小鼠精巢细胞减数分裂标本制备与观察
小鼠减数分裂标本的制备及观察.
【实验内容】
一、标本制备过程 1. 处死动物，剥离睾丸。2. 取部分睾丸组织，匀浆取上皮细胞悬液。3. 悬液加入培养液小瓶，置培养箱内培养24小时。4. 培养终止前4小时， 加入秋水仙素。5. 收取细胞0.075mol/L KCL低渗处理。6. 1000rpm离 心8分钟，取沉淀。7. 甲醇：冰醋酸（3：1）固定。8. 滴片，Giemsa 染色，镜检。 二、标本的观察 1、 精原细胞有丝分裂中期相，明确小鼠染色体数目40条。 2、 使用油镜找出减数分裂各时相，着重观察第一次减数分裂的形态变化。 前期I：细线期；偶线期；双线期；终变期。 中期I：四分体排列在赤道面上； 后期I：同源染色体移向两极； 末期I：
二、绘制所观察的人口腔上皮细胞并注明基本结构。
Experiment 13
小鼠减数分裂标本 的制备及观察
【实验目的】
1. 理解小鼠睾丸组织减数分裂标本的制备技术 2. 掌握减数分裂过程中各期染色体的形态特征
【实验原理】
减数分裂是二倍体生殖细胞在形成配子时 的一种特殊的细胞分裂形式。通过小数鼠丸细胞 的体外培养以增加减数分裂相，获得分裂较高的 标本
动物生殖细胞有丝分裂过程
雌雄小鼠生期
终变期
中期I
后期
末期
【作
业】
一、分别求出使用低倍镜(10X)，高倍镜(40X)时目镜测微尺每格代表 的长度： 低倍镜：目镜测微尺每格代表的长度= 高倍镜：目镜测微尺每格代表的长度= 三、计算人口腔上皮细胞的核质比例。 计算细胞、细胞核体积的公式： 圆 形 V=4/3πr 3(r为半径) 椭圆形 V=4/3πab2(a、b分别为长、短半径) 核质比 N／D=Vn／(Vc—Vn)(Vn为核的体积，Vc是细胞的体积) ×lO(μm)= ×lO(μm)= μm μm
小鼠精巢生殖细胞减数分裂各时相识别
— 435 —CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.42 No.5 2019 解剖学杂志 2019年第42卷第5期* 2018年甘肃省高校科研基金项目（2018A-144，2018A-146） 第1作者E-mail ：wmxie2014@△通信作者，E-mail ： 2531295072@收稿日期：2019-03- 27；修回日期：2019-06-26doi ： 10.3969/j.issn.1001-1633.2019.05.001·论 著·小鼠精巢生殖细胞减数分裂各时相识别*谢文美 周凤娟△ 王 强 赵小荣 朱春燕（甘肃医学院，1 遗传病研究室，2 基础医学院生物教研室，平凉 744000）摘要 目的：识别鉴定哺乳动物小鼠精巢生殖细胞减数分裂各时相细胞。
方法：结合减数分裂过程染色体变化及秋水仙素抑制纺锤体形成原理，分析观察改良制作小鼠精巢生殖细胞减数分裂染色体标本，比较各时期细胞及染色体形态变化。
结果：鉴定出小鼠减数分裂第1次分裂、第2次分裂及精子形成过程各细胞形态特征图谱，并详细解析了识别各时期细胞染色体构型变化要点，同时也简要阐述了秋水仙素的应用对识别细胞各时相染色体的影响。
结论：小鼠精巢生殖细胞减数分裂染色体变化复杂，建立完整的清晰图谱可为减数分裂课程教学及染色体异常研究提供参考。
关键词 减数分裂；秋水仙素；染色体；性泡；小鼠Identification of the meiotic events in mouse spermatogenesis *Xie Wenmei ，Zhou Fengjuan △，Wang Qiang ，Zhao Xiaorong ，Zhu Chunyan（1. Laboratory of Genetic Disease ，2. Department of Basic Medical Science ，Gansu Medical College ，Pingliang 744000，China ）Abstract Objective ：To identify the chromosomal behavior characteristics of meiotic events in mouse spermatogenesis. Methods ：The chromosome changes of the mouse germ cells in meiosis were systematically observed by modified methods of germ cells in mice based on the changes of chromosome in meiosis process and the inhibition of spindle formation by