糖类对冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis芽生孢子产量及毒力的影响

环境昆虫学报 2020, 42 (6)： 1446 -1457JournaloeEnvcronmen alEn omology
http ： "hjkcxb. alljournals. net
dol ： 10. 3969/j. d o . 1674 -0858. 2020. 06. 20
梁離,吴华，韩日畴，曹莉•糖类对冬虫夏草菌OpOPdOyeye fonste 芽生抱子产量及毒力的影响[J ].环境昆虫学报，2020, 42 (6):
1446 -1457.
糖类对冬虫夏草菌Ophiocordycexe sicexsis
生 毒力的 丨
梁 +1,
2,吴 华2，韩日畴2,曹 莉2
#
(1-仲恺农业工程学院，广州510225 *
*基金项目：广州市科技计划项目(201604020030, 201803010087)；国家自然科学基金(31900368 )；广东省科学院“千名博士 (后)计
划”引进专项(2019GDASYL-0103056)；广东省科学院科技发展专项(2018GDASCX -0107)
作者简介：梁叙，男，硕士研究生，研究方向为资源昆虫、冬虫夏草研发，E - mail : vip —an@ 163. com
*通讯作者Autfor Ar coeeoondencc ：曹莉，女，研究员，主要从事资源昆虫、冬虫夏草研发以及新型生物杀虫剂产业化的研究，E-mVi ：
caol@ giabr. gd- cn
收稿日期 Received ： 2020 -07 -27 ；接受日期 Accepted ： 2020 —08 —31
2-广东省科学院动物研究所，广东省动物保护与资源 验室，广东省野生动物保护与利用公共实验室，广州510260)
摘要：冬虫夏草(Chinese cordyceps )是食药两用的传统名贵资源。

其人工培养需要冬虫夏草菌OpOUdOyeps
oxex^p 的优质芽生抱子。

为获得高产量及高感染力芽生抱子，本研究测定不同糖类培养基对冬虫夏草菌芽生抱子
产量及毒力(对小金蝠蛾Thiaudes xiaofxexsls 幼虫的存活率、携菌率和僵虫率)的影响。

两个冬虫夏草菌株于含
6 (葡 、 、 拉伯糖、 、 和 藻糖)的液 养 分别培养30d 、45d 和60 d ，计
生抱子 并将 的抱子 感染两个品系的 蛾6龄幼虫，
不同温度下观察幼虫的存活率、携菌
率及僵虫率。

示：不同糖源培养 生抱子的 差异显著，
养 生抱子：最
; 菌株和幼虫品系对 幼虫的存活率 著差异；不同糖源培养基获得的芽生抱子对蝠蛾幼虫的存活
率 著差异，对菌率和僵虫率产生影响；以 为糖源的培养基、芽生 子培养 著影响 幼
虫的存活率与僵虫率， 养30 d 的 虫夏草菌所
的幼虫的存活率、僵虫率显著
60 d 的；温度 著
影响
幼虫的存活率、僵虫率，10C 的幼虫存活率和僵虫率显著 14m 、18C 的。

