Ligation Independent Cloning by Exonuclease III
一种基于髓鞘碎片诱导M1型骨髓巨噬细胞外泌体的高效表达方法和应用[发明专利]
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专利名称：一种基于髓鞘碎片诱导M1型骨髓巨噬细胞外泌体的高效表达方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：周添,吴天准
申请号：CN202111517938.7
申请日：20211213
公开号：CN114480278A
公开日：
20220513
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种基于髓鞘碎片诱导M1型骨髓巨噬细胞外泌体的高效表达方法和应用，属于外泌体技术领域。
该方法包括：(1)提取得到髓鞘碎片；(2)诱导培养获得骨髓巨噬细胞；(3)将髓鞘碎片与骨髓巨噬细胞在无外泌体血清中共培养，收集培养上清液，提取获得外泌体；(4)鉴定外泌体的成分。
本发明还提供了通过该方法表达的外泌体及其应用。
本发明方法操作简便，重复性良好，低成本，能够促进骨髓巨噬细胞外泌体的大量分泌，获得数量多且高质量的M1型骨髓巨噬细胞外泌体。
该方法制备的外泌体可被微血管内皮细胞吞噬，促进微血管内皮细胞增殖，可为脑小血管萎缩症提供潜在的治疗方案，为特定炎性外泌体的生产提出了一种新的简便的方法。
申请人：深圳先进技术研究院
地址：518055 广东省深圳市南山区西丽大学城学苑大道1068号
国籍：CN
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用于治疗和预防骨质疏松症的胃泌素拮抗剂[发明专利]
![用于治疗和预防骨质疏松症的胃泌素拮抗剂[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/8cfe5d6d6529647d262852d8.png)
专利名称：用于治疗和预防骨质疏松症的胃泌素拮抗剂专利类型：发明专利
发明人：欧文·马克·莫德林,马克·基德
申请号：CN201480073822.0
申请日：20141121
公开号：CN106163527A
公开日：
20161123
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：在一些方面，提供的实施例基于本发明对胃泌素在调节老化的肠‑卵巢轴和逆转胃泌素介导的骨质流失的靶向胃泌素活性影响方面的作用的证明。
提供的为方法、组合物和药剂(包括胃泌素拮抗剂)来治疗、改善和预防骨疾病和病情。
用于治疗有需要的主体中与高胃泌素血症有关的骨疾病或病情的方法可包括向主体施用至少一剂治疗上有效量的胃泌素受体靶向药剂，从而治疗与高胃泌素血症有关的骨疾病或病情。
申请人：CL生物科技有限责任公司
地址：圣基茨和尼维斯查尔斯敦
国籍：KN
代理机构：北京聿宏知识产权代理有限公司
代理人：吴大建
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自噬免疫荧光共定位
自噬免疫荧光共定位自噬是细胞在应对压力、维持稳态和调节代谢等方面的一种重要机制。
免疫荧光共定位则是一种用于研究蛋白质亚细胞定位的技术。
自噬免疫荧光共定位技术结合了这两种机制，可以用于研究自噬相关蛋白质在不同亚细胞结构中的定位和相互作用。
自噬机制自噬是一种通过溶酶体降解细胞内部分或全部成分的过程。
它包括三个主要步骤：形成自噬体、运输到溶酶体和降解。
形成自噬体的过程包括以下步骤：1. 起始阶段：该阶段由ATG1/ULK1复合物、ATG9和PI3K复合物组成，主要功能是启动自噬过程。
2. 膜扩张阶段：该阶段由VPS34-PI3K复合物、Beclin-1和ATG14L等蛋白质组成，主要功能是形成双层隔膜并扩张形成孤立的双层隔膜囊泡（autophagosome）。
3. 运输阶段：该阶段由微管相关蛋白LC3和ATG12等蛋白质组成，主要功能是将孤立的双层隔膜囊泡运输到溶酶体。
4. 降解阶段：该阶段由酸性水解酶和其他水解酶组成，主要功能是将自噬体内的物质降解为小分子物质并释放到细胞质中。
自噬免疫荧光共定位技术自噬免疫荧光共定位技术可以用于研究自噬相关蛋白质在不同亚细胞结构中的定位和相互作用。
该技术主要包括以下步骤：1. 细胞处理：将需要研究的细胞处理成需要的状态（例如处理成诱导自噬状态）。
2. 免疫染色：使用特异性抗体标记需要研究的蛋白质。
3. 荧光染色：使用荧光探针标记不同亚细胞结构（例如核、线粒体、高尔基体等）。
4. 显微镜观察：使用显微镜观察标记的荧光信号，确定需要研究的蛋白质在不同亚细胞结构中的定位和相互作用。
自噬免疫荧光共定位技术的优点是可以直观地观察蛋白质在不同亚细胞结构中的定位和相互作用，同时可以定量分析这些蛋白质在不同亚细胞结构中的表达水平。
该技术已经广泛应用于自噬相关疾病、肿瘤等领域的研究。
总结自噬是一种重要的细胞代谢机制，可以通过溶酶体降解细胞内部分或全部成分。
自噬免疫荧光共定位技术则是一种用于研究自噬相关蛋白质在不同亚细胞结构中的定位和相互作用的技术。
引物设计的原则汇总中 -有重复的段落
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度可以通过点击Change－Current oligo length来改变。定位后，点击Tm窗口的Upper按钮，确定上游引物
