莱克多巴胺检测标准
用酶联免疫法检测猪肉中莱克多巴胺含量
用酶联免疫法检测猪肉中莱克多巴胺含量摘要用酶联免疫法对某区域内的猪肉进行莱克多巴胺含量检测，结果表明：在低添加水平为0.012 5mg/kg、0.025 0mg/kg、0.050 0 mg/kg、0.100 0mg/kg、1.000 0mg/kg时，均能将莱克多巴胺检出，该法具有灵敏度高、简单、快捷的优点。
关键词猪肉；莱克多巴胺；酶联免疫法近年来全社会对“瘦肉精”猪非常关注，政府出台了一系列相关法律法规，加大了对生产、销售以及在猪饲料、饮水中添加“瘦肉精”等违禁药物的打击力度，同时对饲料、尿样、内脏中“瘦肉精”残留量的检测水平和检测频率也有了很大的提高，现有证据表明，莱克多巴胺作为“瘦肉精”替代品已在养猪生产中被使用。
对于莱克多巴胺含量的测定，常用的检测方法有分光光度法、液相色谱法和气相色谱法等。
本试验用酶联免疫方法对某区域内的猪肉进行莱克多巴胺含量检测，以摸索有效、快速的莱克多巴胺检测方法。
1材料与方法1.1材料与试剂样品来源：采自某区域销售的5份猪肉样品。
莱克多巴胺标准品，纯度99.5%，购自中国药品生物制品检定所；超纯水由Milli-Q liocel纯水器制备；莱克多巴胺标准溶液，质量浓度为10ug/mL，用莱克多巴胺标准品自行配制。
1.2仪器96孔的酶标板；BP310S电子分析天平，感量为0.001g，Sartorius公司；RJ-TDL-40B离心机，转速为4 000rmp，锡市瑞江分析仪器有限公司；Wellscan MW．3型酶联检测仪，芬兰Labsystems；MS2型漩涡混合器，IKA公司；100μL 可调微量移液器，美国RAININ。
1.3试验方法1.3.1样品前处理。
加4倍样品抽提缓冲液到适量的样品中，用均质器混匀。
称取1.4g均质样品，4 000rmp在室温（20～25℃）下离心5min，转移0.5mL上清液到管子里，75℃孵育5min，最大速度涡旋1min。
4 000rmp室温离心5min，转移0.2mL上清液到1个新管子里，加5μL样品平衡缓冲液，混合，稀释因子为4。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定—气质联用技术
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.4结果计算
计算结果小于本标准检出限0.5ug/kg时，视为未检出
2 液质联用法检测瘦肉精
备注 在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更
多使用液质联用。
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.3主要步骤 5.振荡均匀，放入37℃水浴 锅震荡16h 放置一夜 （备注：样品中有油脂，需要加入正己烷；若无油脂，无需加入正己烷） 6.离心 9000r/min 7min 7.上清液过滤（用漏斗、定量滤纸）到另一新管,用乙酸铵冲洗滤纸
详细过程参考实训指导书或国标GB-T22286-2008
2 液质联用法检测瘦肉精
2.2实验方法与主要步骤
2.2.2主要仪器: 高效液相色谱-串联质谱联用仪:配有电喷雾离子源（ESI）、 均质器、 漩涡混合器 离心机 氮吹仪、 真空过柱装置。
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.3主要步骤 （1）提取 1.称取5g样品（均匀取样）于50ml离心管中，
2.1原理
试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节pH值，沉淀蛋白后离心， 上清液用异丙醇-乙酸乙酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱串联质谱法测定，内标法定量。
2 液质联用法检测瘦肉精
2.2实验方法与主要步骤
2.2.1主要试剂 甲醇（液相色谱纯） 乙酸钠 高氯酸 氨水甲醇溶液 标准储备溶液； 混合标准储备溶液； 同位素内标物:克仑特罗-D9， 沙丁胺醇-D3，纯度大于98%等
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法吹干样液，吹到似干非干干为止； （6）用1ml 0.1 甲酸/水—甲醇定容； （7）超声后放沃悬器沃悬30s-1min； （8）用注射器吸需要样液，经0.22微米滤膜除杂，转入进样瓶 3.液相色谱串联质谱测定
莱克多巴胺
莱克多巴胺盐酸莱克多巴胺英文名称：ractopamine原料名称：翻译成莱克多巴胺也有人翻译成雷托巴胺化学名称：1-（4-羟基苯基）-2[1-甲基-3-（4-羟基苯基）-丙氨基]-乙醇盐酸盐理化性质：可溶于水，微溶于丙酮，可溶于乙醇，PH 值：6～7，呈中性，熔点：159.8℃质量标准：最低含量99%（高压液相法）化学分子式：C18H23NO3Cl 分子量：337.83海关编码：2922.1100化学分类：苯基乙醇胺类用途：盐酸莱克多巴胺是一种医药原料，一种可用于治疗冲血性心力衰竭症的强心药。
还可以用于治疗肌肉萎缩症，增长肌肉，减少脂肪蓄积，并对胎儿和新生儿生长有益。
美国FDA在2000年批准，可以用于动物营养重新配剂，广泛地用于畜牧业和养殖业。
可以同时提高动物的日增重，提高饲料利用率，提高动物的蛋白质含量。
