高效液相色谱法测定复方狼毒注射液中苦参碱的含量_宋茹

摘要: 采用 HPL C 法, 以 Shim-pack CLC-ODS 为色谱柱, 乙腈-0. 02 mol·L - 1磷酸二氢钠( 60∶40) 为流动相, 检测波
长 210 nm , 测 定复 方狼毒 注射 液中 苦参碱 的含 量。结果 : 苦参碱 在0. 15～0. 90 mg ·ml- 1范 围内 呈线 性关 系, C= 0. 999 3, 平均回 收率为 99. 13% , R SD = 0. 99% 。方法简便快速, 结果准确可靠, 可作为该制剂的质量控制方法。
Key words: HPL C; Compound Radix Euphor biae fischer ianae inject ion; M atr ine
复方狼毒注射液由苦参、狼毒等中药组方制剂而成, 具有清热 燥湿、解毒活血之功效, 临床上用于治疗牛皮癣、疥疮等皮肤病, 疗 效确切, 毒副作用小。方中苦参为君药, 用量较大。为确保 制剂质 量, 应控制其活性成分苦参碱的含量。目前, 对苦参类制剂 中苦参 碱的含量测定, 多采用薄层扫描法[1] , 也有文献报道用高效 液相色 谱法[ 2] 、高效毛 细管电泳法[ 3] 、气相色谱法[ 4] 等。我们在开发 研究 复方 狼毒注 射液的 同时, 建立 了苦参 碱的 HPL C 含 量测定 方法, 该法简便, 且灵敏度高, 可用以控制其内在质量。 1 仪器与试药 1. 1 仪 器: 岛 津 L C-6 A 高 效液相 色谱仪; 岛 津 SPD -6 A V 紫 外 检测器; 岛津 C-R 4 A 数据处理机。 1. 2 药品与 试剂: 苦 参碱对照 品( 中 国药品生物 制品检定 所) ; 复 方狼毒注射液( 自制) ; 乙腈为色谱纯; 其它试剂均为分析纯 。 2 方法与结果 2. 1 色 谱 条 件: 色 谱 柱 Shim-pack CL C-ODS ( 6. 0 m m × 150 mm) ; 流动相 为乙腈-0. 02 mol·L - 1磷酸二 氢钠( 60∶40) ; 检测波 长 210 nm ; 流速 1. 0 ml·min- 1; 柱温 35℃。本条件下样品的色谱 图见图 1。
王传杰1 , 高丽霞2, 翟树林2, 马丽虹2
( 1. 山东省泰安市中心医院 271000; 2. 山东省药材技工学校, 山东 泰安 271000)
肉豆蔻是肉豆蔻科植物肉豆蔻 M yr istica fr agrans Houtt. 的干 燥种仁, 具有温中行气、涩肠止泻的功效。肉豆蔻历代采用 面裹煨 法加工炮制, 可以增强止泻的功效。现在, 肉豆蔻的炮制研 究主要 针对其工艺、成分、毒性进行, 这些研究对探讨肉豆蔻的药理作用, 指导肉豆蔻的临床使用有一定意义。现分别介绍 如下。
黄樟醚的薄层扫描测定[ J] . 中国中药杂志, 1991, 16( 5) ∶275. [ 4 ] 贾天柱, 夏 凡, 王忠海, 等. 肉豆蔻炮制 品质量标 准研究[ J] . 中国
中药杂志, 1998, 23( 4) ∶215. [ 5 ] 江苏新 医学院. 中药大 辞典[ M ] . 上海: 上 海科学技 术出版社, 1977
解放军济南军 区药品检 验所副主任 药师, 主要从事药 理研究和
药品检验工作.
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时珍国医国药 2000 年第 11 卷第 9 期
L ISHIZH EN M EDIC INE AND M AT ERIA MEDICA RE SE ARCH 2000 VOL. 11 NO. 9
肉豆蔻的炮制研究进展
肉豆蔻含 2% ～9% 的挥发油[ 5] 及 40% 的脂肪 油。肉豆蔻止泻 的物质主要是挥发油, 肉豆蔻的水煎液基本无止泻作用[ 6] 。肉豆蔻 炮制后, 挥发油含量明显下降[7] 。挥发油 中具有止泻作用的成分肉 豆蔻醚和 黄樟醚的含 量在炮制后 有不同程 度的降低, 肉豆蔻 醚约 降低 30% [8] 。肉豆蔻醚和黄 樟醚都是高沸 点物质, 并不是肉 豆蔻 炮制 时间越长, 二者下 降越多, 而是到一 定时间后 便不再 下降[ 7] 。 甲基丁香酚、甲基异丁香酚具有止泻作用, 二者炮 制后含量明显增 加, 换算成原料中的含量, 蒸品为生品的 10 倍之多, 面煨品 也为生 品的 3～6 倍[ 9] 。 3 毒性
法是否可靠, 值得进一 步探讨。也有研究认为, 肉豆蔻生品即有显 著止泻 作用[ 10] , 而炮制 不能增 强肉豆 蔻的止 泻功效; 肉豆 蔻炮制 前后, 肉豆蔻醚含 量变化不大 , 对降 低肉豆蔻毒 性没有意 义, 肉豆 蔻不必炮制, 生用即可[ 11] 。这种结果的差异性, 是否与试验中使用 的仪器不同、试验设计 方法不同有关, 仍待研究。 4. 2 历代本草中均未记载肉豆 蔻的毒性, 只是近代有中毒致死的 报道[ 5] , 才把 降低毒性作 为肉豆蔻的 炮制目的。 肉豆蔻 是否真有 毒?炮制能否 降低毒性?肉豆蔻不是常用药, 临床使用较少, 现在处 方中多生用, 却一直未 见中毒的报道。现在的药理实验也未发现肉 豆蔻的急性毒性作用, 并且提出肉豆蔻不必炮制[10,12] 。综上所述, 肉豆蔻的毒性问题仍需深入研究。
关于肉 豆蔻的炮 制, 现代 研究结果 与传统炮制 理论有不 符之 处, 表现在工艺与毒性两个方面。 4. 1 肉豆蔻传统采用面裹煨法, 讲究煨制较长时 间, 约 1～2 h, 这 样才能避免滑肠, 增强止泻作用。现在的炮制方法, 除蒸法 时间较 长( 2 h) 外, 其它方法都较短。从炮制前后止泻成分的变化看, 面裹 煨法、蒸法优于其它炮制方法。这说明用 其它炮制方法替代面裹煨
参考文献:
[ 1 ] 中华人民共和国卫 生部药典委员会. 中国药典( Ⅰ部) [ M] . 广州: 广 东科技出版社, 化学工业出版社, 1995∶110.
