艾滋病及HIV的检测培训

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• 另外还有家庭用HIV检测(Home Access System)。
4、HIV抗体筛查的流程图
样品 筛查检测
选用筛查试剂
原有试剂+另一 种筛查试剂
阳性反应 复测
阴性反应 阴性报告
均阳性反应
一阴一阳 送确认
均阴性反应 阴性报告
(二)HIV抗体确认试验
1、免疫印迹式验(WB):
WB是将HIV病毒蛋白用SDS-PAGE电泳,把分 子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已 经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将 此膜切割成条装,每一条硝酸纤维膜上均含有经电 泳分离过的HIV病毒抗原。
• 对HBV有效的消毒和灭活方法均适用于HIV 。
• HIV对热很敏感,对低温耐受性强于高温。 因此,可以用高温灭活病毒,在低温条件下 保存病毒。
• 在室温(22~27℃)液体环境下HIV可存活15 天以上;经56℃处理30min可使HIV在体外对 人的T淋巴细胞失去感染性,但不能完全灭活 血清中的HIV;经过60℃ 3小时或80℃ 30min 作用后不能检出感染性病毒。
二、艾滋病的传播途径
• 艾滋病毒存在于艾滋病感染者和艾滋病人的血 液、精液、阴道-宫颈分泌物、乳汁、唾液、 泪液、尿液、脑脊液、汗液、粪便、耳分泌液 、支气管分泌液等人体的分泌液中,其中以血 液、精液、阴道-宫颈分泌液艾滋病毒的含量 最高,筑成了艾滋病传染性很强的物质基础。
• 艾滋病流行至今二十多年的科学研究证明,艾 滋病在人群中的传播只有三条‘路’:性途径 、血液途径和母婴传播。
第2种筛查试剂(高特异性) 阳性
阴性
第3种筛查试剂(高特异性)
阴性
提供疑似阳性咨询,建议做 确认试验
不确定
确认试验 阳性
阴性
提供咨询随访,建 议3个月后再次做
确认试验
出具“HIV抗体阳性”报 告
提供咨询、指导、随访
出具“HIV抗体阴性”报告 提供咨询、指导、常规孕期保健
(二)产时
孕期未接受HIV抗体检测的产妇: 首先应进行咨询,取得知情同意以后, 可同时用两种不同的快速检测试剂进行 HIV抗体筛查试验。 根据检测结果给予不同的咨询和干预。 若产妇已临产,且只能用一种快速检测试 剂检测,结果阳性,即视为HIV抗体阳性 处理。
②至少有一条env带和p24带同时出现。 (2)HIV-2抗体血清学阳性反应(+)
符合WHO标准(有二条env带,有或无gag带 ),符合试剂盒标准,方可判为血清学阳性反应。
(3)HIV抗体阴性(-) 无HIV抗体特异带出现,或仅有p17。
(4)HIV 抗 体 不 确 定 ( ± ) : 出 现 HIV 特 异 性 抗 体带,但带型不足以确认阳性者。
为配合治疗,婴儿HIV感染的早期诊断也可以采用核酸检 测。目前以2次核酸检测结果作为诊断的依据,2次不同时间的 样本核酸检测均为阴性诊断未感染,2次不同时间的样本核酸 检测均为阳性诊断为HIV感染。至18个月仍要进行HIV抗体检 测加以确认。
检测后咨询,知情同意 选择干预措施
正常分娩
产后进行HIV确认试验
产后暂时无法进行确认试验时
(三)产后 筛查试验阳性的产妇在产后要进行HIV确认试验。根据检
测结果再进行咨询和干预。
(四)婴儿检测 婴儿应于12个月进行HIV抗体检测,结果阴性则排除感染
,纳入正常儿童保健;阳性者继续追踪随访,至18个月再次进 行HIV抗体检测,结果阴性排除感染,纳入正常儿童保健;阳 性婴儿转入当地艾滋病综合防治系统。
(一)孕期 孕期产前检查:应在知情同意的情况下常规
做HIV抗体筛查试验。最好选择ELISA方法(无 条件地区可用快速检测)筛查。
图3 孕产期保健服务流程(适用有充分的时间进行复测和确认试验者)
对产前检查的孕妇进行预防艾滋病母婴传播咨询,获得知情同意,采集样本
HIV抗体筛查试验
阳性
第1种筛查试剂(高敏感性)
• HIV抗体出现后,病毒血症减轻,血浆中HIV RNA 的滴度下降,急性HIV感染的症状消失.
