实验1培养基的制备与灭菌消毒

二 基本原理
1 培养基的制备
培养基是根据微生物满足生长的营养需求，人工配
制的混合营而表现出不同的营养 需求所以不同类的微生物一般采用不同的培养基。 牛肉膏蛋白胨培养基——细菌专用 马铃薯糖培养基——真菌专用
培养基分类
（1）按存在的物理状态分
2
马铃薯糖培养基（通常用于培养真菌）
培养基组成： 马铃薯 葡萄糖或蔗糖 琼脂 水 200 g 20 g 18---20 g 1000ml
（1）
PH
（2）
自然
配制方法： ① 称量：注意马铃薯去皮后切成丝称量。 ② 溶化：将马铃薯丝放入水中置于电炉上加热并不断 搅拌，煮沸5—10min，用多层纱布过滤得滤液，在滤液中加入其他 药品，不断搅拌直至完全溶解。 ③ 分装： ④ 包扎： ⑤ 灭菌：
3、干热灭菌
（1）包扎：将需灭菌的培养皿、吸管、镊子分别用纸包扎好（ 示范）。
（2）装箱：将物品放入干热灭菌箱内，注意物品不可与灭菌箱
内壁接触，且不可摆放过挤。 （3）灭菌：接通电源，启动开关，并打开排气孔，待温度升高
至80---100℃关闭排气孔，继续升温至160---170℃时开始
计 时，通过温度调节器维持恒温2小时。
压力为1.05kg/cm2（121.3℃）,20-30min
（5） 出锅：隔断热源，自然降温，待压力表指针回到零，打开 排气阀，稍等一些时间，再开盖取物。
四
实验报告
（1） 培养微生物的培养基应具备哪些条件？ （2） 为什么培养基配制好后必须立即灭菌？ （3） 什么是培养基？培养基按其物理状态和组成成分分成哪 些类型? （4） 在培养基中，琼脂有何作用？它有哪些特性？ （5） 使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时应注意哪些事项？
分组操作：分8组，8~9人1组。每组需要做的工作
（1）1、2、3、4、5组做牛肉膏蛋白胨培养基。每组 做600ml。装试管10管，余下装三角瓶。 （2）6、7、8组做马铃薯糖培养基。每组200ml。装试 管10管，余下装三角瓶。 （3）每组包1ml 吸管8-9支。（示范） （4）每组包10ml 吸管3支 （5）每组装9 ml无菌水10管。 （示范） （6）每组包培养皿2包（每包6个）（示范） （7）装锅灭菌。
1
牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养）
（1） 培养基组成： 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 PH （2）配置方法 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ 称量： 溶化：电炉加热熔化 调节PH： 分装：试管和三角瓶 包扎：双层纸和绳子。 灭菌：高压蒸汽灭菌。 3g 10g 5g 18--20g 1000ml 7.0----7.2
2 消毒和灭菌
◆ 消毒与灭菌是确保微生物纯培养（由一个菌体生长繁殖
的群体）的最基本的实验技术。
◆ 灭菌是应用理化方法杀灭物体上所有微生物。 ◆ 消毒是应用理化方法杀灭物体上部分微生物（主要是病
原微生物）。
灭菌与消毒的方法可分为 物理法：高温灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌
化学法：化学药剂杀菌
三 实验操作步骤
实验一 培养基的制备和消毒灭菌 一 实验目的
1 了解培养基配制原理，学习并掌握培养基制备方法。
2 学习微生物实验的一些准备方法（灭菌培养皿的准备、灭
菌吸管的准备、无菌水的准备、培养基平板和斜面的准备 等），为后续实验做准备。 3 了解消毒与灭菌应用范围及基本原理，学习并掌握实验室 常用消毒与灭菌的方法
（4）降温，取物：关闭电源开关，自然降温，待温度降到60℃
时才能开箱取物，否则可因箱内高温骤降导致灭菌玻璃器 皿
4、高压蒸汽灭菌
（1） 灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内 加入适量的水，将内桶放入。 （2） 装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖 ，以两两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。 （3） 加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽 排出时，维持3-5min，锅内空气排尽，关上排气阀。另外一种排气 方法：先将排气阀关闭，待加热升温内压达到5磅时再打开排气阀 ，等到压力表指针回到零，关闭排气阀。 （4） 升温保压：★
液体培养基（不含凝固剂）
半固体培养基（凝固剂琼脂含0.2--0.5%） 固体培养基（凝固剂琼脂含1.5--2.0%）。 （2） 按组成成分分： 天然培养基 合成培养基 半合成培养基
琼脂的特性：
成分是多缩半乳糖，绝大多数微生物不能分解利用。
96℃溶解，42~45℃凝固
对微生物生长没有毒害作用
培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。