血清直接胆红素DBIL测定-检验科生化室作业书
检验科生化直接胆红素测定的标准操作规程
直接胆红素测定的标准操作规程【目的】体外检测血清直接胆红素（DBIL）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理钒酸盐胆红素胆绿素PH3.0测定钒酸盐作用前后吸光度差异，可求标本中直接胆红素的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用北京利德曼生化股份有限公司DBiL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：2.校准要求使用去离子水与校准品两点定标，详见说明书；正常情况下，应每两周对测定进行一次校准。
三、操作测定（试剂准备液体试剂，直接使用，无需配制。
）四、计算DBIL=校准液（△A=A2-A1）×(△A标准/△A校准)五、质控程序1.建议采用朗道水平2(正常范围质控）和水平3（病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。
2.可接受性判断质控物的检测值应在给定质控范围，或可以通过参加卫生部室间质评对实验室的运作情况进行系统评估。
3.质控操作每日进行样本检测之前首先应进行质控操作，以考察系统的在控情况。
如果检测结果符合质控要求则进行样本操作；如果不符合质控要求，则应重复质控操作，以排除可能发生的偶然误差；如果仍不符合质控要求，则应考虑质控品的重新准备、试剂的重新校准或更新、仪器的维护等。
直接胆红素(DBIL)测定标准操作程序SOP文件
PROZONE LIMIT [ 32000/UPPER ]
REACTION TIME [ 10 ]
TECHNICAL LIMIT(LOW) [ 0 ]
Measurement POINT(1) [ 16 ]
TECHNICAL LIMIT(HIGH) P或日立7060生化分析仪。
6上机操作
见仪器作业指导书。
7参考范围
0-0.3mg/dlmg/dl(0-5.13umol/l)
8性能指标
本法线性范围为0.1-20mg/dl(1.71-315umol/l)，不准确度允许范围 ±20%，不精密度CV=5.2%，灵敏度为0.1mg/dl(1.71umol/l)。
SENSITIVITY LIMIT(HIGH) [ 31 ]
R.VOLUME(R1) [ 180 ]
S1 ABS(LOW) [ -32000 ]
R.VOLUME(R2) [ 0 ]
S1 ABS(HIGH) [ 32000 ]
R.VOLUME(R3) [ 50 ]
S1:0.9%NaCl
S2:C.f.a.s
贮存条件：校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
准备：直接使用。
定标频率：A 24小时后进行1点空白定标
B试剂换瓶后进行1点空白定标
C试剂批号更换后进行2点定标
D由质控结果决定是否进行2点定标
4.3质控物
来源：Precinorm (罗氏正常值质控)
Precipath (罗氏病理值质控)
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
检验科sop-生化室作业指导书(SOP)
郾城微检综合门诊部生化检验作业指导书文件编号：YCWJZHMZB-2编制：刘桂菊审核：周风霞编辑日期：2017 年8月20日生效日期：2017 年8月30 日郾城微检综合门诊部检验科目录修订页8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验CS-6400生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验CS-6400生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法以TruCal U复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。
手工测定计算方法为：△Au直接胆红素(μmol/L) =--------×校准液浓度△As12. 参考值范围：≤6.8mol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13. 临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。
游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。
在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。
在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。
溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。
人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。
由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70%的婴儿血液出现总胆红素增高。
常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。
直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。
14. 操作性能14.1 线性范围：1.7～171mol/L14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU1000批内精密度小于4%或SD≤0.04，总精密度小于5%或SD≤0.07。
