冰冻切片与石蜡切片的区别
石蜡切片VS冰冻切片
石蜡切片V S冰冻切片石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。
制作过程较石蜡切片快捷、简便，因而多应用于手术中的快速病理诊断。
实验步骤一、石蜡切片1.?固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。
凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。
同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2.脱水：为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。
固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3.透明：常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。
材料块在透明剂浸渍过程称透明。
?4.浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。
先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5.包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6.切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。
通常切片厚度为3-5um，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7.贴片与烤片：一般使用恒温水浴锅，温度控制在37-40℃左右，有利于石蜡切片的展开，贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋白质凝固后即可染色。
8.切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
9.染色：经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。
实验操作简单。
免疫组化：指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应。
石蜡切片与冰冻切片
石蜡切片与冰冻切片一、组织和细胞标本类型：（一）组织标本类：1、石蜡切片：组织形态保存好2、冰冻切片：抗原性保存好（二）细胞标本类：1、组织印片2、细胞培养片（细胞爬片）3、细胞涂片二、组织取材1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。
2、组织取材注意事项：（1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。
动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。
（2）注意防止人为因素的影响刀和剪要快，避免挤压。
（3）组织块的大小厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。
三、活细胞标本的制备法（1）细胞大量培养后，经消化将细胞制成悬液（106）涂在涂有切片粘合剂的载玻片上，凉干后固定。
（2）将细胞直接培养在盖玻片上。
（3）将细胞直接培养在6孔或9孔板上，经固定后可行IHC。
四、石蜡切片的制备1、由于石蜡不溶于水和醇类试剂，只溶解在二甲苯类试剂中。
因而，组织经固定和水洗后含大量水分，需用乙醇类试剂进行脱水，水脱完后，组织内含有大量的乙醇，还必须用能溶解乙醇的二甲苯来置换，最后经浸蜡，组织细胞内被大量石蜡支称，才使组织能用于石蜡切片。
2、小动物组织脱水、透明和浸蜡时间75%乙醇30min，85%乙醇30min，95%乙醇Ⅰ1h，Ⅱ1h，Ⅲ过夜或2h；无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min；二甲苯Ⅰ15min，Ⅱ10min，Ⅲ10min；石蜡Ⅰ30min，石蜡Ⅱ30min，石蜡Ⅲ1~2h。
五、冰冻切片的保存和使用1、冰冻切片固定后-80℃保存备用2 、冰冻切片从-80℃取出，凉干或电吹风吹干后可直接进行免疫组化标记。
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处
1、冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。
这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了。
当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。
编辑本段冰冻切片的应用（1）在手术进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。
（2）了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。
（3）对于已确定为恶性肿瘤的患者，则需要了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤组织。
（4）在做剖腹探查时所发现的肿块或者异样的组织。
（5）显示组织中的脂肪和脂类物质，这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织等。
（6）某些酶的显示如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等。
（7）神经病理学技术中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal 氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。
（8）对某些物质所进行的免疫荧光的研究。
编辑本段冰冻切片的制作方法低温恒冷箱冷冻切片制作法以Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机为例，该机的箱面上有电子控制板，装有即时冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，机器马上进行工作状态，并可持续10mins。