colchicine. Results ：All the morphological characteristics of cells in the first division ，second division and sperm formation of mice were established ，and the main changes of cell chromosome configuration were analyzed. The effects of colchicine on cells to identify the chromosome changes were briefly described. Conclusion ：The establishment of complete and clear cell map in meiosis in mouse spermatogenesis provides reference for the teaching of meiosis course and the study of chromosome abnormalities.Key words meiosis ；colchicine ；chromosome ；sex body ；mouse减数分裂过程中不同时相染色体变化复杂，染色体减数分裂异常也是许多人类遗传病发生的主要原因之一。
减数分裂的观察
减数分裂的观察
目的要求 实验原理 实验用品 方法与步骤 实验结果裂过程及各个时期 的特点 2．掌握小鼠精巢减数分裂标本的制备过程
实验步骤
取花蕾长度在3~4mm，花药长度为 1~1.1mm的大葱花，投入Carnoy固定液中 固定1~2小时，也可将材料置于70%的酒 精中长期保存。 制片的方法同根尖染色体的制备方法。
减数分裂前期I
减数分裂中期I
减数分裂后期I
减数分裂后期I
减数分裂末期I
实验报告
在取材过程中需要注意的问题有哪些？ 绘图表示植物细胞减数分裂的各个时期。
实验原理
减数分裂（meiosis）是高等生物个体在形成生 殖细胞过程中发生的一种特殊的分裂方式。在 这个过程中，DNA复制一次，细胞连续分裂两 次，结果形成的生殖细胞染色体减半，称为减 数分裂。减数分裂是生物遗传与变异的细胞学 基础。
实验用品
1．器材：解剖器材，盖玻片，培养皿，吸管。 2．试剂：1NHCl，Carnoy固定液；改良苯酚品红。 3．实验材料：大葱花
小白鼠染色体标本的制作、染色与观察
小白鼠染色体标本的制作、染色与观察姓名：学号：实验时间：1.实验目的（1）初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。
（2）了解常用实验动物染色体的数目及特点。
（3）认识不同生物染色体的特征。
2.实验原理凡处于活跃增殖状态或者经过各种处理，任何动物组织的细胞都可进入分裂时期，均可用于染色体分析。
在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。
给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：①用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处；②用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上；③空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。
主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
3.实验材料和用品（1）材料：小白鼠（2）试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液（3）器材：解剖盘、解剖镊、解剖剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等4.实验步骤（1）小白鼠染色体标本制作①取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。
小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察