PAYLEAN（莱克多巴胺）对商品猪的影响和利用商品猪生产者的目的是高效率地生产出瘦肉率高质量好的猪肉以跟其他的动物产品竞争。
瘦肉胴体的定价系统导致了对瘦肉生长速度、胴体瘦肉率和饲料报酬的进一步选择。
健康、营养和设备管理策略的推行都是为了尽可能地提高瘦肉生长效率。
但是盐酸克伦特罗在全世界养猪业中的使用都是违法的，最近美国FDA批准的盐酸莱克多巴胺在猪中使用后，美国养猪户把使用前后是"黑夜与白天的差别"。
应承认盐酸莱克多巴胺能否在中国批准生产和使用需大量试验验证和相当一段时间。
以下叙述权当抛砖引玉！Paylean是一种饲料添加剂，是美国Elanco Lilly 公司的注册商标并被美国FDA于今年7月份批准生产仅在养猪生产中使用，它能进一步提高肌肉组织生长速度和效率。
它含有莱克多巴胺的盐酸盐，是提高肌肉蛋白生长和饲料效率的小分子。
Ractopamine是phenethanolamines 成员之一。
Paylean不是一种激素、类固醇、抗生素，也不是生物工程产物。
它已经被证实在150~240的最后90磅体重期间的饲料中添加4.5~18克/吨，已经被美国食品药物管理局广泛而反复评估了其有效性和安全性。
快灵生物莱克多巴胺检测卡
快灵生物莱克多巴胺检测卡说明书
检测原理：
快灵生物莱克多巴胺检测卡基于胶体金免疫层析技术。
莱克多巴胺检测卡检测时，样品中的莱克多巴胺在流动过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体与固相载体膜上的莱克多巴胺-BSA偶联物的结合，如果样品中的莱克多巴胺含量大于检测灵敏度，T线在规定时间内不显颜色，结果为阳性，反之，T线显红色色带，结果为阴性。
无论检测液中莱克多巴胺浓度高低，C线均显红色色带。
检测样品：尿液、动物组织、血清、饲料等。
灵敏度：尿液（3ppb、5ppb）、动物组织（5ppb）、饲料（20ppb）（灵敏度仅供参考，产品实际灵敏度优于所列）
检测时间：5分钟
特异性：使用莱克多巴胺检测卡检测100ug/ml盐酸克伦特罗、群勃龙醋酸酯、磺胺类、氯霉素类、大环内酯类、氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类和四环素类等药物，结果均呈阴性。
产品用途：快灵莱克多巴胺检测卡基于竞争法胶体金免疫层析技术，用于快速筛查莱克多巴胺(瘦肉精)超标的样品。
结果解释：
阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。
22151271_盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检验方法的简化与验证
“瘦肉精”是一种特定的可用来减少被饲养动物脂肪、增加其瘦肉比例的药物的俗称。
传统型瘦肉精一般是指β－受体激动剂，是一类人工合成的苯乙醇胺类物质，包括克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、异丙喘宁、氯丙那林、西马特罗与非诺特罗等，其中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺最为常见。
该类药物在动物性食品中的残留会对消费者的身体造成不同程度的影响，对于易感人群危害更为严重[1-2]。
2002年，β－受体激动剂被列入《食用动物禁用兽药及其他化合物清单》[3]。
现阶段，对β－受体激动剂和喹乙醇及其代谢物的检测方法较多。
刘佳等[4]建立了一种检测猪肝中26种β2-受体激动剂药物残留的反相液相色谱-串联质谱方法；金玉娥等[5]也采用液相色谱—串联质谱测定了猪肉和猪肝中11种β2-受体激动剂，上述检测方法取得了比较理想的结果。
但上述研究的前处理过程都比较复杂，一般包括酶解、提取、固相萃取的过程，比较费时费力。
GB/T 21313-2007[6]的检验方法中用高氯酸溶液进行提取，众所周知，高氯酸为强氧化易爆品，具有较高的危险性，在实验室使用具有较大的安全隐患。
本研究对GB/T 21313-2007的检验方法进行调整，用盐酸溶液代替高氯酸溶液进行提取，简化过柱净化程序，提高实验效率，降低上机液杂峰干扰。
1 材料与方法1.1 试验原理试样中β-受体激动剂残留经酶解后，再用盐酸溶液提取，经过滤和离心后，上清液用MCX固相萃取柱净化，液相色谱/串联质谱仪测定，外标峰面积法定量。
1.2 试验仪器液相色谱Agilent1200；二级串联质谱Agilent6410；万分之一分析天平；水浴锅。
1.3 试剂甲酸（99%）；乙腈，色谱纯；甲醇，色谱纯；乙酸，分析纯，乙酸钠（NaAc·4H2O）；盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液：准确称取0.010 0 g标准品（色谱纯≥99.5%），用甲醇溶解并定容至10 mL，即可得浓度为1 000 mg/L的标准储备液，-18 ℃保存，有效期12个月。
莱克多巴胺(Ractopamine)ELISA 检测试剂盒说明书
地址：北京市海淀区西北旺镇东北旺南路1号院东南1号房 电话：+86-10-82771310 82773503 82771993 827729271莱克多巴胺(Ractopamine)ELISA 检测试剂盒说明书本试剂盒可以在尿样、血清、饲料、组织等生物样品中酶免定性、定量检测莱克多巴胺的残留量。
