母液的配制

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培养基母液配制

培养基母液配制

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质,配制成较浓的母液(母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍),贮存在冰箱中备用,以后配制培养基时根据用量量取。

由于培养基成分较多,如果每配制一次即进行多次称量(不少成分用量较微),不仅会造成较大的误差,而且会增加工作量,因而配制母液可使培养基配制方便准确。

配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍,倍数不宜过高。

MS培养基母液及培养基配方法参考表2。

大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存,以免长期贮存发生沉淀。

若将全部大量成分配在一起时,为防止在混合时发生沉淀,须在各药品充分溶解后,按表1.2中化合物出现顺序混合,氯化钙最后加入,以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后,在1000 ml容量瓶中定容,然后移入磨口瓶中,贴上标签,置于普通冰箱(4℃)贮存。

微量元素母液配制时,由于培养基中微量元素用量甚微,浓度为0.l~0.0001mg/l,所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。

一般将微量元素分别称量溶解,定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中,但也有将KI分别配制,单独贮存在棕色瓶中。

配好后,贴上标签,贮存于4℃冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制。

目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。

称取Na2-EDTA 3.73 g,FeSO4 ·2H2O 2.78 g,分别溶解(可加热),然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。

转入细口瓶,贴上标签,4℃冰箱中保存。

氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时,母液浓度通常为原培养基配方的50倍(或100)。

常用氨基酸和维生素为水溶性物质,可用蒸馏水溶解,但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解,然后用重蒸馏水定容。

配制好后,转入细口瓶,贴上标签,-20℃(或4℃)冰箱中保存。

植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要,灵活设计其浓度,一般为 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。

培养基母液配制

培养基母液配制

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质,配制成较浓的母液(母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍),贮存在冰箱中备用,以后配制培养基时根据用量量取。

由于培养基成分较多,如果每配制一次即进行多次称量(不少成分用量较微),不仅会造成较大的误差,而且会增加工作量,因而配制母液可使培养基配制方便准确。

配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍,倍数不宜过高。

MS培养基母液及培养基配方法参考表2。

大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存,以免长期贮存发生沉淀。

若将全部大量成分配在一起时,为防止在混合时发生沉淀,须在各药品充分溶解后,按表中化合物出现顺序混合,氯化钙最后加入,以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后,在1000 ml容量瓶中定容,然后移入磨口瓶中,贴上标签,置于普通冰箱(4℃)贮存。

微量元素母液配制时,由于培养基中微量元素用量甚微,浓度为~l,所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。

一般将微量元素分别称量溶解,定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中,但也有将KI分别配制,单独贮存在棕色瓶中。

配好后,贴上标签,贮存于4℃冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制。

目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。

称取Na2-EDTA g,FeSO4 ·2H2O g,分别溶解(可加热),然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。

转入细口瓶,贴上标签,4℃冰箱中保存。

氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时,母液浓度通常为原培养基配方的50倍(或100)。

常用氨基酸和维生素为水溶性物质,可用蒸馏水溶解,但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解,然后用重蒸馏水定容。

配制好后,转入细口瓶,贴上标签,-20℃(或4℃)冰箱中保存。

植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要,灵活设计其浓度,一般为、、、或1 mg/l。

如配 mg/l NAA母液,称25 mg NAA溶于50 ml 重蒸馏水,或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸馏水中。

MS培养基的配置

MS培养基的配置

MS培养基的配置一、母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍。

优点:(1)保证各物质成分的准确性;(2)便于配置时快速移取;(3)便于低温保藏。

1、MS大量元素母液(50X)称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。

配1升培养基取20 ml。

注:CaCl2·2H2O单独配置2、MS微量元素母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基母液10ml。

注:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml,即含0.25 mg的量。

3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。

配1升培养基母液10ml。

注:配制时,两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。

混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。

4、MS有机物母液(200X)称10升量溶解在50ml蒸馏水中。

配1升培养基母液5ml。

二、MS固体培养基的配制1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出,按顺序排列,并逐一检查是否沉淀或变色,避免使用已失效的母液。