，同样方法定位下游引物位置，点击Lower按钮，确定下游引物。引物确定后，即可以充分利用Analyze菜单
计的引物形成的二聚体是不稳定的，即其Delta G值应该偏低，一般不要使其超过4.5kcal/mol，结合碱基对
不要超过3个。Oligo此项的分析窗口中分别给出了3’端和整个引物的二聚体图示和Delta G值。
④Analyze中第三项为Hairpin Formation，即发夹结构分析。可以选择上游或者下游引物，同样，Delta G值
引物设计的原则汇总中 （有重复的段落） - 日志 - 快乐的小麻雀 - 我的空间 - Powered by UCenter Home
。上下游引物的GC％需要控制在40％～60％，而且上下游引物之间的GC％ 不要相差太大。Tm值共有3个 ，分别采用三种方法计算出来，包括nearest neighbor method、％GC method和2(A＋T)＋4(G＋C)method ，最后一种应该是Primer5所采用的方法，Tm 值可以控制在50～70度之间。 第五项为False Priming Sites，即错误引发位点，在Primer5中虽然也有False priming分析，但不如oligo详 细，并且oligo会给我正确引发效率和错误引发效率，一般的原则要使误引发效率在100以下，当然有时候正 确位点的引发效率很高的话，比如达到400～500，错误引发效率超过100幅度若不大的话，也可以接受。 ⑤Analyze中，有参考价值的最后一项是“PCR”，在此窗口中，是基于此对引物的PCR反应Summary，并且 给出了此反应的最佳退火温度，另外，提供了对于此对引物的简短评价。若该引物有不利于PCR反应的二级 结构存在，并且Delta G值偏大的话，Oligo在最后的评价中会注明，若没有注明此项，表明二级结构能值较 小，基本可以接受。 ⑥引物评价完毕后，可以选择File－Print，打印为PDF文件保存，文件中将会包括所有Oligo软件中已经打开 的窗口所包括的信息，多达数页。因此，打印前最好关掉Tm窗口和Delta G窗口，可以保留引物信息窗口、 二级结构分析窗口（若存在可疑的异常的话）和PCR窗口。 4、引物确定后，对于上游和下游引物分别进行Blast分析，一般来说，多少都会找到一些其他基因的同源序 列，此时，可以对上游引物和下游引物的blast结果进行对比分析，只要没有交叉的其他基因的同源序列就可 以。 二、引物设计过程中的心得 1、Primer 5.0搜索引物 ①Primer Length我常设置在18－30bp,短了特异性不好，长了没有必要。当然有特殊要求的除外，如加个酶 切位点什么的。 ②PCR Product size最好是100－500bp之间，小于100bp的PCR产物琼脂糖凝胶电泳出来，条带很模糊，不 好看。至于上限倒也不必要求苛刻。 ③Search parameters还是选Manual吧，Search stringency应选High，GC含量一般是40－60％。其它参数 默认就可以了。 ④搜索出来的引物，按Rating排序，逐个送Oligo软件里评估。当然，搜索出的引物，其扩增产物很短，你可 以不选择它，或是引物3端≥2个A或T,或引物内部连续的G或C太多，或引物3端≥2个G或C，这样的引物应作 为次选，没得选了就选它。对于这样的引物，如果其它各项指标还可以，我喜欢在引物末端去掉一个不满意 的或加上一个碱基，看看引物的评估参数有没有变好点。 2、Oligo 6.0评估引物 ①在analyze里，Duplex Formation不管是上游引物、下游引物还是上下游引物之间，The most stable 3’-Di mer绝对值应小于4.5kcal/mol, The most stable Dimer overall绝对值一般应小于多少kcal/mol跟PCR退火温 度有关，我几次实验感觉在PCR退火温度在65°的时候，The most stable Dimer overall 6.7kcal/mol没有问 题。 ②Hairpin Formation根据黄金法则 ③False priming sites: Primer的priming efficiency应该是错配地方的4倍左右，更多当然更好。 ④在PCR栏，丁香园战友感觉其所显示的optimal annealing temperature数值值得参考。在PCR摸索条件的 时候，退火温度为其数值加减2的范围就可以了。 ⑤Internal stability很重要：我们希望引物的内部稳定性是中间高、两边低的弧形，最起码保证3端不要过于 稳定。 下图引物3端过于稳定，很容易导致不适当扩增。△G参照黄金法则，这其实很好理解：把一滴水放 到大海里，这滴水就会不停的扩散分布，扩散的越厉害越稳定，所以△G绝对值越大结构越稳定。 3、其他 ①两个评价系统不一样，丁香园战友感觉oligo评价引物好点，primer出来的引物，一般按效率排序，再结合 退火温度和引物长度，选择引物到oligo测试。这是初步的选择，其实引物到了oligo里，退火温度也不一样。 ②3端的二聚体应该避免，这个要看退火温度决定，一个50°的退火温度肯定和65°对二聚体的影响不一样了 ，一般来讲尽量控制在－4.5kcal/mol以下（丁香园战友观点，很多东西真得还是需要自己摸索）。 ③丁香园战友感觉3端有A无A影响不大，3端有T是不是一定不行，不见得。软件是评估，法则也不是没有例 外，不是1＋1＝2那么确定。 ④错配和二聚体谁轻谁重，丁香园战友觉得“到致命的程度”谁都重要，在设计的时候，尽量两个都不得罪。 ⑤GC含量并非不重要，它直接影响引物各端稳定性，3端来两个G或C,稳定性就上去了，粘在模板上很牢。 所以丁香园战友设计引物的时候，会尽量避免这样的情况出现。