提供的材料与试剂1、可拆96孔酶标板×1块 （包被有偶联抗原）2、标准液×6瓶：（1.5ml/瓶）0ppb ，0.3ppb ，0.9ppb ，2.7ppb ，8.1ppb ，24.3ppb3、高浓度标准品：（1.5ml/瓶） 100ppb4、抗体工作液 10ml ………………………绿色帽5、酶标二抗 7ml ………………………透明帽6、底物液 A 液 7ml ………………………白色帽7、底物液 B 液 7ml ……………………… 红色帽8、终 止 液 7ml ………………………黄色帽9、20×浓缩洗涤液 40ml ………………………透明帽 10、20×浓缩提取液 50ml ………………………蓝色帽一、概述莱克多巴胺（Ractopamine ）是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物，属β-兴奋剂，是一种营养重分配剂，可加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率。
欧盟已禁止将β-兴奋剂作为家禽的生长促进剂，我国在《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中也有明文规定，但由于莱克多巴胺属于非处方药，且价格远低于克仑特罗，因此非法使用者有不断增多的趋势。
本试剂盒是应用ELISA 技术研发的新一代药物残留检测产品，操作时间仅需1.5小时，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA ，在酶标板微孔条上预包被上偶联抗原，样本中残留的莱克多巴胺和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB 底物显色，样本吸光度值与其所含莱克多巴胺含量成负相关，通过标准曲线换算出相应的值，再乘以样品稀释倍数，即可得出样品中莱克多巴胺的残留量。
中华人民共和国出入境检验检疫标准 莱克多巴胺
中华人民共和国出入境检验检疫标准莱克多巴胺一、概述进口食品安全一直是中华人民共和国政府高度重视的问题。
莱克多巴胺作为一种禁用于食品生产的激素物质，在出口食品中的含量一直备受关注。
本文将探讨中华人民共和国出入境检验检疫标准莱克多巴胺相关的法规和政策。
二、莱克多巴胺的禁用和管控莱克多巴胺是一种广泛使用于动物饲料中的生长促进剂，但在肉类和食品生产中被严格禁止使用。
在中华人民共和国，莱克多巴胺在养殖业中被禁用，而且在进口的肉类和食品中的含量也受到严格管控。
中华人民共和国食品药品监督管理局和出入境检验检疫局发布了相关的法规和政策，对于莱克多巴胺的使用和含量做出了明确规定。
三、出入境检验检疫标准1. 进口食品检验标准根据中华人民共和国食品安全法和相关法规，出入境检验检疫局对进口食品的莱克多巴胺含量有严格的监管标准。
进口肉类和食品中的莱克多巴胺含量必须符合中华人民共和国国家标准，否则将被禁止进口并进行相应的处理。
2. 出口食品检验标准对于出口的肉类和食品，中华人民共和国出口商需要严格遵守目的国家的法规和标准。
对于莱克多巴胺的使用和含量必须符合目的国家的要求，并且在出口前需要提供相关的检验报告和证明文件。
四、对违规行为的处理在进口食品中发现莱克多巴胺超标的情况下，中华人民共和国出入境检验检疫局将对违规行为进行严厉处罚。
相关企业将被要求立即停止进口并进行整改，同时可能面临罚款和其他行政处罚。
对于重大违规行为，相关企业甚至可能被列入黑名单，影响其今后的出口和进口业务。
五、结语中华人民共和国出入境检验检疫标准对莱克多巴胺的使用和含量做出了明确的规定，旨在保障进口食品的安全和质量，并且遵守目的国家的法规和标准。
对于违规行为的处理也体现了中华人民共和国政府对食品安全问题的严肃态度。
希望企业和个人能够遵守相关法规，提高食品安全意识，共同维护食品质量和用户权益。
以上就是本文对中华人民共和国出入境检验检疫标准莱克多巴胺相关的法规和政策的探讨，希望对读者有所帮助。
饲料中莱克多巴胺的HPLC法测定(精)
饲料中莱克多巴胺的HPLC法测定摘要用碱性甲醇提取试样中的莱克多巴胺，经SLA固相萃取柱净化，浓缩后用2％乙酸溶液定容，过膜后用高效液相色谱－荧光检测法分离测定；色谱柱类型Waters Symmetry C18柱，250mm×4.6mm（i.d.），粒径5μm；流动相为戊烷磺酸钠溶液∶乙腈(体积比80∶20)；激发波长为226nm，发射波长为306nm；流速1ml／min；进样量50μl；饲料中莱克多巴胺的检测限为0.5mg/kg；莱克多巴胺的测定在0.02～0.50μg／ml范围内具有良好的线性关系，平均回收率在85.1％以上，RSD小于7.5％；方法简单，灵敏度高，可用于饲料中莱克多巴胺的含量测定。
关键词莱克多巴胺；残留；饲料；高效液相色谱法中图分类号 S816.7莱克多巴胺是苯乙醇胺类β2－肾上腺素兴奋剂，能促进动物体蛋白质沉积，抑制脂肪沉积，具有营养“再分配效应”[1,2]。
因此，有人用来作为饲料添加剂，提高猪酮体的瘦肉率。
但是，动物在饲用含莱克多巴胺的饲料后，会造成肌肉及组织中不同程度的残留，使用不当将导致消费者出现不同程度的中毒现象。
为保障人民的身体健康和生命安全，保障畜牧业的健康持续发展，我国已经明确将其列入禁用药品目录。
然而，在饲料或饲养过程中违法使用莱克多巴胺的现象已经出现，并有蔓延之势。
由于莱克多巴胺是一种新型的β2－肾上腺素兴奋剂，目前的检测方法和检测标准很少[3,4]，特别是国内尚未见文献报道。
