和操作要领。
普通生物显微镜由3部分构成：
①照明系统：包括光源和聚光器。
②光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。
③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台) 、调节器和物镜转换器(旋转器等使用（一）、观察前准备
高中生物_动物细胞培养教学设计学情分析教材分析课后反思
⾼中⽣物_动物细胞培养教学设计学情分析教材分析课后反思
2.2.1动物细胞培养教学设计
1.讲授法：对细胞培养过程进⾏疑难讲解。
2.⾃学法：学⽣先⾃学基本知识，完成导学案。
3.学案导学
4.新授课教学基本环节：情境导⼊、激发兴趣→合作探究、精讲点拨→阅读教材、独⽴思考→反思总结、当堂检测
课时安排：1课时
引⼊：烧伤病⼈的治疗通常是取烧伤病⼈的健康⽪肤进⾏⾃体移植，但对于⼤⾯积烧伤病⼈来讲，健康⽪肤很有限，请同学们想⼀想如何来治疗该病⼈？
[动物细胞培养]
动物细胞培养的概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞⽣长和增殖. 动物细胞的培养过程：见课本P45：动物细胞培养技术是其他动物细胞⼯程技术的基础
（⼀）动物细胞培养的过程
学习活动⼀：
【合作学习】
阅读教材并完成下列问题：
1.为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？
2.如何将动物组织分散成单个的细胞？
3.胰蛋⽩酶的作⽤是什么？由此可说明细胞间的物质主要是什么成分？
4.培养瓶或培养⽫的内表⾯为何要光滑、⽆毒？
5、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？
【动动⼿】请完成动物细胞培养
的流程图。
有关概念:
原代培养：从机体取出后⽴
即培养的细胞为原代细胞。初次
培养称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培
养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，
分装到两个或两个以上的培养
瓶中继续培养，称为传代培
养。
细胞株：原代细胞⼀般传⾄
10代左右细胞⽣长停滞，⼤部分细胞衰⽼死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。
动物细胞培养技术思考题
《动物细胞培养技术》复习思考题
1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高?你认为该如何保证器皿中无杂质?如果
器皿中有杂质,会对细胞培养产生什么样的影响?
答:①离体细胞对各种毒物都很敏感,若所用器材清洗效果未达到要求,各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅,121.3℃,20~30分钟,在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿,避免造成污染。③
2.叙述超净工作台的工作原理?
答:超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程,在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化,净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走,使工作区构成无菌环境。
3.正压过滤器为何会除菌?
答:正压式过滤器没有内置灭菌灯,正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜,这层膜可以将细菌阻挡在膜上,过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程
4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗?如果不精确,会导致什么后果?请举例说明。
你认为精确配制各种溶液?
答:
5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化?
答:配制后的液体应呈桃红色,PH值为7.4左右。苯酚红的变色
域:1.2(橙)~3.0(黄), 6.5(棕色)~8.0(紫色),若为黄色,则液体呈酸性,不利于细胞的生存。
6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制
答:Ca+2、Mg+2是细胞膜的重要组分,具有使细胞凝聚的作用。因此,用于分
离细胞的消化液宜用无Ca+2、Mg+2离子的D-Hanks液或PBS液。
细胞工程 要点、思考题、补充题详解
《细胞工程》各章节小结、课后思考题及补充思考题第一章绪论小结：
一、生物工程
定义：一般称为生物技术，是以生命科学为基础，利用生物体系和工程学原理生产生物制品和创造新品种的一门综合技术。
二、细胞工程
定义：应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水品上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或特种细胞产品的一门综合性科学技术。
重要应用：（1）动植物快速繁殖；
（2）品种改良与新品种培育；
（3）细胞工程生物制品；
（4）组织工程；
（5）动物胚胎工程快速繁殖优良、濒危品种；
（6）医学器官修复或移植的组织工程；
（7）用于能源开发、环保；
（8）转基因动植物的生物反应器工程；
第二章细胞工程基础小结：
一、细胞生物学基础
细胞分化：是指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间上和空间上的分化。细胞全能性：是指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
二、分子生物学基础
转基因技术步骤：（1）目的基因的获取；（2）构建重组DNA；
（3）重组DNA引入受体细胞；（4）表达目的基因受体细胞的挑选；三、普通生物学基础
生殖与发育：有性生殖：是两个配子融合为一，成为合子或受精卵，再发育成为新一代个体的生殖方式。
第三章植物组织与细胞培养小结：
一、植物组织培养（概念、原理、培养条件、常用仪器、步骤、应用、人工种子等）
概念：是指将植物组织、器官、细胞、胚胎、原生质体等在适当培养条件下诱导产生愈伤组织或长成完整植株的技术。
实验动物学思考题汇总
Chap1 绪论
问答题：
1.实验动物的基本概念是什么？
2.实验动物有那三大特点？
3.实验动物学的定义是什么？
4.实验动物的标准化包括哪些内容？它有什么意义？
5.为什么说实验动物学是一门新兴的综合性基础学科？
6.什么叫比较医学？
7.生命科学研究所必需的四个基本条件是什么？
8.什么是动物福利？
9.针对动物保护主义，科技界的对策是什么？
10.国际上对动物实验伦理有哪些要求？
11.什么是动物实验的“3R原则”？
Chap2 实验动物的遗传学控制
1. 请说出实验动物种、品种、品系的概念。
2. 按遗传学控制分类，可将实验动物分为哪几类？
3. 什么叫近交？什么叫近交系？用近交系动物做实验的优点是什么？
4. 请叙述亚系的概念和形成原因。
5. 请叙述支系的概念。