2、取少量的蒸馏水(约为配制培养基量的2/3)加入烧杯中。

注意:配500ml培养基用1000ml烧杯。

3、按母液顺序和规定量,用量筒、移液管或微量移液器取母液,依次放入烧杯中。

每1000ml培养基,需要:MS大量元素母液 20mlMS微量元素母液 10mlMS铁盐母液 10mlMS有机物母液 5ml4、通过计算,用微量移液器取所需的各种生长调节剂母液。

5、加入蔗糖(30g/L),溶解。

6、定容:用容量瓶。

7、调pH值:用0.1 N 和0.5N 的NaOH,一般pH=5.8。

注意:①经高温高压灭菌后,培养基的pH值会下降0.2—0.8,故调整后的pH值应高于目标pH值0.5个单位。

培养基母液配制

培养基母液配制

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质, 配制成较浓的母液(母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍), 贮存在冰箱中备用, 以后配制培养基时根据用量量取。

由于培养基成分较多, 如果每配制一次即进行多次称量(不少成分用量较微), 不仅会造成较大的误差, 而且会增加工作量, 因而配制母液可使培养基配制方便准确。

配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍, 倍数不宜过高。

MS培养基母液及培养基配方法参考表2。

大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存, 以免长期贮存发生沉淀。

若将全部大量成分配在一起时, 为防止在混合时发生沉淀, 须在各药品充分溶解后, 按表中化合物出现顺序混合, 氯化钙最后加入, 以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后, 在1000 ml容量瓶中定容, 然后移入磨口瓶中, 贴上标签, 置于普通冰箱(4℃)贮存。

微量元素母液配制时, 由于培养基中微量元素用量甚微, 浓度为~l, 所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。

一般将微量元素分别称量溶解, 定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中, 但也有将KI分别配制, 单独贮存在棕色瓶中。

配好后, 贴上标签, 贮存于4℃冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制。

目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。

称取Na2-EDTA g, FeSO4 ·2H2O g, 分别溶解(可加热), 然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。

转入细口瓶, 贴上标签, 4℃冰箱中保存。

氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时, 母液浓度通常为原培养基配方的50倍(或100)。

常用氨基酸和维生素为水溶性物质, 可用蒸馏水溶解, 但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解, 然后用重蒸馏水定容。

配制好后, 转入细口瓶, 贴上标签, -20℃(或4℃)冰箱中保存。

植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要, 灵活设计其浓度, 一般为、、、或1 mg/l。

母液的配制

母液的配制
配制培养基时,为了使用方便和用量准确,通 常采用母液法进行配制,即将所选培养基配方中各 试剂的用量,扩大若干倍后再准确称量,分别先配 制成一系列的母液置于冰箱中保存,使用时按比例 吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例,所需配制的母液可分为: MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液 和MS有机化合物母液等。另外,还要配制生长物质 母液,在不同类型的培养基中使用。
母液定容 体积 ml
1650 10 16500
370
10 3700
170
10 1700
1000
CaCl2·2H2O 440
10 4400
注意: (1) 配制是各化合物应分别称量、分别溶解,经充分溶解后才
能混合。
(2)某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等在 一起可能发生化学反应,产生沉淀物。为避免此现象发生,各种 化学药品必须先以少量蒸馏水使其充分溶解后才能混合,混合时 应注意先后顺序。速度宜慢,边搅拌边混合。待第一种化合物溶 解后再加入第二种化合物,当最后一种化合物完全溶解后,将溶 液倒入容1000ml的量瓶中,再加水定容1000ml 。
注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备 用。
如果将新配制的铁盐母液立即放入冰箱中。 则会容易形成沉淀。
4、有机母液的配制
MS培养基的有机成分包括维生素、肌醇、氨基 酸等,由于用量小,也应配成母液。培养基中的有 机成分原则上应分别单独配制。
特别是微量元素、维生素等微量成分,因用量少,不仅 称量麻烦,还容易出现误差,所以配制母液是科学和方便 的方法。使用母液不但可以保证培养基个物质成分的准确 性及配制的方便性,且便于低温保藏,从而提高工作效率。

