竞争ELISA法测莱克多巴胺的残留

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莱克多巴胺残留检测方法及其进展

莱克多巴胺残留检测方法及其进展王雪霞1，刘晓云2，彭运平2(1.广州万孚生物技术有限公司，广东广州 510663)（2.广州正冠生物科技有限公司，广东广州 510663)摘要：本文系统介绍了食品安全中莱克多巴胺测试的意义，并对比分析了酶联免疫方法、免疫层析方法、高效液相法、质谱法、毛细管电泳法、免疫传感器法、化学发光免疫分析法的特点及优劣，并对其发展方向进行了分析和展望。

关键词：莱克多巴胺；残留；检测文章篇号：1673-9078(2010)9-1009-1012Reviews of Detection Methods and Devolvement of RactopamineW ANG Xue-xia1, LIU Xiao-yun2, PENG Yun-ping2(1.Guangzhou Wondfo Biotech Co., Ltd, Guangzhou 510663, China)(2.Guangzhou Zhengguan Biotech Co., Ltd, Guangzhou 510663, China)Abstract: The detection methods of ractopamine were introduced in this article. The disadvantages and advantages of different test method for ractopamine were analyzed, including ELISA, GICA, HPLC, LC/MS, CE, CLIA and so on.Key words: ractopamine; residue; detection;动物源性食品中违禁药物（如β-激动剂、激素、抗生素和精神类药物等）的残留已成了困扰世界范围内食品卫生的难题[1]。

药物残留不仅影响我国畜禽产品的出口贸易，同时威胁着消费者的健康。

应用ELISA方法检测猪尿中莱克多巴胺残留量

畜牧兽医科技信息2020年第05期莱克多巴胺(Ractopamine,RAC)是一种人工合成的苯乙胺类β-肾上腺受体兴奋剂类药物,具有促进动物生长、降低脂肪含量、提高肉类动物瘦肉率的作用，曾被商品猪生产者作为新型的“瘦肉精”在畜牧生产上代替盐酸克伦特罗添加使用，以提高经济效益。

一旦误食含有超标RAC 动物性食品极可能引起急性中毒及四肢肌肉颤动,心律失常,血压升高等症状，对人类健康造成了严重威胁。

2002年我国农业部第176号公告明确禁止在动物饲料和饮用水中添加RAC 等β-受体激动剂,将其列为兽药残留监控的重点对象。

目前，主要是采用间接竞争ELISA 检测试剂盒方法对莱克多巴胺残留量进行初筛。

该法适合对样本中莱克多巴胺进行定性或半定量检测，能在短时间内完成大批量样品的检测,且无需复杂的仪器设备,具有特异性强、灵敏度高、试剂稳定性高、试验效率高等优点。

由于商品化试剂盒生产商众多，试剂盒质量参差不齐，试剂盒的质量直接影响检测结果的准确性，为了验证ELISA 方法检测猪尿中莱克多巴胺残留量的可行性，对试剂盒的灵敏度、精密度、准确性进行了验证，现将试验结果报告如下。

1材料与方法猪尿，采自东莞市中心定点屠宰场。

Multiskan FC 型酶标仪，购自美国Thermo 公司。

莱克多巴胺盐酸盐，购自曼哈格BePure ，批号：301314，纯度97.0%；莱克多巴胺ELISA 试剂盒,购自浙江迪恩生物,批号：70119。

将试剂盒中所有试剂置于22~25℃条件下回温1h 以上。

猪尿样品2500rmp/min 离心3min 。

在微孔板中加入50μL 的标准溶液/猪尿样品，立即在所有孔中加入100μL 酶标工作液，轻轻晃动反应板几秒钟，在22～25℃条件下孵育10min ，倒掉微孔中的液体，所有微孔置于洗板机洗板中洗板4次，每次每孔250μL 清洗液。

将微孔板倒扣在吸水纸上拍干，加入100μL 显色剂，晃动反应板使之混匀，22～25℃下显色10min ，加入100μL 终止液。

用ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量

用ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量孔令勇;彭会建;何根山;陈阿明;沈培庆;盛祖勋【期刊名称】《广东饲料》【年(卷),期】2006(15)4【摘要】近年来全社会对“瘦肉精”猪非常关注．政府出台了一系列相关法律法规。

