食品微生物实验室基本要求

➢在无人条件下，可采取紫外线消毒，作用 时间应≥30min，室内湿度＜20℃或＞ 40℃、相对湿度＞60%时，应适当延长照 射时间。
➢用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面 受到紫外线的直接照射，且应达到足够的 照射剂量。
➢人员在关闭紫外灯后至少30min方可入内操 作。
➢按照ISO18953的规定，评价紫外线的消毒
• 无菌室臭氧消毒
• 封闭无菌室内，无人条件下，采用 20mg/m3浓度的臭氧，作用时间应≥30min。 消毒后臭氧浓度≤3时方可入内操作。
• 按照GB/T18202的规定，检测室内臭氧浓 度。
• 无菌室空气灭菌效果验证方法(沉降法)
• 在消毒处理后与开展检验活动之前期间采 样。
• 取样位点的选择应基于人员流量情况和做 试验的频率。一般情况下，无菌室面积 ≤30m2时，从所设定的一条对角线上选取 3点，即中心1点，两端各距墙1m处各取1点； 无菌室面积≥ 30m2时，选取东、西、南、 北、中5点，其中东点、西点、南点、北点 均距墙1m。
_
18~28
相对湿 度%
≤70
噪声 dB(A)
≤60
最低照 度lx
200
二级 _
可开窗 _
18~27 30~70 ≤60 300
三级 7或8 15或12 -10
15~25 30~60 ≤60 350
四级 7或8 15或12 -10
18~24 30~60 ≤60 350
注：BSL-3主要实验室相对于大气的最小负压不应小于-30Pa，BSL-4主要 实验室相对于大气的最小负压不应小于-40Pa。本表中的噪声不包括生物
➢确定平板上的菌落数，如大于所设定的风 险值，应分析原因，并采取适当措施。
• 培养基与试剂的消毒与灭菌
• 培养基通常应采用高压温热灭菌法，121℃ 灭菌15min，特殊培养基按使用者的特殊要 求进行灭菌(如含糖培养基，115 ℃灭菌 20min)。
• 部分培养基(如嗜盐琼脂培养基、胆硫乳培 养基等)，只能煮沸灭菌。
百级洁净实验室与BSL-2实验室的区别
• 百级洁净实验室的洁净度要求： 含尘浓度
含菌浓度
空气洁净等级
尘粒粒径 (μm)
尘粒数 （个／m3 ）
沉降菌 (Φcm碟 0.5h）
浮游菌 (个／m3)
≥0.5
≤3,500
100级
≤1
≤5
≥5
0
10000级
≥0.5
≤350,000
≤3
≥5
≤2,000
≤100
100000级
• 实验室的墙壁、天花板和地面应光整、易 清洁、防渗漏并耐化学品和消毒剂的腐蚀。 地板应防滑。
• 实验台面应防水，并可耐消毒剂、酸、碱、 有机溶剂和中等热度的作用。
• 应保证实验室内所有活动的照明，避免不 必要的反光和闪光。
• 实验室器具应坚实耐用，在实验台、生物 安全柜和其它设备之间及其下面要保证有 足够的空间以便进行清洁。
≥0.5 ≥5
≤3,500,000 ≤20,000
≤10
≤500
大于100000 (相当于
300000级)
≥0.5 ≥5
≤10000000 ≤61800
BSL-2实验室的主要技术指标
级别 洁净 度级 别
一级 _
最小换 气次数 (次/h)
可开窗
与室外方向上 相邻相通房间 的最小负压差 (Pa)
温度℃
氯
++
+
酸
盐
乙-
++ ++ ++ -
+V++++ -
+
醇
+++
甲 ++ ++ ++ ++ ++ + + + + + + - + + + 醛 + + + + +a
戊 ++ ++ ++ ++ ++ + + NA + + + NA ++ ++ ++
二 + + + + +b
+++
醛
碘 ++ ++ ++ ++ ++ + + ++ + + + A + + -
• 二级生物安全水平时，应在靠近实验室的 位置配备高压灭菌器或其它清除污染的工 具。
• 安全系统应当包括消防、应急供电、应急 淋浴及洗眼设施。
• 应当考虑设置机械通风系统，以使空气向 内单向流动。如果没有机械通风系统，实 验室窗户应当能够打开，同时安装防虫纱 窗。
• 在实验室内应有基本生物安全设备：生物 安全柜(一级或二级）、移液助器、乳胶手 套等
无菌室 (≤30m2)
无菌室 ≤30m2)
无菌室(≥ 30m2)
采样点设置图
➢在所选位点，将平板计数琼脂平板(90mm) 或置于距地面80cm，开盖暴露15min，然 后，置36℃ ± 1℃的恒温培养箱培养48h ±1h。如果检测某目标霉菌或细菌，则可用 选择性琼脂平板(如PDA、PALCAM等) 。
• 进行病原微生物分离与鉴定必须在BLS-2实 验室中进行。
什么是生物安全实验室？
• 是通过规范的实验室设计建造、实验设备 的配置、个人防护装备的使用（硬件）、 严格遵从标准化的操作程序和管理规程等 （软件）：
• 确保操作生物危险因子的工作人员不受实 验对象的伤害；
• 确保周围环境不受其污染； • 确保实验因子保持原有本性所采取综合措
施的实验室。
生物安全防护的基本原则(三要素)
• 安全设备、个体防护装置和措施 。 • 实验室的特殊设计和建设要求 。 • 严格的管理制度和标准化的操作程序和规
程目标确保实验室工作人员不受实验对象 侵染， 确保周围环境不受其污染的目的。
生物安全实验室设施的基本要求
• 必须为实验室安全运行、清洁和维护提供 足够的空间。