母液的配制

母液的配制
药品名称 规定用 量mg/L 5 5 扩大倍 称取量mg 数 100 100 50 50 100 母液定容体 积 ml
烟酸(维生素B5) 盐酸吡哆醇(维生素B6)
盐酸硫胺素(维生素B1)
甘氨酸
5
20
100
100
50
200
(2)肌醇母液的配制 按培养基配方用量的100倍,用电子分析天 平分别称取后放入l烧杯中,加蒸馏水直接溶解, 然后定容于100ml容量瓶中,转移到储液瓶中保 存于4℃冰箱。
(3)CaCl2· 2H2O要在最后单独加入(因为氯化钙易与磷 酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀)。
(4)然后,倒入细口磨砂试剂瓶中,贴上标签,注明配制
日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
2.微量元素母液的配制
将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍, 用电子天平分别依次称取MnSO4· 4H2O 22.3g, ZnSO4· 7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g,KI 0.83g, Na2MoO4· 2H2O 0.25g,CuSO4· 5H2O 0.025g, CoCl2· 6H2O 0.025g,并用重蒸水逐个溶解,待全部溶解再依 次混合后用容量瓶定容至1000ml,后倒入细口磨砂试剂瓶中, 贴上标签,注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃
药品名称 规定用 量ml/L 扩大倍 称取量mg 数 母液定容体 积 ml
肌醇
100
100
1000
100
5.植物生长调节剂的配制
常用的激素如生长素和细胞分裂素等配制 成母液使用起来方便、准确。 配制前需先用相应的少量有机溶剂进行溶 解,然后再定容。贴好标签,写明配制激素的 浓度,存放于冰箱中。

ms基本培养基母液的配制方法

ms基本培养基母液的配制方法

ms基本培养基母液的配制方法一、准备所需材料1. 酸性植物激素溶液:包括吲哚乙酸(IAA)、纯度较高的激素(如6-苄基腺嘌呤,BA)等。

2. 碱性植物激素溶液:如生长素(GA3)等。

3. 无机盐溶液:包括硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钾、硼酸、锌硫酸、硼酸等。

4. 维生素溶液:如次黄嘌呤核苷酸(NAA)等。

5. 蔗糖溶液:用于提供能量和碳源。

6. 琼脂:用于凝固培养基。

二、配制步骤1. 称取适量的无机盐溶液成分,按照MS基本培养基的配方比例将各种盐溶解在蒸馏水中,常用的浓度为1/2或1/4的MS培养基。

2. 将酸性植物激素溶液和碱性植物激素溶液分别加入到溶液中,注意控制激素的浓度。

3. 加入维生素溶液,按照配方比例加入到溶液中。

4. 加入适量的蔗糖溶液,用来提供能量和碳源。

5. 最后将琼脂加入到溶液中,搅拌均匀。

6. 调节溶液的pH值,通常为5.8左右。

7. 用蒸馏水补充溶液至总体积,并充分搅拌均匀。

8. 将配制好的培养基溶液进行高温高压灭菌处理,一般条件下为121摄氏度,压力为0.1MPa,持续20分钟。

三、注意事项1. 在配制过程中,要保持实验室卫生,使用无菌操作。

2. 使用高质量的试剂和蒸馏水,避免杂质的干扰。

3. 激素的浓度要根据实验需要进行调整。

4. 配制过程中要注意酸碱度的调节,尽量控制在5.8左右。

5. 琼脂的加入要充分搅拌均匀,避免结块。

6. 灭菌处理要按照规定的条件进行,确保培养基的无菌性。

通过以上步骤,我们可以成功地配制出MS基本培养基的母液。

这种培养基在植物组织培养、植物细胞和胚胎发生研究中起着重要的作用。

根据实验的需要,可以在母液的基础上进一步调整培养基的成分和浓度,以满足不同植物材料的培养要求。

希望以上内容对您有所帮助。

(完整word版)MS母液的配制与保存

(完整word版)MS母液的配制与保存

MS母液的配制与保存一、目的要求:通过MS培养基母液的配制,掌握配制与保存培养基母液的基本技能。

二、设备用品:1、设备:百分之一天平,万分之一天平,电磁炉,家用冰箱2、用品:称量纸(大小都要),玻璃烧杯250ml,容量瓶500ml和250ml,广口瓶500ml250ml,标签纸,洗瓶,药匙,玻璃棒,搪瓷杯,纯水,95%酒精,纸巾,笔。