ligation independent cloning-分子克隆技术
不足：一方面，插入片段要经过限 制性内切酶处理，这样在实验设计 时就要考虑目的基因的DNA序列， 不能实现多基因的平行操作，不适 合高通量；另一方面，该过程使用 连接酶，不但延长了实验的周期， 而且也会带来载体自连背景，增加 了筛选工作量。
GCCGCCCTGCAGGACTCGAGTTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAAATCTT
TEV酶切位点：ENLYFQ^S
TGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCT CTCACCATCACCATCACCATGAAAACCTGTACTTCCAATCCAATATTGGAAGTGGATAACGGATCCGCGATCG
双酶切
PCR 双酶切
连接
2
整理课件
ligation-independent cloning
在很多情况下，重组DNA技术的应用都会受到 基因序列中原有的酶切位点的限制，尤其是多基 因片段的重组往往更容易受到限制酶酶切位点序 列的限制，研究者不得不使用一些非常稀有的酶 切位点或者采用其它的DNA重组方法，大大增 加了DNA重组的工作量和难度。因此，开发一 种不受序列限制而且需要准确重组的新方法就显 得十分重要。
8 【参考】NusA技术：显著增强大肠杆菌表达可溶、活性蛋白：/experiment/430/465/469/25129.htm
整理课件
2BT
>2BT Ecoli T7 ColE1-ori LICv1 transfer His6-tev-yORF AMP （全长4876bp）
TCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACG CGAGAACGGGTGCGCATAGAAATTGCATCAACGCATATAGCGCTAGCAGCACGCCATAGTGACTGGCGATGC
单细胞基因组测序技术新进展及其在生物医学中的应用
Hereditas (Beijing) 2021年2月, 43(2): 108―117 收稿日期: 2020-12-01; 修回日期: 2021-01-03基金项目:中国博士后科学基金面上项目(编号：2019M651377)和上海市“超级博士后”激励计划项目(2018-2020)资助[Supported by ChinaPostdoctoral Science Foundation Grant (No. 2019M651377), and Shanghai “Super Postdoctoral Fellow” Program (2018-2020)]作者简介: 王卓，博士，研究方向：循环肿瘤细胞鉴定与单细胞测序。
E-mail:*********************.cn 通讯作者:施奇惠，博士，研究员，研究方向：液态活检与单细胞分析。
E-mail:******************.cn DOI: 10.16288/j.yczz.20-363 网络出版时间: 2021/1/22 10:34:26URI: https:///kcms/detail/11.1913.R.20210122.0900.002.html综 述单细胞基因组测序技术新进展及其在生物医学中的应用王卓，申笑涵，施奇惠复旦大学生物医学研究院, 上海 201100摘要: 随着单细胞基因组测序技术的建立与发展，对细胞基因组特征的分析进入了单细胞水平。
单细胞的基因组分辨率不但使研究人员能够在单细胞尺度上分析肿瘤细胞的异质性，也使得传统上难以检测的稀有细胞的基因组研究成为可能。
这些稀有细胞往往具有重要的生物学意义或临床价值，如癌症患者血液中循环肿瘤细胞(circulating tumor cell, CTC)的基因组检测或三代试管婴儿植入前胚胎细胞的遗传缺陷诊断与筛查(preim-plantation genetic diagnosis/screening, PGD/PGS)。
引物设计实例分析GFP融合蛋白引物设计引物设计基本原则引物
引物设计实例分析(GFP 融合蛋白引物设计)引物设计基本原则引物长度( primer length) 产物长度( product length) 序列Tm 值( melting temperature)G+C 含量( composition) 引物二聚体及发夹结构( duplex formation and hairpin) 阅读框1. 引物的长度一般为15-30bp,常用的是18-27bp但不能大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74C，即Taq酶的最适温度2. 产物的长度扩增片段长度为100~600碱基对。
3. Tm 值引物的Tm 值一般控制在55-60 度，尽可能保证上下游引物的Tm 值一致，一般不超过2 度。
如果引物中的G+C 含量相对偏低，则可以使引物长度稍长，而保证一定的退火温度。
Tm=2(A+T)+4(C+G)4. 引物的GC 含量有效引物中(G+C)的比例为40-60%,过高或过低都不利于引发反应。
