诱变法筛选高转化率谷氨酸棒杆菌

３ ， ２ Ｐ ，．， 素 ２５ 豆 粕水解 液 ２ ，Ｈ ７ 。 ３ Ｋ Ｈ Ｏ２０ 尿 ．， ２ｐ ． ０ 发 酵 培养基 ：葡萄糖 ８ ０．玉米 浆 ５ ． ０，糖 蜜
１ ， Ｈ２Ｏ ． Ｍｇ Ｏ ・Ｈ ０ ．， 酚 红 ２０ｍｇ ． Ｋ Ｐ ４ ０， Ｓ ４７ ２ ２０ 苯 ０ １ ． ，
烷 化基 团使 Ｄ Ａ分 子上 的碱 基及磷 酸 部分烷 化 。 Ｎ Ｄ Ａ 复制 时导 致碱 基配 对错 误而 引起 突变 。 Ｎ 采用
文献 ［ 述 方 法 进 行 硫 酸 二 乙酯 诱 变 。 后 取 适 ８ １ 所 然 当稀释倍 数 进行 涂 布 。
ｇｕａ ｉｕ ＭＨ ２ ， ｌｔｍ ｃ ｍ） ０ １ 本公 司研 发 部保 藏菌 株 。
１１ ．． 培养 基（ Ｌ ２ ｇ ） ／
完 全 培 养 基 ： 萄 糖 ５ 牛 肉膏 ｌ ， 白 胨 葡 ， ０蛋
翻豳 豳
发 酵 科 技 通 讯
１ ． 平 板筛 选 ．２ ２ 进 一 步摇 瓶发 酵检 测 。
第４ 卷 ０
抗性 菌株 的 获得 ：将 第一 次诱 变 的菌液 涂 布
１ 试 验 材 料 与 方 法
１１ 试 验 材料 ．
１１ ．． 菌株 １
１ ． 硫 酸 二 乙酯（ Ｅ １ ．１ ２ Ｄ Ｓ诱变
Ｄ Ｓ是 一种 单 功 能 基 团烷 化 剂 ， Ｅ 主要 是通 过
出 发 菌 株 ：谷 氨 酸 棒 杆 菌 ｆｏｙ ｅａ ｔ ｉｍ Ｃ ｒｎ ｂ ｃｅ ｕ ｒ
菌具 有重 要意义
硫 酸 二 乙￣ （Ｅ １丙 二 酸 ， 津市 光 复精 细 Ｄ Ｓ、 天 化 工研 究 所 ， 析 纯 ； 代 硫酸 钠 ， 分 硫 北京 化 工厂 ， 分 析 纯 ； 胺胍 ，ｉ 磺 ｓ ｍａ分装 ， ｇ 分析 纯 。其 它均为 国产 分 析纯 或生 化试 剂 。
１ ． 试验 方法 ２
院微生 物研 究所 。
在 操作 上 更 具有 简 便 易 行 的优 点 ， 内在 这 方 面 国 已有很 多 报道 ｌ１ 获 得 的菌 株也 为 后续 的原 生 质 ３。 － ７ 体 融 合 或 通 过 其 他 手 段 筛 选 高 产 谷 氨 酸 菌 株 打 下 了 良好 的基 础 ［】 ４ 。本研 究 在 传 统 诱 变 的 基 础 ＿ ６ 上 ，采 用 丙 二 酸 和磺 胺 胍作 为平 板 筛 选条 件 ． 经 摇 瓶 发 酵 复 筛 ，得 到 具 有 这 两 种 物 质 抗 性 的 菌 株 ， 菌株 的糖 酸 转化 率较 出发菌 株有 明显 提 高 ， 该 对继 续 进行 诱变 或通 过其 他方 式 筛选 谷氨 酸优 良
２３ Ｌ 谷氨 酸高 产菌 株 的摇瓶 发 酵试 验 ． 一 对 上 述 ６ 株菌 株 与 出发 菌株一 起 ， １ 进行 摇瓶
于含 抗 性 物质 （ 二 酸 、 胺胍 ） 丙 磺 的筛 选平 板 上 ， 培