三、方法步骤计算方式:称取量=规定量×浓缩倍数×母液体积1、MS1大量元素母液配制(0.5L)化合物原配方量扩大倍数称取量母液体积NH4NO3 1650mg/L 20倍16.5g0。

5LKNO3 1900mg/L 20倍19g0。

5LMgSO4。

7H2O 370mg/L 20倍3。

7g0。

5LKH2PO4 170mg/L 20倍 1.7g0.5LCaCl2。

2H2O 440mg/L 20倍 4.4g0,5L配制方法:用百分之一天平称取NH4NO316。

5g,KNO319g,MgSO4.7H2O3。

7g,KH2PO41。

7g;将纯水装入搪瓷杯中放到电磁炉上加热,把药品分别放入玻璃烧杯中加热水玻璃棒搅拌至药品完全溶解,用玻璃棒引流的方式将溶解完的药品倒入容量瓶中,用洗瓶清洗3次玻璃烧杯,以免药品残留。

用此方式分别将药品溶解然后引流至容量瓶中,最后将容量瓶定溶至500ml刻度线,待冷却后倒入广口瓶中放置冰箱内保存。

注意:CaCl2.2H2O是放热性药品所以单独配制,称取药品4。

4g放入玻璃烧杯中用冷水将药品溶解,用同样的方法将CaCl2。

2H2O定溶,待冷却后倒入广口瓶中放置冰箱内保存.在MS母液瓶上贴标签,注明母液名称,浓缩倍数,配制日期,配制人以及吸取量。

2、MS2微量元素母液的配制(0.25L)化合物原配方量扩大倍数称取量母液体积H3BO36。

2mg/L200倍0.31g0.25LMnSO4. 4H2O22.3mg/L200倍1。

115g0。

25LZnSO4. 7H2O 8。

母液的配制

母液的配制
呈金黄色),冷却后定容至500ml的容量瓶中,倒入棕色磨口 试剂瓶中,经室温放置一段时间令其充分反应后,贴上标签,
注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备 用。
如果将新配制的铁盐母液立即放入冰箱中。 则会容易形成沉淀。
4、有机母液的配制
MS培养基的有机成分包括维生素、肌醇、氨基 酸等,由于用量小,也应配成母液。培养基中的有 机成分原则上应分别单独配制。
配制培养基时,为了使用方便和用量准确,通 常采用母液法进行配制,即将所选培养基配方中各 试剂的用量,扩大若干倍后再准确称量,分别先配 制成一系列的母液置于冰箱中保存,使用时按比例 吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例,所需配制的母液可分为: MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液 和MS有机化合物母液等。另外,还要配制生长物质 母液,在不同类型的培养基中使用。
母液分装
溶解 按顺序混合
定容
保存于冰箱
五、实验方法及步骤 1.大量元素母液的配制
即含N、P、K、Ca、Mg、S六种元素的混合溶液, 一般配成浓度为10倍或20倍的母液。
药品名称
KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4
规定用量 扩大 mg /L 倍数
1900 10
称取量mg 母液定容 体积 ml
(3)CaCl2·2H2O要在最后单独加入(因为氯化钙易与磷 酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀)。
(4)然后,倒入细口磨砂试剂瓶中,贴上标签,注明配制 日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
2.微量元素母液的配制
将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍, 用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g, ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g,KI 0.83g, Na2MoO4·2H2O 0.25g,CuSO4·5H2O 0.025g, CoCl2·6H2O 0.025g,并用重蒸水逐个溶解,待全部溶解再依 次混合后用容量瓶定容至1000ml,后倒入细口磨砂试剂瓶中, 贴上标签,注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃ 冰箱保存备用。