上下游引物的GC 含量不能相差太大。
5. 引物自身引物间3端的互补、二聚体或发夹结构也可能导致 PCR 反应失败 任务用绿色荧光蛋白（GFP ）标记蛋白NR1pcDNA3.1ion SU55762 Plasmid 2 AflW I lG-Hli Dra lll (ie?4iFctfOIOSI 138561 I il^i xba r ii4i2i S/M B I Ml MCS J i5Gl-67U ■HSVTK i' pcty A pEGFP-N I > M kb \ KM 7 \ N M SV40 QH P lawonBamHI(GGATCC)pcDNA3.1NRl的编码序列(~4000bp)121 ggggctccta gagaacccgg gggcgcttga ccgcgcgcgg gcggcccgcg gg+cgtacat 181 cgcgaggtcg tcgcactcgc gcaacccaga gccaggcccg c+gtgcccgg agctcatgag 241 caccatgcac ctgctgacat tcgccctgct ttt+tcctgc tcc+tcgcc c gcgcggatcc 301 cgaccccaag atcgtcaaca tcggcgcggt gctgagcacg cgcaagca+g aacagatgtt 361 ccgcgaggca gtaaaccagg ccaataagcg acacggctct tggaagatac agctcaacgc 421 cacttc+gtc acccacaagc ccaacgccat acaga+ggcc ctg+cag+gt g+gaggacct 481 catctctagc caggtctacg ctatcctagt tagccacccg cctactccca acgaccactt 541 cactcccacc cctgtctcct acacagctgg ct+ctacagc atccctgtcc tgggactgac 601 tacccgaa+g tccatctact ctgacaagag tatccacctg agtttccttc gcacggtgcc 661 gccctactcc caccag+cca gcgtctggtt tgagatgatg cgagtctaca actggaacca 721 catcatcctg ctggtcagcg acgaccacga gggacgggca gcgcagaagc gcttggagac 781 gttgctggag gaacgggagt ccaaggcaga gaaggtgctg cagtttgacc caggaaccaa 红色为信号駄，蓝隹为BamHI番切位点,下划线标出盛切位点的阅读框GFP 序列(-700bp)ATG&TGAGCAA& GGC&AGGAGC TSTTCACC6G6&TGGT&CCC ATCCTGGTC6 A&CVGGACGGC6AC&TAAAC GGCCACAAGT TCAGCGTGTCC&&C6AG&&C 6A&G&C&AT& CCACCTACGGCAA&CT&ACC CT6AA&TTCA TCTQCACCAC CGSCAAGCTG CCCGT&CCCT GGCCCACCCTCGT&ACCACC TTCGGCTACG GCCT&CAGTGCTTC&CCCGC TACCCCGACC AC^TGAAGCA GCACGACTTC TTCAAfiTCCG CCAT&CCCGAAG&GVACGTC CAG&A&CGCA CCATCTTCTTCAA&&AC6AC 6GCAACVACA AQACCC&CGCCQAGGT&AA& TTCGAG&GC& ACACCCTG&TGAACCGC^TC 6A&CT6AA&G GCATCGACTTCAAG&AGGAC G&CAACATCC TGGG&CACAAGCT&GA6TAC AACTACAACA GCCACAAC&V CTATATCAT6 6CCGACAAGC AGAA&AACG& CATCAAGGTSAACTTCAA6A TCCGCCACAA CATC&AG&AC&6CA&C&TGC AGCTC&CC6A CCACTACCA&CA6AACACCC CCATCGGCGA CGGCCCCGTTGCTGCT&CCTAC CAGTCCGCCC TGAGCAAAGA CCCCAACGAG AAGCGCGATTC ACATGGTTCCT SCTSGASTTC 6TGACCGCC6 CCG6GATCAC TCTCS6CATS GAC6AGCT6T ACAA&TAA引物要求PCR扩增GFPGFP两边添加BamHI酶切位点保证NR1的阅读框不改变第一步：扩增GFP基本序列PrirtWrl ： 5AT>&A&CAAG^&C&A&GA&C ......... PrifnsrZ ： 5' TT4 CTTGT A CA &CTCGTCCA TGCCGA GA ......Primerl: 5' PHmerZ: 5* &FP 宇鬥 TCTCGGCATGGACG^OCT&TACAAGTAA 3石5'变性.