加大了对生产、销售以及在猪饲料、饮水中添加“瘦肉精”等违禁药物的打击力度．同时对饲料、尿样、内脏中“瘦肉精”残留量的检测水平和检测频率也有了很大的提高，对不法分子起了较大的震慑作用。

但由于利益的驱使，加之对“瘦肉精”替代品的检测仍处于起步阶段，违法活动并没有停止。

现有证据表明。

在市场上出现用莱克多巴胺作为“瘦肉精”替代品用于养猪生产中。

本试验用ELISA方法对吴江市区域内生产和销售的中大猪配合饲料进行莱克多巴胺含量检测，以摸索有效、快速的莱克多巴胺检测方法。

【总页数】2页(P44-45)【作者】孔令勇;彭会建;何根山;陈阿明;沈培庆;盛祖勋【作者单位】吴江市畜牧兽医站,江苏,吴江,215200;吴江市畜牧兽医站,江苏,吴江,215200;吴江市畜牧兽医站,江苏,吴江,215200;吴江市畜牧兽医站,江苏,吴江,215200;吴江市畜牧兽医站,江苏,吴江,215200;吴江市畜牧兽医站,江苏,吴江,215200【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.用胶体金免疫层析法检测饲料中莱克多巴胺含量 [J], 张志健;王晓菲;戴绚丽2.间接ELISA法筛选阳性克隆在莱克多巴胺检测中的的应用 [J], 张怀珠;温科3.畜禽尿液中莱克多巴胺含量测定(ELISA法)不确定度分析 [J], 范万东;张端平;蒋玉明;陈长银4.用ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量 [J], 孔令勇;彭会建;何根山;陈阿明;沈培庆;盛祖勋5.ELISA试剂盒与LC-MSMS法检测动物排泄物及饲料中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的比较研究 [J], 贺健强; 刘刚; 梁德勇; 尹青青; 栾小康; 杨珍; 崔晓辰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

莱克多巴胺残留分析方法研究进展

《止在饲料和动物饮用水中使用的药禁
２７０，定量离子（／）。６、５２ｍｚ：２ｉＯ
戊烷磺酸钠溶液作为流动相，Ｃ１分８柱
离．该方法在１￣０ｐ／．１０，Ｌ线性范围０ｇ内，相关系数大于０９９，检测限为．８９０３ｇ，定量限为１ｂ／。邓国东．￣／Ｌ．￣ＬＯｇ等［采用反相高效液相色谱法测定猪４１尿中的莱克多巴胺，比较了不同离子盐环境对色谱峰的影响。采用乙腈
分析方法的研究进展，包括液相色谱法、气相色谱一质谱法、液相色谱一质
磺酸盐溶液为流动相，采用Ｃ１８柱进行药物峰与杂质峰的分离。莱克多巴
基和氨基．属于高沸点、难拘发的化
加，就要监控食品动物饲养的每一个环节，重点监测饲料中的非法添加物，
以及对动物尿液、屠宰后动物组织等进行多方位的抽查检测。本文从对莱
（０戊烷磺酸钠（．７）则莱克多巴２）一０８ｇ
孙建文等翻采用液相色谱荧光法测定动物组织中的莱克多巴胺，乙腈一
促生长剂，用于美国、加拿大等２０多个国家，但被欧盟、日本等１０多个５国家禁用。我国先后发布了《品动食物禁用的兽药及其化合物清单》和

莱克多巴胺Rac定量检测试剂盒ELISA

莱克多巴胺（Rac）定量检测试剂盒（ELISA）利用说明书一、概要β兴奋剂是一种人和兽医作为医治哮喘的药物。

在家畜中超剂量利用能够脂肪组织转化为肌肉组织，由于能够显著改善脂肪率和生产效率，β兴奋剂往往被滥用于畜牧养殖生产中。

已经有克伦特罗或其他β兴奋剂中毒的病例报导，近来又有一些非法利用莱克多巴胺（Rac）来替代克伦特罗作为饲料添加，并存在滥用现象。

通常情形下，HPLC或GC-MS是克伦特罗残留检测的确证方式，可是其前处置步骤繁琐、费用昂贵。

酶联免疫快速检测试剂盒具有本钱低廉、操作简便、一次处置样本量大等优势，已成为常规的初步筛查方式。

本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，与仪器分析技术相较具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、用途定量检测动物尿液中莱克多巴胺（Rac）的残留。