母液的配制资料

母液的配制资料

如果将新配制的铁盐母液立即放入冰箱中。
则会容易形成沉淀。
4、有机母液的配制
MS培养基的有机成分包括维生素、肌醇、氨基
酸等,由于用量小,也应配成母液。培养基中的有
机成分原则上应分别单独配制。
(1)维生素母液的配制 按培养基配方用量的100倍,用电子分析天 平分别称取后放入l烧杯中,ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ蒸馏水直接溶解, 然后混合定容于100ml容量瓶中,转移到储液瓶 中保存于4℃冰箱。
(3)CaCl2· 2H2O要在最后单独加入(因为氯化钙易与磷 酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀)。
(4)然后,倒入细口磨砂试剂瓶中,贴上标签,注明配制
日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
2.微量元素母液的配制
将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍, 用电子天平分别依次称取MnSO4· 4H2O 22.3g, ZnSO4· 7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g,KI 0.83g, Na2MoO4· 2H2O 0.25g,CuSO4· 5H2O 0.025g, CoCl2· 6H2O 0.025g,并用重蒸水逐个溶解,待全部溶解再依 次混合后用容量瓶定容至1000ml,后倒入细口磨砂试剂瓶中, 贴上标签,注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃
1390
1865
铁盐母液的配制方法是:
用电子天平称取硫酸亚(FeSO4.7H2O)和乙二胺四乙酸 二钠(Na2-EDTA),分别用蒸馏水加热溶解,煮沸,使之全 部溶解,溶解后混合后继续煮沸几分钟(约加热5min至溶液 呈金黄色),冷却后定容至500ml的容量瓶中,倒入棕色磨口 试剂瓶中,经室温放置一段时间令其充分反应后,贴上标签, 注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备 用。

母液配置

母液配置

植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。

MS培养基的配制包括以下步骤。

培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。

这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。

现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg/LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。

其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5 5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。

各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。

嫁接母液配制实验报告

嫁接母液配制实验报告

1. 掌握嫁接母液的配制方法,了解嫁接母液在植物繁殖中的应用。

2. 学习植物组织培养技术,提高实验室操作技能。

二、实验原理嫁接母液是指在植物组织培养过程中,将植物细胞、组织或器官中的有效成分提取出来,配制成一定浓度的溶液,用于繁殖和培养植物。

嫁接母液中含有丰富的生长素、细胞分裂素、糖类等营养物质,可以促进植物生长、提高繁殖效率。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:新鲜植物叶片、茎段、芽等。