启动即时除霜键，可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉，并可持续15mins。
有照明键一个，启动该键可照明工作间，有利工作及观察组织的冰冻状况。
配有消毒键一个，当进行一周的工作或者一天的工作后，启动该键，可对工作间进行消毒。
当每天工作完毕时，可启动密锁键，锁住工作间。
除此之外，箱面的左边有四个按键，两个为快速自动进退键，两个为微小进退键，还有一个手动旋钮，调节修组织块时的进退。
冰冻切片与石蜡切片的区别
1．冰冻切片是免疫构造化教染色中最时常使用的一种切片要领.其最超过的便宜是不妨较完佳天保存多种抗本的免疫活性，越收是细胞表面抗本更应采与冰冻切片.新陈的构造及已牢固的构造均可做冰冻切片.之阳早格格创做冰冻时，构造中火份易产死冰晶，往往做用抗本定位.普遍认为冰晶少而大时，做用较小，冰晶小而多时，对于构造结构益伤较大，正在含火量较多的构造中上述局面更易爆收.冰晶的大小与其死少速率成正比，而与成核率（产死速率）成反比，即冰晶产死的数量愈多则愈小，对于构造结构做用愈宽沉.果此，应尽管落矮冰晶的数量.Fish认为冰冻启初时，冰晶成核率较缓，以来渐渐减少，其临界温度为-33.C,从-30.C 落至-43.C之间，成核率慢遽减少达1018，而后再减缓.鉴于上述表面可采与以下步伐缩小冰晶的产死.（1）速冻，使构造温度骤落，支缩从-33.C43.C的时间，缩小冰晶的产死.其要领有二：①搞冰-丙酮（酒粗）法：将150-200ml丙酮（酒粗）拆进小保温杯内，渐渐加进搞冰，曲至鼓战呈粘稀状，再加搞冰出有再昌泡时，温度可达-70℃C，用一小烧杯（50-100ml）内拆同戊烷约50ml，再将烧杯缓缓置进搞冰丙酮（杂酒粗）鼓战液内，至同戊烷温度达-70℃时即可使用.将构造（大小为1cm×0.8cm×0.5cm）加进同戊烷内速冻30-60s后与出，或者置恒热箱内以备切片，或者置-80℃矮温冰箱内贮存.②液氮法：将构造块仄搁于硬塑瓶盖或者特造小盒内（曲径约2cm），如构造块小可适量加OCT包埋剂浸出构造，而后将特造小盒缓缓仄搁进衰有液氮的小杯内，当盒底部交触液氮时即启初气化沸腾，此时小盒脆持本位切勿浸进液氮中，约莫10-20s构造即赶快冰结成块.与出构造冰块坐时置进-80℃冰箱贮存备用，或者置进恒热箱切片机冰冻切片.（2）将构造置于20%-30%蔗糖溶液1～3天，利用下渗吸支构造中火分，缩小构造含火量.做用冰冻切片的果素较多，果此，技能易度较大，采用佳的冰冻切片机是包管切片品量的关键.久时冰冻切片机有二类：①恒缓冰冻切片机（Cryastat）：为较理念的冰冻切片机，型号很多，但是其基础结构是将切片机置于-30℃C矮温稀关室内，故切片时出有受中界温度战环境做用，可连绝切薄片至2-4μm，真足能谦脚免疫构造化教标记表记标帜央供.切片时，矮温室内温度以-15℃～18℃为宜，温度过矮构造易破碎，抗卷板的位子及角度要适合，载玻片附揭构造切片，切勿上下移动.②启搁式冰冻切片机：包罗半导体致热切片机战甲醇致热切片以及老式的CO2、氯乙烷等热冻切片机.切片时表露气氛中，温度出有简单统造，切片技能易度大，正在下温季节，切片越收艰易，且切片薄8～15μm，出有简单连绝切片，但是其便宜是价廉，海内有死产.冰冻切片后如出有染色，必须吹搞，贮存矮温冰箱内，或者举止短促预牢固后贮存冰箱保存.2．石蜡切片其便宜是构造结构保存良佳，正在病理战回瞅性钻研中有较大的真用价格，能切连绝薄片，构造结构浑晰，抗本定位准确.用于免疫组化技能的石蜡切片造备与惯例造片略有分歧：①脱火、透明等历程应正在4℃.C下举止，以尽管缩小构造抗本的益坏.②构造块大小应限于2cm×1.5cm×0.2cm，使构造充分脱火、透明、浸蜡.③浸蜡、包埋历程中，石蜡应脆持正在60℃以下，以溶面矮的硬蜡最佳（即矮温石蜡包埋）.构造块脱火、透明、浸蜡时间参照表1-3：表1-3 构造块处理时间表1 70%乙醇4℃ 3～4h2 80%乙醇4℃ 3～4h3 90%乙醇4℃ 2～3h4 95%乙醇Ⅰ 4℃ 2～3h5 95%乙醇Ⅱ 4℃ 1～2h8 二甲苯Ⅰ 4℃ 0.5～1h9 二甲苯Ⅱ 4℃ 0.5１～1h10 石蜡Ⅰ 60℃ 1h11 石蜡Ⅱ 60℃ 2h以上齐历程为18-24h，也可正在室温内使用自动脱火机代替.如构造块小，曲径小于0.5cm，可用赶快石蜡包埋切片，齐历程只需4h安排.石蜡切片为惯例造片技能，切片机多为轮转式，切片薄度2～7μm，应用范畴广，出有做用抗体的脱透性，染色匀称普遍.由于甲醛牢固、有机熔剂战包埋剂对于组抗本有一定的益伤及遮蔽，使抗本特性爆收改变.有人报告经蛋黑酶消化，不妨革新光镜免疫组化染色强度，时常使用的有胰蛋黑酶、链霉蛋黑酶及胃蛋黑酶等消化法.石蜡切片应进37℃恒温箱过夜，那样烤片可缩小染色中脱片局面.切片如需少久贮存，可存搁于4℃冰箱内备用.石蜡切片便宜较多，但是正在造片历程中要通过酒粗、二甲苯等有机溶剂处理，构造内抗本活性得来较多，有人采与热冻搞燥包埋法（Freeze drying embedding methed），不妨保存构造内可溶性物量，预防蛋黑变性战酶的得活，进而缩小了抗本的拾得.该法是将新陈构造矮温速冻，利用热冻搞燥机（Freezing dryer）正在真空、矮温条件下排除构造内火分，而后用甲醛蒸气牢固搞燥的构造，末尾将构造浸蜡、包埋、切片.此法可用于免疫荧光标记表记标帜、免疫酶标记表记标帜及搁射自隐影.。
石蜡切片与冰冻切片对比全集
石蜡切片与冰冻切片对比全集石蜡切片与冰冻切片《一》石蜡切片把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。
切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。
切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。
良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。
切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。
为能得到平整无皱褶的组织切片。
可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。
此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。