安全柜、动物隔离器的噪声，如包括上述设备的噪声，则最大不应超过 68dB(A)。
二级生物安全防护水平(BSL－2）
• 二级生物安全防护水平是指实验室的操作、 安全设备、和设施适用于操作我国的第三 类（少量二类）危害的致病微生物。
• 二级生物安全防护水平适合于从未知病原 的人身上取血、体液和组织的检测和研究 （可能含有高致病微生物）。
• 对热敏感的培养基或添加物质，应采用膜 过滤的方法过滤除菌。
• 即用型培养基不需灭菌，应参见相关国际
• 器具与设备的消毒灭菌
• 温热灭菌：采用高压灭菌器， 121℃灭菌 20min，适用于玻璃器皿、移液器吸头、塑 料瓶等。按照GB15981的规定，评价高压灭 菌器的杀菌效果。
• 干燥灭菌：采用干燥箱灭菌，160℃，灭菌 2h，适用于玻璃器皿和不锈钢器具等。
载+ + + + +
+
体
注：+++，良好；++，一般；+，轻微；-。零；V，取决于病毒；C，阳离子；A，阴离子；NA，不适 用a，。40℃以上；b，20℃以上
BSL－2：实验室设施(二级屏障)
BSL-2实验室
生物安全标识
生物安全柜
注意乳胶手套的使用
千级无菌实验室
风淋室
食品微生物无菌室的基本要求及管 理
• 无菌室的基本建设要求
• 根据本实验室所涉及的生物安全等级，无 菌室的设计应符合GB 50364(生物安全实验 室建筑技术)和GB 19489(生物安全通用要求) 的相关要求。
食品微生物实验室基本要求
总则：环境
• 实验室环境应不影响检测结果的准确性。 • 实验室的工作区域应与办公室区域明显分
开。 • 实验室工作区域面积和总体布局应能满足
从事检测工作需求，实验室布局应采用单 方向工作流程，避免交叉污染。 • 实验室内温度、湿度、照度、噪声和洁净 度等应符合工作要求。
• 一般样品检测应在洁净区域(包括超净工作 台或洁净实验 室)进行，洁净区域的应有明 显标示。
• 病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安 全实验室(Biosafety level 2 BSL-2) 进行。
洁净实验室与BSL-2实验室的区别
• 百级洁净实验室只针对实验环境提出洁净 要求，不提供对人员或环境的生物安全保 护。(超净工作台不能替代生物安全柜)。
• 普通的食品微生物实验(不进行病原微生物 分离与鉴定)只要求在洁净实验室进行。
• 无菌室大小应满足检验工作的需要。内墙 为浅色，墙面和地面应光滑，墙面与地面、 天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，无死 角，易于清洁与消毒。
➢无菌入口处应开设缓冲间，缓冲间内应安 装非手动式形关的洗手盆，并可有毛巾。 缓冲间应有足够的面积以保证操作人员更 换工作服和鞋帽。
➢无菌室内工作台的高度约80cm，工作台应 保持水平。工作台面应无渗漏，耐腐蚀， 易于清洁、消毒。
➢无菌室内光照应分布均匀，工作台面的光 照度应不低于540lx。
➢无菌室内应具备适当的通风和温度调节条 件。无菌室的推荐温度为20℃，相对湿度 为40%~60%。
➢缓冲间及操作室内均应设置达到空气消毒 效果的紫外灯或其它适宜的消毒装置。
• 无菌室的管理
• 无菌室在使用前和使用后应进行有效的消 毒，消毒方法参见附录D。
➢液体消毒剂消毒：使用适当浓度自配或商 业液体消毒剂对工作台面、器具或设备表 面进行消毒。
➢可按照GB15981的规定，评价自配或商业液 体消毒剂的消毒效果。
➢可按照ISO18953的规定，监测工作台面、 器具或设备表面的消毒效果。
• 实验室废弃物的处理
• 对于培养物及其污染的物品(如培养基、测 试条、生物鉴定管、血清学鉴定用玻片、 用过的移液器吸头、细菌培养皿、注射器 等)，应使用适当浓度的自配或商业液体消 毒剂对其处理一定时间，或121℃高压灭菌 至少30min，或其他有效处理措施。将处理 物倒入特殊标志的垃圾袋内，直接送到指 定地点。
➢对于实验动物尸体及相关废弃物，按照 GB14925的规定进行处理。
➢记录并保留废弃物和实验动物尸体处理的 记录。
部分消毒剂的特性
消 抗活性
被灭活
毒性
毒
剂
真 菌
细菌
分 孢 亲 非 蛋 天 合 硬水 去 皮 眼 肺
枝子脂亲白然成
垢肤 睛
G+ G_ 杆 菌
病 毒
脂 病
质
物 质
物 质
剂
毒
次 + ++ ++ ++ ++ + + ++ + + + C + + +
• 应当有足够的储存空间。
• 应当有足够的储存空间摆放随时使用的物 品 (试剂、气体等)。
• 在实验室工作区外应当有存放外衣和私人 物品的设施。还应当有供长期使用的存储
• 每个实验室都应有洗手池，并最好安装在 出口处，尽可能用自来水(要有防止嚼齿动 物和节肢动物侵扰的装置)。
• 实验室的门应有可视窗，并达到适当的防 火等级，最好能自动关闭。
• 无菌室的消毒效果应至少每两周验证一次。
• 应制定清洁、消毒、灭菌、使用和应急处 理程序。
• 应建立环境监测结果，并归档保存。
• 不符合规定时应立即停止使用。
微生物实验室消毒处理方法
• 无菌室紫外线消毒 • 在室温20℃~25℃时，220V30W紫外灯垂
直处的紫外线辐射强度应≥70μW/cm2， 低于此值时应更换。适当数量的紫外灯， 确保平均每立方米应不少于。 • 紫外线消毒时，无菌室内应保持清洁干燥。