海南粪箕笃根茎中总生物碱含量的测定

海南粪箕笃根茎中总生物碱含量的测定
作者：程彬戴华白丽丽
来源：《安徽农业科学》2015年第16期
摘要[目的]建立海南粪箕笃总生物碱含量测定的方法。

[方法]以盐酸小檗碱为对照品，溴甲酚绿为酸性染料，在缓冲溶液pH=5.4条件下，于421 nm波长处测定其吸光度。

[结果]粪箕笃在0～15.75 μg/ml浓度范围内线性关系良好（r=0.999 5），平均回收率为103.21%，
RSD=0.30%。

[结论]该法简便、灵敏度高、重复性好，可用于粪箕笃总生物碱的含量测定。

关键词粪箕笃；生物碱含量；分光光度法；根茎
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2015）16-067-02
Determination of Total Alkaloids in Rhizome of Stephania longa L. from Hainan Province
CHENG Bin1， DAI Hua2， BAI Lili1*
（1. School of Pharmaceutical Sciences， Hainan Medical University， Haikou， Hainan 571199； 2. School of Public Health， Hainan Medical University， Haikou， Hainan 571199）
Abstract[Objective] To establish a method for the determination of total alkaloids in Stephania longa L.from Hainan Province. [Method] With berberine hydrochloride as the control， bromocresol green as acid dye colorimetry， the content of total alkaloids in Stephania longa L. was determined by spectrophotometry at 421 nm and sodium citrate buffer solution at pH=5.4. [Result] The linear ranges of the total alkaloids were 0-15.75 μg/ml （r=0.999 5）. The average recovery was 103.21%
（RSD=0.30%）. [Conclusion] The method is simple， accurate and reproducible， which can be used for content determination of total alkaloids in S. longa.
Key words Stephania longa L.； Alkaloids content； Spectrophotometry； Rhizome
粪箕笃（Stephania longa L.）为防己科千金藤属植物，多年生草质藤本，广泛分布于广东、福建、台湾、海南等我国南部地区[1]。

在海南全省各地可见，生于村边或旷野灌木丛中，是天然的南药资源。

全株可入药，味辛、性平，具有清热解毒、利湿消肿、袪风活络、抑菌、镇静和镇痛等功效[2-3]。

该属植物富含生物碱，近年来对该属植物的化学成分及药理进行研究[4-8]，但有关粪箕笃总生物碱含量的测定鲜有报道。

笔者主要采用分光光度法，以盐酸小檗碱为对照品，对海南粪箕笃根茎中的总生物碱进行含量测定，为粪箕笃及其千金藤属其他植物的药用开发与利用奠定基础。

1材料与方法
1.1仪器
UV1600型紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器有限公司）；PHS-3C型酸度计（上海精密科学仪器有限公司）；B210S分析天平（北京赛多利斯有限公司）。

1.2试药
盐酸小檗碱标准品（中国药品生物制品检定所，批号110713-201212，纯度86.7%）；粪箕笃药材（采自海南
文昌），经海南医学院曾念开副教授鉴定为粪箕笃Stephania longa L.根茎，晾干粉碎后备用。

所用试剂均为分析纯，水为
蒸馏水。

1.3试验方法
1.3.1试液配制。

1.3.1.1对照品溶液的制备。

精密称取在110 ℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品10.1 mg置于50 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，按86.7%计算，即得175 μg/ml。

1.3.1.2供试品溶液的制备。

粪箕笃粉末约
2.0 g精密称量6份，置于圆底烧瓶中，用85%乙醇回流2 h，浓缩后经氯仿提取，于100 ml容量瓶中定容至刻度，低温冷藏、备用。

1.3.1.3显色液和缓冲液的配制。

按药典方法配制溴甲酚绿酸性染料溶液，以及pH=5.4的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液[9]。

1.3.2吸收波长的选择。

精密量取盐酸小檗碱对照品溶液和供试品溶液各0.5 ml，置分液漏斗中，加柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液5.0 ml，溴甲酚绿溶液
2.0 ml，摇匀，加入氯仿10.0 ml，充分振摇，静置1 h，分出氯仿层，于200～600 nm波长范围内进行扫描，同时以氯仿作为空白参比液。