2. 仪器:剪刀、烧杯、玻璃棒、电子天平、容量瓶、移液管、无菌操作台、无菌室、超净工作台等。

四、实验步骤1. 植物材料预处理:将新鲜植物材料剪成一定大小的片段,用70%乙醇消毒30秒,再用无菌水冲洗3次。

2. 提取植物有效成分:将预处理后的植物材料放入烧杯中,加入适量的蒸馏水,用玻璃棒充分搅拌,提取植物有效成分。

3. 过滤:将提取液用滤纸过滤,去除杂质。

4. 配制嫁接母液:根据实验要求,将提取液按照一定比例稀释,配制成所需浓度的嫁接母液。

5. 调节pH值:用pH计检测嫁接母液的pH值,根据需要用1mol/L的NaOH或HCl溶液进行调节。

6. 分装与保存:将配制好的嫁接母液分装到无菌试管中,密封保存于4℃冰箱中。

五、实验结果与分析1. 实验结果:成功配制出所需浓度的嫁接母液。

2. 分析:嫁接母液在植物繁殖过程中具有重要作用,可以促进植物生长、提高繁殖效率。

本实验成功配制出嫁接母液,为后续植物繁殖实验提供了条件。

1. 植物材料预处理:预处理过程中,消毒和冲洗是关键步骤,可以降低细菌、真菌等微生物的污染,提高嫁接母液的质量。

2. 提取植物有效成分:提取过程中,要确保植物材料充分浸泡在蒸馏水中,提高有效成分的提取率。

3. 配制嫁接母液:根据实验要求,选择合适的稀释比例,保证嫁接母液的质量。

4. 保存:嫁接母液易受细菌、真菌等微生物污染,需在低温、无菌条件下保存,以保证其稳定性。

七、实验总结本实验成功配制出嫁接母液,掌握了嫁接母液的配制方法。

培养基母液的配制方法

培养基母液的配制方法

培养基母液的配制方法培养基是用于细胞培养的基础营养物质,它为细胞提供适当的营养和环境条件,以促进细胞的生长和繁殖。

培养基母液是制备培养基的初始液体,下面是一种常见的培养基母液的配制方法。

配制培养基母液的材料和设备:1.高质量的培养基成分:如氨基酸、维生素、无机盐、糖、有机酸等。

2.纯净的水:可以使用去离子水或高纯水。

3.称量器具:称量天平、量筒等。

4.搅拌装置:磁力搅拌器或振荡器等。

5.固液分离装置:滤纸、滤膜或离心管等。

6.灭菌工具:如高压灭菌锅、紫外线灭菌仪等。

具体步骤如下:步骤1:准备工作-清洗和消毒工作台和必要的玻璃器皿,如量筒、烧杯、磁力搅拌器等。

-检查所需材料和设备是否完整,以防止操作过程中的中断。

步骤2:配制培养基1.按照所需培养基配方中各成分的质量比例,用称量天平准确称量各成分。

2.使用量筒或烧杯,加入适量的纯净水。

3.将已称量的培养基成分加入水中。

根据配方要求的顺序,加入各成分并充分搅拌混合。

4.搅拌速度和时间根据配方要求进行调整,使各成分充分溶解并均匀分布。

步骤3:过滤和灭菌1.准备好合适的滤纸或滤膜,并放置在过滤装置中。

可以根据需要使用多次过滤或组合过滤器设备以获得更好的过滤效果。

2.调整过滤装置的设置,使培养基缓慢通过过滤器,以避免气泡的产生。

可以使用真空过滤或重力过滤方法,根据实际情况进行选择。

3.检查过滤结果,确保培养基没有异物或沉淀物。

4.准备好灭菌容器,如离心管或高压灭菌锅。

将过滤后的培养基倒入容器中,并盖好盖子。

5.使用适当的灭菌设备对培养基进行灭菌处理。

可以使用高压灭菌锅、摇床灭菌、紫外线灭菌等方法。

步骤4:保存和使用1.灭菌后的培养基母液应存放在适当的条件下,如低温、阴凉和无光照的环境中,以保持其质量。

2.在使用前,应对培养基进行适当的质量控制,如pH值检测、无菌条件下培养等。

总结:以上是一个常见的培养基母液的配制方法。

在实际操作中还要根据所需培养基的种类和配方进行合理选择和调整。

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特别是微量元素、维生素等微量成分,因用量少,不仅 称量麻烦,还容易出现误差,所以配制母液是科学和方便 的方法。使用母液不但可以保证培养基个物质成分的准确 性及配制的方便性,且便于低温保藏,从而提高工作效率。
a
3
储备液(母液)
母液是将培养基成分扩大若干倍,一般为10倍、20倍、100倍甚至更高倍数 的浓缩溶液。
理论知识:
培养基:是植物组织培养的物质基础,也是组织培养 能否成功的重要因素之一。
培养基的主要成分是植物生长发育所必需的各种营养元素。
成分:水分(主要成分)
无机盐类:大量元素、微量元素、铁盐
有机营养成分:维生素、肌醇、氨基酸等
植物生长调节剂:细胞分裂素类、
生长素类: IAA(吲哚乙酸)、
萘乙酸 (NAA)
配制培养基时,为了使用方便和用量准确,通常采用母液法进行 配制,即将所选培养基配方中各试剂的用量,扩大若干倍后再准确称 量,分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存,使用时按比例吸取 母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例,所需配制的母液可分为:MS大量元素母液、 MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外,还 要配制生长物质母液,在不同类型的培养基中使用。
16500
MgSO4·7H2O
370
10
3700
KH2PO4
170
10
1700
1000
CaCl2·2H2O
440
10
4400
a
9
注意: (1) 配制是各化合物应分别称量、分别溶解,经充分溶解后才能混合。
(2)某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等在一起可能发生化学反应, 产生沉淀物。为避免此现象发生,各种化学药品必须先以少量蒸馏水使其充分溶解后 才能混合,混合时应注意先后顺序。速度宜慢,边搅拌边混合。待第一种化合物溶解 后再加入第二种化合物,当最后一种化合物完全溶解后,将溶液倒入容1000ml的量瓶 中,再加水定容1000ml 。
按照扩大倍数 称量
母液分装
溶解 按顺序混合
定容
a
8
五、实验方法及步骤 1.大量元素母液的配制
即含N、P、K、Ca、Mg、S六种元素的混合溶液,一般配成浓度为 10倍或20倍的母液。
药品名称 KNO3
规定用量mg 扩大倍
/L