研究
为培养优质冬
虫夏草芽生抱子，提 蛾幼虫僵虫率提供了
+
关键词：冬虫夏草；冬虫 草菌； 蛾幼虫； 饲养；
养基
中图分类号：Q969. 97； Q965 文献标识码：A 文章编号：1674 -0858 (2020) 06 - 1446 - 12
Influence of sugars on the yieHs and virulence of Ophiocodyceps sieexsos
blastospores
LIANG Yan 1，2， WU Hua 2， HAN Ri-Chou 2， CAO Li 2*
( 1.
Zhongkal University of Agricu —ura and
EnyinoEny , Guangzhou 510225， China ； 2. Guangdony Keg Laboratory of Animal Conservation and ResoueceUtiaiaation ， GuangdongPubaicLaboeatoeyoeWiad AnimaaConseeeation and Uti ai aation ， Institute
oeZooaogy ， GuangdongAcademyoeSciences ， Guangahou 510260， China )
Abstract : Chinoa cordyceps is a traditional valuabia resourca fer food and miOinv. Agificial cultivation
of Chinesa cordyceps yquiys high ・quVity blastosporas of OpOPcorPycepe sOensg. In ordvr tv obtain high
yiead and eieuaencebaastspQees ， thee e e ctsQethemediacQntainingdi e eentsugaesQn theyieadsand eieuaence ( sueeieaaeates ， eungaaeetentin eateand mummieied eateQetheineected Thctarode/aaeeae ) Qe O . cnen c baastspQeesweeedeteemined.TwQ O .
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mediawith
6期梁烦等：糖类对冬虫夏草菌OphucorUycegs sioexsis芽生抱子产量及毒力的影响1447
dideont sugars for30,45and60dags,ospute/y,and the blastospore yields were deteonined-These spores were used to inject the6th instar larvae of T.xiopiaosP,and the suoival rates,Oingai retention rates and m ummiOed rates of the inOcWd ThPoroPes1a oae were obtained-The results showed that blastospore yields Oom diWeont media was signRcantly dideoni,with highest yield obtained Oom the medium containing rval suoival rates were not didemnt bg the injected fungal strains and Woal strains-Fungal retention rates and mummified rates of the infected ThParoPes larvae were inOuenced bg the blastospores Oom diWeont media,but the suoival rates were not much dideoni.The Ongai cultuo times signOicanVg affected the laoal suoival and mummified rates,and the blastospores Oom30d cultures produced signOicantig higher rates than those Oom60d cultures Oom the malbse-containing cultures.The temperatures also signOicantig affected the suoival rates and mummified rates of the injected Woae,and the Woal suoival and mummified rates at10C were signOicantig higher than those at14C and18C-The osults provide a reference Or producing high-qua/tg O.sioeosP blastospores and increasing the mummified rates of the injected Wmae-
Key worle:Chinese cardyceps;OpPiocordyceys sioeosP；ThPoroPes Woae;artificial cultivation；media containing sugars
冬虫夏草是冬虫夏草菌侵染寄主昆虫-蝙蝠蛾科Hepia/dae幼虫，在合适环境下形成的幼虫尸体与真菌子座的复合形态结构（Sung et of, 2007；Leet of,2013）。

由于良好的药理药效作用，冬虫夏草被称为“中药三大宝”（人参、鹿茸和冬虫夏草）之一-（Lx et of,2013;Gao et of, 2014；Liu et of,2015；丘雪红等，2016；Zhang et of,2017；Chen et of,2018；韩日畴等, 2019）+冬虫夏草主要产于海拔3000m以上的青藏高原（Yl et of,2011）,生长周期长，生存条件恶劣，因此，野生资源极为有限（陈仕江等, 2001）。

随着“亚健康”人群的扩大，冬虫夏草日益受到人们的青睐；而过度采挖和气候变暖导致野生冬虫夏草处于濒危（Zhang et of,2012；Li et of,2016；Hopping et of,2018）。

唯一选择是进行冬虫夏草人工培育（Xia et of,2016；丘雪红等，2016；韩日畴等，2019）+
冬虫夏草菌是一种嗜低温真菌（Dong et of, 2011；Dong et of,2012），其寄主蝙蝠蛾昆虫野外完成其生活史需要3~4年，实验室培育也需要1-2年（徐海峰，2007；Tax et of,2016；Li et of,2020）+经过数十年的努力，冬虫夏草的人工栽培取得重大突破，包括冬虫夏草菌子实体的人工培育（Cao et of,2015）、蝙蝠蛾昆虫低海拔规模化人工饲养（曹莉和韩日畴，2014；Tax et of,2016；Li et of,2019）以及利用冬虫夏草菌感染蝙蝠蛾幼虫获得媲美野生的冬虫夏草（张姝等，2013；Zhao et of,2014；Xiao et of,2018；韩日畴等，2019；Li et of,2020）+目前,冬虫夏草菌的芽生抱子和子囊抱子均用于感染蝙蛾幼虫获得虫草,生子感（曹莉等，2019；Liu et of,2020）,子囊抱子用于体表感染（杨大荣等，1986；韩晓然，2020）+在实践中，两种感染方法各有优缺点+注射感染,需获得大对蛾幼虫有力的
芽生抱子（Liu et of,2020）+
为了获得高质量的冬虫夏草芽生抱子，本研究中比较了不同糖类培养基对冬虫夏草菌芽生抱子产量以及芽生抱子对蝠蛾幼虫存活率、携菌率和僵虫率的影响，为在低海拔地区人工栽培冬虫夏草提供重要参考+
1材料与方法
1.1冬虫夏草菌培养
冬虫夏草菌菌株KD（分离自四川康定）和QH（分离自青海玉树）,经分子鉴定后（Cao et of,2015）保存于广东省科学院动物研究所（原广东省生物资源应用研究所）+培养基成分如下：糖20g,马铃薯200g煮汁，蛋白月东10g,大蜡螟鲜幼虫5g（以人工培养基饲养），磷酸二氢钾3g,七水合硫酸镁1-5g,维生素B10-02a,以水定容至1000mL+配制好的培养基分装至250mL的三角瓶中,150mL/瓶,并于121C高压灭菌30min,冷却后使用+本实验使用的糖类包括葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖和海
1448环境昆虫学扌f Journal f Environmental Entomology42
藻糖，均为分析纯，购自广州市普有限公司。

