大肠杆菌PPT

不产气 粪大肠菌群阴性
产气 EMB平板
36±1℃ 18-24h
有典型菌落报告为阳性
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44.5±0.5℃ ± ℃
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营养琼脂斜面 18-24h
IMVIC
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3M测试片法检测食品中大肠菌群和大肠杆菌 测试片法检测食品中大肠菌群和大肠杆菌
国 际 官 方 方 法
将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗。 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。 滴加95%乙醇脱色约15~30s，直至颜色液被洗掉。不要 过分脱色，水洗。 滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。 结果： 革兰氏阳性菌呈紫色 革兰氏阴性菌呈红色
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IMVIC
• 色氨酸肉汤 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后，加Kovacs氏试剂0.2-0.3ml, 上层出现红色为靛基质阳性反应。 • MR-VP培养基 培养基： 培养基 • 在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取1ml至13×100mm试管中， 加5%α-萘酚乙醇溶液0.6ml,40%氢氧化钾溶液0.2ml，和少许肌酸结 晶，振摇试管后静置2h，出现伊红色为VP试验阳性。 • 将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5滴甲基红溶液。培养 物变红则为甲基红试验阳性，变黄为阴性。 • Kovacs氏枸橼酸盐肉汤 氏枸橼酸盐肉汤：36±1℃培养96h后记录有无生长。 氏枸橼酸盐肉汤 • LST肉汤 肉汤：于36±1℃培养48±2h，观察试管是否产气。 肉汤
生化试验：
菌落挑取
三糖铁琼脂 蛋白胨水 克氏双糖铁琼脂
半固体斜面
PH7.2尿素琼脂 KCN肉汤
赖氨酸脱羧酶试验培养基
培养过夜
TSI底层产酸不产硫化氢， KCN阴性，尿素阴性 大肠杆菌 革兰氏阴性菌
36°C±1°C 24 h±2h或48 h±2h
计数红色带 气泡的菌落 报告大肠菌群数
计数蓝色带 气泡的菌落 报告大肠杆菌数
计数蓝色带气泡和 红色带气泡的菌落 报告大肠菌群数
3M PetrifilmTM 大肠菌群测试片
含有改良的VRB培养基 目标菌落为红点带气泡 36 ±1°C , 24 ±2 h 培养时叠放片数小于20 计数范围15-150 AOAC官方方法
印有格子的纸 片
大肠菌群及大肠杆菌3M Petrifilm 检测法 大肠菌群及大肠杆菌
检样 25g(mL）样品+ 225mL稀释液 10倍系列稀释 只检测大肠菌群 接种1ml样品匀液到每张 PetrifilmTM大肠菌群测试片
36°C±1°C 24 h±2h
大肠杆菌和大肠菌群 同时检测 接种1ml样品匀液到每张PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片
主要菌型： 主要菌型：O157:H7
大肠菌群类检测方法
• 3M Petrifilm 测试片法 • GB • SN • 日本方法 • VRB固体平板法 • Deso固体平板法 • 显色培养基法 MPN Table
革兰氏染色
粪大肠菌群检测的GB法
乳糖胆盐发酵管产气的培养物 EC肉汤
44.5±0.5℃ 24±2h
3M PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片 大肠杆菌/大肠菌群测试片 的检测原理 β-半乳糖苷酶 半乳糖苷酶
四唑翁指示剂
（tetrazolium） tetrazolium） 薄膜
粘合剂＋ 粘合剂＋指示剂 冷水可溶性凝胶 标准培养基＋ 标准培养基＋冷 水可溶性凝胶 粘合剂
β-葡萄糖苷酶 葡萄糖苷酶
大肠菌群类检测方法介绍
肠杆菌科四种指标菌的范围 （隶属关系） 隶属关系）
肠杆菌科 (Enterobactericeae) 大肠菌群(Coliform) 大肠菌群(Coliform) 粪大肠菌群 (Fecal Coliform) 大肠杆菌 (E.coli)
食品中大肠菌群类及其检验
● 大肠菌群（coliforms）： 大肠菌群（ ）： ◆指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和 指一群在 ℃条件下培养 能发酵乳糖、 能发酵乳糖 兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 ◆该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评 该菌群主要来源于人畜粪便， 价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 粪大肠菌群（ ● 粪大肠菌群（Faecal coliform）： ）： 系指一群在44.5℃培养 能发酵乳糖、 ◆系指一群在 ℃培养24h~48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧 能发酵乳糖 和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 大肠杆菌（ ● 大肠杆菌（Escherichia coli）： ）： 大肠杆菌广泛存在于是人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃ ◆大肠杆菌广泛存在于是人和温血动物的肠道中，能够在 ℃ 发酵乳糖产酸产气、 生化试验为+ 发酵乳糖产酸产气、 IMViC生化试验为 + - -或- + - -。 生化试验为 或 。 ◆包括：产肠毒素（ETEC）肠致病性（EPEC）肠侵袭性(EIEC) 包括：产肠毒素（ETEC）肠致病性（EPEC）肠侵袭性(EIEC) 肠出血性(EHEC) 肠出血性(EHEC)
3MTM PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片 大肠杆菌 大肠菌群测试片
24 h得出大肠菌群数 肉、家禽和海鲜，24 h 得出大肠杆菌数 其它食品，48 h得出大 肠杆菌数 E. coli O157表现为大肠 菌群
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