三、检测原理本试剂盒采纳竞争酶联免疫实验。

检测的基础是抗原抗体反映，微孔板预包被羊抗鼠IgG 捕捉抗体，加入鼠抗莱克多巴胺抗体后，会与捕捉抗体连接。

通过孵育及洗板后，加入标准品、样品及莱克多巴胺酶标记物（Rac-HRP），游离的莱克多巴胺（Rac）与莱克多巴胺酶标记物（Rac-HRP）竞争莱克多巴胺抗体结合位点。

通过孵育及洗板后，加入底物并孵育。

结合的酶连接物将底物转化为蓝色的产物。

加入反映终止液后使颜色由蓝转变成黄色。

在450 nm 处测量，吸光度值与样品中的莱克多巴胺浓度成反比，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数即可得出样品中莱克多巴胺的含量。

四、检测限检测限：ml（）五、特异性交叉物交叉率（%）Dobutamine……………………………………Ritodrine………………………………………Ractopamine …………………………Ractopamine Gluc B (384)(1S,3S) –Ractopamine…………………………(1R,3S)-Ractopamine……………………………Isoxsuprine………………………………………Salmeterol…………………………………………Fenoterol…………………………………………Clenbuterol……………………………………<Salbutamol………………………………………<六、试剂盒组成每一个盒中的试剂足够进行 96 个实验（包括标准测定），试剂盒中的组份如下：一、96孔酶标板1块（12孔×8条）：预包被羊抗鼠IgG二、标准液×6瓶（1ml/瓶）：0ng/mL、mL、mL、mL、mL、mL3、酶连接物（6mL）：辣根过氧化物酶标记的莱克多巴胺工作液4、莱克多巴胺抗体（6mL）：鼠抗莱克多巴胺单克隆抗体工作液五、底物液A（6mL）：过氧化脲6、底物液B（6mL）：四甲基联苯胺（TMB）7、终止液（6mL）：2N H2SO48、浓缩洗涤液（25×）（25mL）：含Tween-20的磷酸盐缓冲液（PBST）9、其他：封板膜3张，自封袋1个，说明书1份七、样本处置处置任何样本，必需利用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要改换吸头。

猪尿中莱克多巴胺免疫分析技术检测研究应用进展

３．３免疫芯片法（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｉｐａｓｓａｙ）
ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ
磊等研究报道，通过构建以功能化微珠表面竞争性免疫反应为基础的流控芯片体系，利用该系统检测莱克多巴胺结果表明，其检测时间小于４５ｒａｉｎ，检测限达到了０．０３ｕｇ／ｍＬ，免疫芯片法具有高通量、快速、高效、操作简便、成本低、自动化程度高等优点，具有巨大的研发潜力和良好的应用前景，是目前动物性产品中有害物残留检测领域研究热点之一。３．４免疫亲和层析技术（Ｉｍｍｕｎｅ
２０１６．２３钢砑，萄３９
检淘４鸣、析！篓婴—Ｎ—Ｇ—Ａ…ＮＤ．ＩＮ…Ａ一１。Ｙ…ＳＩＳ一
３．１酶联免疫吸附法（Ｅｎｚｙｍｅａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ）酶联免疫吸附法是一种以竞争性酶联反应原理为基础的检测技术，它结合了抗原抗体反应的特异性和酶的高效性，是最常用于检测猪尿中莱克多巴胺等残留的快速筛选方法。裴道国等报道．利用酶联免疫吸附法检测莱克多巴胺，最低检测限可达到０．１ｎｇ／ｍＬ．平均回收率在９０％和７０％之间。王凤侠等先合成ＲＡＣ的多克隆抗体，再通过竞争酶联免疫检测莱克多巴胺，其检测限可达到０．１斗ｇ／Ｌ。Ｓｈｅｌｖｅｒ等用ＥＬＩＳＡ方法检测ＲＡＣ，检测限为ｌｎｇ／ｍＬ，变异系数小于１０％．回收率在８８％～１０１％之间。ＥＬＩＳＡ法具有高效、快速、灵敏、操作方便等特点，所需器材简单易得．用来进行大批量样品的初步筛选，是日前检测部门应用的主要方法，此方法仅作为初筛方法，需用气相质谱或液相质谱进行确证。３２胶体金免疫层析法（Ｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｓｓａｙ，ＧＩＣＡ）ＧＩＣＡ是以胶体金作为显色媒介的一种新型快速检测技术，利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合的原理，在层析过程中完成这一反应，从而达到检测的目的。该方法已经发展成为诊断试纸，使用非常方便。蒋蔚等报道，利用ＧＩＣＡ研制出的试纸条对莱克多巴胺进行检测，可在短时间（８～】０ｒａｉｎ）完成．其检测结果可以通过肉眼进行判断。胶体金免疫层析技术具有简单、快速、特异、灵敏的特点，结果判断直观，成本低、无污染，样品前处理简单、显色时间短且所有试剂包含在一根试纸条上，不需要借助相关仪器，检测效率能得到很大提高，适合大规模样品的现场检测，具有广阔的市场前景和应用价值。