超净工作台中，将9~13°C下固体G5培养基（葡20g，马薯200g汁，蛋白月东10a，大螟鲜幼虫5g（以养基饲养），磷酸二氢钾3g，七水酸镁1.5g，维生素B1 0.02y，琼脂16y，以水定容至1000mL o）培养60d的冬虫夏草菌块（约1cm3）接种于上述液体培养，110gm、9-13m上培养50d，生子作为源。

培养的菌液以三层无菌擦镜滤，滤液离心（8000rpm，10C，15min），上液，重悬菌磷酸
冲液（PBS，pH7.0）+将收集的芽生抱子液稀释至1.5X106个/mL，每瓶150mL培养基中分别1mL 1.5X106个/mL芽生抱子液，置于110gm、9~13C暗下培养。

每隔10d，分别从培养瓶中取样0.3mL，摇匀后取10%L添加的荧光28染色（Siymo公司，上）中对虫夏草菌菌丝及芽生抱子进行染色，在光显微镜（Nikon，日本）下对芽生抱子进行观察与计数。

每个3个复，持续观60d o
1.2蛾幼虫的饲养
验所用的蛾6龄幼虫YL和GG品系东省科学院动物研究所实验室饲养，饲养方法按照（Toe el eV，2015），6龄幼虫用于注射感染+
1.3蝠蛾幼虫的
以无菌PBS缓冲溶液稀释得到的芽生抱子浓度为106个/mL。

感蛾幼虫的■按照（曹莉等，2019；Liu et el-，2020）。

利用微（针直径0.06mm）分别对蛾6龄幼虫YL和GG品系进行感，每幼虫注射4%0芽生抱子（芽生抱子数量为106个/mL）。

后的蛾幼虫分别10m、14C或18C
养。

每个60幼虫，3个重复（共180）+30d观察和记录幼虫存活率、于60d 观察和记录幼虫存活率和幼虫僵虫率。

分别后30d的幼虫血淋巴经荧光28染色色后，微镜下观察血淋巴现芽生抱子，并计算幼虫携菌率。

1.4统计与分
据以平均值土标准误（X±SE）表示。

使用SPSS软件（IBM Statistics SPSS25.0）分析。

符合正态分布（NormVOy P—is with Tests）和方差齐性（Tot of Homoyilty of VuOnco）的数据进行差分析（Ona W u/ANOVA）；差存在著差异，则Tukeg法进行+对不符合上述的数据则进行检验（Kruskal-Wallis test followed by tha Mann-Whitneg U test检验）。

显著水平设置为P二0.05+
2结果与分析
2.1糖类对冬虫夏草菌芽生抱子产量的影响
加入不同的培养，冬虫草菌（KD、QH菌株）在不同培养的芽生抱子不同（图1、图2）+养生抱子显著，的；巻
养30~40d；生长曲线大致分为3个阶段：0~15d的缓慢生长,15~35d的指数生长阶段，35~60d的下降生长阶段。

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图1冬虫夏草菌(KD菌株)9〜13C下于不同含糖培养
生抱子生长曲线
Fig.1Growth curve of b—stospores of OpOUdOyeps sixexsis (KD)in themediacontainingdi e eentsugaesat9h13m 含糖不同的培养基中芽生抱子在30d时的产量差异显著（11,24=414.719,P=0.000）（图3）+ KD菌株在不同培养基中的芽生抱子产量均显著高QH菌株；不在KD Q QH菌株，乍
养生抱子均显著；对于KD菌株，拉伯糖和葡的培养芽生子著差异，著、
糖和海藻养的抱子；藻养获的芽生抱子著和f 培养基的，和差异不显著。