1.3.3方法学考察。

1.3.3.1线性关系考察。

精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、0.9 ml，加水0.9、0.8、0.7、0.5、0.3、0.1 ml，按“1.3.2”项操作，充分振摇后，静置1 h，分出氯仿层。

室温放置40 min后，在421 nm下测定吸光度值，同时以氯仿为空白对照。

1.3.3.2稳定性考察。

取供试品溶液，在室温和室内光照条件下密闭放置，分别在0、5、10、30、60、120 min时测定吸光度值。

1.3.3.3精密度试验。

精密量取对照品溶液0.5 ml，余下操作同“1.3.2”项，依次测得吸光度值，以空白溶液作参比。

1.3.3.4重复性试验。

取供试品溶液6份，操作同“1.3.2”项，依次测得吸光度值，以空白溶液作参比。

1.3.3.5加标回收试验。

取6份供试品溶液，分别加入175 μg/ml盐酸小檗碱对照品溶液
0.23 ml，依照“1.3.2”项操作，在421 nm波长处测定吸光度值。

1.3.4总生物碱含量的测定。

取供试品溶液6份，每份0.5 ml，用氯仿定容至10.0 ml，按“1.3.2”项操作，分别测得吸光度值，根据标准曲线进行含量计算。

2结果与分析
2.1波长的选择
取供试品与对照品在200～600 nm的波长范围内进行扫描，结果显示（图1），盐酸小檗碱对照品溶液和供试品溶液均在421 nm处有吸收峰，而空白参比液在421 nm处没有吸收，故该试验选择421 nm作为测定波长。

图1对照品溶液（a）和空白参比液（b）全波长扫描图
2.2方法学考察
2.2.1线性关系的考察。

精确量取对照品溶液，在421 nm处测其吸光度。

以吸光度值为纵坐标、浓度（μg/ml）为横坐标绘制标准曲线（图2），得出线性回归方程为A=0.074 0C+0.014 5，相关系数r=0.999 5，在浓度0～15.75 μg/ml范围内线性关系良好。

图2标准曲线图
2.2.2稳定性试验。

平行测定6次，得其RSD=0.20%（n=6），表明供试品溶液在0～120 min内基本稳定，满足试验要求。

2.2.3精密度试验。

平行测定6次，得其RSD=0.16%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.2.4重复性试验。

平行测定6次，得其RSD=2.20%（n=6），表明重现性较好，符合试验要求。

2.2.5加标回收试验。

由表1可知，该法回收率为102.75%～10
3.57%，平均回收率为103.21%，RSD=0.30%（n=6），表明回收率较好，符合试验要求。

表1加标回收率试验结果
测量次数样品含量μg加标量μg吸光度回收率%平均回收率∥%RSD%
134.0540.250.630 9103.46103.210.30
234.0740.250.628 1102.96
334.0040.250.629 2103.23
434.0540.250.626 6102.75
534.0940.250.631 9103.57
634.0346.460.629 8103.31
2.3总生物碱含量的测定平行测定6份试液，由表2可知，粪箕笃根茎中总生物碱含量为0.38%～0.40%，平均含量为0.39%，RSD=2.20%（n=6）。

表2粪箕笃根茎中总生物碱含量测定结果
序号吸光度含量∥%
10.313 30.40
20.297 30.38
30.297 00.38
40.308 00.40
50.305 70.39
60.310 30.40
平均值0.305 30.39
3结论与讨论
采用分光光度法测定粪箕笃根茎中总生物碱含量平均为0.39%，操作简便快捷，灵敏度高，重现性好，测定结果准确可靠。

溴甲酚绿显色法测定总生物碱含量时，选择合适的pH很重要，其他条件对测定结果影响较小[10]，故该试验参考文献[9]选定pH=5.4。

该方法与液相色谱法比较，具有所用仪器简单、操作方便、耗时少的优点。

参考文献
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[10] 孟祥松，时军.溴甲酚绿比色法测定苦参总碱含量的研究[J].安徽医药，2007，11（1）：41-42.。