Isolation and staining of mouse meiotic metaphasechromosomes小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察xx 2011级生科四班201100140120 同组者：xx【实验目的】1、learn to isolate mouse testes cells and stain with Giemsa.学会分离小鼠睾丸细胞并用Giemsa染液染色2、Observe the number and morphology of mouse chromosomes观察小鼠染色体的数目及形态特征【实验材料】【Reagents】秋水仙素colchicine solution吉姆萨染液Giemsa stains solution生理盐水physiological saline氯化钾溶液KCl solution固定液fixation solution【Tools and equipments】Dissecting tray，beaker，centrifuge tube，microscope，glass slide，pipette，scissors，forceps，copper mesh.解剖盘，烧杯，离心管，显微镜，载玻片，吸管，剪刀，镊子，铜网【实验原理】meiosis is a process of reductional division in which the number ofchromosomes per cell is cut in half. In animals, meiosis always results in the formation of gametes, while in other organisms it can give rise to spores. 减数分裂是细胞分裂染色体数减半的过程，在动物中,减数分裂的结果总是在形成配子,而在其他生物可以产生孢子。
遗传学实验 减数分裂的制片与观察
实验二减数分裂的制片与观察PB12210261 徐导中国科学技术大学生命科学学院【摘要】本实验选取玉米雄花作为实验材料，首先将已固定好雄花的花药剥离出来，然后通过对花粉母细胞进行解离、染色、压片来观察细胞减数分裂的全过程。
【关键词】减数分裂细线期偶线期粗线期双线期终变期【Abstract】In this experiment, we chose Zea mays as the material. We got a lot of cells in meiosis. Then we disposed the cells in order to observe the whole processes of the meiosis.【Key words】Meiosis leptonema zygonema pachynema diplonema diakineses【实验部分】一、实验目的1、了解植物生殖细胞的形成过程；2、熟悉减数分裂各时期的特点，加深对减数分裂的认识；3、掌握植物花粉母细胞的压片技术和方法。
二、基本原理减数分裂（meiosis）,又称成熟分裂（maturation division）是在性母细胞成熟时，配子形成过程中所发生的一种特殊方式的有丝分裂。
性母细胞（2n）连续进行两次核分裂（第一次分裂和第二次分裂），形成四个染色体数目减半的配子(n)。
经过受精，雌雄配子（n）融合为合子，又恢复了体细胞染色体数目（2n）。
确保了亲代与子代间染色体数目的恒定性，从而保证了物种相对的遗传稳定性。
在适当的时候采集植物的花蕾制备染色体标本就可在显微镜下观察到植物细胞的减数分裂。
整个减数分裂可分为下列各个时期：第一次分裂前期Ⅰ减数分裂的特点之一就是前期Ⅰ特别长，而且又较复杂。
通常根据细胞核内结构变化特征又将这一期分成五个时期，即细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期。
细线期（leptotene）：这是减数分裂的开始时期，染色质开始浓缩为细而长的丝状，首尾不分，且细线局部可见到念珠状颗粒，即染色粒。
小鼠精巢细胞减数分裂标本的制备与观察
小鼠细胞分裂标本的制备与观察一、实验目的a)掌握小鼠精巢染色体标本制作法。
b)观察减数分裂过程中不同时期的染色体。
c)观察腹水瘤细胞有丝分裂中不同时期的染色体形态。
二、实验原理a)减数分裂（Meiosis）是发生于生殖细胞的一种特殊的细胞分裂方式，DNA复制一次，而细胞连续分裂两次，形成单倍体的精子和卵子。
减数分裂远比有丝分裂复杂，经两次细胞分裂，分别称减数分裂Ⅰ、减数分裂Ⅱ，两次分裂间又一个较短的间期，这个间期DNA不复制。
b)雄性动物精子发生于睾丸曲精细管的生精上皮细胞，由其中的精原细胞经多次有丝分裂和生长，形成初级精母细胞，初级精母细胞经减数分裂形成次级精母细胞，次级精母细胞有丝分裂成精细胞，再经一系列变化成精子。
c)因此，通过分离曲细精管、剪碎并加入液体吹打，可使官腔各种细胞游离出来，然后经过低渗、固定、染色等过程就可制成包含减数分裂各期的标本。