莱克多巴胺(Ractopamine)ELISA 检测试剂盒说明书

地址：北京市海淀区西北旺镇东北旺南路1号院东南1号房电话：+86-10-82771310 82773503 82771993 827729271莱克多巴胺(Ractopamine)ELISA 检测试剂盒说明书本试剂盒可以在尿样、血清、饲料、组织等生物样品中酶免定性、定量检测莱克多巴胺的残留量。

提供的材料与试剂1、可拆96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原）2、标准液×6瓶：（1.5ml/瓶）0ppb ，0.3ppb ，0.9ppb ，2.7ppb ，8.1ppb ，24.3ppb3、高浓度标准品：（1.5ml/瓶） 100ppb4、抗体工作液 10ml ………………………绿色帽5、酶标二抗 7ml ………………………透明帽6、底物液 A 液 7ml ………………………白色帽7、底物液 B 液 7ml ……………………… 红色帽8、终止液 7ml ………………………黄色帽9、20×浓缩洗涤液 40ml ………………………透明帽 10、20×浓缩提取液 50ml ………………………蓝色帽一、概述莱克多巴胺（Ractopamine ）是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物，属β-兴奋剂，是一种营养重分配剂，可加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率。

欧盟已禁止将β-兴奋剂作为家禽的生长促进剂，我国在《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中也有明文规定，但由于莱克多巴胺属于非处方药，且价格远低于克仑特罗，因此非法使用者有不断增多的趋势。

本试剂盒是应用ELISA 技术研发的新一代药物残留检测产品，操作时间仅需1.5小时，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA ，在酶标板微孔条上预包被上偶联抗原，样本中残留的莱克多巴胺和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB 底物显色，样本吸光度值与其所含莱克多巴胺含量成负相关，通过标准曲线换算出相应的值，再乘以样品稀释倍数，即可得出样品中莱克多巴胺的残留量。

莱克多巴胺检测标准

ICS 65.120 B 46备案号：DB33饲料中莱克多巴胺的测定Determination of ractopamine in feedstuffs浙江省质量技术监督局发布前言本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了酶联免疫法、高效液相色谱－荧光检测法和气相色谱-质谱法。

本标准由浙江省农业厅提出并归口。

本标准由浙江省畜产品质量安全检测中心、浙江省疾病预防控制中心负责起草，浙江一星集团饲料有限责任公司参与起草。

本标准主要起草人：陈慧华、吴平谷、应永飞、任玉琴、屈健、周文海、陈勇、浦琴华。

饲料中莱克多巴胺的测定1 范围本标准规定了以酶联免疫（ELISA）法、高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法检测饲料中莱克多巴胺的方法，规定GC－MS法为仲裁法。

本标准适用于饲料和饲料添加剂中莱克多巴胺的测定。

酶联免疫（ELISA）法为筛选方法，检测限为0.01mg/kg，高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法为定量方法，定量限HPLC法为0.1mg/kg、GC－MS法为0.05mg/kg。

线性范围：酶联免疫（ELISA）法为0.005ng-0.05ng，高效液相色谱（HPLC）法为2.5ng-10ng，气相色谱－质谱（GC－MS）法为0.05ng-1.0ng。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1 饲料采样方法3 试样制备按GB/T 14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。