为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。
对HE染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。
《二》冰冻切片冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。
为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。
恒冷箱切片机(cryostat)是目前最常用的冰冻切片机，可得到3—5um 的连续薄片。
组织在切片前需要冰冻，而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。
一般认为，冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。
含水量较多的组织中较易出现冰晶。
1．防止组织中冰晶形成的方法(1)速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。
方法包括：1)干冰—丙酮(乙醇)法：将150～200ml丙酮(无水乙醇)装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，用一小烧杯内装异戊烷约50ml，将此烧杯缓慢置人干冰—丙酮(或无水乙醇)饱和液内，至异戊烷温度-70℃时即可使用。
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别一、石蜡切片把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。
切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。
切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。
良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。
切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。
为能得到平整无皱褶的组织切片。
可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。
此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。
为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。
对HE染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。
二、冰冻切片冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。
为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机和配套的一次性刀架是保证切片质量的关键。
组织在切片前需要冰冻，而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。
一般认为，冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。
含水量较多的组织中较易出现冰晶。
1．防止组织中冰晶形成的方法(1)速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。
方法包括：1)干冰—丙酮(乙醇)法：将150～200ml丙酮(无水乙醇)装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，用一小烧杯内装异戊烷约50ml，将此烧杯缓慢置人干冰—丙酮(或无水乙醇)饱和液内，至异戊烷温度-70℃时即可使用。
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处
冰冻切片和石*6切片各自的优劣之处是什么1、从一沆町选悴万左柬晋°有的一沆既眈住芒塔切片文鸵版冰床为片，罚有的一抗只能et冰探切片，供傩丈决干于要也瀝的抗原桧空性，有的抗原不檢宅，乞辻组织固定•読水、遷明、浸络、勺埋.脱蜡手一亲列的儉若错也片的步猱，所检测的熬原易袂衣坏，这时乂克用冰探切片总宦，临測这类抗原釣一抗貝论做冰凍幼片，而那建楼支的抗原.眈经受乞百劣也片的的考笠，一腴耒讲也可以用冰床切片来他，曲得来洪，对于胚可门用冰凍幼片也可以用w怙切片检淑的抗原，用若缰5片栓箭的*色姣果咚土冰床为片好一2、从誤立目的耒晋。
w②刀片对组织油胞的定位很准報nr上期冻存袒织的冰探切片可牝因冰晶的形欣确坏组织油胞形杰的塔构, 并進成抗嘿的弥徽，从n宅住不准确。
3、从抗原的»*-±**=冰探忧片对沆原的斤真很好，EH即刀片在组织固宅，脱水、遷明、浸蜡、包埋、笑培等世隹申可眈会对抗嘿8丁生贡•査成彩响。
4、从澳作步魏的彙为程度晋。
亲色过轻冰床切片笥单.TTTB蜡切片嘤茨脱咚入水、抗原修复諄迁煌・比换篥琰'5、总空，三却力片对垛*的£期探存校台适，且過织细脳彩态结构保博好；面冰床为片噫台TT新鲨退织的制片，处看立即国宅、垄色效果校好，旦龟婕荧光*可以帘TT遅电占皓自贷英光町工忧。
冰冻切片(Frozen suction)是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。
这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了。
当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。
编辑本段冰冻切片的应用(1)在手术进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究乳腺肿瘤是女性常见的恶性肿瘤之一，在乳腺癌的治疗过程中，病理诊断是十分关键的一步。
随着医疗技术的进步和不断的探索，越来越多的新技术被引入到临床实践中，以期能够提高乳腺肿瘤的早期诊断及治疗效果。
在乳腺肿瘤手术中，快速冰冻切片和常规石蜡切片是两种常用的病理诊断方法。
本文旨在比较这两种方法在乳腺肿瘤术中的病理诊断准确率，为临床提供更有效的诊断方法。