6. 请叙述重组近交系、重组同类系、同源突变近交系和同源导入近交系的概念。
7. 在饲养繁殖中发现一只雄性无毛小鼠，已知无毛基因hr/hr是隐性基因，根据Snell发明的基因导入原理，如何将此基因导入到C57BL/6J小鼠体内？
8. 动物近交可引起哪些变化？
9. 近交系动物有哪些特点？
10. 近交系动物的局限性和缺点是什么？
11. 请叙述封闭群动物的概念。
12. 近交系动物和封闭群动物在种群维持和生产时的交配方式上有什么区别？
13. 请叙述突变系动物的概念。
14. 动物基因发生突变有哪两种形式？基因突变可出现哪些表现？
15. 对动物进行诱发突变的方法有哪些，各具什么特点？
16. 请叙述杂交群动物的概念和特征。
Chap3 实验动物的微生物学和寄生虫学控制
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《动物细胞培养技术》复习思考题
动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？
答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。③
叙述超净工作台的工作原理？
答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。
正压过滤器为何会除菌？
答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程
各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。你认为精确配制各种溶液？
答：
配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？
答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。
用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制
答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。
L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？
答：L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。
HEPES溶液的作用机理？
答：它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动
平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？
答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质； b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源； d起酸碱度缓冲液作用； e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。
营养液制备后为什么要小剂量分装？
答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。
营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长
10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？
答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
细胞培养过程中对无菌的要求很高，你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污染？请详细阐述。
答：①实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminarflow）以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作②无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验③进无菌室前要彻底洗手④使用培养液前不宜过早开瓶，开瓶后的培养液应保持斜位，避免直立，以防止下落细菌的污染。⑤操作时尽量不要谈话，咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。⑥）吸取培养液、细胞悬液时，应专管专用⑦⑧
你认为组织块培养成功需哪些条件？你们小组为了实验成功采取了哪些具体的措施？你在本次实验中做了什么工作？
答：①实验所用的器材必须保证无菌无毒，用胰蛋白酶（浓度适中）消化的时间不宜过长和过高、营养、温度
组织块培养的基本原理如何？
答：细胞增殖
何时须更换培养基进行传代？可否使用与原先培养条件不同之血清种类来进行后期的培养？
答：①一般两天换一次,如果细胞贴壁率变化不大,可以适当延长,到细胞贴壁率达到85左右,可以传代②不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
培养细胞时不用CO2或使用5 % 或10% CO2是否都可以？说明原因？
答：不是。一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH 的缓冲系统,而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度.当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5 %CO2培养细胞.
你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？你在其中参与了什么操作？有什么体会？答：①要点：1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。用筛网滤掉未消化的组织块。2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计数并用培养液调整细胞密度。
3）、用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。
4）、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。
5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。
培养瓶移入CO2恒温箱培养时，瓶盖为何要稍松？又如何避免细胞污染？如果细胞污染有何挽救措施？
答：①拧紧瓶盖无法进行气体交换，瓶盖稍松才能为细胞生长提供必要的氧气和二氧化碳，尤其是二氧化碳特别重要，细胞在酸性培养液中生长的更好②
胰蛋白酶的消化原理如何？如何初步判断胰蛋白酶的消化时间？
答：①原理：细胞外含有多种胞外蛋白,如胶原蛋白；使细胞间或细胞与培养瓶内壁粘连起来.用胰蛋白酶分解这些蛋白质后就可以使它们分开了! ②显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再链接成片，表明此时细胞消化适度。2~10分钟
细胞培养到一定时间为何要进行传代？能一直传代下去吗？阐述其机理。