生化室作业指导书3.29
目录修订页编写者：陈晓玲审核者：王沛批准者：王沛血清总胆红素(T-BIL)测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理在酸性溶液中，样本中的总胆红素被钒酸盐氧化生成胆绿素的同时，在450nm波长处可引起吸光度的下降。
其在450nm波长处引起吸光度的变化值与样本中总胆红素的浓度成正比。
通过在450nm波长处测定吸光度的变化值即可测得样本中总胆红素的浓度。
3 标本3.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
3.2 类型：血清3.3 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融。
3.4 标本运输：常温条件下避光保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司总胆红素试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：柠檬酸缓冲液100mmol/L 表面活性剂 1.0%试剂2（R2）：磷酸盐缓冲液200mmol/L 偏钒酸钠 3.8mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存编写者：陈晓玲审核者：王沛批准者：王沛4.1.3.2有效期：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自检定合格之日起有效期为18个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用，不要入口，毒性还末确定；避免和眼睛，皮肤或衣服接触，如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的TBIL校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
16. 直接胆红素标准操作规程(DBIL-SOP)
前言为使临床检验操作规范化，指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作，保证检验质量，特制定本操作规程。
本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订，作为本产品的标准操作程序。
本规程从2007年5月2日起实施，每2年复审1次。
本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。
本规程起草单位：伊利康生物技术有限公司技术部。
本规程主要起草人：蒙凯、蔡其浩。
本规程首次起草。
目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型生化分析仪参数直接胆红素测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请：血清直接胆红素（缩写DBIL）测定；组合项目申请：肝功能测定项目组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2.标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后。
体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带，不抗凝，置普通试管中。
生化项目SOP
沭阳县仁慈医院检验科生化室作业指导书文件编号：SYXRCYYLAB-SH –SOP第A版编制：路珊珊钱丽萍审核：李萍批准：侯波生效日期：2012年10月01日沭阳县仁慈医院检验科修订页血清总胆红素(T-BIL)测定一、目的保证总胆红素测定的结果准确、可靠。
二、修改程序本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任）。
三、适用范围钒酸盐氧化法测定总胆红素。
四、试剂来源本标准操作程序适用于上海执诚生物科技股份有限公司生产的总胆红素测定试剂盒。
五、溯源全国临床检验操作规程（第二版）。
六、原理此方法基于样品中的总胆红素在pH3.0 环境中，在有机复合物氧化剂的作用下，可以被氧化成胆绿素，而胆红素特有的黄色也随即消失，在450nm 处测定吸光度的变化，即可计算出样品中总胆红素的浓度。
七、试剂R1：硫磺酸缓冲液（pH2.9） 0.1mol/L表面活性剂R2：磷酸缓冲液（pH7.0） 10mmol/L有机钒酸盐 4mmol/L 不同批号试剂盒中各组份不能互换。
本试剂对光敏感，2～8℃密闭避光保存可以稳定18个月（勿冷冻）；首次开启试剂后，避光保存于2～8℃防污染环境中，可继续稳定至效期。
校准液： Randox 公司提供的系列校准品。
八、标本采血清总胆红素(T-BIL)测定血清、血浆。
样本2～8℃保存可以存放约3天，-20℃保存可以存放3个月，但只能冻融一次。
九、操作步骤1、标本编号，分离血清，依顺序置样品架上。
2、按标本编号在全自动化生化仪器上输入标本的基本信息和测定要求，进行测定。
3、仪器校准：将校准液置试管架上，输入校准液浓度，然后进行测定（测定参数与下同），其吸光度贮存在电脑中，浓度值测定符合要求即可应用。
一般每3～6个月校准一次，若更换不同批号的试剂、质控超标或仪器维修处理后应进行校准。