因此探索饲料中莱克多巴胺的检测方法具有很重要的意义。
我们比较了提取剂、提取方法、固相萃取柱、萃取试剂、流动相对提取效果的影响，在此基础上对HPLC 测定方法进行了系统考察，即线性范围、重复性试验、稳定性试验、加标回收率等，最终确定了一套比较理想的检测条件。
1 实验部分1.1 仪器与试剂Waters 2695高效液相色谱仪；Waters W-474荧光检测器；PE LS-45型荧光分光光度计；KQ-500超声波振荡器；Sigma 2k15冷冻离心机；BüCHI B-490旋转蒸发仪；MS2 minishaker漩涡混匀器；METTLER AG-285电子天平；氮吹仪；SLA固相萃取柱（500mg/5ml），杭州富裕科技服务有限公司提供。
生鲜牛乳中莱克多巴胺的测定
患者危害更大 ， 严重的危及生命 ， 国严禁在饲料 中添 我
加使用。 １ 材 料 与 方 法
比进用于 ，
溶解干燥 的残 留物。
洗涤Ｔ作液 ：用水将 ２ 倍浓缩洗涤液按 １ ９ Ｏ ： 体 １
积 比进行稀释 （ 份 ２ １ ０倍浓缩洗涤液＋ ９份灭菌水 ） １ ， 用于酶标板 的洗涤 。 １ 仪器和设备 － ３ 酶标仪 ：配备 ４０ｎ ５ ｍ滤光片 Ｒ － ０ ０ 深圳霖杜 Ｔ ６０ ， 生命科学股份有限公 司； 振荡器 Ｅ ： 津市三水科学 １ 天 １ 仪器 有限公 司 ； 冷冻离心机 Ｌ １上海 医用仪器 厂 ； ３： 微
ａｓｍｐｅ ｒ ｐ ｄ ａ ｃ ｒｔ ｎ ｅ ｓｔ ｅ ａ ｄ ｔ ｅｓ ｉ ｅ ｅ ｏ ｅｙｒ ｔ ｆｅ ｔ ｌｗ ｅ ｅ ｔ ｎ ｌ ｔ ｉ， ｏ ｄｓａ ｉ ｔ， ｉ ｌ， ａ ｉ ， ｃ ｕ ａｅａ ｄ ｓ ｎ ｉｖ ， ｎ ｈ ｐ ｋ ｄ ｒｃ ｖ ｒ ａｅｅｆｃ，ｏ ｄ ｔｃｉ ｍｉ ｋ ｔｇ ｏ ｔｂｌ ｙ ｉ ｏ ｉ ｉ ｇ ｏ ｅ ｒ ｄ ｃｂｌｔ ｎ Ｏｏ ． ｏ ｄ ｒｐ ｏ ｕ ｉ ｉ ｙａ ｄＳ ｎ ｉ
Ｚ Ａ ＧＪｎ ｍ ｉ ＷＵＸａ— ｉｇ， Ｉ ｉ ｕ ｎ， Ｉ ｈ ｏ， Ｕ ａｇ， Ｈ Ｎ ａ ＭＡＷｅ－ ｏ ｇ Ｈ Ｎ － ｅ ， ｉ ｍ ｎ ＬＵＷｅ ｊａ ’Ｌ ｕ Ｘ ＥＧ ｎ ’Ｚ Ａ ＧＹ ｈ， ｎ ｈｎ ｕ ｏ － Ｚ
莱克多巴胺免疫胶体金快速检测试剂板 使用说明书
莱克多巴胺免疫胶体金快速检测试剂板使用说明书【产品简介】本产品用于快速检测猪肉中莱克多巴胺残留，灵敏度为5μg/kg（ppb），整个检测过程只需要15～25分钟，适用于各类企业及检测机构。
【产品组成】莱克多巴胺免疫胶体金快速检测试剂板（50份/盒）RAC专用PBST（1瓶/盒）说明书（1份/盒）【配套器具】滴管（50支/盒）5mL刻度冷冻管（50个/盒）1.5mL离心管（50个/盒）【样品处理】猪肉样品应当避光冷藏保存。
1称取4g左右剪碎的猪肉样本装于5mL刻度冷冻管中，盖紧管盖，于90℃以上水浴锅中水浴10分钟；2冷却至常温后，取4滴煮出的溶液（尽量吸取肉汁中上清）于1.5ml离心管中，再加入4滴RAC专用PBST，充分混合，待检。
【使用步骤】测试前先完整阅读使用说明书，并将试剂板和待检样本溶液恢复至常温（20~30℃）。
♦从包装袋中取出试剂板后请尽快使用；♦用滴管吸取待检样品溶液，于加样孔中滴加4滴（约100μL），加样后开始计时；♦结果应在3~5分钟读取，其他时间判读无效；♦读取结果时，试剂板水平置于观察者正面，如上图右侧所示。
【结果判断】阴性（－）：T线（检测线，靠近加样孔一端）显色，表明样品中莱克多巴胺浓度低于5ng/mL，或不含莱克多巴胺。
阳性（＋）：T线无显色，则表明样品中莱克多巴胺浓度高于5ng/mL。
无效：未出现C线（对照线），可能是操作不当或试剂条已失效。
应再次阅读说明书，并用新的试剂板重新测试。
【注意事项】♦请勿触摸试剂板中央的白色膜面；♦请勿使用过期的试剂板；♦切勿重复使用配备的滴管，以免交叉污染；♦切勿食用配备的试剂；♦若需直接检测标准品，请用本公司提供的PBST缓冲液进行配制。
【特异性】本产品与链霉素、四环素、氯霉素、磺胺类等药物无交叉反应。
【精密度】同时用本产品和莱克多巴胺ELISA检测试剂盒对260份样品包括140份阴性样本和120份阳性样本进行检测，结果表明本产品与莱克多巴胺ELISA检测试剂盒的结果符合率为93.6％。
莱克多巴胺对健康的危害及其检测方法研究
莱克多巴胺对健康的危害及其检测方法研究莱克多巴胺是“瘦肉精”的替代品，对人体健康有极大的危害。
长期以来各种因非法使用β-兴奋剂造成的中毒事件时有发生。
目前常用的检测方法有色谱法和免疫分析法。
标签：莱克多巴胺危害检测1 概述莱克多巴胺（Ractopamine）与盐酸克伦特罗（俗称“瘦肉精”）一样，属于β-兴奋剂类药物，在我国都是严禁在动物养殖过程中作为饲料添加剂的药物。
β兴奋剂有着非常广泛的生理作用，作为兽药，在临床上常被用于治疗支气管哮喘、支气管痉挛和产科疾病[1，2，3]。
当莱克多巴胺的使用量为临床使用量的5～10倍时，具有增加胴体蛋白质含量，促进骨骼肌合成，减少脂肪组织，改善肉质的作用[4]，是良好的营养重分配剂和生长促进剂，可以有效提高瘦肉率和饲料使用率。
2 对人体健康的危害2.1 危害动物性食品中激素的残留量虽然很低，但其一旦通过食物链进入人体，会对健康产生极大的危害，人体中毒后常表现为心跳过速、心率失常、肌肉震颤、头晕头痛、呕心呕吐、发热寒战等症，特别对患有“富贵病”等症的病人及免疫力较低的老人和儿童危害更大，甚至会导致死亡[5]。