• 通常4-12周发生HIV抗体阳转。从HIV感染到 产生抗体(或血请抗体阳转)称为“窗口期” ,>95%的HIV感染都发生在感染后的 5.8 个 月内,故一般认为窗口期为3个月;高度怀疑 者可追踪至6个月。
逆转录病毒血清学 P24 或P31 中的一条,并有 无
标准委员会
一条Env带
美国红十字会
Gag、Pol和Env带各有一条 无
德 国 Paul Ehrlich 有两条带,其中一条必须 无
研究院
是Env带
我国判定标准:
(1)HIV-1抗体阳性(+) 有下列任何一项者,即可确认:
①至少有二条env带(gp41和gp160或gp120)出现 , gp41 和 gp160, 或 gp41 和 gp120, 或 gp41 和 gp160/gp120。
待检血清样品1:100稀释,加到放置硝酸纤维 膜的槽内,恒温震荡,充分接触反应。血清中抗HIV 抗 体 , 与 膜 条 上 的 抗 原 带 相 结 合 。 加 入 抗 人 IgG酶结合物和底物后,即可使抗原-抗体结合带呈 现紫褐色。根据出现条带情况判定结果。
表3 不同国际组织HIV抗体免疫印迹(WB)试验阳性结果判断标准
艾滋病及HIV的检 测培训
一、HIV的基本生物学特性
• 属于逆转录病毒科慢病毒属。 • HIV在病毒分类中的定位是慢病毒属中的人类
免疫缺陷病毒组 • HIV分为HIV-1和HIV-2二个型别。 • HIV-1共有M组(主要亚型组)、O亚型组和N
亚型组。
• M组又分为A、B、C、D、F1、F2、G、H、J 、K共11个非重组亚型,另外近年来发现多个 流行重组型(circulating recombinant form,CRFs),包括CRF01- CRF14。
国际组织
对HIV-1
对HIV-2
美国CDC
gp41、gp120或gp160和P24 无 中的任何两条带
美国FDA
P24 和 P31, 再 加 gp41 或 无 gp120/gp160之中任意一条
世 界 卫 生 组 织 要有两条Env带,无论有无 要有两条Env带,无论
(WHO)
Gag或Pol带(也可能存在) 有无Gag带或Pol带
• 标本:除血液外还可用唾液检测HIV( Orasure,如Salivacard),尿液检测 HIV 。1996年美国FDA首次批准HIV-1 尿检EIA试剂,我国也正在研制。
• 主要适用于静脉注射毒品(IDUs)人群 和其它高危人群的大面积流行病学调查 。
• 阳性标本仍需采血做确认试验才能确定 HIV抗体阳性。
• 病人无临床症状,体检时无异常,少数可查 到“持续性全身性淋巴腺病”(PGL),肿 大的淋巴结至少发生在两处,且不是腹股沟淋 巴结。
• 细胞内的病毒大部分处于潜伏状态,所以淋 巴结中病毒浓度很高。
• 淋巴组织是病毒的主要藏身处,外周血中的 病毒载量相对不高。
3、艾滋病前期(“ARC”或“B期”) 艾滋病前期症状包括被HIV感染后更常见更严
HIV-1 HIV-2
HIV 的 分 群和亚型
M组
A ( A1 A 2)
B
C
D
F1
F2
CRF01-AE
G
CRF02-AG
H
N组
J
K
CRF03-AB CRF04-CPX CRF05-DF
CRF
O组(O1-O3)
A B C D E F G
CRF06-CPX CRF07-BC CRF08-BC CRF09-CPX CRF10-CD CRF11-CPX CRF12-BF CRF13-CPX CRF14-BG
• “ HIV感染早期”定义:血清抗体阳转和HIV 感染6个月之间的阶段。6个月时病毒载量达到 一个“固定值”,早期抗病毒治疗可降至很低 ,如果不进行抗病毒治疗,几年内不会有很大 变化。此固定值和预后有很大关系。
• 早期治疗的目标之一是重新设定固定值,使固 定值保持较低水平。
2、无症状感染期(潜伏期)
三、HIV感染在体内的动态分 期
1、原发HIV感染期
• 病毒进入体内在2天内到达局部淋巴结,5天内进入 血液循环。其结果是导致全身性播散,到达脑部和 淋巴组织。
• 从暴露于HIV到出现症状的时间一般是2-4周在急性 感染的数天内,出现高水平的病毒复制,血浆中可 检出107 /ml个病毒RNA分子。CD8+细胞数上升,伴 有短暂的CD4+细胞计数下降。
重的症状(包括鹅口疮、口腔毛状黏膜白斑病、 发热、体重减轻等),但还不是艾滋病的典型症 状。 4、艾滋病期
当患者出现典型症状时,CD4+细胞计数通常 降至200/ul以下,血和淋巴结中的HIV又上升到 相当高的水平,同时抗病毒CD8+细胞反应减弱 。在艾滋病期病人血液中的HIV群体又一次变得 相当均一,通常是细胞融合(S1)表型为主,与 T细胞嗜性有关。
母亲是怎样将艾滋病病毒传给自 己的孩子的?