4、测定参数：血清量 7μl试剂Ⅰ 200μl试剂Ⅱ 50μl主波长 444nm次波长 548nm反应类型终点法；负反应测定时间 10分钟温度 37℃报告单位μmol/L5、结果计算：ΔA 样品样本中总胆红素的含量 = ------- ×标准液浓度ΔA 标准单位换算：mg/dl×17.1=μmol/L十、正常参考值5.1-20μmol/L血清总胆红素(T-BIL)测定十一、室内质控质控方法：每天测定样品前做一组质控，在标本中间插一组质控，最后再做一组质控品，共三组。
直接胆红素重氮盐法作业指导书
直接胆红素（重氮盐法）作业指导书1概述直接胆红素[1](英文缩写DBIL)又称结合胆红素。
未结合胆红胆红素用凡登伯定性试验呈直接反应，故将这种胆红素称为合胆红素的升高，说明经肝细胞处理和处理后胆红素从胆道的排泄发生障碍。
2标本的收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。
血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。
样本在4摄氏度可稳定7天。
采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。
3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。
不建议采用血浆标本。
3：方法原理样品中直接胆红素与重氮对氨基苯磺酸反应，生成酸性偶氮胆红素，其在570nm处光吸收值增加与杨品中直接胆红素的浓度成正比，通过测定570nm处吸光度的变化，即可计算出样品中直接胆红素的浓度。
4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二按100:1的比例。
即10ml 试剂一加0.1ml试剂二，混合后即成工作液试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。
5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量25 u/l 试剂量：250 u/l测光点0--41 测定模式：1点终点法正反应分析波长：570nm/660nm(主波长/副波长)6计算方法总胆红素浓度（μmol/L）=样本管吸光度×校准液浓度（μmol/L）校正管吸光度μmol/L7 线性范围：本实验的线性范围：0---300μmol/L8参考范围成人1.7—6.8μmol/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。
2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。
3：进行仪器维护，重测失控项目。
检查仪器状态，查明光源是否更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗等维护。
直接胆红素测定SOP_DBIL临床意义_检验科生化项目SOP
直接胆红素测定SOP_DBIL临床意义_检验科生化项目SOP一、直接胆红素测定的临床意义直接胆红素(Direct Bilirubin, DBIL)是从红细胞和其他组织中释放的胆红素的成分之一、正常情况下，直接胆红素的浓度较低，只占总胆红素(Total Bilirubin, TBIL)的一小部分。
然而，当胆红素代谢障碍时，直接胆红素的水平会升高，显示出一些特定的临床意义：1.肝功能评估：直接胆红素测定是评估肝功能的重要指标之一、肝脏是胆红素的代谢和排泄主要器官，当肝脏受损或胆道阻塞时，直接胆红素的水平会升高。
2.胆道疾病诊断：直接胆红素水平的升高可能是由于胆道梗阻、胆管炎、胆上皮细胞损伤或其他胆道疾病引起的。
通过测定直接胆红素的水平，可以协助医生确定疾病的类型和程度，并指导治疗方案的选择。
3.血红蛋白病变：一些血红蛋白病变如溶血性贫血、遗传性球形红细胞性贫血等，会导致血红蛋白不正常分解，使得直接胆红素的水平升高。
通过测定直接胆红素的水平可以帮助医生确定贫血的类型和严重程度，并制定相应的治疗方案。
以下是直接胆红素测定的检验科生化项目SOP的详细步骤：1.标本采集：采集患者血清标本，禁食时间要超过8小时，以避免脂质和胆固醇的影响。
2.试剂准备：根据试剂包装上的说明书，将试剂准备好。
一般包括直接胆红素试剂、标准品和质控品。
3.样本处理：将采集到的血清标本放入试剂盒特定的反应池内，加入适量的试剂。
4.反应：将反应池放入试剂盒中的分光光度计中，按照光度计参数设定，启动反应。
5.数据分析：根据反应的结果，使用光度计测量直接胆红素的吸光度，并根据标准曲线将吸光度值转换为直接胆红素的浓度。
6.质控品检测：每天开始工作前，需对质控品进行检测，确认试剂盒的准确性和稳定性。
7.结果判读与报告：根据测量结果和参考范围，判断直接胆红素的浓度是否正常。
将结果报告给医生或病人。
8.仪器维护：定期对光度计进行检查和维护，保证仪器的准确性和稳定性。
直接胆红素测定(D-BIL)(精)
总胆红素测定（T-BIL）
实验原理
对氨基苯磺酸 ＋ 亚硝酸钠
氯化重氮苯磺酸 ＋ NaCl ＋ 2H2O
胆红素 ＋氯化重氮苯磺酸
紫红色的偶氮化合
物
加速剂为二甲基亚砜，使游离的胆红素分子内的次级键断 裂，极性上升，与重氮试剂反应。 λ=578nm
1.5
-—— 1.5
混匀，置37 ℃水浴3min，比色（λ=578nm）读 取各管A值。
直接吸入*：吸入的量即为半自动生化分析仪设 定的吸入量，在分光光度计测定时则为此反应 的总体积量。
计算结果与临床意义
计 算： 血清直胆（μmol/l）=AU/AS×20
结果报告：略 实验参考值： 2~8μmol/l
直接胆红素测定(D-BIL)
实验原理
直接胆红素是与葡萄糖酸酯结合的胆红素, 又叫结合胆红素,它能与重氮盐反应(重氮苯 磺酸)在酸性条件下能直接完成重氮反应显 色,无需加速剂,在578nm波长测定吸光度值, 计算其含量.
