凝胶过滤层析的基本操作

凝胶过滤层析的基本操作
凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）是一种常用的分
离和纯化生物大分子（如蛋白质、核酸等）的方法。

该方法基于分子的大
小和形状的差异，利用一种孔隙较小的基质（凝胶）将分子按照大小分离，从而达到纯化的目的。

凝胶过滤层析是一种非亲和层析法，因为分离是通
过分子与基质之间的排斥效应进行的，而不是通过特定的信号配对。

1.准备样品：将待纯化的生物大分子样品（如蛋白质溶液）处理成适
合进行层析的条件。

这通常包括调节样品的pH值、离子强度、缓冲剂等。

2. 准备层析柱：选择合适的凝胶填料，并根据需要选择合适的柱尺寸。

凝胶填料可以是聚合物凝胶或硅胶凝胶。

聚合物凝胶（如Sephadex、Sepharose等）常用于分离中等分子量的生物大分子，而硅胶凝胶（如Sephacryl等）则适用于分离较大分子量的生物大分子。

3.平衡柱：将层析柱与缓冲液平衡。

通常用适当的缓冲液（如甘氨酸
盐缓冲液）进行平衡，以确保柱内填充物的孔隙充满均匀。

4.样品加载：取适量的样品，在不破坏填充物的情况下缓慢地、连续
地将样品滴入柱顶端。

加载速度要缓慢，以确保样品充分进入柱内而不是
渗漏到填充物外。

5.洗脱：在缓冲液的作用下，样品溶液逐渐沿柱体下滤。

较小的分子
会占据填充物内较小的孔隙，因此会与缓冲液一起快速通过填充物，而较
大的分子则会在填充物中逐渐滞留。

洗脱时间的长短取决于目标分子的大小。

6.收集洗脱液：用收集管接收洗脱液，以便将目标分子收集起来。

7.考虑后续处理：根据需要，纯化后的生物大分子可以进一步进行其他处理，如浓缩、冻干或储存等。

凝胶过滤层析技术的优点包括操作简单、不需要特殊的设备和试剂、分离过程温和且不破坏生物大分子的活性。

但也需要注意凝胶的选择、控制操作速度、适当调节缓冲液等因素，以获得最佳的纯化效果。

另外，凝胶过滤层析不能对极低分子量的物质进行有效分离，且柱内的适用范围有限，对于较大的生物大分子可能需要较长的时间来完成分离。

因此，在选择层析纯化方法时需要根据实际情况综合考虑。