引物复 ....TCTCQGCAT^&AC&A &CTGTTACAAGTAA3' ...A&AGCC&TACCTGCTCGACATGTTCATT h PrinwZFrimtrl ： ^AT&^TGACCAA&&&C^A^A^C .......................3+ ^ACCACTCGT ........... C6TACCTGCTCtfA£ATGTTCATl 5CTTGTA CA &CTC&TCCATGCC&A&A第二步：GC 比值；Tm 值ATGGTG A AGGGCG AGG A ……………CTTGTACA&CTCGTCCATr&CC&AGA .............PHtnerl : 5- ATGGT&MC 阳GGGCGAGG 昌(6C ：60%H Tm= 64> PHm«r2* 炉CTTBTACABCTCGTCCATGCC 祐C ：57%,Tnt 66】第三步：酶切位点BamHI: ggatcc Primerl: 51ATGGT&A&CAAGGGC&A&GA (GC:60%,Tm ： 64) Primer2: 5*CVTffVACAGCTCGTCCAT&CC 1 (GC: 57%,^： 66) Primerl: 5'9gQtcQATGGTGAGCAAG&6CGA&GA Primer2: 5T ggatccCTTfiTACAGCTCSTCCATGCC第四步：阅读框5’ ATG&T&AGCAAGGGCGAGGAGC 5'AT ^TGA &CAA &G &CGAQ &A &C&CAA^C&A&&A&C .............Primer!：N"序atgagcaccatgcacctgctgacattcgccctgctttt+tcctgctccttcgcc cgc gcg gat ccc gaccccaag atcgtcaaca tcggcgcggt gctgagcacg cgcaagcatg aacagatgttccgcgaggca gtaaaccagg ccaataagcg acacggctct tggaagatac agctcaacgccacttctg+c acccacaagc ccaacgccat acagatggcc ctglxag+gT gtgaggacct .................................................................Primerl: 5' gggtcc4T GGT GAGCAAGGGCGAGGAIPrimerl; 5599atccTAT6GT6AGCAAGGGCGAGGAotgagcaccatgcacctgc+gacattcgccctgc+tttttcctgctccttcgcccgc gcg gat ccc gacccca tig atcgtcaaca tcggcgcggt gctgagcacg cgeacgcatgaacagatgttccgcgaggca gtacaccagg ccaataagcg acacggctct tggaaga+ocagetcaacgixocttcfgix acccacaagc ccaacgccat acaga+ggcc ctgtcagtgt g+gcggacctGFP序列5T ATG6TG A GG&CGA &G A&C ........... TCTC&GC ATG&AC&AGCTGTACA AGT A A3T插AGFPJS的组合序ege gcg 呂at cc T.......................................................................................TCTCG6CATGGACGAGCT6TACAA& ??ggat ccc gaccccaag atcg+caacatcggcgcggt gc+g口£cci£：g cgcaagcatg aacaga+gt+ccgcgaggca gtaaaccaggccaa+aagcg acacggctct tggaaga+ac agctcaacgccacttc+g+c acccacaagc ccaacgccct acagctggcc etgteag+gt gtgaggocct第五步保护序列Primerl: 5' GCGGggatccTATGGTGAGCAAGGGCGAGGAPrimer2: 5' GCGCggatccctCTTGTACAGCTCGTCCATGCC记得当初写本科论文，感到不知道讨论什么问题好。
生物专业英语翻译
第一课Cytoplasm: The Dynamic, Mobile Factory细胞质：动力工厂Most of the properties we associate with life are properties of the cytoplasm. Much of the mass of a cell consists of this semifluid substance, which is bounded on the outside by the plasma membrane. Organelles are suspended within it, supported by the filamentous network of the cytoskeleton. Dissolved in the cytoplasmic fluid are nutrients, ions, soluble proteins, and other materials needed for cell functioning.生命的大部分特征表现在细胞质的特征上。
细胞质大部分由半流体物质组成，并由细胞膜（原生质膜）包被。
细胞器悬浮在其中，并由丝状的细胞骨架支撑。
细胞质中溶解了大量的营养物质，离子，可溶蛋白以及维持细胞生理需求的其它物质。