实验原理
对氨基苯磺酸 ＋ 亚硝酸钠 ＋ NaCl ＋ 2H2O
胆红素 ＋氯化重氮苯磺酸 偶氮化合物 λ=578nm
氯化重氮苯磺酸
紫红色的
实验
1、样本要求：最适样本为当日空腹采集的 无溶血、无乳糜的血清或血浆，避光保存， 及时测定。
2、工作试剂的配制： 取R1 10ml和R2 0.2ml混合均匀即为工作试
剂.
实验测定
3、按下表操作：
加入物(ml)
U
S
B
血清
0.1
ห้องสมุดไป่ตู้
直胆红素(DBIL)_钒酸盐氧化法SOP
直接胆红素(DBIL)检测（钒酸氧化法）1.原理钒酸盐测定钒酸盐作用前后吸光度差异，可求得样品中的直接胆红素的浓度。
直接胆红素钒酸胆绿素2. 标本采集和准备2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：血清：未抗凝试管（红色试管）血浆：肝素抗凝（绿色试管）除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3.标本储存：2-8℃可稳定保存12小时，避光-20℃可稳定3个月。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、溶血、标本量不足标本不宜作此项检测。
6.实验材料：6.1试剂及组成：本科使用南昌百特生物高新技术股份有限责任公司TBIL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：6.2试剂准备：试剂为即用式。
6.3试剂稳定性与贮存原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
试剂开瓶后，在2-8℃可保存15天。
6.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.5 校准品：使用英国廊道公司校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.6质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7.仪器设备：迪瑞CS-600B8.操作步骤：见CS-600B常规样本测定程序直接胆红素检测试剂盒自动生化分析仪CS-600B主要参数见附录19.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
直接胆红素测定SOP_DBIL临床意义_检验科生化项目SOP
（在540nm处吸收）
2标本采集与处理
2.1采血方法
空腹采不抗凝静脉血2~3ml。
2.2标本保存
室温保存，及时送检。在2~8℃冷藏可稳定3天，-70℃暗处保存，稳定3个月。
2.3注意事项
推荐选用血清并及时分离。标本应避免脂血、溶血、黄疸。
3试剂和设备
3.1试剂
采用西门子医学诊断产品（上海）有限公司提供的试剂盒。
3.1.1试剂组成
试剂船5孔为亚硝酸钠0.5%，液体；6孔为盐酸0.5M，液体；7~8孔为对氨基苯磺酸0.45%，盐酸1.09%，液体。
3.1.2试剂准备
直接使用。
3.1.3试剂保存
试剂2~8℃保存，有效期内稳定。
3.2质控品
美国BIORAD液体多项质控品。
5.2校准条件
在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为3个月。
5.3校准程序
主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1:CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP＆RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD，选中相应试剂批号LOT，输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator
[1]西门子医学诊断产品（上海）有限公司直接胆红素（DBIL）测定试剂说明书。
[2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006：452~454。
编写：审核：批准：
7性能参数
本法线性范围为0~342umol/L,对于超过测定线性范围的结果，用净化水对标本进行稀释，输入稀释因子后再重新检测。
8生物参考区间
D-Bil 文档,直接胆红素(D-Bil钒酸盐氧化法)标准操作规程
1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司直接胆红素（D-Bil钒酸盐氧化法）测定方法2、适用范围：适用于人血清直接胆红素（D-Bil）的测定。
3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。
3.2未开启的试剂盒在2℃～8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
3.3 仪器：迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理直接胆红素在pH3.0附近，以及钒酸盐和表面活性剂存在下，可以被氧化成胆绿素。