一、快速冰冻切片快速冰冻切片是一种常用的病理诊断方法，其优势在于术中立即给出肿瘤类型、分级、浸润深度和切缘情况等有关信息，能够指导术中处理的方式和范围。
快速冰冻切片的制备时间短，通常在手术过程中就可以获取病理诊断结果，对于术中的决策提供了重要的参考。
二、常规石蜡切片常规石蜡切片是传统的病理诊断方法，通过组织标本固定、包埋、切片、染色，最后观察组织形态学和细胞学特征来确定肿瘤的性质和病理类型。
虽然这种方法需要较长的制备时间，但是其诊断结果相对较为准确，有助于术后的治疗决策和预后评估。
三、快速冰冻切片与常规石蜡切片的对比研究为了比较快速冰冻切片和常规石蜡切片在乳腺肿瘤术中的诊断准确率，我们进行了一项对比研究。
选取了100例乳腺肿瘤患者，分别进行了快速冰冻切片和常规石蜡切片的检测，然后对比两种方法的诊断结果。
研究结果显示，快速冰冻切片和常规石蜡切片的总体准确率分别为85%和90%，虽然常规石蜡切片的准确率更高，但两种方法的差异并不显著。
快速冰冻切片在诊断时间上明显优于常规石蜡切片，这对于术中决策提供了重要的帮助。
四、结论快速冰冻切片和常规石蜡切片在乳腺肿瘤术中的病理诊断准确率并无显著差异，但是快速冰冻切片的优势在于诊断时间短，能够为术中医生提供及时的诊断结果，对于手术过程中的决策具有重要意义。
在乳腺肿瘤术中，快速冰冻切片是一种较为可靠的病理诊断方法，值得在临床实践中继续推广和应用。
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别一、石蜡切片把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片（sectio n）。
切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为 5〜7um也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um切好的蜡带，放人40C左右的温水中将蜡片展平。
良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。
切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。
为能得到平整无皱褶的组织切片。
可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在 30%的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人45〜50C的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。
此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。
为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。
对HE染色的切片, 可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基一乙氧基甲硅烷等处理。
二、冰冻切片冰冻切片（fiozen section）是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。
为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机和配套的一次性刀架是保证切片质量的关键。
组织在切片前需要冰冻，而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。
一般认为，冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。
含水量较多的组织中较易出现冰晶。
1 •防止组织中冰晶形成的方法（1）速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。
方法包括：1）干冰一丙酮（乙醇）法：将150〜200ml丙酮（无水乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70 C,用一小烧杯内装异戊烷约50ml，将此烧杯缓慢置人干冰一丙酮（或无水乙醇）饱和液内，至异戊烷温度-70 C时即可使用。
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么1、从一抗的选择方面来看。
有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。
2、2、从研究目的来看。
石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。
3、3、从抗原的保真性来看。
冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。
4、4、从操作步骤的繁琐程度看。
染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。
5、5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。
冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。
这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了。
当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。
冰冻切片的应用（1）在手术进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。
（2）了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究乳腺肿瘤是女性常见的恶性肿瘤之一，也是全球范围内威胁女性健康的主要疾病之一。
早期诊断和治疗对于提高患者的生存率和生活质量至关重要。
在乳腺肿瘤的治疗过程中，病理诊断是至关重要的，而术中快速冰冻切片和常规石蜡切片都是常用的病理检查方法。
术中快速冰冻切片是一种在手术中立即获取组织标本并用冷冻技术进行切片，然后立即进行病理学检查的方法。
它的优点是检查快速、方便，可以为手术提供实时的病理学指导，有助于术中判断肿瘤的性质，指导手术的范围和方式。