The Nucleus: Information Central（细胞核：信息中心）The eukaryotic cell nucleus is the largest organelle and houses the genetic material (DNA) on chromosomes. (In prokaryotes the hereditary material is found in the nucleoid.) The nucleus also contains one or two organelles-the nucleoli-that play a role in cell division. A pore-perforated sac called the nuclear envelope separates the nucleus and its contents from the cytoplasm. Small molecules can pass through the nuclear envelope, but larger molecules such as mRNA and ribosomes must enter and exit via the pores.真核细胞的细胞核是最大的细胞器，细胞核对染色体组有保护作用（原核细胞的遗传物质存在于拟核中）。
组织蛋白酶半胱氨酸蛋白酶抑制剂[发明专利]
![组织蛋白酶半胱氨酸蛋白酶抑制剂[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/93cd11ae33687e21ae45a969.png)
专利名称：组织蛋白酶半胱氨酸蛋白酶抑制剂
专利类型：发明专利
发明人：M·博伊德,C·劳,C·梅龙,B·洛伊,J·谢格茨,V·L·特隆申请号：CN200480036642.1
申请日：20041209
公开号：CN1906164A
公开日：
20070131
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及属半胱氨酸蛋白酶抑制剂的新的一类化合物，包括但不限于组织蛋白酶K、L、S 和B的抑制剂。
这些化合物可用于治疗其中骨吸收需要加以抑制的疾病，如骨质疏松症。
申请人：默克弗罗斯特加拿大有限公司
地址：加拿大魁北克省
国籍：CA
代理机构：中国专利代理(香港)有限公司
代理人：李连涛
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促进中枢神经系统髓鞘再形成的单克隆抗体[发明专利]
![促进中枢神经系统髓鞘再形成的单克隆抗体[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/03af66c04b73f242326c5fbf.png)
专利名称：促进中枢神经系统髓鞘再形成的单克隆抗体专利类型：发明专利
发明人：M·罗德里奎兹,D·J·米勒
申请号：CN95193822.3
申请日：19950427
公开号：CN1152939A
公开日：
19970625
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明揭示了当给予患有脱髓鞘性疾病哺乳动物IgM单克隆抗体时，可促进中枢神经系统髓鞘再形成作用。
这些抗体显示多器官的自体反应活性，并可识别神经原细胞表面和胞浆的抗原决定簇。
申请人：梅奥医学教育和研究基金会
地址：美国明尼苏达州
国籍：US
代理机构：中国专利代理(香港)有限公司
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胰岛细胞的离体成熟[发明专利]
![胰岛细胞的离体成熟[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/7930accf4b73f242326c5f31.png)
专利名称：胰岛细胞的离体成熟专利类型：发明专利
发明人：乔纳森·RT·莱基
申请号：CN201280047827.7申请日：20120928
公开号：CN104011546A
公开日：
20140827
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及用于促进来自断奶前哺乳动物之胰岛细胞成熟的方法，目的是优化胰岛以将其作为供体组织用于异种移植。
本发明的方法从供体动物移出胰腺，然后将所述胰腺组织减小成大于完整胰岛之大小的碎片，同时保持胰岛处于完全的、产生胰岛素的状态。
本发明的方法还在提高经培养胰岛的葡萄糖响应度的新的成熟培养基中依序地培养经消化的组织，然后选择有充分葡萄糖响应的胰岛用于移植程序。
申请人：胰岛科学股份有限公司
地址：美国纽约州
国籍：US
代理机构：北京集佳知识产权代理有限公司
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洋川芎内酯Ⅰ对氧糖剥夺-复氧大鼠原代大脑皮层神经元的影响
洋川芎内酯Ⅰ对氧糖剥夺-复氧大鼠原代大脑皮层神经元的影响洋川芎内酯Ⅰ（Ligustilide，LIG），一种从中药当归中提取的有效成分，已被广泛应用于中医中药领域。
它具有多种药理和生物学活性，包括保护神经细胞、抗氧化、抗炎和抗凋亡等作用。
氧糖剥夺与复氧（OGD/R）是缺血和再灌注（I/R）损伤常见的模型。