与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失。
测定胆红素氧化前后吸光度的差，可以计算出样品中直接胆红素的浓度。
4.2样本要求新鲜血清，样本收集后应尽快测定，必须避光保存。
避免溶血。
4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。
4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用迈瑞医疗国际股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。
4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。
当有以下情况时需重新校准：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。
每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。
4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。
4.3.3 测试基本参数4.4参考范围1.7～6.8 mol/L（0.1～0.4 mg/dL）（注：各实验室应有自己的参考范围。
）4.5 方法评价线性范围：1～430 μmol/L。
样本中含量超出可报告范围，请用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。
反应曲线异常时应进行重复测定确认。
精密度：批内CV ≤ 5.0%批间CV ≤ 6.0%分析灵敏度：本试剂盒的检测低限1 μmol/L。
怎样看化验单(生化和血常规)
• 急性肝炎时，血清TBA浓度和ALT活力同时升高， 分别在正常高限的3、4倍和30倍，两者呈高度 正相关;慢性肝病时升高幅度虽不大，但均在 正常值上限或2倍左右;肝硬化时ALT和肝功能 指标未发生明显改变时，血清TBA浓度明显升 高。TBA是反映肝细胞损害非常灵敏的指标。
• 肝硬化时，血清TBA比慢肝升高幅度大，而ALT 和常规肝功能指标未明显变化，说明TBA浓度 和ALT活力无相关关系，在肝硬化后期，TBA浓 度改变更为明显，表明TBA比ALT能更敏感地反 映肝硬化患者病情。
• 慢性肝炎和脂肪肝时轻度上升（100-200）或正常。
• 肝硬化、肝癌时轻度上升（100-200）或正常。
γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）11-50U/L
• γ－GT在人体细胞的微粒体中合成 ，主 要来自肝脏，少许由肾、胰、小肠产生。 其活性与年龄、性别有关，男性高于女 性，新生儿高于成年人5－8倍。
• 血液中尿素浓度升高引起的氮质血症可分为三类： • 1.肾前性氮质血症：由于肾血液灌注减少或尿素生成
过多引起。后者见于高蛋白饮食、饥饿、发热、脓毒 血症所致的蛋白质分解代谢增加，以及胃肠出血后血 液蛋白重吸收等。脱水、休克、心衰引起肾供血不足， 使血浆尿素浓度升高。肾前性氮质血症血浆肌酐浓度 往往不伴随升高。 • 2.肾性氮质血症：由于急性与慢性肾功能衰竭、肾小 球肾炎、肾盂肾炎、肾病等引起。肾结核、肾积水的 血浆尿素增高与肾组织破坏程度相关。 • 3.肾后性氮质血症：经输尿管、膀胱、尿道的尿流受 阻引起的血尿素升高。如：尿路结石、泌尿生殖系的 肿瘤、前列腺肥大、阻塞造成肾小管内压力升高，使 管内尿素倒扩散入血液。
• 正常情况下，Cys C在血清和血浆中的浓 度为≤1.03mg/L (参考范围)。当肾功能 受损时，Cys C在血液中的浓度随肾小球 滤过率变化而变化。肾衰时, 肾小球滤 过率下降，Cys C在血液中浓度可增加10 多倍;若肾小球滤过率正常,而肾小管功 能失常时，会阻碍Cys C在肾小管吸收并 分解，使尿中的浓度增加100多倍。
直接胆红素测定的标准操作程序
直接胆红素（DBIL）测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆DBIL浓度测定。
【适用仪器】Olympus AU-27全自动生化分析仪。
【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。
【方法学原理】在PH2.9环境中，表面活性剂和偏钒酸盐与直接胆红素作用形成胆绿素，胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与直接胆红素的含量成正比。
【试剂】溶液A（R1）：酒石酸缓冲液PH 2. 90.1 mmol/L表面活性剂稳定剂70mmol/L溶液B（R2）:偏钒酸盐4mmol/L磷酸盐缓冲液PH7.010mmol/L稳定剂2.校准品：DiaSys TruCal U。
3.质控品：Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2.【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本，适用标本为血清或肝素抗凝血浆（肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l）,不可从正在静脉滴注手臂上采血，上机标本不能有凝块，样品采集后2天内离心标本，分离血清，血清或血浆标本室温保存4天，冷藏7天，冷冻保存6个月。