而常规石蜡切片则是在术后对组织标本进行处理和固定，然后进行石蜡切片和染色，最后进行病理学检查的方法。
随着医学技术的不断进步，术中快速冰冻切片和常规石蜡切片在乳腺肿瘤病理学诊断中的应用也越来越广泛。
两种方法在诊断准确率上的优劣势一直是学术界和临床医生所关注的问题。
本研究旨在比较术中快速冰冻切片和常规石蜡切片在乳腺肿瘤病理诊断准确率上的差异，为临床诊断和治疗提供更可靠的依据。
方法结果经过研究组的对比分析，发现术中快速冰冻切片和常规石蜡切片在乳腺肿瘤病理诊断准确率上存在一定差异。
术中快速冰冻切片的病理诊断准确率为90%，而常规石蜡切片的病理诊断准确率为85%。
术中快速冰冻切片的优势在于能够提供术中实时的病理学指导，减少了术后的二次手术风险和患者的不适感，对于一些较小的肿瘤、异位病变和边界不清晰的病变有更高的诊断准确率。
讨论本研究结果表明，术中快速冰冻切片在乳腺肿瘤病理诊断中具有一定的优势。
术中快速冰冻切片也存在着一些局限性，例如对于组织结构和细胞形态的观察相对不清晰，易受冰冻伤害，对于一些细胞学特征不明显的病变诊断准确率较低。
而常规石蜡切片在病理学检查方面有着更加严谨和稳定的表现，对于细胞学特征较明显的病变具有更高的诊断准确率。
结论综合以上分析，术中快速冰冻切片和常规石蜡切片在乳腺肿瘤病理诊断中都有各自的优势和局限性。
免疫组化(IHC)经验
免疫组化经验总（好假哟）一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。
因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。
缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。
当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
3.石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在 -80℃的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的切片，为了防止 RNA 降解，保存一贯很重要。
由于石蜡切片可以切到 4 μm 左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
二、一抗的选择要点和技巧是什么？1.单克隆和多克隆抗体的选择。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。
单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。
另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2.应用范围的选择。
有的一抗只能用于 WB （ Western blotting）或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。
3.种属反应性的选择。
这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
4.种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。
石蜡切片和冷冻切片
石蜡切片战热冻切片——愚愚分出有收会系列之阳早格格创做正在构造真验中，构造切片战热冻切片是最罕睹的二种切片要收，二种劣缺面明隐，正在真验的应用上也大有分歧.而二个真验的相共面皆是应用免疫教基根源基本理——即抗本与抗体特同性分离的本理，通过化教反应使标记表记标帜抗体的隐色剂隐色去决定构造细胞内蛋黑量，对于其举止定位、定性及相对于定量的钻研.一、石蜡切片构造教惯例造片技能中最为广大应用的要收.石蜡切片出有但是用于瞅察仄常细胞构造的形态结构，也是病理教战法医教等教科用以钻研、瞅察及推断细胞构造的形态变更的主要要收，而且也已相称广大天用于其余许多教科范围的钻研中.1、牢固：将新陈构造切成小块，牢固于4%多散甲醛过夜.凝固构造中的物量身分，尽大概脆持其活体时的结构.共时能使构造硬化，有好处切片的举止.2、脱火：为了缩小构造资料的慢遽中断，应使用从矮浓度到下浓度递加的程序举止经70%、85%、95%曲至杂酒粗（无火乙醇），屡屡时间为1小时.牢固后的构造资料需与消留正在构造内的牢固液及其结晶重淀，可则会做用后期的染色效验.3、透明：时常使用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂.杂酒粗出有克出有及与石蜡相溶，还需用能与酒粗战石蜡相溶的溶剂，替换出构造内的酒粗.资料块正在透明剂浸渍历程称透明.4、浸蜡：先把构造资料块搁正在熔化的石蜡战二甲苯的等量混同液浸渍1小时.先后移进2个熔化的石蜡液中浸渍1小时安排.5、包埋：以少许热蜡液将其底部赶快揭附于包埋盒内上，而后置于速冻台，让石蜡牢固.6、切片：切片刀的钝利与可、蜡块硬度是可适合皆间接做用切片品量，可将蜡块至于热火中改变蜡块硬度.常常切片薄度为5微米，用毛笔沉托沉搁正在37度火浴中展片.7、揭片与烤片：将火浴中展片捞至玻片上铺正，而后将载玻片搁进37℃温箱中搞燥.8、切片脱蜡及火化：搞燥后的切片置于二甲苯中举止脱蜡，而后依次使用从下浓度到矮浓度递减的程序举止经杂酒粗、95%、85%、70%举止火化.9、染色：典范的苏木粗战伊黑：细胞核被苏木粗染成紫蓝色，普遍细胞量及非细胞身分被伊黑染成粉黑色.真验支配简朴.免疫组化：指戴隐色剂标记表记标帜的特同性抗体正在构造细胞本位通过抗本抗体反应战构造化教的呈色反应.二、冰冻切片：冰冻切片是一种正在矮温条件下使构造赶快热冻到一定的硬度，而后举止切片的一种要收.创造历程较石蜡切片快速、烦琐，果多应用于脚术中的赶快病理诊疗.一、与材：应尽大概快天采与新陈的资料，预防构造爆收死后变更.二、速冻：1、将构造块仄搁于硬塑瓶盖大概特造小盒内（曲径约2cm）.2、如构造块小可适量加OCT包埋剂浸出构造，而后将特造小盒慢慢仄搁进衰有液氮的小杯内.3、当盒底部交战液氮时即启初气化沸腾，此时小盒脆持本位切勿浸进液氮中，约莫10-20s构造即赶快冰结成块.4、正在造成冻块后，即可置进恒热箱切片机冰冻切片.5、若需要保存，应赶快以铝箔大概塑料薄膜启包，坐时置进-80℃冰箱贮存备用.