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肉豆蔻的毒性成分是肉豆蔻醚[ 5] , 在研究中, 黄樟醚也 往往作 为肉豆蔻毒性变化的指标。肉豆蔻炮制后, 二者的含量降低, 则说 明肉豆蔻的毒性降低[ 7] 。药理实验考察肉豆蔻的急性毒性, 给小鼠 水煎液 灌胃给药 已达到 164% 的浓度, 达到 41 g/ kg 以 上, 仍 未见 死亡, 而剂量已为人的 300 倍以上[ 6] 。用 生肉豆蔻粉末混悬液给小 鼠灌胃, 也未发现肉豆蔻粉对小鼠有急性毒性作用[ 10] 。 4 讨论
灵敏度高, 结果准确, 可作为该制剂的质控方法。
图 1 苦参碱高效液相色谱图 A 苦参碱对照品 B 复方狼毒注射液 C 阴性对照品 1 苦参碱 2. 2 标准曲线 制备: 精密称取适 量的苦参 碱对照品, 加流动 相溶
收稿日期: 2000-04-04; 修订日期: 2000-05-08
作者 简介: 宋 茹( 1960-) , 女( 汉族 ) , 山东陵 县人, 现任 中国人民
L ISHIZHE N ME DICINE AND MA TE RIA ME DICA RE SE ARCH 2000 VOL. 11 NO. 9
时珍国医国药 2000 年第 11 卷第 9 期
高效液相色谱法测定复方狼毒注射液中苦参碱的含量
宋 茹, 袁继民, 于连生
( 中国人民解放军济南军区药品检验所, 山东 济南 250022)
1 ml, 分 别置 于 10 ml 容量 瓶中, 精密 加入 苦 参碱 对照 品 溶液 2 ml, 用流动相稀释 至刻度, 按样品测 定方法进行 测定, 测得平均回
收率为 99. 13% , RSD = 0. 99% 。结果见表 2。 3 讨论
3. 1 复方狼毒注射液为复方制 剂, 成分复杂, 采用上述溶剂系统, 分离效果良好。本方法操作简便, 样品只需一步稀释便可测定, 且
w ith the co lum n o f Shim-pack CL C-ODS, the mobile phase of acetonitrile-0. 02 mo l·L - 1 sodium phosphate monobasic ( 60∶ 40) , detection waveleng th of 210 nm. Results: T he linear rang e is 0. 15～ 0. 90 mg · ml- 1, C= 0. 999 3, t he aver age recover y is 99. 13% and RSD = 0. 99% . T he method is simple, rapid and accurate, it can be a quality contr ol st andard of Compo und R adix Euphor biae fischerianae injectio n.
解并制成 1. 5 mg·m l- 1 的溶液, 精密量 取 1, 2, 3, 4, 5, 6 ml, 分别 置 10 ml 量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀。取 10 Ll 进样, 按上
述色谱条件测定, 以峰 面积 对浓度 ( mg · ml- 1 ) 进行回 归, 得回归 方程为: Y = 781 185 X - 467 421, C= 0. 999 3。可知苦参碱在 0. 15
1 工艺 为 了简化工 艺, 节 省面粉, 现在肉豆 蔻多采用( 湿) 麸煨、切 片
麸炒、滑石粉煨、蒸法进行加工。《中国药典》[ 1] 收载了面裹 滑石粉 煨法, 但在实际中此法较少使用。肉豆蔻土炒的炮制温度以 160～ 180℃ , 时间 以 50 min 为宜[ 2] 。肉豆 蔻用 麦麸 煨 130～150℃, 20 min 为宜[3] 。面裹煨以 170～190℃, 20 min 为宜[ 3] 。蒸法为肉豆蔻 用清水泡 1 h, 取出蒸 2 h, 干燥[ 4] 。 2 成分
～0. 90 mg·ml- 1范围内呈良好的线性关系。 2. 3 样品测定: 取复方狼毒注射液 1 ml, 置 10 ml 量 瓶中, 加流动 相至刻度。在与对照品相同的色谱条件下, 进样 10 Ll 测定。计算 含量, 结果见表 1。