1900
10
称取量mg 19000
母液定容体积 ml
NH4NO3
1650
10
0.025
1000 25
CoCl2·6H2O
0.025
1a 000 25
母液定容体积 ml 1000
13
3.铁盐母液的配制
Fe是用量较多的一种微量元素,因铁离子在水溶液中不稳定, 易与氢氧根离子结合二发生沉淀,必须单独配制。只有其螯合物才 容易被植物吸收和利用,因此需要单独配制成铁盐螯合物母液。
目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物,必须 单独配成母液。这种螯合物使用起来方便,比较稳定,且不易发生 沉淀。
a
10
(3)CaCl2·2H2O要在最后单独加入(因为氯化钙易与磷 酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀)。
(4)然后,倒入细口磨砂试剂瓶中,贴上标签,注明配制 日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
a
11
2.微量元素母液的配制
将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍,用电子天平分别依次称 取MnSO4·4H2O 22.3g, ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g,KI 0.83g, Na2MoO4·2H2O 0.25g,CuSO4·5H2O 0.025g, CoCl2·6H2O 0.025g,并用重蒸水逐 个溶解,待全部溶解再依次混合后用容量瓶定容至1000ml,后倒入细口磨砂试剂瓶中, 贴上标签,注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
a
1
培养基类型:MS培养基、B5培养基、N6培养基
MS培养基是由Marashige和Skoog为培养烟草组 织而设计的,是应用最为广泛的培养基。
根据培养材料的种类、有针对性地选择 适宜的培养基,没有任何一种培养基可适合 所有情况下的组织培养。
a
2
培养基制备是植物组织培养的基本工作。培养基含 有很多化学成分,而且数量多少不等,性质各有差异。
a
15
如果将新配制的铁盐母液立即放入冰箱中。 则会容易形成沉淀。
a
16
4、有机母液的配制
MS培养基的有机成分包括维生素、肌醇、氨基 酸等,由于用量小,也应配成母液。培养基中的有 机成分原则上应分别单独配制。
a
14
3、MS铁盐母液的配制
药品名称
规定用量mg 扩大倍 称取量mg
/L

母液定容体积 ml
FeSO4.7H2O Na2-EDTA
27.8
100
1390
37.3
100
1865
500
铁盐母液的配制方法是:
用电子天平称取硫酸亚(FeSO4.7H2O)和乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTA), 分别用蒸馏水加热溶解,煮沸,使之全部溶解,溶解后混合后继续煮沸几分钟(约 加热5min至溶液呈金黄色),冷却后定容至500ml的容量瓶中,倒入棕色磨口试剂 瓶中,经室温放置一段时间令其充分反应后,贴上标签,注明配制日期、扩大倍数、 配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
a平、托盘天平、烧杯(50ml, 100ml, 500ml, 1000ml)、量筒(1000ml,100ml, 25ml)、 容量瓶(1000ml,500ml,100ml)、药勺、称量纸、 玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。
a
7
确定培养基
贴标签 保存于冰箱
四、母液配制流程图
a
12
2、微量元素母液的配制
药品名称
规定用量
ml/L
MnSO4·4H2O
22.3
扩大倍 称取量mg 数 1000 22300
ZnSO4·7H2O
8.6
1000 8600
H3BO3
6.2
1000 6200
KI
0.83
Na2MoO4·2H2O
0.25
1000 830 1000 250
CuSO4·5H2O
按试剂种类和性质将其分别称量、分别溶解、分别配制、单独保存或几种 混合保存,配制培养基时在按比列吸取即可。
配制母液及培养基时要选用蒸馏水,以免带入杂物质对培养材料产生不利 影响。
a
4
实验一 MS培养基贮备液(母液)的配制
一、实验目的
熟悉MS培养基的组成,掌 握贮备液(母液)的配制方法。
a
5
二、实验原理:
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