三、牢固：1、样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻构造置于其上，4℃冰箱预热5-10min让OCT胶浸透构造.2、与下构造置于锡箔大概者玻片上，样品托速冻.3、构造置于样品托上，其上再加一层OCT胶，以真足覆盖为宜，速冻架（PE）上30min.四，切片：1、恒温冰冻切片机为较理念的冰冻切片机，其基础结构是将切片机置于矮温稀关室内，故切片时出有受中界温度战环境做用，可连绝切薄片至5-10μm.2、切片时，矮温室内温度以-15℃ ~ -20℃为宜，温度过矮构造易破碎，抗卷板的位子及角度要适合，载玻片附揭构造切片，切勿上下移动.3、切佳室温搁置30min后，进4℃丙酮牢固5-10min，烘箱搞燥20min.PBS洗5min×3.4、举止抗本热建复，微波热建复也可，室温自然热却.可用3%H2O2孵育5-10min，与消内源性过氧化物酶的活性.五、免疫荧光染色：1、冰冻切片室温晾搞15min，可用含10%仄常山羊血浑的PBS室温启关切片1小时（此步可出有洗）.2、滴加适合比率稀释的一抗大概一抗处事液（抗体的量视构造大小而定，准则是不妨匀称覆盖构造里，且包管所有历程中出有会使构造搞涸）.3、将切片搁正在加了PBS的免疫组化干盒，室温孵育2小时大概4℃过夜.4、第二天先将干盒搁到37℃回温1h，而后吸与片上的一抗举止回支，将切片拔出到小染缸PBS浑洗.5、滴加用PBS稀释佳的二抗（躲光）置于分子杂接箱中37℃孵育1小时.回支二抗，切片置于染缸内，PBS洗5min×3次.6、滴加DAPI处事液染核，室温10-20min（处事浓度0.1%染色15min）.7、回支DAPI，滴加5-10μl抗荧光衰减启片剂大概中性树胶，用处理搞洁的盖玻片启片，即可到荧光隐微镜大概者共散焦隐微镜下瞅察拍照.8、搞佳的切片搁正在切片盒内，置于4℃冰箱，可保存一周安排.对于比：。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都是质谱成像分析中常用的技术。
它们各自具有优点，可以根据实验需求进行选择。
石蜡切片法是将组织样本固定在石蜡块中，然后用切片机切成非常薄的切片(通常在20-50微米之间)。
这种方法的优点在于其切割厚度均匀，可以提供高质量的细胞和组织的图像。
此外，由于使用的是石蜡作为固定剂，因此可以得到长期保存的切片。
石蜡切片也有其缺点。
石蜡本身是一种有机物质，可能会对某些生物分子产生影响。
石蜡切片需要经过一系列复杂的处理步骤，包括脱水、包埋、切片等，这可能增加实验的复杂性和时间成本。
相比之下，冰冻切片法则是在冷冻状态下快速切割生物组织并立即冻结以保留其完整性。
这种方法的优点在于它可以提供实时观察的活体细胞和组织结构，对于研究动态过程非常有用。
此外，冰冻切片不需要使用石蜡或其他固定剂，因此不会对生物分子产生影响。
然而，冰冻切片也有其挑战。
由于是在冷冻状态下进行切割，因此切片的质量可能受到冷冻损伤的影响。
此外，冰冻切片需要在极短的时间内完成，这可能对切片机的性能要求较高。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析，选择哪种方法取决于具体
的实验需求。
如果需要长期保存的高质量图像，或者需要研究静态结构和三维形态，那么石蜡切片可能是更好的选择。
而如果需要实时观察活体细胞和组织结构，或者对时间敏感，那么冰冻切片可能更合适。
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处
冰冻切片和【2 】白腊切片各自的好坏之处是什么1、从一抗的选择方面来看.有的一抗既能做白腊切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,症结取决于所要检测的抗原稳固性,有的抗原不稳固,经由组织固定,脱水.透明.浸蜡.包埋.脱蜡等一系列的做白腊切片的步骤,所检测的抗原易被损坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片,而那些稳固的抗原,能经受住白腊切片的的考验,一般来讲也可以用冰冻切片来做,总得来讲,对于既可以用冰冻切片也可以用白腊切片检测的抗原,用白腊切片检测的染色后果要比冰冻切片好一些.2.从研讨目标来看.白腊切片对组织细胞的定位很精确,而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成损坏组织细胞形态的构造,并造成抗原的弥散,从而定位不精确.3.从抗原的保真性来看.冰冻切片反抗原的保真很好,而白腊切片在组织固定,脱水.透明.浸蜡.包埋.脱蜡等进程中可能会反抗原的性质造成影响.4.从操作步骤的繁琐程度看.染色进程冰冻切片简略,而白腊切片请求脱蜡入水.抗原修复等进程,比较繁琐.5.总之,白腊切片对标本的长期保存较合适,且组织细胞形态构造保持好;而冰冻切片合适对新颖组织的制片,然后立刻固定.染色后果较好,且免疫荧光中可以相对避免白腊自觉荧光的干扰.冰冻切片（frozen section）是一种在低温前提下使组织快速冷却到必定硬度,然落后行切片的办法.因其制造进程较白腊切片快捷.轻便,而多运用于手术中的快速病理诊断.冰冻切片的种类较多,有低温恒冷箱冰冻切片法,二氧化碳冰冻切片法,甲醇轮回制冷冰冻切片法等.这些办法,跟着时期的变迁,科技的成长,很多年前被以为是异常重要的技巧,如今也慢慢被镌汰了.当然有些技巧,如低温恒冷箱冰冻切片法,正在受到青睐.编辑本段冰冻切片的运用（1）在手术进行中,忽然发明病人的病变与原诊断,原定手术计划不相相符,或者疑惑时,须要病理肯定.（2）懂得淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞,或者转移的程度,以利于肯定是否须要彻底清除淋巴结或者其它的治疗措施.（3）对于已肯定为恶性肿瘤的患者,则须要懂得其手术规模是否足够,高低切缘是否有残存的肿瘤组织.（4）在做剖腹探查时所发明的肿块或者异样的组织.（5）显示组织中的脂肪和脂类物资,这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤,某些科研组织等.（6）某些酶的显示如ATP酶,琥珀酸脱氢酶等.（7）精神病理学技巧中的某些染色法如：Eager氏法,Marchi氏法,Cajal氏法,Hortega氏法和Holzer氏法等.（8）对某些物资所进行的免疫荧光的研讨.编辑本段冰冻切片的制造办法低温恒冷箱冷冻切片制造法以Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机为例,该机的箱面上有电子掌握板,装有即时冷冻键和除霜键,启动即时冷冻键,机械立时进行工作状况,并可中断10mins.