对于QH
菌
6期梁烦等：糖类对冬虫夏草菌OphUcdUpegs siaxPs芽生抱子产量及毒力的影响1449
图2冬虫夏草菌(QH菌株)9〜13C下于不同含糖培养
生抱子生长曲线
Fig.2Growth curve of blastospores of Ophiocorfyceps sixosP (QH)in the media containing dOerent sugars at9〜13C
株，拉伯糖培养基中芽生抱子产量显著高于葡、、、藻养基的；含葡、、或藻养生抱子数差异不显著。

，持虫夏草菌生抱子生长的最优糖源；KD菌株芽生抱子在不同培养 的均QH菌株。

图3两种冬虫夏草菌株(KD和QH)9~13C下于不同养30d的生子
Fig.3Yields of OpPiocorbycegs sicecsis blastospores
(KD and QH)in the media containing dOferent sugars
at30d at9〜13C
注：柱子上面不同字母表示处理间芽生抱子产量在5%水平差异显著，下同+Noto:Columns with dOferent le/ers indicate significant dOferences at5%level among the yields of blastospores.The same as below.2.2不同30d的冬虫夏草生抱
的蛾幼虫存活率、也
虫的
含不同 养基培养30d的生抱子（KD、QH菌株）以106个/mL浓度蛾幼虫的两个品系，幼虫10C下饲养30d的存活率、携菌率，60d的僵虫率见图4~6（KD、QH菌株的养及QH菌株的葡、
养养30d达不度）。

不同糖养养30d的芽生抱子（KD菌株）后幼虫的存率（图4-A）不存在著差异（F9，20= 0.966,P=0.495）,而QH菌株（图4-B）的存活率存在显著差异（F5，12=4.089，P=0.021），海藻的YL品系幼虫存率著拉伯、
（YL C GG品系）及海藻糖GG品系的。

其携菌率均存在显著差异（KD菌株，图5-A：H= 19.483，P=0.021；QH菌株，图5-B：H= 11.940，P=0.036），KD菌株养基（YL及GG品系幼虫）和藻养基的YL品系幼虫携菌率达到100%，而QH菌株仅有芽养基的GG品系幼虫携菌率达到100%。

其僵虫率均存在显著差异（KD菌株，图6-A：F9,20= 7.711，P=0.000；QH菌株，图6-B：F5，12= 4.160,P=0.020）。

2.3不同45d的冬虫夏草生抱
的蛾幼虫存活率、也
虫的
含不同 养基培养45d的芽生抱子（KD、QH菌株）以106个/mL浓度注射两个品系的：蛾幼虫，幼虫10C下饲养30d的存活率、携菌率，60d的僵虫率见图7~图9。

含不同养养30d的生抱子（KD、QH菌株）后幼虫的存率（图7-A、图7-B）均不存在显著差异（KD菌株：H=15.328,P=0.168；QH菌株：Fu,”=1.695,P=0.135）。

