备课素材：如何筛选杂种细胞 高二下学期 生物人教版(选修3)

如何筛选杂种细胞

不论是动物细胞，还是植物原生质体间的融合是随机的，两个不同亲本的原生质体混合后经诱导融合，实际上得到的是各种原生质体的混合物，包括异核体（AB型）、同核体（AA 和BB）以及未发生融合的双亲原生质体（A和B）。

而植物体细胞杂交的目的是要突破不同种属的植物远缘杂交不亲和的障碍，获得具有双亲遗传特性的新的植物类型。杂交瘤细胞也是集两种融合亲本的优点于一身因此，只不过提取的B细胞种类复杂，既有活化和非活化之分，还有桨细胞类型之分，尤其是后者，取自动物体内浆细胞，因为生活中接触过的抗原太多，体内的分泌特定抗体的B细胞种类多达10的9次方，筛选时，除了要求是异核杂种细胞外，还要能分泌特定抗体。通常筛选杂种细胞的方法有以下三种。

1.互补选择法。

这种方法的原理是利用现成的或诱发产生的各种缺陷型或抗性型的突变体细胞作为融合实验的材料。由于突变体均不能在特定的选择性培养基上生长，而能在该培养基上正常生长的是互补的杂种细胞，因此可将其筛选出来。杂交瘤细胞就是通过特定培养基，利用杂种细胞特殊的核苷酸合成途径，分离杂交瘤细胞。

2.机械选择法。

利用两种原生质体的某些可见标志（如形态、颜色等差异），对融合产物进行鉴别，筛选出杂种细胞进行单独培养。对于在形态、颜色上难以区分的原生质体融合形成的异核体，可利用不同荧光素分别标记两亲本的原生质体，然后进行诱导融合，在荧光显微镜下选择同时带有两种荧光标记的杂种细胞。此外，还可以借助流式细胞仪，结合核酸检测及免疫荧光检测，更加准确高效分离目标细胞。

3.细胞培养筛选法。

根据植物细胞对培养基成分和培养条件的要求与反应不同，可作为选择杂种细胞的依据。利用这种特性或人为地造成杂种细胞生长和分化能力的差异来进行杂种细胞的选择。