养 得 到 的菌 株用 ０８ ％生 理盐 水 洗下 ，富集 培养 ．５ 并 进行 第 二 次 Ｄ Ｓ诱 变 ， 诱 变 三 次 ． 性 物 质 Ｅ 共 抗 浓度 随诱 变 的进 行逐 渐提 高 。 三 次诱 变后 ， 第 于筛 选平 板 上 培养 ３ ～ ｄ ｄ ４ ，挑 取单 菌 落 即得 到抗 性 突
基 本 培 养 基 ：葡 萄 糖 ５ ，硫 酸 铵 ２ Ｋ Ｈ Ｏ ， Ｐ
１ ，Ｋ ｚ０５ Ｍｇ Ｏ ・Ｈ Ｏ ．， 脂 １ ，Ｈ ７ — ０ Ｈ Ｐ ４ ， Ｓ ４７ ２ ０５ 琼 ５ｐ ． 基 中加入 一定 浓度
的抗性 物质 。 种 子 培 养 基 主 要成 分 为 ： 萄糖 ２ ， 米 浆 葡 ５玉
抗 性 平 板 筛选 ，得 到 一株 高转 化 率谷 氨 酸 菌株 。在 含 有 ８ ｇ ０／ 萄糖 的 发 酵培 养 基 中进 行 摇 瓶 发 酵 Ｌ葡
２ ｈ 糖 酸 转化 率较 原始 菌株提 高 了 ２ ．％。 ８， ２１
关 键词 ： 氨 酸棒 杆 菌 谷
谷氨 酸
诱 变 筛选
利 用 微 生 物发 酵 法 生 产谷 氨酸 已有 ５ Ｏ多 年
平 、 低 生产 成 本 的 有效 手 段 之 一 。相 对 于 构 建 降
基 因工 程 菌 株 而言 ， 利用 传 统 物 理 或化 学 诱 变 方
法 进行 处 理 ， 而 获 得 特异 性 的 突 变 菌株 的方 法 进
微量 营养 物质 ，Ｈ ７ ～ ．。 ｐ ． ７２ ０ １１ 仪器 与试 剂 ．． ３ 脉 动 真空灭 菌 柜 ， 家港 神农 药机 有 限公 司 ： 张 双 人超 净 工作 台 ，苏 州净 化设 备 厂 ； ＨＺ Ａ 型 Ｄ —Ｃ 回转式 摇 床 、 Ｈ —Ｄ 型往 复式 摇床 ，太仓 实验 Ｄ Ｚ Ａ 设 备 厂 ；Ｂ 一 ０ Ｓ Ａ ４ Ｃ生 物传 感 分 析仪 ，山 东省 科 学
１，ａ１ ， ０ Ｎ Ｃ 琼脂 １ ，Ｈ ７０ ７２ ５ ５ ｐ ．－ ．。
的历 史 ＿， ｌ 目前 我 国多 采 用 生 物 素 亚 适 量 型 菌 株 Ｊ 进 行 发 酵 生 产 。２ ０ ０ ８年 报 道 的 平 均 产 酸 约 为 １５ ／ ０ ｇＬ左 右 ， 酸转 化 率 约 为 ５ ％ ． 国 外 进 行 糖 ５ 与 的谷 氨 酸 强 制 发 酵 平 均 产 酸 为 １ ０ ／ １ ０ ／ ， ２ ｇＬ ６ ｇＬ 糖 酸转 化 率 高 于 ６ ％的水 平有 不 小 差距 ｌ ０ ２ Ｊ 现 。在 有 条件 和设 备一 定 的情 况下 ， 过 不 同方 法 定 向 通 选 育 高产 和 高效 谷 氨 酸 生 产菌 株 ， 是提 高 产 酸 水
第４ ０卷 第 ２期
２１ 年４ ０１ 月
发 酵 科 技 通 讯
诱变法筛选 高转化率谷氨酸棒杆菌
胡 炎 华 黄 南 张 祖 栋 李 岩
（ 梅花 生物 科技 集 团股份 有 限公 司 河 北廊 坊 ０５ ０ ） ６ ０ １
摘 要 ： 以谷 氨 酸棒杆 菌 ＭＨ ２ ０ １为 出发 菌株 ， 经硫 酸二 乙酯（ Ｅ ） 次诱 变处 理 ， 胺 胍 和 丙二 酸 Ｄ Ｓ三 磺