其携菌率（图8-A、图8-B）也不存在显著差异（KD菌株：H=14.842,P=0.190；QH菌株：H= 18.868,P=0.063）。

KD菌株的僵虫率（图9-A）也不存在显著差异（H=12.751,P=0.310）,而QH菌株（图9-B）的僵虫率存在著差异（H=21.870,P=0-025）。

1450
环境昆虫学报 Jourvel ef Environmentel Entomolopy
42卷
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图4不同糖培养基培养30 d 的冬虫夏草菌KD (A )、QH ( B )芽生抱子对注射后的
小金蝠蛾幼虫(YL 、GG 品系)存活率的影响
Fig. 4 Survival rates of the ThPebPes xiuopmcPs ( YL and GG ) Umae chaZenged with OphiocorPycege sigegsis
(KD and QH ) bUstospons from the media containing diferent sugars Ser 30 days
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图5不同糖培养基培养30 d 的冬虫夏草菌KD (A )、QH (B )芽生抱子对注射后的
小金蝠蛾幼虫(YL 、GG 品系)携菌率的影响
Fig. 5 Fungal retention rates of the ThPebPes xiuofi'iegps ( YL and GG ) larvae chaZenged with OphiocorPycege sPiensis
(KD and QH) blastospores from the media containing diferent sugars after 30 days
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图6不同糖培养基培养30 d 的冬虫夏草菌KD (A )、QH ( B )芽生抱子对注射后的
小金蝠蛾幼虫(YL 、GG 品系)僵虫率的影响
Fig. 6 Mummified rates of the ThPebPes 0700X001$ ( YL and GG ) Umae challenged with OphiocorPycege e i nexsis
(KD and QH ) bUstospons from the media containing diferent sugars Ser 30 days
2.4不同糖培养基培养60 d 的冬虫夏草菌芽生砲
子对注射后的 蛾幼虫存活率、扌：虫的
含不同
养基培养60 d 的芽生抱子（KD 、
QH 菌株）以106个/mL 浓度
两个品系的小金
蝠蛾幼虫， 幼虫 10C 下饲养30 d 的存
活率、携菌率，60 d 的僵虫率见图10 -图12 （QH
菌株的 拉伯 养 养60 d 所 生抱子
不够 ）+ 不同 养 养60 d 的芽生 子 （ KD 、 QH 菌株） 后幼 虫 的 存
率
6期梁 烦等：糖类对冬虫夏草菌OpOUdOyeps sPuxsP 芽生抱子产量及毒力的影响1451
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Glucose Fructose Arabinose Maltose Sucrose Trehalose
培养基的不同糖类Different sugars in medium
图7不同糖培养基培养45 d 的冬虫夏草菌KD (A )、QH (B )芽生抱子对注射后的
小金蝠蛾幼虫(YL 、GG 品系)存活率的影响
Fig. 7 Survival rates of the TOPauPes xioojixexsts ( YL and GG ) —mae chVlenged with OpOUdOyeps sixexsis ( KD and QH )
b —stospores from the media containing ddferent sugars after 45 days
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图8不同糖培养基培养45 d 的冬虫夏草菌KD (A )、QH ( B )芽生抱子对注射后的
小金蝠蛾幼虫(YL 、GG 品系)携菌率的影响
Fig. 8 Fungal retention rates of the TOPaoPes xioojixexsts ( YL and GG ) —mae chVlenged with OpOPcorPycep- sixexsis
(KD and QH) b —stospores from the media containing dOferent sugars after 45 days
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图9不同糖培养基培养45 d 的冬虫夏草菌 小金蝠蛾幼虫(YL 、GG 品系)僵虫率的影响
Fig. 9 Mummified rates of the TOPauPes xioofiuxsis ( YL and GG ) —mae chVlenged with OpOUdOyeps -1eexeP ( KD and QH )
b —stospores from the media containing ddferent sugars after 45
days
1452环境昆虫学报 Journal of Environmental Entomology 42
（图10-A 、图10-B ）均不存在显著差异（KD 菌株：111>24 = 2.091, H= 0.063 ； QH 菌株：H = 15.403, P=0. 080 ）o KD 菌株的携菌率（图 11 -
A ）存在显著差异（KD 菌株：H = 23.589, P = 0.015）,
YL 品系幼虫
、
和海藻
糖的携菌率达到100%, GG 品系幼虫
、阿
拉伯糖和 的携菌率达到100% +而QH 菌株不同
养基的携菌率（图11 -B ）差异不显
著（H=13.677, P= 0.134）。

其僵虫率均存在显
著差异（KD 菌株，图 12 - A ： H = 25. 545, P =
0. 008； QH 菌株，图 12 - B ： H = 23.587, P = 0.005）。