莱克多巴胺的毒性作用虽然没有“瘦肉精”强，但是如作为饲料添加剂长期使用，其致癌、致畸、致突变的作用有待深入研究。
莱克多巴胺属于激素，会产生肾上腺样作用，会导致过敏反应，可使机体免疫功能下降[6]。
同时兽药通过动物的粪便、尿液排泄污染生态环境，也会间接危害人类健康[7]。
2.2 中毒事件自从1998年香港发生第一起“瘦肉精”中毒事件后，近二十年来，我国因非法添加β-兴奋剂而导致的食物中毒事件屡见不鲜。
国外也常有相关的食物中毒事件的报道。
目前包括我国在内的许多国家都不允许β-兴奋剂用于食用动物的促生长。
我国农业部发布的《关于严禁非法使用兽药的通知》中，明令禁止将β-兴奋剂等药物作为饲料添加剂使用。
由于我国加大了打击非法使用“瘦肉精”的力度，使得畜肉产品中“瘦肉精”的检出率大大降低。
莱克多巴胺检测卡说明书(完整版)
莱克多巴胺（ractopamine）金标快速检测卡——（胶体金法）使用说明书【产品名称】通用名称：莱克多巴胺金标快速检测卡（胶体金法）英文名称：ractopamine汉语拼音：LaiKe DuoBaAn JinBiao KuaiSu JianCeKa【摘要】本速测卡专门用于检测动物尿样中的莱克多巴胺的快速筛查，整个检测过程只需要3-5分钟，不需要任何仪器设备，最低检测限为5ng/ml。
【检测原理】莱克多巴胺（ractopamine）是一种肾上腺受体激动剂，可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
人食用了饲喂莱克多巴胺的禽畜产品后，残留的莱克多巴胺可对消费者的健康构成极大危害。
因此，中国政府禁止在饲料中使用莱克多巴胺来增加动物的瘦肉率。
莱克多巴胺快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测尿液中的莱克多巴胺。
根据检测卡样品测试线(T)和对照线(C)的有无来判定样品中的莱克多巴胺含量。
具有简单快速，无需特殊的仪器设备等特点，既可以在实验室进行，也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。
结果准确，饲料样品灵敏度为10ppb，组织、肉样、肝脏样品灵敏度为5ppb，准确率大于95%。
【试剂盒组成】1.莱克多巴胺快速检测卡50头份2.说明书1份3.PE手套5只【标本收集】尿样标本必须收集在洁净、干燥、不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。
若不能及时送检，尿样标本在2-8℃冷藏可保存24小时。
长期保存需冷冻-20℃，忌反复冻融。
【操作步骤】1、测试前必须将未开封的检测卡和待测样本进行室温平衡。
2、从铝箔袋中取出检测卡（在一小时内使用）。
3、将检测卡平放，用塑料吸管垂直滴加2-3滴无气泡样本液（约60 µL--80µL）于加样孔，开始计时。
【判定结果】检测结果应在5分钟时读取，半小时后结果判读无效；阳性：在观察孔内，若对照线显色，但检测线不显色，说明样品中莱克多巴胺的含量高于5ppb。
畜产品中莱克多巴胺残留的快速检测
在 ４ｈ ８ 后测不到放射性残留，但肝脏和肾脏仍可测 到放射性残留，而 ０ 休药期莱克多 巴胺在猪肝脏中 的总残 留为脂 肪组织 的 １ 倍 。美 国 Ｆ Ａ设定 的人 ９ Ｄ 每 日最 大摄 人 量 （ Ｄ ） １ ５ ｇｋ ， Ａ Ｉ为 ． ／ｇ推算 出的组 织 ２ 中 药 物 残 留 最 高 限 量 为 肌 肉 中 ０２ｐ ｍ， 脂 肪 ． ｐ ５ １ ｐｍ， ． ｐ 肾脏 １ ｐｍ， 脏 ０ ５ｐ 同 时设 定 莱 克 ５ ．ｐ 肝 ５ ． ｐｍ， ７ 多巴胺的休药期为 ０ ， ｄ 即上市前无须休药期。 １９ 年 以来 ， 国农 业部等 相关部 门多次发 文 ， ９７ 我 禁止生产和使用“ 肉精”但是仍有很多瘦 肉精 中 瘦 ， 毒事 件发生 ， 重威胁 消费者 的健 康 。因此检测 动物 严
试 验 研 究
畜产品 中菜 克多巴股 残 留的快速检 测
邱 建 琴 ，左 晓磊
（ 河北 省 石家庄 市 畜牧水 产局 。石 家庄 ００ ０ ） ５ ０ ０
摘 要 ：莱克 多巴胺属于 １ 类肾上腺激素 ， ３ 因具有“ 减脂增 肉” 的作用而被广泛用于畜牧生产 中， 但在动物机体 中有较大的残留时会严重威胁人类健康。 检测莱克多巴胺有 多种方法。 Ｅ Ｉ 而 ＬＳ Ａ应用 抗原 抗体 反应 ， 够对猪 尿 、 肝 中的 莱克 多 巴胺 残 留快速 进行 检 测 筛选 ， 而有 效控制 瘦 肉精在 能 猪 从
作 者 简 介 ： 建 琴 （９６ ， 邱 １５ ～） 高级 畜牧 师 ， 北鹿 泉 河 人 ，主要从事动物营养及 畜产品等方面研究检 测管 理 工作 。
甲醇（ 分析纯 、 ０ ； ｍ ｏ ／ＨＣ ； ｍ ｏ Ｈ— １ ％） ０ ｍ ＬＬ Ｌ１ ｍ ＵＬ ０ ５ ０
DB34T 827-2008 尿液中莱克多巴胺的残留测定酶联免疫吸附法.pdf
ICSDB34备案号：安徽省质量技术监督局发布前 言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。
本标准由安徽省质量技术监督局批准。
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。
本标准起草人：许世富、明文庆、汤春莲、陶小平。