本文通过体外和体内实验，探讨了LIG对OGD/R大鼠原代大脑皮层神经元的影响。
首先，我们在原代大脑皮层神经元培养体系中进行了LIG 的体外实验。
通过MTT法和荧光显微镜观察细胞活力和凋亡情况，发现在OGD/R模型组，细胞活力显著降低，细胞凋亡明显增加。
然而，在添加不同浓度的LIG后，细胞活力得到明显恢复，细胞凋亡得到显著抑制。
这表明LIG具有一定的抗氧化和抗凋亡作用，可保护神经细胞免受OGD/R损伤。
其次，我们在大鼠OGD/R模型体系中进行了LIG的体内实验。
通过超微结构观察、行为学测试和免疫组织化学分析，研究了LIG对大鼠脑损伤的保护作用。
结果显示，在OGD/R模型组，大鼠脑组织超微结构异常，行为学表现受损，神经元凋亡增加。
然而，在LIG处理后，大鼠脑组织超微结构恢复正常，行为学表现改善，并且神经元凋亡显著减少。
此外，免疫组织化学分析显示，LIG可显著减少炎性和应激反应的发生，减轻神经细胞免疫反应。
这表明LIG在体内能够有效改善大鼠脑损伤，并且其保护作用与抗炎和抗应激作用密切相关。
另外，我们还进一步探讨了LIG的作用机制。
通过Western blotting和实时定量PCR分析，研究了LIG对OGD/R 引起的炎性和凋亡信号通路的调节作用。
结果显示，在OGD/R模型组，炎性和凋亡相关蛋白的表达显著增加。
然而，在LIG处理后，这些蛋白的表达得到显著抑制。
此外，实时定量PCR结果显示，LIG可显著上调抗氧化基因的表达，降低氧自由基的产生。
这表明LIG通过调节多个信号通路，包括炎性和凋亡信号通路，以及抗氧化信号通路，发挥其保护神经细胞的作用。
检测结核分支杆菌复合体与非结核分支杆菌的方法和试剂盒[发明专利]
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专利名称：检测结核分支杆菌复合体与非结核分支杆菌的方法和试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：周煜,夏懿
申请号：CN200410053093.0
申请日：20040723
公开号：CN1724681A
公开日：
20060125
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种快速检测结核分支杆菌复合体与非结核分支杆菌的方法，该方法包括步骤：在特异性扩增条件下，在聚合酶反应体系中进行聚合酶链式反应，所述的反应体系中含有特异性扩增分支杆菌的引物对，还含有分支杆菌属特异性探针和结核分支杆菌复合体特异性探针。
本发明还提供了相应的试剂盒。
本发明可快速简便地同时检测和鉴定结核分支杆菌复合体与非结核分支杆菌。
申请人：上海复星医学科技发展有限公司
地址：200233 上海市宜山路1289号
国籍：CN
代理机构：上海专利商标事务所有限公司
代理人：徐迅
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KlenowFragment,Exo-
Klenow Fragment，Exo-产品编号产品名称包装Fragment，Exo- 100U D7039 Klenow产品简介：Klenow Fragment，Exo-，即没有外切酶活性的Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I (E.coli. DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。
Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5'→3' 聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3' 和3'→5'外切酶活性。
特点：由于Klenow Fragment，Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在3’末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。
用途：5’突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为突变的 polA 基因片段。
分子量：约68kDa(单体)。
活性定义：37℃ 30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：67mM potassium phosphate (pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml [3H]-dTTP，62.5µg/ml poly(dA-dT)•poly(dA-dT)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液： 25mM Tris-HCl (pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50% (v/v) glycerol。
Reaction Buffer (10X)：500mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2， 10mM DTT。
lic法构建表达载体
lic法构建表达载体
LIC（Ligation-Independent Cloning）法是一种高效的分子克隆技术，它不需要依赖于连接反应，可以简化克隆过程并降低假阳性率。