• 母婴传播一般指感染艾滋病毒的母亲传给其胎 儿或婴儿的传播方式。这种传播可能发生在怀 孕、分娩和哺乳期。
• 研究报告指出,HIV感染母亲所产的新生儿有 11%~60%可能发生感染。
• 母婴传播有以下几个阶段:
• (1)宫内感染:是胎儿生前在母亲子宫中通 过损伤胎盘进入胎儿体内,母亲的胎盘、羊水 中存在大量的艾滋病病毒,可直接从胎儿娇嫩 的、未发育完全的皮肤中进入胎儿体内。
HIV病毒体呈球形,直径约100~120nm。 电镜下成熟的HIV-1呈现一致密的圆柱状核 心和一个病毒包膜。 病毒核心由病毒RNA、核心结构蛋白和病毒 复制所必须的酶类组成。 HIV的RNA为两条相同拷贝(完全同源)的 正股RNA链。
• HIV对环境中物理因素和化学因素抵抗力均 较弱,比HBV的抵抗力低得多。
四、HIV感染的三种临床结局和长期存活 的 相关因素:
• 1.典型进展者
• 在感染早期,其免疫功能未受损害,但在 8~10年内免疫控制能力逐渐下降,最后发展 成艾滋病。
• 2.快速进展者
• 病速下程降快,速抗进HI展V的,抗CD体4+水细平胞很计低数,在而2-且5年该内抗体迅 中和HIV的能力也较差。
• (2)生产过程中感染 • 生产过程中由于胎儿通过产道受到反复撞击和
挤压,血液和羊水等分泌物可被胎儿吸入体内, 也可通过皮肤损伤进入体内。研究发现,可在刚 出生胎儿胃引流物中查出艾滋病病毒。 • 所有这些发现表明,母婴传播可能有高达50%的 新生儿在出生时通过与母亲生殖器官分泌液或血 液接触而发生感染。 • (3)哺乳期感染: • 科学家研究了100多例非洲感染HIV的哺乳女性 ,发现有58%的乳汁样品中可检测HIV,有时乳 汁中感染性病毒数量很高,乳汁中病毒可通过婴 儿免疫不健全或损伤的口腔粘膜、消化道进入体 内。 • 母婴传播中有30%是在哺乳期感染的。 • 对感染HIV怀孕母亲用抗艾滋病毒预防服药治 疗能降低母婴传播的感染率已得到肯定。
2、免疫荧光试验(IFA)
将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上 ,经固定后即为试验用抗原片。待检血 清中的抗-HIV抗体与抗原结合后再与荧 光素标记的抗人免疫球蛋白结合,在荧 光显微镜下可见到含草绿色荧光的细胞 和多核巨细胞(胞浆荧光)。目前国内 尚无商品化产品,仅在少数有条件的实 验室使用。
二、HIV检测方法的选择
• 快速进展者最显著的特征:HIV感染后一直 维持较高的病毒载量,而且分离的HIV有均 一性。
• 3.长期存活者(又称长期不进展者)
• 这些感染者能维持健康状态12年以上 ,并且CD4+细胞计数维持正常。
• 长期存活者在感染者中的比例一般在 8~10%,目前最长已达20多年。
3、尿液HIV抗体检测
• HIV耐碱不耐酸
• HIV对化学因素很敏感
• 室温中0.5%次氯酸钠或75%酒精只需 1min即不能检出RT酶活性;
• 0.2%次氯酸钠、0.1%家用漂白粉、 0.1%戊二醛等5min即可灭活HIV;
• 30% 酒 精 溶 液 5 min、20% 酒 精 溶 液 10min可灭活HIV。
• 对紫外线不敏感,离开人体可存活数 小时至数天。
图4 产时保健服务流程(适用于没有充分的时间进行复测和确认试验者)
对产前未接受HIV抗体检测的即将/或临产产妇进行预防艾滋病母婴 传播咨询,获得知情同意,采集样本
同时用两种不同的快速检测试剂进行 HIV抗体筛查试验
若产妇已临产,且只能用一种 快速试剂检测,结果阳性,即
视为HIV抗体阳性处理
检测后咨询,解释结果 正常分娩
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