人肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用检测

人肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用
检测
佟明华;陈思强;孔祥平;姚汝华;易学瑞;杨联萍
【期刊名称】《实用临床医学（湖北）》
【年(卷),期】2003(017)002
【摘要】目的构建肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵质粒，为进一步研究其相互作用蛋白奠定基础。

方法将人肝再生增强因子的编码序列重组入pGBKT载体中，经酶切及序列分析鉴定构建正确后，转化酵母AHl09菌株，转化子在SD／-His／-Trp选择培养基上培养；滤纸法β-半乳糖苷酶活性测定；Westem blot检测目的蛋白表达情况。

结果正确地构建了人肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-hALR，其酵母AHl09转化菌在SD／-Trp培养基上30℃培养65h，长
出φlmm菌落，而在SD／-Trp-His培养基上不生长，β-半乳糖苷酶活性检测呈
阴性。

Westem blot结果显示目的蛋白以35KD的融合蛋白形式表达。

结论诱饵质粒pGBKT7-hALR对宿主菌AHl09没有毒性作用，能稳定表达目的蛋白，不能自身激活报告基因，可用于酵母双杂交的筛选工作。

【总页数】3页(P16-18)
【作者】佟明华;陈思强;孔祥平;姚汝华;易学瑞;杨联萍
【作者单位】解放军第458医院传染病中心，广州510602;毕南理工大学生物工
程系
【正文语种】中文
【中图分类】Q784
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