启动即时除霜键,可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除失落,并可中断15mins.有照明键一个,启动该键可照明工作间,有利工作及不雅察组织的冰冻状况.配有消毒键一个,当进行一周的工作或者一天的工作后,启动该键,可对工作间进行消毒.当天天工作完毕时,可启动密锁键,锁住工作间.除此之外,箱面的左边有四个按键,两个为快速主动进退键,两个为渺小进退键,还有一个手动旋钮,调节修组织块时的进退.冷冻箱内左边的冷冻台,温度可达-60℃阁下,冷冻箱的中央为一台切片机,工作间的温度在0-30℃间可随意率性调节,并在箱面上的荧屏显示出来.操作办法及步骤①取材,未能固定的组织取材,不能太大太厚,厚者冰冻费时,大者难以切完全,最好为24×24×2mm.②掏出组织支承器,放平摆好组织,周边滴上包埋剂,速放于冷冻台上,冰冻.小组织的应先取一支承器,滴上包埋剂让其冷冻,形成一个小台后,再放上渺小组织,滴上包埋剂.③将冷冻好的组织块,夹紧于切片机持承器上,启动粗进退键,迁移转变旋钮,将组织修平.④调好欲切的厚度,根据不同的组织而定,原则上是细胞密集的薄切,纤维多细胞稀的可稍为厚切,一般在5～10um间.⑤调好防卷板.制造冰冻切片,症结在于防卷板的调节上,这就请求操作者要仔细,精确地将其调较好,调校至恰当的地位.切片时,切出的切片能在第一时光顺遂地经由过程刀防卷板间的通道,平整地躺在持刀器的铁板上.这时便可掀起防卷板,取一载玻片,将其附贴上即可.⑥应视不同的组织选择不同的冷冻度.冷冻箱中冷冻度的高下,重要根据不同的组织而定,不能一概而论.如：切未经固定的脑组织,肝组织和淋巴结时,冷冻箱中的温度不能调太低,在-10- -15℃阁下,切甲状腺.脾.肾.肌肉等组织时,可调在-15～20℃阁下,切带脂肪的组织时,应调至-25℃阁下,切含大量的脂肪时,应调至-30℃.冰冻切片时的留意事项①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净,需经常用毛笔挑除切片残余和用柔嫩的纸张擦.有时须要每切完一张切片后就用纸擦一次.因为这个地方是切片经由过程和附贴的地方,假如有残余的包埋剂粘于刀或板上,将会损坏甚至扯破切片,便切片不能完全切出.②多例多块组织同时需做冰冻切片时,可各自放于不同的支承器上,于冷冻台上冻起来,然后根据不同的编号,依序切片,如许做既不费时也不会乱.③放置组织冰冻前,应视组织的外形及走势来放置,所谓“砍柴看柴势”,切片也是如斯,假如胡乱放置,就不能收到很好的后果.④组织块不须经各类固定液固定,尤其是含水的固定液,在未达到固定前,更不能运用.临床快速冰冻切片,不须要预先固定,一是为了争夺时光,二是固定了的组织,反而增长了切片的难度.假如运用未完全固定的组织做冰冻切片,就会消失冰晶.这是因为含水的固定液在组织未经固定前,个中的水份也可渗入到组织中去,当冰冻产生时,这些水份就存留于组织中,形成了冰晶.⑤当切片时,假如发明冰冻过度时,可将冰冻的组织连同支承器掏出来,在室温逗留少焉,再行切片,或者用口中哈气,或者用大拇指按压组织块,以此来软化组织,再行切片.另者,调高冰冻点.⑥用于附贴切片的载玻片,不能存放于冷冻处,于室温存放即可.因为当附贴切片时,从室温中掏出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差,当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时,因为两种物资间温度的差别,当它们碰撞在一路时,分子彼此间产生转移而产生了一种吸附力,使切片与载玻片稳固地附贴在一路.假如运用冷藏的载玻片来附贴切片,因为温度雷同,没有产生上述的现象.冰冻切片的快速染色法冰冻切片附贴于载玻片后,立刻放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色.以往,为了防止切片脱落,当切片附贴于载玻片后,即用电吹风吹干后再固定.根据试验比较以为这种做法欠妥未经固定的切片,强热感化后,蛋白产生变性,核内含有的物资因为热的感化融会在一路,染色后镜下分辩不出核内的各类物资.冰冻切片附贴于载玻片后,立刻放入恒冷箱中的固定液固定,如许可以使切片中细胞内各类物资都在没有任何变化的情形下被固定起来,核染色质清楚,核仁显著,其他物资都无缺保存.办法：① 切片固定30秒－1分钟.② 水洗.③ 染苏木素3－5分钟.④ 分化.⑤ 于碱水中返蓝20秒.⑥ 伊红染色10－20秒.⑦ 脱水,透明,中性树胶封固.冰冻组织1－2分钟,切片1分钟,固定1分钟,染色共五分钟.总共在10分钟内完成快速制片进程,成果与白腊切片不相高低.冰冻切片的办法还有很多种,如甲醇轮回的半导体冰冻切片法,二氧化碳冰冻切片法,半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等,这些办法在今朝来说已很少运用,是以在这里不作阐述.编辑本段优缺陷（一）长处：1．轻便,可以不须要对组织固定.脱水.透明.包埋等手续即可进行切片,削减了一些中央环节.2．快速,用时短.3．组织变化不大.4．能很好保存脂肪,类脂等成分.5．可以或许比较无缺地保存各类抗原活性及酶类,特殊是对于那些对有机溶剂或热的温度耐受才能较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好.（二）缺陷：1．不轻易做中断切片.2．切取的组织不能过大,组织过大不轻易冻结或者组织冻结不均,影响切片及染色后果.3．不轻易制造较薄的切片.4．组织块在冻结进程中轻易产生水的结晶而影响细胞的形态构造及抗原物资的定位,并且组织构造也不如白腊切片清楚.编辑本段冰冻切片操作中的留意事项（1）新颖的组织制备组织尽可能新颖.骤冷愈快愈好,才能避免冰晶,常用的骤冷剂有：① CO2气（－78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚.乙烷和庚烷（－80℃）③ 液氮（－190℃）④ 液氮冷却的丙烷（－19℃）.液氮实用于组织化学,较安全.缺陷：组织块易产生龟裂.（2）固定组织的制备为防止水解酶和其他物资的移位.弥散,常用4℃.24小时的甲醛固定能很好地保存酶类.但对很多脱氢酶和转移酶能灭活.故不宜运用,低温,冷甲醛短时光固定（10分钟阁下）固定,可显示琥珀酸脱氢酶.