三、实验试剂及仪器a)材料：成年雄性小白鼠b)用品：注射器、平皿、尖头镊子、剪刀（普通剪刀、眼科小剪刀）、吸管、离心管、离心机、玻片等。
c)试剂：1、100μg/ml秋水仙素。
2 、2％柠檬酸钠溶液3、 0.075M的KCI4、3:1甲醇:冰醋酸及1:1甲醇:冰醋酸（应现配）5、PH6.8，0.01M的PBS缓冲液6、Gimesa原液7、Gimesa工作液：1份Gimesa原液加9份PH6.8，0.01M的PBS缓冲液，混匀。
工作液应现用现稀释。
四、实验步骤a)细胞收集i.小鼠精巢细胞收集1.注射秋水仙素，增加中期分裂相。
(试验前4－5小时，小鼠腹腔注射秋水仙素0.5ml（100μg/ml）。
2.取睾丸并清洗。
断颈处死小鼠，剖开腹部，取出肾形睾丸，放入盛有4－5 ml2％柠檬酸钠溶液的平皿中，洗去污血，去掉胞外脂肪等物。
3.挑出曲细精管并剪碎。
弃污液，另加柠檬酸钠溶液1 ml，用尖头镊尖将曲细精管拉出，并用眼科剪尽量将其剪碎。
4.游离并收集细胞。
小白鼠减数分裂实验报告
一、实验目的1. 了解减数分裂的基本过程和特点；2. 观察小白鼠睾丸中精原细胞减数分裂的各个阶段；3. 分析减数分裂过程中染色体的行为变化。
二、实验原理减数分裂是有性生殖过程中的一种特殊细胞分裂，其主要目的是将一对同源染色体分离，从而产生具有遗传多样性的配子。
在减数分裂过程中，染色体经历了两次分裂，形成了四个单倍体的配子。
本实验通过观察小白鼠睾丸中精原细胞减数分裂的各个阶段，了解减数分裂的过程和特点。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小白鼠睾丸组织、生理盐水、70%酒精、卡诺氏固定液、Hoechst33342染液、显微镜等；2. 实验仪器：解剖显微镜、显微镜、离心机、冰箱等。
四、实验方法与步骤1. 小白鼠处死，取出睾丸；2. 将睾丸放入生理盐水中清洗，去除多余组织；3. 将清洗后的睾丸放入70%酒精中固定，放置4℃冰箱过夜；4. 将固定好的睾丸取出，放入卡诺氏固定液中浸泡，放置4℃冰箱过夜；5. 取出睾丸，制成切片；6. 将切片放入Hoechst33342染液中染色，室温放置30分钟；7. 将染色后的切片取出，用蒸馏水清洗，去除多余染液；8. 将切片放入显微镜下观察，记录减数分裂各个阶段染色体的行为变化。
五、实验结果与分析1. 早期减数分裂（减数分裂I前期）在早期减数分裂阶段，染色质开始凝缩，形成染色体。
同源染色体开始配对，形成四分体。
本阶段观察到的染色体行为有：染色体凝缩、同源染色体配对。
2. 中期减数分裂（减数分裂I中期）在中期减数分裂阶段，同源染色体排列在赤道板上。
此时，染色体行为有：染色体排列在赤道板上、同源染色体分离。
3. 晚期减数分裂（减数分裂I后期）在晚期减数分裂阶段，同源染色体分离，分别移向两极。
此时，染色体行为有：同源染色体分离、染色体移向两极。
4. 早期减数分裂（减数分裂II前期）在早期减数分裂II阶段，染色质开始凝缩，形成染色体。
此时，染色体行为有：染色体凝缩。
5. 中期减数分裂（减数分裂II中期）在中期减数分裂II阶段，染色体排列在赤道板上。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
小鼠细胞分裂标本的制备与观察
一、实验目的
a)掌握小鼠精巢染色体标本制作法。
b)观察减数分裂过程中不同时期的染色体。
c)观察腹水瘤细胞有丝分裂中不同时期的染色体形态。
二、实验原理
a)减数分裂（Meiosis）是发生于生殖细胞的一种特殊的细胞分裂方式，DNA
复制一次，而细胞连续分裂两次，形成单倍体的精子和卵子。
减数分裂
远比有丝分裂复杂，经两次细胞分裂，分别称减数分裂Ⅰ、减数分裂Ⅱ，
两次分裂间又一个较短的间期，这个间期DNA不复制。
b)雄性动物精子发生于睾丸曲精细管的生精上皮细胞，由其中的精原细胞
经多次有丝分裂和生长，形成初级精母细胞，初级精母细胞经减数分裂
形成次级精母细胞，次级精母细胞有丝分裂成精细胞，再经一系列变化
成精子。
c)因此，通过分离曲细精管、剪碎并加入液体吹打，可使官腔各种细胞游
离出来，然后经过低渗、固定、染色等过程就可制成包含减数分裂各期
的标本。
三、实验试剂及仪器
a)材料：成年雄性小白鼠
b)用品：注射器、平皿、尖头镊子、剪刀（普通剪刀、眼科小剪刀）、吸管、
离心管、离心机、玻片等。
c)试剂：1、100mg/ml秋水仙素。
2 、2％柠檬酸钠溶液
3、 0.075M的KCI
4、3:1甲醇:冰醋酸及1:1甲醇:冰醋酸（应现配）
5、PH6.8，0.01M的PBS缓冲液
6、Gimesa原液
