离子交换柱层析操作(包涵体蛋白)
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离子交换柱层析操作
（包涵体蛋白）
1.装柱：
1.1 取出层析柱，用去离子水冲洗干净，连接好管子后固定柱子；
1.2用水冲洗层析柱3-5次，每次10ml去离子水；
1.3取出填料，静止至室温后，根据需要用移液器取出3-5ml的填料进行装柱，
1.4用去离子水冲洗填料5个柱体积；
2.柱的平衡与上样：
2.1用0.02M TB bufferB 缓冲液(PH7.6)平衡Ni柱，直至流出液的pH为7.6；
2.2对处理的样品进行过滤后，缓慢上样让蛋白充分结合；
3洗杂蛋白：
3.1用0.02M TB bufferB 缓冲液(PH7.6)过柱，清洗没有结合到层析柱上的杂蛋白，至流出液与缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含10mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流出液与含10mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；
3.3用含20mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流出液与含20mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；
3.4用含40mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流出液与含40mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；
3.5用含60mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流出液与含60mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；
3.6用含80mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流出液与含80mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；
3.2用含100mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流
出液与含100mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；
（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）
4解离目的蛋白：
4.1用含100mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；
4.2 用含200mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流出液与含200mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；
4.3 用含500mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流出液与含500mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；
4.4用含1000mM咪唑的TB bufferB 缓冲液（PH7.6）过柱，共洗约30ml，至流出液与含1000mM咪唑的TB bufferB 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul 做SDS-PAGE检测；
（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）
5.柱的清洗与保存：
5.1用含1000mM咪唑的缓冲液B（PH7.6）以冲洗层析柱，共冲洗30ml；
5.2用浓度为1.5M的NaCl溶液冲洗层析柱，共冲洗30ml；
5.3用过滤去离子水冲洗50ml；
5.4用20%乙醇冲洗30ml后于4℃20%乙醇中保存。