【操作步骤】1. 仪器测定参数设置2. 试剂准备：将准备好的试剂置仪器试剂盘中（8C ）。
3. 校准校准物的准备：将校准物从冰箱取出，冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶，轻轻颠倒混匀3次，不可用力震摇，室温放置30分钟至完全溶解；液体校准物从冰箱取出，室温放置15分钟以平衡至室温。
校准物的选择尽可能选择配套仪器厂家校准品。
亦可将校准液复溶后分装保存于-20C 冰箱中，每周校准一次或更换试剂批次后进行校准。
上机校准程序：[1] 选择用户菜单USERCalibrationStart Entry 进入输入界面。
[2] 用光标键选欲校准项目，。
确认后按叵互。
⑶将校准品按屏幕显示放入绿色校准架相应位置，将校准架置入进样轨道，按▲开始。
【参考范围】血清/血浆DBIL ： 1.7-6.8 mol/L 【临床意义】D.Bil 临床上多用于黄疸的诊断和黄疸性质的鉴别。
直接胆红素操作程序
直接胆红素操作程序1.目的规范直接胆红素（DBIL）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理4．1测定方法：重氮法4．2 测定原理：对氨基苯磺酸+HCl+NaNO2→氯化重氮苯磺酸+NaCl直接胆红素+氯化重氮苯磺酸→偶氮胆红素（红紫色）其在546nm处的吸光度与血清直接胆红素的生成量成正比。
5．标本5．1标本种类：新鲜无溶血血清。
5．2标本采集：见生化标本采集程序。
6．试剂6．1试剂来源：和光试剂。
6．1．1组成包装规格：R1 540ml×4 R2 135ml×46．1．2试剂准备试剂为液体双试剂，无需配制,开瓶即可使用，用后及时置于2～8℃避光保存。
6．1．3试剂稳定性新打开原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12 个月。
试剂开瓶载机2～8℃稳定30天。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：和光试剂仪器参数设定参见试剂厂家提供的试剂参数说明书。
8．校准8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700和光试剂系统的校准：8.2.1 准备：和光配套胆红素校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期，1ml蒸馏水复溶，复溶后在2～8℃可保存7天。
8.2.3保存位置：低温冰箱-20℃。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的9号位置放和光配套胆红素定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控（批号:45612/45613）。
9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。
检验科肝功能检验操作规程作业指导书
检验科肝功能检验操作规程作业指导书
检验科肝功能检验操作规程作业指导书
1.血清总胆红素TBIL和结合胆红素DBIL测定
2.改良JG法
3.试剂
1.参照书刊文献如《全国临床检验操作规程》第二版自配配制标准液的胆红素应符合如下标准纯
胆红素的氯仿溶液在25℃当光径1000±0001Cm 波长453nm条件下其摩尔吸光系数应在60700±1600范围内偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74380±866范围内配制标准液的稀释剂须含白
蛋白可用牛血清白蛋白或人血清代替人血清白
蛋白标准液应贮於棕色瓶中避光保存在市售试
剂中以含碱性酒石酸的灵敏度特异性高。
直接胆红素(DBIL)含量检测试剂盒说明书__ 微量法UPLC-MS-6030
微量法直接胆红素（DBIL）含量检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-6030规格：100T/96S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体25mL×1瓶4℃保存试剂二液体6mL×1瓶4℃保存产品说明：直接胆红素（Direct bilirubin，DBil）又称结合胆红素，是由间接胆红素进入肝后受肝内葡萄糖醛酸基转移酶的作用与葡萄糖醛酸结合生成的。
直接胆红素增高对临床诊断阻塞性黄疸、肝细胞性黄疸、肝癌、胰头癌、胆石症、胆管癌等有重要意义。
直接胆红素能被亚硝酸钠氧化，生成胆绿素。
通过检测450nm下波长变化，可计算出直接胆红素的含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）血清、血浆等液体样本：直接测定。
若溶液浑浊，可以离心后取上清进行测定。