浅谈畜产品中莱克多巴胺的检测方法

浅谈畜产品中莱克多巴胺的检测方法作者：李政清，聂婉，伍晓红，等来源：《江西饲料》 2016年第3期李政清，聂婉，伍晓红，陈秋玲，王琤韡①（江西科技师范大学生命科学学院南昌330013）摘要：介绍了莱克多巴胺的组成与危害，酶联免疫法（ELISA）、胶体金免疫层析法（GICA）、高效液相色谱法（HPLC）、质谱联用法（MS）、毛细管电泳法（CE）、免疫传感器法和化学发光免疫分析法(CLIA) 等莱克多巴胺的检测方法。

关键词：莱克多巴胺; 检测; 畜产品中图分类号：S816.17 文献标识码：A 文章编号：1008-6137（2016）03-0011-030 引言近年来，畜产品中莱克多巴胺的问题越来越严重，面对日益严重的问题，莱克多巴胺检测方法愈加先进，本文对莱克多巴胺检测技术做一概述，以期对畜产品安全监察有一定的参考作用。

1 莱克多巴胺的组成与危害莱克多巴胺·盐酸又称激动剂，是一种苯酚胺类β-肾上腺素兴奋剂。

其结构以两种非对应异构形式存在，分别为RS、SR、RR和SS。

市场销售的莱克多巴胺为其盐酸盐，是RS、SR、RR、SS 4种异构体的混合物，其中异构体RR是莱克多巴胺主要生物活性异构体。

莱克多巴胺的过量摄取会引起神经兴奋，出现肌肉振颤、恶心、头疼、呕吐等症状。

用量巨大可能引发高血压、心脏病严重的可导致死亡。

本文针对莱克多巴胺的检测方法做简略介绍。

2 莱克多巴胺的检测方法2.1 酶联免疫法（ELISA）目前莱克多巴胺检测应用最广的方法是竞争性ELISA。

随着单克隆抗体技术的发展，莱克多巴胺的检测由传统的多抗体检测试剂盒转型为选工业生产化简单且选择性强的单克隆抗体检测试剂盒，灵敏度可达0.5 ng/mL，并建立了单抗的酶联免疫分析方法，可检测动物组织（肉、肝脏）、尿样、饲料中的莱克多巴胺残留。

竞争ELI?SA分为两种，分别是直接竞争ELISA与间接竞争ELISA，相比之下国内莱克多巴胺ELISA检测试剂盒多为间接竞争ELISA，而国外检测试剂盒多为直接竞争ELISA。

酶联免疫吸附法检测猪肉和猪尿中莱克多巴胺残留

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喜甍与拱添裁２９第ｌ第２饲加ｏ年４期ｏ卷
酶联免疫吸附法检测猪肉和猪尿中菜克多巴胺残留
张亚峰，张会彩，刘聚祥，王建平
（北农业大学动物科技学院．河北保定河０１０７００）
心管中（白样品按ｌ４ｇｇ加ＲＣ）加入ｌ空～０ｎ／添Ａ，０ｍＬ丙酮．动１ｍｎ后再２００ｒｎ离心１ｉ涡ｉ０ｍｉ／０ｍｎ
美国５０型ＢｏＲｄ酶标仪：５ｉａ２ＪＢ型组织捣卜２
１０ＬＴ０ＭＢ系统底物显色液，７℃显色１ｉ，３５ｒｎ最ａ
准检测方法是液相色谱法、气相色谱一谱法和液质
相色谱一串连质谱法仪器法虽可定性定量检测，但设备昂贵，步骤繁琐，费时费力。ＥＩＡ法可同时对ＬＳ大批量样品进行快速筛选，操作简单。本文采用ＥＩＡ法对猪肉和猪尿中ＲＣ残留检测进行了研ＬＳＡ究和探讨．以供参考
摘要：莱克多巴胺单克隆抗体『接竞争酶联免疫吸附（ＬＳ￣以日】ＥＩＡ）
定猪肉和猪尿中莱克多巴胺残留。该法对
莱克多巴胺的检测限为０８ｎ／Ｌｇ，空白组织中的添加回收率为８．１９５，异系数为５８１．．ｇ（）在ｍ０４％～０．变％．％～２％。６