本标准于2008年8月1日首次发布。
尿液中莱克多巴胺的残留测定——酶联免疫吸附法1 范围本标准规定了尿液中莱克多巴胺检验的制样和酶联免疫吸附测定方法。
本标准适用于尿液中莱克多巴胺的残留常规快速测定。
本标准检测限为0.1μg/L，线性范围：0.0075ng～0.25ng。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 试样制备采集的尿样应保存于4℃左右的冰箱中。
尿样如有混浊，应经离心处理。
4 原理本方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：反应在已包被有莱克多巴胺多抗的塑料微孔中进行，将莱克多巴胺标准品或样品、酶标物加入微孔，温浴时，游离的和酶标记的莱克多巴胺竞争结合莱克多巴胺抗体的结合位点。
所有未反应的酶标物在洗涤步骤中被清除，结合了的酶可以由显色剂显示出来，因为酶可以使无色的显色剂转变成蓝色，反应终止液的加入则可以使蓝色变成黄色，吸收值可以在450nm处进行测定。
颜色变化的程度反映样品中莱克多巴胺的含量，在一定浓度范围内吸光度的高低与样品中莱克多巴胺的含量成反比。
5 试剂和溶液5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。
5.2 竞争酶标免疫法莱克多巴胺试剂盒，2℃～8℃冰箱中保存。
5.2.1 微孔板：包被有莱克多巴胺多抗。
莱克多巴胺
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2014年7月12日，台北市环保局在木栅垃圾焚化厂，销毁重7 490 kg的含瘦肉精进口美国牛肉。2014年2、 3月间，台湾爆发瘦肉精争议。这批含动物用药莱克多巴胺（俗称瘦肉精）进口美国牛肉，都是来自遭封存下架退 货的树森公司基隆、高雄两地仓储，其中瘦肉精含量最高的部分肉品，达2.9ppb（浓度单位）。
一、莱克多巴胺是一种β-兴奋剂类化合物，属于第二代瘦肉精
莱克多巴胺是一种人工合成的β-肾上腺受体激动剂（俗称β-兴奋剂）类化合物，是由美国制药公司研究出 的毒性小、代谢快的克伦特罗替代品，属于第二代瘦肉精。因其具有调节蛋白质合成的作用，国外也称为蛋白质 再分配剂（Repartitioner），在临床上主要用于治疗支气管哮喘、充血性心力衰竭症和肌肉萎缩症等。
检测方法
一、液相方法 试剂和溶液 乙腈和甲醇：色谱纯；甲醇、二氯甲烷、正己烷：分析纯；2%冰乙酸：取5ml冰乙酸，用水定容到250ml。 提取液：取900ml甲醇，用水定容到1 000ml,再加2ml浓盐酸，混匀。 流动相：取320ml乙腈，用水定容到1 000ml，再加20ml冰乙酸和0.87g戊烷磺酸钠，混匀。 莱克多巴胺标准贮备液：准确称取莱克多巴胺（纯度≥99%）0.100 0g，置于100ml容量瓶中，用甲醇溶解， 定容，其浓度1 000μg/ml的贮备液，置4℃冰箱中保存。 克仑巴安标准工作溶液：分别准确吸取一定量的标准贮备液，置于10ml容量瓶中，用2%冰醋酸稀释、定容， 配制成浓度为0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml的标准溶液，分别进 HPLC检测。 仪器和设备 高效液相色谱仪：配荧光检测器；离心机；振荡器；微孔滤膜（0.45μm）。
液相色谱-串联质谱法检测饲料中的莱克多巴胺
关键 词 ： 质联 用 ； 液 检测 ； 料 ； 克 多 巴胺 饲 莱
１ ｌ ｌ 乙 酸 溶 液 ：准 确 移 取 冰 乙 酸 （ ．） ． ｍｏ Ｌ ９ ／ １ ４ 莱克 多 巴胺 也称 盐 酸莱 克 多 巴胺 ． 一 种 医 是 药 原料 ．可 用 于治 疗 充血 性 心力 衰竭 的强 心药 ．
定 浓 度 范 围 内成 正 比 ， 样 与 工 作 曲 线 比 较定 量 。 实验 ， 试 经
１ 甲酸 ： ． ５ 色谱 纯 ：
１ 三 水合 乙酸钠 ： ． ６ 优级 纯 ；
１ ＭＣ 混 合 型 阳 离 子 固 相 萃 取 净 化 小 柱 ： ． ７ Ｘ
６ ｍｇ３ｍＬ； ０ ／
肪 蓄积 由于莱 克 多 巴胺 有类 似于 盐酸克 伦特 罗
的作 用 ， 动 物 组 织 中残 留 ． 能 对 人 体 产 生 不 在 可
利 影 响 ， 以我 国农业 部 、 生部 、 所 卫 国家 药 品监督 管 理局 明文禁 止莱 克多 巴胺 用 于动物 养殖 饲 料 样 品 中 的莱 克 多 巴胺 经 酸性 三 水 合 乙 酸钠 溶 液提 取 ． 心后 经 ＭＣ 固相 萃取 柱 净化 ． 离 Ｘ
还 可 以用 于治 疗 肌 肉萎 缩 症 ． 长 肌 肉 ． 少 脂 增 减
５ ｍ 用 超纯 水定 容至 １０ ． Ｌ， ７ ０ ｍＬ容 量瓶 中 ， 匀 ； 摇 １１ 洗 脱 液 ： ． ０ 准确 移 取 氨水 （ ．） ． 。 乙 酸 １ ３ ｍＬ 用 ２ ５ 乙酯 （．） 容 至 １ ０ Ｌ容量 瓶 中 ， １ 定 ３ ０ｍ 摇匀 ； １１ 样 品复 溶 溶液 ： 取 甲醇 （．）０ ｍ 甲酸 ．ｌ 移 １１２ ０ Ｌ， （ ．） ｍ ，用超 纯 水定 容 至 １０ ０ Ｌ容 量瓶 中 ， １ ２Ｌ ５ ０ ｍ 混 合均匀 ： １１ 莱 克 多 巴胺 标 准 品 ：纯度 １９ ． 国家标 ．２ ＞ ９０ ％（ 准 物质 中心提 供 ） ：