7、Gimesa工作液：1份Gimesa原液加9份PH6.8，0.01M的PBS缓
冲液，混匀。
工作液应现用现稀释。
四、实验步骤
a)细胞收集
i.小鼠精巢细胞收集
1.注射秋水仙素，增加中期分裂相。
(试验前4－5小时，小鼠腹
腔注射秋水仙素0.5ml（100mg/ml）。
2.取睾丸并清洗。
断颈处死小鼠，剖开腹部，取出肾形睾丸，放
入盛有4－5 ml2％柠檬酸钠溶液的平皿中，洗去污血，去掉胞
外脂肪等物。
3.挑出曲细精管并剪碎。
弃污液，另加柠檬酸钠溶液 1 ml，用尖
头镊尖将曲细精管拉出，并用眼科剪尽量将其剪碎。
4.游离并收集细胞。
将剪碎的曲细精管及溶液移入离心管中，用吸
管反复吸打1－2min，使尽量多的细胞从管腔中游离出来；静置
5 min（或300rpm离心2 min），使大的膜管状杂质下沉；吸含
有游离细胞的上清液于另一管中，1000 rpm离心5 min，沉淀即
为不同发育阶段的细胞。
ii.小动物骨髓细胞收集
1.处死动物，取长骨。
2.用剪刀剔除骨上所附肌肉及其他组织。
3.用剪刀剪开骨头两端。
4.用带针头的注射器吸取生理盐水将骨髓腔中细胞冲到小烧杯或
小平皿中，在转入离心管中。
b)细胞染色体标本制备（包括上述两种及腹水瘤细胞）
i.低渗处理，使细胞胀大,加入5 ml 0.075M的KCI，轻轻吹打混匀，
静置10 min。
ii.预固定. 向离心管中加入1ml 3:1甲醇:冰醋酸，轻轻吹打混匀，静置2 min，1000 rpm离心8min，弃上清。
iii.固定. 向上述沉淀中加入5 ml 3:1甲醇:冰醋酸，吹打混匀，静置10－20 min，1000 rpm离心8min，弃上清。
iv.再固定加5 ml 1:1甲醇:冰醋酸，吹打混匀，静置5 min，1000 rpm 离心8min，弃上清，加2-3滴1:1甲醇:冰醋酸固定液悬浮细胞。
(有
残余液就直接滴片，不用另加固定液）
v.滴片。
滴一滴细胞悬液于冰水中刚捞出的湿载波片上，自然干燥。
vi.染色。
Gimesa染液20-30 min,流水洗去多余染液，待干
五、实验结果
a)腹水瘤细胞湿片观察
上图当中，圆圈1内的为腹水瘤细胞分裂后期的染色体形态。
此时的染
色体较中期细，切此时的染色体不规侧，如图所示染色体基本分为两个
区域。
圆圈2内的为腹水瘤细胞为分裂前期的染色体形态。
圆圈3内的腹水瘤细胞为分裂间期的染色体形态。
分列前期与分裂间期的染色体形态的区别为：分裂间期的细胞核内的染色质分布均匀，颜色均匀；分列前期的时间比较长，所以染色体的形态也比较多种，有细胞核膜还存在的，但其中的颜色不均匀，还有细胞核膜已经解体的，但染色体比较凌乱，且比较紧密。
如图所示，圆圈1中所示的为腹水瘤细胞有丝分裂中期的染色体形态。
此时，染色体排列的较有规律，而且染色体也比较粗。
这个时期比较容易辨认，而且就观察所得，处于中期的细胞数量也比较多。
如图所示，圆圈1内的细胞可能为腹水瘤细胞有丝分裂末期的细胞。
（但是，观察的不是非常清楚，所以我也不能确认。
）
b)腹水瘤细胞干片观察
如图所示，为腹水瘤细胞有丝分裂的干片观察。
装片当中，细胞膜破裂的极少，只有少数细胞细胞膜破裂，可以看到里面的染色体，图中可以看到的染色体基本处于细胞分裂中期，因为细胞分裂中期也是最容易观察的。
c)精巢细胞的减数分裂观察（与a）中的形态基本相同的前期、中期等的
染色体形态就不再赘述，主要来看一下精巢细胞所特有的染色体及细胞形态）
如图所示，圆圈1当中的精巢细胞已经完成了减数分裂，但是细胞质的分裂还没有完成。
下拨之分裂完成以后及形成精细胞，在经过形态变化即可形成精子。
图中可见清晰的细胞膜、核膜以及染成深色的染色体。
圆圈2当中蝌蚪形的深色物质为细胞膜裂解后暴露在外面的精巢细胞的核。
图片拍的不是非常的清晰，但是可以看出上图所有完整的细胞但中都有
两个被染成了深色的核，触不可以判断该细胞正处于减数第一次分裂的
末期。
六、实验分析
a)实验中各种试剂的作用：100mg/ml秋水仙素，用于促进细胞分裂。
2％
柠檬酸钠溶液，用于对细胞进行清洗。
0.075M的KCI，用于细胞的膨大，
且因为浓度控制的刚好，所以细胞又不会破裂。
3:1甲醇:冰醋酸及1:1
甲醇:冰醋酸（应现配），用于固定细胞。
Gimesa原液，用于染色。
b)试验中腹水瘤细胞的观察分为干片和湿片。
湿片是将细胞悬液滴在已经
预先放在冰水当中湿润过的载玻片，使细胞破裂；而干片上的细胞基本
上不破裂。
七、注意事项
a)收集尽量多的细胞。
b)加入低渗液后一定要轻轻吹打，以免细胞核提前破裂，引起染色体外遗，
无规则排列。
c)染色要扣染，以免染液在玻片表面形成氧化膜，影响观察。
（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）。