莱克多巴胺

莱克多巴胺（Ractopamine，RAC）ELISA检测试剂盒说明书产品编号：3K30200-001.【概述】莱克多巴胺(Ractopamine，RAC) 属β- 兴奋剂类药物。

它可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被作为养殖促进剂使用。

其残留经食物链进入人体可导致头痛、头晕、胸闷、心悸、四肢麻木等中毒症状，对消费者的健康构成极大危害。

国家卫生部、农业部、药品监督管理局发出的公告明确禁止莱克多巴胺在食用动物中使用。

莱克多巴胺酶联免疫试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于现场大批量样品检测。

2.【试验原理】采用直接竞争法，样品中的莱克多巴胺与酶标板上固定的抗原竞争酶标记的抗体，通过酶催化显色剂显色，根据显色的深浅来判断样品中的含量。

样本吸光值与其含有的莱克多巴胺呈负相关。

3.【适用范围】可定性、定量检测尿样中的莱克多巴胺。

4. 【试剂盒组份】4.1 标准品×6 瓶* 1ml/ 瓶4.2 莱克多巴胺酶标板：1块（8孔*12条）4.3 莱克多巴胺抗体工作液：1瓶(6ml)4.4 酶结合物工作液：1瓶（6ml）4.5 浓缩样品稀释液：1瓶（10×, 30ml）4.6 浓缩洗涤液：1瓶(20×,40ml)4.7 浓缩肉样提取液：1瓶(50×,12ml)4.8 底物液A 液1瓶：7ml4.9 底物液B 液1瓶：7ml4.10 终止液1瓶:7ml4.11 说明书1 份4.12 质控报告1 份4.13 盖板膜1 张4.14 自封袋1 个★注：标准品浓度为0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。

5.【使用单位需自备的设备及试剂】5.1 仪器设备：5.1.1 微孔板酶标仪450nm/630nm5.1.2 均质器5.1.3 振荡器5.1.4 旋涡混合器5.1.5 离心机5.1.6 氮吹仪5.1.7 微量移液器5.1.8 计时器5.2 试剂：5.2.1针对组织样品一的样品乙腈、乙酸乙酯、正己烷（或正庚烷）5.2.2 针对于饲料样品1M NaOH溶液:称取4gNaOH加去离子水溶解并定容至100ml。

莱克多巴胺对健康的危害及其检测方法研究

莱克多巴胺对健康的危害及其检测方法研究莱克多巴胺是“瘦肉精”的替代品，对人体健康有极大的危害。

长期以来各种因非法使用β-兴奋剂造成的中毒事件时有发生。

目前常用的检测方法有色谱法和免疫分析法。

标签：莱克多巴胺危害检测1 概述莱克多巴胺（Ractopamine）与盐酸克伦特罗（俗称“瘦肉精”）一样，属于β-兴奋剂类药物，在我国都是严禁在动物养殖过程中作为饲料添加剂的药物。

β兴奋剂有着非常广泛的生理作用，作为兽药，在临床上常被用于治疗支气管哮喘、支气管痉挛和产科疾病[1，2，3]。

当莱克多巴胺的使用量为临床使用量的5～10倍时，具有增加胴体蛋白质含量，促进骨骼肌合成，减少脂肪组织，改善肉质的作用[4]，是良好的营养重分配剂和生长促进剂，可以有效提高瘦肉率和饲料使用率。

2 对人体健康的危害2.1 危害动物性食品中激素的残留量虽然很低，但其一旦通过食物链进入人体，会对健康产生极大的危害，人体中毒后常表现为心跳过速、心率失常、肌肉震颤、头晕头痛、呕心呕吐、发热寒战等症，特别对患有“富贵病”等症的病人及免疫力较低的老人和儿童危害更大，甚至会导致死亡[5]。