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ICS 65.120 B 46备案号：DB33饲料中莱克多巴胺的测定Determination of ractopamine in feedstuffs浙江省质量技术监督局发布前言本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了酶联免疫法、高效液相色谱－荧光检测法和气相色谱-质谱法。
本标准由浙江省农业厅提出并归口。
本标准由浙江省畜产品质量安全检测中心、浙江省疾病预防控制中心负责起草，浙江一星集团饲料有限责任公司参与起草。
本标准主要起草人：陈慧华、吴平谷、应永飞、任玉琴、屈健、周文海、陈勇、浦琴华。
饲料中莱克多巴胺的测定1 范围本标准规定了以酶联免疫（ELISA）法、高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法检测饲料中莱克多巴胺的方法，规定GC－MS法为仲裁法。
本标准适用于饲料和饲料添加剂中莱克多巴胺的测定。
酶联免疫（ELISA）法为筛选方法，检测限为0.01mg/kg，高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法为定量方法，定量限HPLC法为0.1mg/kg、GC－MS法为0.05mg/kg。
线性范围：酶联免疫（ELISA）法为0.005ng-0.05ng，高效液相色谱（HPLC）法为2.5ng-10ng，气相色谱－质谱（GC－MS）法为0.05ng-1.0ng。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1 饲料采样方法3 试样制备按GB/T 14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。
第一法酶联免疫法4 原理与方法4.1 原理本测定方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：吸附在孔内的莱克多巴胺与标准或样品中的莱克多巴胺竞争性地与莱克多巴胺抗体相结合，与标准品或样品相结合的莱克多巴胺抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，其再与加入的酶标记的第二抗体相结合，酶底物在酶作用下产生蓝色产物，吸光度的高低与样品中莱克多巴胺的含量成反比。
4.2 方法采用莱克多巴胺酶联免疫试剂盒或类似产品，按试剂盒的使用说明操作。
5 试剂和溶液5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定。
5.2 PBS缓冲液：用水10倍稀释厂商提供的浓缩PBS缓冲液。
5.3 工作洗液：用水20倍稀释厂商提供的浓缩洗液。
5.4 乙酸乙酯。
5.5 碳酸盐缓冲液：称取4.3g碳酸钠（Na2CO3•10H2O），2.9g碳酸氢钠（NaHCO3），加水至1000mL，摇匀，调节pH值至9.5。
5.6 提取液：取10mL甲醇，加90mLPBS缓冲液，摇匀。
5.7 甲醇。
5.8 第二抗体工作液：用第二抗体稀释液2500倍稀释第二抗体。
6 仪器与设备6.1 微孔板酶标仪(带450nm滤光片)。
6.2 振荡器。
6.3 冷冻离心机。
6.4 微量加样器及配套吸头：20μL, 50μL, 100μL, 200μL 。
6.5 冰箱。
6.6 洗板机。
6.7 生化培养箱。
6.8 氮吹仪。
6.9 分析天平：感量0.01g。
7 测定步骤7.1 注意事项不同品牌的试剂盒其操作步骤可能略有差别，具体操作步骤可根据试剂盒使用说明书略作调整。
7.2 试样处理取3g试样于50mL离心管中，加入6mL提取液（5.5），上下手摇数次，加入6mL碳酸盐缓冲液（5.4），再加入8mL乙酸乙酯（5.3），振荡30min；以4000rpm的转速离心5min，移取2.0mL上层有机相至另一新试管中，氮吹至干。
加入50μL甲醇（5.6）溶解残余物后，再加入450μL PBS缓冲液（5.1），即为供试溶液，取50μL进行ELISA测定。
7.3 测试程序7.3.1 根据所测定样品及标准数，计算出所需微孔条数，将微孔条插入微孔架，标准和样品做两个孔的平行重复，记录标准和样品的位置。
7.3.2 加入50μL的标准品和处理好的样品到各自的微孔中，标准和样品做两个平行重复。
7.3.3 加入100μL第一抗体溶液到每一个微孔中，在37℃孵育30分钟后倒出孔中的液体，将微孔架倒置在洗水纸上拍打（每轮拍打3次）以保证完全除去孔中的液体，再加入工作洗液（5.2）250μL，重复操作两遍。
最后用吸水纸吸干。
7.3.4 加入150μL稀释的酶标记的第二抗体（5.7）37℃孵育30分钟后倒出孔中的液体，将微孔架倒置在洗水纸上拍打（每轮拍打3次）以保证完全除去孔中的液体，再加入工作洗液（5.2）250μL，重复操作两遍。
最后用吸水纸吸干。
7.3.5 加入100μL酶底物液到微孔中，充分混合并在室温孵育5-10min。
7.3.6 加入50μL反应终止液到微孔中，混合后在450nm处测量吸光度值。
8 结果计算以空白（浓度为0的标准溶液）吸光度值为100%计算，折算出各标准和样品的相对吸光度值。
标准的吸光度值(或样品)相对吸光度值（%）= ×100空白的吸光度值计算出的标准相对吸光度值绘成为一个对应浓度(ng/L)的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在200-2000ng/L范围内应当成为线性。