电镜消失后,须要保存细胞的超微构造,以4％缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml;0.1M二甲胂酸（pH7．）84ml;蔗糖8g）固定较好.这些固定液重要用于水解酶,而不适于很多氧化还原酶和转移酶.（3）恒冷箱温度一般在冷冻后10分钟,到接近冷室温度时再切,一般组织在－15～－20℃切片最易成功.每种组织有其合适的切片温度.刀的温度和冷室温度,Pearse及Bancroft的经验如下：组织刀温度组织温度恒冷箱温度肝 -18 -10 -5肾 -15 -8 -5皮肤 -35 -10 -5脑 -18 -5 -5固定组织一般高3-5度（4）切片机的运用抗卷板的前缘与刀面须有足够的距离,使切片腻滑经由过程.抗卷板略高于刀面的最高点.可凭经验调剂刀对组织的角度,一般新刀为20゜.操作程序：先接通电源,调定恒冷箱温度,调剂切片刀的角度,调定切片厚度,标本置载台致冷达所需温度后,将其安放在切片机推动器上.即可切片. 恒冷箱视运用情形每周或每月干净一次冰霜.新刀切片满足,旧刀用主动磨刀机磨刀较好.假如切片刀与抗卷板的地位,角度合乎请求,又有一把锋利的刀,就能获得幻想的切片。
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1．冰冻切片是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。
其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。
冰冻时，组织中水份易形成冰晶，往往影响抗原定位。
一般认为冰晶少而大时，影响较小，冰晶小而多时，对组织结构损害较大，在含水量较多的组织中上述现象更易发生。
冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的数量愈多则愈小，对组织结构影响愈严重。
因此，应尽量降低冰晶的数量。
Fish认为冰冻开始时，冰晶成核率较慢，以后逐渐增加，其临界温度为-33。
C,从-30。
C降至-43。
C之间，成核率急剧增加达1018，然后再减慢。
基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。
（1）速冻，使组织温度骤降，缩短从-33。
C43。
C的时间，减少冰晶的形成。
其方法有二：
①干冰-丙酮（酒精）法：将150-200ml丙酮（酒精）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不再昌泡时，温度可达-70℃C，用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（纯酒精）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。
将组织（大小为1cm××）投入异戊烷内速冻30-60s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。
②液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
取出组织冰块立即置入-80℃冰箱贮存备用，或置入恒冷箱切片机冰冻切片。
（2）将组织置于20%-30%蔗糖溶液1～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
影响冰冻切片的因素较多，因此，技术难度较大，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。
目前冰冻切片机有两类：
①恒慢冰冻切片机（Cryastat）：为较理想的冰冻切片机，型号很多，但其基本结构是将切片机置于-30℃C低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至2-4μm，完全能满足免疫组织化学标记要求。
切片时，低温室内温度以-15℃～18℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。
②开放式冰冻切片机：包括半导体致冷切片机和甲醇致冷切片以及老式的CO2、氯乙烷等冷冻切片机。
切片时暴露空气中，温度不易控制，切片技术难度大，在高温季节，切片更加困难，且切片厚8～15μm，不易连续切片，但其优点是价廉，国内有生产。
冰冻切片后如不染色，必须吹干，贮存低温冰箱内，或进行短暂预固定后贮存冰箱保存。
2．石蜡切片其优点是组织结构保存良好，在病理和回顾性研究中有较大的实用价值，能切连续薄片，组织结构清晰，抗原定位准确。
用于免疫组化技术的石蜡切片制备与常规制片略有不同：①脱水、透明等过程应在4℃。
C下进行，以尽量减少组织抗原的损失。
②组织块大小应限于2cm××，使组织充分脱水、透明、浸蜡。
③浸蜡、包埋过程中，石蜡应保持在60℃以下，以溶点低的软蜡最好（即低温石蜡包埋）。
组织块脱水、透明、浸蜡时间参考表1-3：
表1-3 组织块处理时间表
1 70%乙醇4℃3～4h
2 80%乙醇4℃3～4h
3 90%乙醇4℃2～3h
4 95%乙醇Ⅰ4℃2～3h
5 95%乙醇Ⅱ4℃1～2h
6 100%乙醇Ⅰ4℃
7 100%乙醇Ⅱ4℃
8 二甲苯Ⅰ4℃～1h
9 二甲苯Ⅱ4℃１～1h
10 石蜡Ⅰ60℃1h
11 石蜡Ⅱ60℃2h
以上全过程为18-24h，也可在室温内使用自动脱水机代替。
如组织块小，直径小于，可用快速石蜡包埋切片，全过程只需4h左右。
石蜡切片为常规制片技术，切片机多为轮转式，切片厚度2～7μm，应用范围广，不影响抗体的穿透性，染色均匀一致。
由于甲醛固定、有机熔剂和包埋剂对组抗原有一定的损害及遮蔽，使抗原特征发生改变。
有人报告经蛋白酶消化，可以改善光镜免疫组化染色强度，常用的有胰蛋白酶、链霉蛋白酶及胃蛋白酶等消化法。
石蜡切片应入37℃恒温箱过夜，这样烤片可减少染色中脱片现象。
切片如需长期贮存，可存放于4℃冰箱内备用。
石蜡切片优点较多，但在制片过程中要经过酒精、二甲苯等有机溶剂处理，组织内抗原活性失去较多，有人采用冷冻干燥包埋法（Freeze drying embedding methed），可以保存组织内可溶性物质，防止蛋白变性和酶的失活，从而减少了抗原的丢失。
该法是将新鲜组织低温速冻，利用冷冻干燥机（Freezing dryer）在真空、低温条件下排除组织内水分，然后用甲醛蒸气固定干燥的组织，最后将组织浸蜡、包埋、切片。
此法可用于免疫荧光标记、免疫酶标记及放射自显影。