莱克多巴胺的毒性作用虽然没有“瘦肉精”强，但是如作为饲料添加剂长期使用，其致癌、致畸、致突变的作用有待深入研究。

莱克多巴胺属于激素，会产生肾上腺样作用，会导致过敏反应，可使机体免疫功能下降[6]。

同时兽药通过动物的粪便、尿液排泄污染生态环境，也会间接危害人类健康[7]。

2.2 中毒事件自从1998年香港发生第一起“瘦肉精”中毒事件后，近二十年来，我国因非法添加β-兴奋剂而导致的食物中毒事件屡见不鲜。

国外也常有相关的食物中毒事件的报道。

目前包括我国在内的许多国家都不允许β-兴奋剂用于食用动物的促生长。

我国农业部发布的《关于严禁非法使用兽药的通知》中，明令禁止将β-兴奋剂等药物作为饲料添加剂使用。

由于我国加大了打击非法使用“瘦肉精”的力度，使得畜肉产品中“瘦肉精”的检出率大大降低。

畜产品中莱克多巴胺残留的快速检测

１试验试剂．２
在４ｈ８后测不到放射性残留，但肝脏和肾脏仍可测到放射性残留，而０休药期莱克多巴胺在猪肝脏中的总残留为脂肪组织的１倍。美国ＦＡ设定的人９Ｄ每日最大摄人量（Ｄ）１５ｇｋ，ＡＩ为．／ｇ推算出的组织２中药物残留最高限量为肌肉中０２ｐｍ，脂肪．ｐ５１ｐｍ，．ｐ肾脏１ｐｍ，脏０５ｐ同时设定莱克５．ｐ肝５．ｐｍ，７多巴胺的休药期为０，ｄ即上市前无须休药期。１９年以来，国农业部等相关部门多次发文，９７我禁止生产和使用“ 肉精”但是仍有很多瘦肉精中瘦，毒事件发生，重威胁消费者的健康。因此检测动物严
试验研究
畜产品中菜克多巴股残留的快速检测
邱建琴，左晓磊
（河北省石家庄市畜牧水产局。石家庄０００）５００
摘要：莱克多巴胺属于１类肾上腺激素，３因具有“ 减脂增肉” 的作用而被广泛用于畜牧生产中，但在动物机体中有较大的残留时会严重威胁人类健康。检测莱克多巴胺有多种方法。ＥＩ而ＬＳＡ应用抗原抗体反应，够对猪尿、肝中的莱克多巴胺残留快速进行检测筛选，而有效控制瘦肉精在能猪从
作者简介：建琴（９６，邱１５～）高级畜牧师，北鹿泉河人，主要从事动物营养及畜产品等方面研究检测管理工作。
甲醇（分析纯、０；ｍｏ／ＨＣ；ｍｏＨ— １％）０ｍＬＬＬ１ｍＵＬ０５０

DB34T 827-2008 尿液中莱克多巴胺的残留测定酶联免疫吸附法.pdf

ICSDB34备案号：安徽省质量技术监督局发布前言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。

本标准由安徽省质量技术监督局批准。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。

本标准起草人：许世富、明文庆、汤春莲、陶小平。

本标准于2008年8月1日首次发布。

尿液中莱克多巴胺的残留测定——酶联免疫吸附法1 范围本标准规定了尿液中莱克多巴胺检验的制样和酶联免疫吸附测定方法。

本标准适用于尿液中莱克多巴胺的残留常规快速测定。

本标准检测限为0.1μg/L，线性范围：0.0075ng～0.25ng。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 试样制备采集的尿样应保存于4℃左右的冰箱中。

尿样如有混浊，应经离心处理。

4 原理本方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：反应在已包被有莱克多巴胺多抗的塑料微孔中进行，将莱克多巴胺标准品或样品、酶标物加入微孔，温浴时，游离的和酶标记的莱克多巴胺竞争结合莱克多巴胺抗体的结合位点。

所有未反应的酶标物在洗涤步骤中被清除，结合了的酶可以由显色剂显示出来，因为酶可以使无色的显色剂转变成蓝色，反应终止液的加入则可以使蓝色变成黄色，吸收值可以在450nm处进行测定。

颜色变化的程度反映样品中莱克多巴胺的含量，在一定浓度范围内吸光度的高低与样品中莱克多巴胺的含量成反比。

5 试剂和溶液5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。

5.2 竞争酶标免疫法莱克多巴胺试剂盒，2℃～8℃冰箱中保存。

5.2.1 微孔板：包被有莱克多巴胺多抗。