在构建表达载体时，可以使用LIC法将目的基因插入到表达载体中。
以下是使用LIC法构建表达载体的基本步骤：
1.准备目的基因和表达载体：获取目的基因的DNA片段，并将其与LIC载体进行酶切或PCR扩增。
同时，准备好表达载体，如质粒DNA。
2.消化处理：将目的基因和表达载体进行消化处理，去除其自身的黏性末端，使其形成平末端或单链突出末端。
这一步可以通过酶切或化学方法实现。
3.转化：将处理好的目的基因和表达载体进行混合，并加入适量的T4 DNA连接酶。
在适宜的温度下进行转化反应，使目的基因与表达载体进行连接。
4.筛选与鉴定：对转化后的产物进行筛选和鉴定，可以使用抗生素筛选、PCR鉴定等方法。
确认目的基因已正确插入到表达载体中。
5.表达分析：将鉴定正确的表达载体转入宿主细胞中，进行目的基因的表达分析，如蛋白质表达、酶活性检测等。
使用LIC法构建表达载体的优点包括：操作简便、快速、高效、不需要特殊的仪器设备等。
同时，由于其不依赖于连接反应，可以避免连接效率低下和假阳性率高等问题。
然而，使用LIC法构建表达载体时也需要注意一些问题，如酶切位点的选择、转化条件的选择等，以确保克隆的效率和准确性。
lig基因 碳循环
lig基因碳循环
Lig基因是一种与碳循环相关的基因，它编码了一种催化酶，可以将Lignin中的芳香环分解为可供微生物分解的碳源。
Lignin是植物细胞壁中的一种复杂有机物，由苯丙素、联苯素和香豆素等单体组成。
它是植物的主要结构性材料之一，对维持植物的结构稳定性和生长发育起着重要作用。
但同时，Lignin也是植物生物量的重要组成部分，它的分解会释放大量的碳源和能量，参与到土壤的碳循环过程中。
Lig基因在碳循环中的作用非常重要。
它能够促进Lignin的降解，释放出碳源和能量，为土壤微生物的生长提供充足的营养。
同时，Lig基因的表达水平也与土壤碳循环速率密切相关，越高的表达水平会促进土壤碳循环的速率，从而对环境的生态保护和碳排放的减少具有重要意义。
因此，对Lig基因的研究已成为生态环境保护和碳循环的热点之一。
未来的研究将进一步探究Lig基因的分子机制和调控机制，为生态环境的保护和碳循环的优化提供更加有效的方法和技术。
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The Protocol for Ligation Independent Cloning by
Exonuclease III
1. Design the primers with 15-bp overlap (sequence in vector ends digested by proper enzyme) for target DNA.
*尽量避免 3’突出端的酶切位点；
*黑色粗体部分为应加在引物 5’端的 overlap 序列, 但在 5’overhang 酶的切点的剩余碱基（红色标示区）也可以部分或全部加上去，以调整避免移码.
2. Amplify target DNA by PCR with the overlap primers and digest the vector by proper restriction enzyme. Gel-purify them both, and quantify the
For getting high quality vectors, here are some good tips as follows:
a)The restriction sites we choose should be 5’-overhangs or blunt ends, but it
shouldn’t be 3'-protruding ends ;
b)Digest vectors by double enzymes;
c)Digest vectors overnight to make sure complete cleavage as possible.
3. Mix the vector and insert in the reaction system as follows:
* For different sizes of PCR DNA, different amounts of DNA are recommended:
Place the tube on the ice.
*Make sure the mixture in the tube is cooled to the temperature of the ice bath, and the following approach should also operate on the ice.
4.Add 1μL ExoIII(20 units/μL) to the reaction mixture, pipe for several times.
5.Place the tube on the ice for 30 sec to30 min.
6.Transform the mixture of DNA into DH5αor else following a standard transformation protocol.
7.Analyze transformants by colony PCR and further analyze by DNA sequencing.。