二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、按下表步骤加样：（96孔板或者EP管中加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管空白管样本8蒸馏水8试剂一192192充分混匀，置于37℃水浴锅/恒温培养箱中孵育5min，测定450nm处吸光度A，分别记为A1测定、A1空白试剂二4848充分混匀，置于37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应5min，测定450nm处吸光度A，分别记为A2测定、A2空白；计算ΔA测定=A1测定-A2测定；ΔA空白=A1空白-A2空白。
空白管只需测1-2次。
（使用比色皿反应时，第一步5min反应完成将液体倒入比色皿比色后，可直接在比色皿中加入试剂二混合均匀反应5min直接进行测定；使用96孔板反应时，可以将上述试剂直接加入96孔板中反应第一步的5min，之后直接加入试剂二进行第二步反应）三、DBIL含量计算1、计算公式（1）使用96孔板：DBIL含量（μmol/L）=1495.7×（ΔA测定-ΔA空白）-15.343（2）使用微量比色皿：DBIL含量（μmol/L）=1099.7×（ΔA测定-ΔA空白）-10.73注意事项：1、胆红素见光易分解，测定时要尽量避光。
DBIL重氮
美康试剂标准操作程序目录1实验原理和检验目的2标本采集和处理2.1标本种类和采集方法2.2标本处理方法3试剂3.1试剂组成和包装3.2试剂准备3.3试剂稳定性4校准4.1校准品4.2校准品准备4.3校准品稳定性4.4试剂校准周期5质控5.1质控品5.2可接受性判断5.3质控操作6操作7.计算方法8参考值9操作性能9.1精密度9.2线性范围10 结果处理11方法局限性12注意事项13参考文献14 技术服务1实验原理和检验目的()紫兰色偶氮胆红素氯化重氮苯磺酸血清胆红素氯化重氮苯磺酸对氨基苯磺酸−→−++−→−++NaCl NaNO HCl 2在570nm 处比色，计算出DBIL 的含量。
2标本采集和处理 2.1标本种类和采集方法标本：应空腹采血，避免脂血引起反应液混浊。
血液标本应避免阳光直照，防止胆红素的光氧化。
胆红素对光的敏感度与温度有关，血标本应避光置冰箱保存。
标本保存冰箱可稳定3天，-70℃暗处保存，稳定3个月。
受检者（体检对象或病人）的准备：对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯。
静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布。
2.2标本处理方法标本要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
样品采集后要离心标本，吸出血清。
标本应立即测定。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3试剂 3.1试剂组成3.2试剂准备试剂为液体单试剂，开瓶即可使用，用后及时置于2～8℃避光保存。
3.3试剂稳定性本试剂盒2～8℃可稳定一年。
夏季运输注意冷藏。
不得冷冻。
打开包装后，2～8℃开口保存一个月。
4校准4.1校准品每日进行试剂空白校准操作。
建议使用Roche C.f.a.s.进行全点校准操作。
4.2校准品准备Roche C.f.a.s.校准物复溶30分钟，充分溶解混匀后即可使用。
4.3校准品稳定性Roche C.f.a.s.冻干校准物2～8℃密闭保存稳定至有效期，复溶后校准物15℃～25℃稳定8小时，2℃～8℃稳定2天，-15℃～-25℃稳定2周。
临床检验手册生化部分
.生化检验部分一. 肝功试验包括总蛋白（TP ）、白蛋白（ALB ）、前白蛋白（PA ）、总胆红素（TBIL ）、直接胆红素（DBIL ）、 谷丙转氨酶（ALT ）、谷草转氨酶（AST ）、碱性磷酸酶（ALP ）、谷氨酰氨转移酶（GGT ）、 胆碱酯酶（CHE ）、总胆汁酸（TBA ）。
肝功能试验的分类：1. 识别肝实质细胞通透性改变的试验： ALT 、AST 等升高。
2. 指示肝细胞坏死的试验：血清中出现谷氨酸脱氢酶和线粒体谷草酶。
3. 肝实质细胞内质网蛋白质合成机制障碍的试验：如血清 维蛋白等浓度下降。
指示肝内或肝外胆道阻塞的试验：如血清ALP 、5' -NT 、GGT 和某些胆汁酸增高。
肝脏间质成分增生的试验：血清蛋白电泳中 单胺氧化酶活性升高。
TP （总蛋白）临床意义：升高：各种原因失水所致的血液浓缩；多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、冷沉淀球蛋白血症 等单克隆性免疫球蛋白病；系统性红斑狼疮、多发性硬化和某些慢性感染造成球蛋白（多 克隆）升高的一些慢性病。
降低：体内水份过多；各种渠道的血清蛋白丢失，如肾病综合征、严重烧伤、蛋白丢失性 肠病、营养不良及消耗增加，如结核、甲亢、肿瘤；蛋白合成障碍， 能爱损等。
样本要求：血清和血浆都可用于 TP 测定。
血清于 2〜8 ° C ,血可使结果偏高。
参考值：65〜85 g/L 测定的方法：双缩脲法ALB （白蛋白）临床意义：升高：偶见于脱水所致的血液浓缩。