相对应每一个样品的浓度(ng/L)可以从校正曲线上读出。
第二法高效液相色谱法9 方法原理用2％氨/甲醇溶液提取试样中的莱克多巴胺，经固相萃取柱净化，浓缩后用2％乙酸溶液定容，用高效液相色谱－荧光检测法分离测定。
10 试剂和溶液10.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定。
10.2 乙腈：色谱纯。
10.3 甲醇。
10.4 乙腈。
10.5 乙酸乙酯。
10.6 冰醋酸。
10.7 无水硫酸钠。
10.8 戊烷磺酸钠：色谱级。
10.9 正己烷。
10.10 氨水。
10.11 50％乙腈/乙酸乙酯溶液：取250mL乙腈加乙酸乙酯至500mL，混匀。
10.12 50％甲醇/乙酸乙酯溶液：取250mL甲醇加乙酸乙酯至500mL，混匀。
10.13 2％乙酸溶液：取5mL冰醋酸加水至250mL，混匀。
10.14 固相萃取柱1）：每根柱填料量为500mg，柱体积5mL。
10.15 2％氨/甲醇溶液：取20mL氨水加甲醇至1000mL，混匀。
10.16 戊烷磺酸钠溶液：取800mL水，加20mL冰醋酸和0.87g戊烷磺酸钠（C5H11O3SNa•H2O），混匀。
10.17 莱克多巴胺标准溶液10.17.1 莱克多巴胺贮备液（250μg/mL）精密称取莱克多巴胺对照品25mg，置100mL容量瓶中，用甲醇（10.2）溶解并定容至刻度，置-20℃冰箱中，可保存3个月。
10.17.2 莱克多巴胺稀释液(5μg/mL)精密量取1mL莱克多巴胺贮备液（10.16.1），置50mL棕色容量瓶中，用甲醇（10.2）稀释并定容至刻度，为莱克多巴胺工作液。
10.17.3 莱克多巴胺工作溶液分别准确吸取一定量的标准稀释液（10.16.2），用2％乙酸溶液（10.12）稀释、定容，配制成浓度为0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL的标准溶液。
11 仪器设备11.1 高效液相色谱仪（配荧光检测器）。
11.2 冷冻离心机能达到5000rpm。
11.3 振荡器。
11.4 离心管50mL，10mL。
11.5 微孔滤膜0.45μm。
11.6 涡旋混合器。
1固相萃取柱的填充料为聚苯乙烯。
11.7 分析天平精度0.0001g。
11.8 旋转蒸发仪。
11.9 鸡心瓶50mL。
11.10 氮吹仪。
12 测定步骤12.1 试样提取称取试样3.0g，准确加入2％氨/甲醇溶液（10.14）25mL，涡旋振荡1min，超声振荡10min，5000rpm 离心5min，取上清液10 mL 至鸡心瓶中，50℃旋转蒸干。
12.2 试样净化用2mL甲醇（10.2）和2mL正己烷（10.8）溶解鸡心瓶中的残余物，重复一次，弃去上层；再加入2mL正己烷（10.8），重复一次，分出甲醇至10mL离心管中，45℃下氮气吹干。
用5mL乙酸乙酯（10.4）溶解，加少量无水硫酸钠（10.6），5000rpm离心3min。
洗涤液过固相萃取柱（10.13），先经5mL乙酸乙酯润洗）用3mL50％乙腈/乙酸乙酯溶液（10.10）洗涤柱子，然后用5mL50％甲醇/乙酸乙酯溶液（10.11）洗脱收集，氮吹至干。
12.3 定容用2％乙酸溶液（10.12）定容到1mL，过膜，上机。
12.4 测定12.4.1 高效液相色谱条件色谱柱：C18柱，长250mm，内径4.6mm，粒度5μm，或相当者。
保护柱：C18柱，长20mm，内径3.9mm，粒径5μm，或相当者。
流动相：戊烷磺酸钠溶液（10.15）：乙腈（10.1）＝80：20，使用前脱气。
流速：1.0mL/min。
激发波长：226nm。
发射波长：306nm。
进样量：50μL。
12.4.2 上机测定莱克多巴胺对照溶液和试液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积进行计算。
13 结果计算试样中莱克多巴胺的含量按下式计算：n×Ai×Cs×VsX＝As×M式中：n——样品稀释倍数；Ai——样品峰面积；As——对照溶液峰面积；Vs——定容体积（mL）；Cs——对照溶液浓度（μg/ mL）；M——样品重量（g）；X——试样中莱克多巴胺的含量（mg/kg）；测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。
14 精密度14.1 重复性实验室内平行测定间的相对偏差不大于10％。
14.2 再现性实验室间测定的相对偏差不大于15％。
第三法气相色谱-质谱法15 方法原理试样中莱克多巴胺先用2％氨/甲醇溶液提取，甲醇和正己烷分配脱脂，然后用柱净化，BSTFA（双三甲基硅基三氟乙酰胺）+TMCS（三甲基氯硅烷）衍生，最后用GC－MS法进行定性定量分析。
16 仪器与试剂16.1 气-质联用仪。
16.2 烘箱。
16.3 BSTFA（双三甲基硅基三氟乙酰胺）+1%TMCS （三甲基氯硅烷）。
16.4 莱克多巴胺标准贮备溶液（5mg/mL）：准确称取50mg 莱克多巴胺于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在冰箱中备用。
16.5 莱克多巴胺标准工作溶液：取莱克多巴胺标准贮备溶液，用甲醇稀释至所需浓度。