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图10不同糖培养基培养60 d 的冬虫夏草菌KD (A )、QH (B )芽生抱子对注射后的
小金蝠蛾幼虫(YL 、GG 品系)存活率的影响
Fig. 10 Survival rates of the Thitarodes xiafinensis ( YL and GG ) larvae challenged with Ophiocor'yceps sineesis ( KD and QH )
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图11不同糖培养基培养60 d 的冬虫夏草菌KD (A )、QH (B )芽生抱子对注射后的
小金蝠蛾幼虫(YL 、GG 品系)携菌率的影响
Fig. 11 Fungal retention rates of tOe Thitarodes Xaofnensis ( YL and GG ) larvae challenged with Ophiocor'yceps sinensis
(KD and QH) blastospores from the medio containing diferent sugars aftes 60 days
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n o
d
r5
葡萄糖果糖阿拉伯糖麦芽糖蔗糖海藻糖
Glucose Fructose Arabinose Maltose Sucrose Trehalose
培养基的不同糖类Different sugars in medium
05050505050
544332211(
&)*曲•
BYL OGG
培养基的不同糖类Different sugars in medium
图12不同糖培养基培养60 d 的冬虫夏草菌KD (A )、QH (B )芽生抱子对注射后的
小金蝠蛾幼虫(YL 、GG 品系)僵虫率的影响
Fig. 12 Mummified rates of the Thitarodes xiafinensrs ( YL and GG ) larvae challenged with OphiocfOyceps sinensis
(KD and QH) blastospores from the medie containing diferent sugars aftea 60
days
6期梁族等：糖类对冬虫夏草菌Ophiocordycegs specs P芽生抱子产量及毒力的影响1453
2.5含麦芽糖培养基培养的冬虫夏草菌对蝙蝠蛾幼虫存活率的影响
含麦芽糖培养基培养不同时间的芽生抱子（KD和QH菌株）以106个/mL浓度注射小金蝠蛾幼虫的两个品系，被注射幼虫置于10C、14C和18C下饲养30d的存活率见表1+在同一温度下,无论是注射培养30d、45d、60d的KD还是QH 菌株，两个蝙蝠蛾品系的幼虫于30d的存活率均无显著差异（表1）,即30d：（10C,F3,8=0.966, P=0.454；14C,F3,8=1.109,P=0.401；18C, F3,8=1.594,P=0.266）、45d：（10C,F3,8= 0.664,P=0.597；14C,F3,8= 2.446,P= 0.139；18C,F3,8=1.411,P=0.309）、60d：（10m,F3,8=0.401,P=0.756；14m,F3,8=3.612,P=0.065；18C,F3,8= 1.618,P= 0.260）。

在其它条件相同下，不同温度间的蝙蝠蛾幼虫于30d后的存活率部分存在显著差异（表2）o10m下的蝙蝠蛾幼虫存活率优于14C、18m的；不同生子养对后的
蛾幼虫在10°c、14m、18C下于30d的存活率存在差异（10C:F2,33=9.820,P=0.000；14C: F2,33=12.793,P=0.000；18C:F2,33=26.403, P=0.000）,30d的芽生抱子培养时间对注射后的蝙蝠蛾幼虫存活率显著优于60d的。

