ELISA法HBsAg检测的注意要点

ELISA法HBsAg检测的注意要点
室内质控（IQC）是由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本室常规工作的重复性和精密度，提高本室常规工作中样本检验的一致性，保证每个患者样本验测结果的稳定性。

临床实验室常规HBsAg检验步骤很多，基本上可分为标本收集、实验室测定过程和结果报告及其解释等；规范化的、认真细致的测定过程可以杜绝过失误差，减少随机误差，及时发现系统误差，在室内质控中起着决定性作用。

现将我科HBsAg检测过程中的注意要点报道如下：
1 材料与方法
1.1主要试剂及设备上海科华生物技术有限公司生产的乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（批号20081217），省临验中心分发的HBSAg室内质控品（正常浓度批号为090040，病理浓度批号为090041），上海安泰生产酶标仪（AT－858）和洗板机（AT－828）。

1.2方法采用单克隆抗－HBS包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗－HBS－HRP，当标本中存在HBSAg时该HBsAg与包被抗－HBS结合并与抗－HBS－HRP结合形成抗－HBS－HBsAg－抗－HBS－HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。

2规范化操作及注意要点
2.1从冷藏柜中取出的试剂、质控品及待测标本均需室温平衡30分钟。

2.2待测标本、阴阳性对照及质控品应沿反应孔壁加入，不可有气泡。

2.3酶结合物、显色剂、终止液使用前应摇匀，并弃去1￣2滴垂直滴入。

2.4孵育的时间和温度应严格按试剂盒说明书操作。

2.5注意洗涤液不要溢出，防止污染它孔。

2.6洗板机选择洗涤5次程序，洗板后注意拍干。

2.7酶标仪读数时使用双波长（450nm和630nm），先用空白孔校零。

2.8封片不可重复使用。

2.9结果判断须在反应终止后10分钟内完成。

二个不同浓度的质控品随正常工作日患者样本一道，按试剂盒说明书同时检测。

3结果判断
样品OD值/阴性对照平均OD值≥2.1为阳性，否则为阴性。

阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。

4 造成HBSAg假阳性的原因分析
4.1待测标本溶血、长菌、混浊或含有血细胞，因此标本留取后应及时送检。

4.2洗板时因操作不当引起污染花板。

4.3洗板机设置不当或内部管道有真菌生长，日常工作中要注重仪器的保养和维护。

4.4实验中，实际孵育的时间过长，温度过高。

工作中应有细心及责任心。

4.5患者体内HBsAg阳性向HBsAb阳性转变的过程中偶有同时阳性的结果。

4.6RF因子阳性和服用某些药物的患者可能出现假阳性。

除以上主要原因外，仍有极少数不明原因的假阳性。

所以我们在检测过程中，应尽量避免操作的不当；出现可疑阳性结果的标本，应作重复检测，并结合其它指标，综合分析，必要时可做中和反应，验证其阳性结果的正确性。

5讨论
ELISA法检测HBsAg是建立在抗原和抗体免疫学反应基础上的，因而具有特异性，另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以崔化底物分子产生放大作用；因此，是一种既敏感又特异的方法；该方法已是检验科的常规检测项目，但我们应该意识其还存在着储多影响检测结果因素：⑴血液样品分离血清时要求放置室温凝固收缩，不宜置冰箱中凝固，否则会使大部分IgM和少量IgG 丧失活性。

⑵结合物的纯度、活力、催化效力要高且在检测和贮存过程中稳定。

⑶在孵育或洗涤过程中可能会有非特异蛋白吸附，增加本底颜色产生假阳性。

⑷作用时间：加底物后多长时间终止反应，应以阳性参考血清OD值为1为准，过长或过短都影响检测结果。

⑸结果判断：每次都要有阴阳性参考血清作对照，消除外界因素的干扰，等等。

综上所述，只是我在日常工作中的一点心得体会敬请各位评委批评指正。