因此，不同冬虫夏草菌株未显著影响在相同饲养温度下的两种小金蝠蛾品系的存活率；但不同饲养温度或不同芽生抱子的收获时间显著影响两种小金蝠蛾幼虫的存活率。

表1含麦芽糖培养基培养30d、45d、60d的冬虫夏草菌(KD和QH菌株)注射小金蝠蛾幼虫
(YL-GG品系)在不同温度下的存活率
Table1Survival rates of the Thfarodet xPojineat f(YL and GG)larvae challenged with Ophiocordycext t i nert I s (KD and QH)blastospoi'es from the maltoss-containing culthres after30d,45d,60d ai different temperathres
养(d) Culture times of bUstospons
菌株
Fungal strains
幼虫品系
Insect strains
存活率(%)Survival rates
10C14C18C
YL71.67±4.19aA52.22±1.4@aB49.44±5.80aB KD
GG80.56±4.55aA62.8±5.80aA63.89±9.88aA
30
YL77.78±4.01aA53.89±6.55aB4@.8±2.00aB
QH
GG75.56±2.00aA60.56±3.89aB55.00±3.4@aB
YL70.00±1.67aA58.89±5.80aAB46.6@±1.92aB
KD
GG63.89±4.84aA45.56±3.64aAB39.44±5.30aB 45
YL63.33±6.74aA58.33±3.33aA51.6@±2.55aA
QH
GG69.44±2.00aA54.44±2.00aA51.11±7.22aA
YL53.89±4.84aA40.56±1.4@aA23.33±2.89aB
KD
GG61.67±11.34aA45.00±3.4@aAB25.00±5.09aB 60
YL64.44±8.07aA36.6@±1.6@aB23.33±6.6@aB
QH
GG62.78±1.11aA4@.8±3.09aB36.11±3.89S 注：对每一列（同一温度、同一芽抱培养时间）以及每一行（注射幼虫置于不同温度下）的小金蝠蛾幼虫存活率进行方差分析+小写字母表示同一列分析，大写字母表示同一行分析，不同字母表示差异显著+下同+Note：ANOVA was peEormed on the survival rates of Thitorodcs xiepinensP larvae in each column(same culture bme of bUstospons at the same temperature)and each row(the injected Umae cultured at diferent temperatures).Lowcase letters are used for the analysis of the same columns and capital letters for the analysis of the same Ones.The columns or Ones with the same letters indicate no significant dibennces.The same as below.
2.6含麦芽糖培养基培养的冬虫夏草菌对蝙蝠蛾
虫虫的
结果分析表明含麦芽糖的冬虫夏草菌（KD、QH）注射蝙蝠蛾幼虫（YL和GG）在10C的僵虫率显著高于14°C、18C（表3）,14C和18C下所有幼虫的僵虫率为0+不同时间收获的冬虫夏草菌
1454环境昆虫学扌f Journal f Environmental Entomology 42
表2含麦芽糖培养基培养30 d ' 45 d 、60 d 的冬虫夏草菌(KD 和QH 菌株)注射小金蝠蛾幼虫(YL 和GG 品系)
在不同温度下的存活率方差分析结果
Table 2 Analysis of variance analysis of survival rates of the Thitarodes xmoOicexsis (YL and GG ) larvae cCallengen
with Ophiocordyceps sicexsis (KD and QH ) blastospores from the maltose-containing culthres after
30 d , 45 d , 60 d at different temperathres
注：* 表加存在显著差异；-表加不存在显著差异+ Note ： * SigniOcant ddferences ； - No significant deferences.
芽生抱子培养时间（d ）
菌株
幼虫品系
F I P I 差异
Culture time of b —stospores
FungaaBteainB
InBectBteainB
F-wOe
P-wme SigniOcanco
YL
I ,6= 11.400
0.009*
KD
GG =1.9590.221I ,6
30
QH
YL
=11.9750.008
*I ,6GG I ,6=10.8810.010
*YL
I ,6=10.1850.012*KD
GG =7.4900.023
*
I ,645
QH
YL
=1.6320.272-I ,6GG I ,6=4.7540.058
-YL
I ,6=20.7360.002*KD
GG
=6.0670.036*I ,660
QH
YL
=11.747
0.008
*I ,6GG I ,6=20.6730.002
*
表3小金蝠蛾幼虫(YL 和GG 品系)被注射麦芽糖培养基培养30 d ' 45 d ' 60 d 的冬虫夏草菌(KD 和QH 菌株)
芽生抱子后于10d ' 14d ' 18d 下60d 的僵虫率
Table 3 Mummifen rates of the Thitarodes xctojicexsis (YL and GG ) larvae after 60 days at 10d 、14d 、18d
after challengen with 30 d 、45 d 、60 d ol Ophiocordyceps sinexsSs (KD and QH ) blastospores culthred with
the medinm containing maltose
生 子 养 ( d )Cu/uy times of b —stospores
菌株
Fungaasteains
幼虫品系
Insectsteains
僵虫率(％ ) Mummified rates
10m
14m
18m
YL 25.56 ±2.78 aA 0 U 0 aB KD
GG 37. 78 ±4. 34 aA 0 aB 0 aB 30
YL
25.00 ±4.41 aA
0 aB 0 aB QH
GG 36. 67 ±3. 47 aA 0 aB 0 aB YL
22.78 ±4.34 aA
0 aB 0 aB KD
GG 22.22 ±4.75 aA 0 aB 0 aB 45
YL
27.78 ±1.11 aA 0 aB 0 aB QH
GG
27.78 ±3.38 aA
0 aB 0 aB YL 18. 33 ±4. 19 abA 0 aB 0 aB KD
GG
8.33 ±0.96 bA
0 aB 0 aB 60
YL
0 cA
0 aA 0 aA QH
GG 20.00 ±1.67 aA
0 aB
0 aB
6期梁族等：糖类对冬虫夏草菌Ophiocordycegs specs P芽生抱子产量及毒力的影响1455
（KD菌株）芽生子的小金蝠蛾幼虫的僵虫率间存在显著差异（F5,i2=6.340,P=0.004）（图13）;养30d的虫夏草菌（KD）芽生子的蛾幼虫YL品系的僵虫率与培养60d的生子著差异,养30d的生子的蛾幼虫GG品系的僵虫率著养60d生子的；而养30d和45d的芽生抱子的两蛾幼虫品系的僵虫率之著差异（图13）。

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芽生抱子培养时间（d）Culture times of b lastospores 图13小金蝠蛾幼虫（YL C GG品系）被注射麦芽糖培养养30d'45d、60d的冬虫夏草菌（KD菌株）芽生抱子后于10C下60d的僵虫率
Fig.13Mummified rates of the ThPebPes piupieeigis （YL and GG）Umae at60days at10C after chVlenged with 30d'45d and60d old OphiocoPycegs sineds（KD）
bUstospons cultured with the medium containing maltose
3结论与讨论
虫夏草菌是寄生蛾科昆虫幼虫上的一种药菌（娟，2004；虹，2016）+虫草菌寄主蝠蛾幼虫的相关机制尚未明了（Meng et at.,2015;Rao et at., 2019）+表、针、、、浸泡、比常感蛾幼虫（杨大荣等，1986；王，2001；廖志勇，2005；永勤等, 2010a）,存在菌率、率及僵虫率问题（韩日畴等，2019）+Lin（2020）微生抱子感蛾幼虫的，极大地提高了幼虫携菌率+
不同真菌所需的源不同，虫草Cordycegs militorP的最佳糖源为蔗糖（杨心如等, 2019；,2019）;双抱蘑菇Agoruhs bispops 的源为（张，2016）；刘永霞（2004）认为冬虫夏草菌菌丝生长的源为葡；王爽等（2013）研究表明葡或：糖对球抱白僵菌BeouveUo bossioea的生长和产抱明显优源+赵秀（2005）认为白灵菇Pfurotus yebrodeesg菌丝生长的源
和，而（2019）表白灵菇菌丝生长的源为葡、，以露醇和可溶粉为糖源时发酵液中获得的菌丝干大+本次研究示含不同的培养基对冬虫夏草菌生子存在著差异，为优糖源；然而，芽生子生长对的最优选并不子生长的，含葡的大米养虫夏草子的生长速率和干优养基的（陶海平等, 2020）+
王（2001）表蛾幼虫的饲养温度应该控制在6-12C,而王宏生（2002）则认为蝙蛾幼虫的饲养温度为10-15C+虫
草菌感染后的蛾幼虫，在不同的温度、湿度和不同的光下，其子形存在差异（李，2009；永勤等，2010b）+（2019）研究表明，4C温可以虫草菌感染后的蛾幼虫子形成+本验发现10C14C、18C蛾幼虫的生存,而高温大大蛾幼虫的僵虫率，导致率+需指出，本研究主定不同养的虫草生子对蛾存率和僵虫率的影响，所获示不同
虫夏草菌株著影响在相同饲养温度下的两种蛾品系的存率和僵虫率，不同饲养温度或不同生子的获著影响两
蛾幼虫的存活率和僵虫率，获得的蛾幼虫存活率和僵虫率并优+
本实验分离自和的冬虫夏草菌株均著影响在相同饲养温度下的蛾两个品系的存活率，说菌株和寄主昆虫I未必存在的，但需在今后的研究中进一步验证+不同芽生抱子的收获著影响小蛾两个品系幼虫的存活率和僵虫率，原
有待研究+目前有不同获的冬虫草菌芽生抱子蛾幼虫的报道+不同糖代程形成的芽生抱子显著影响其与寄主昆虫相关的机理值得进一步研究+本验的幼虫存活率，可能与的幼虫龄期有关+结发现，养30h45d的虫草菌的生
1456环境昆虫学扌f Journal of Environmental Entomology42卷
抱子为注射感染小金蝠蛾幼虫的最佳芽生抱子，而培养60d的冬虫夏草菌芽生抱子似乎老化，有可能降低僵虫率。

本研究结果为培养优质冬虫夏草芽生抱子，提高被侵染蝙蝠蛾幼虫存活率、携菌率和僵虫率提供了参考。

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