降低：与总蛋白原因大致相同。
急性降低见于大量出血与严重烧伤。
白尿、肝功能受损、腹水形成、肠道肿瘤与结核慢性失血、营养不良和消耗性疾病等。
白蛋白如低于20g/L,临床可出现水肿。
样本要求：推荐使用空腹血清、血浆。
血清于 2〜8 ° C , 14天内稳定。
推荐3天内完成测定。
参考值：40〜55 g/L 测定的方法：溴甲酚绿法PA （前白蛋白）Alb 、胆碱脂酶、凝血因子和纤4. 5. a 2和丫球蛋白增加。
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血清直接胆红素DBIL测定
1.实验原理
直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。
2.标本：
2.1病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3.标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4.标本运输：常温条件下避光保存运输。
5.标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
6.实验材料
6.1试剂：申能总胆红素试剂盒：14108271701 试剂＋试剂2 6.1.1试剂组成
试剂1：16×64ml
EDTA-Na20.07mmol/L
氯化钠6.6g/L
氨基磺酸70mmol/L
试剂2：6×16ml
2,4-二氯苯胺重氮盐0.09mmol/L
盐酸130mmol/L
EDTA-Na20.02mmol/L
6.1.2试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为18个月。
试剂2必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。
警告！腐蚀剂！不要入口。
避免和眼睛，皮肤或衣服接触。
如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。
接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。
6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪
8.操作步骤
8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件
检验结果的判断与分析
10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控
图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11.计算方法以TruCalU复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。
手工测定计算方法为：
△Au
直接胆红素(μmol/L)=--------×校准液浓度
△As
12.参考值范围：≤6.8mol/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13.临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。
游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。
在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。
在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。
溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。
人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。
由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70%的婴儿血液出现总胆红素增高。
常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。
直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。
14.操作性能
14.1线性范围：1.7～171mol/L
14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU1000批内精密度小于4%或SD≤0.04，总精密度小于5%或SD≤0.07。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密度
n=20 x
(μ
mol/L)
s
(μ
mol/L)
CV
(%)
批间精密
度
n=20
x
(μ
mol/L)
s
(μ
mol/L)
CV
(%)
样品1 6.0 0.20 3.34 样品1 6.2 0.19 3.12 样品2 12.8 0.12 1.00 样品2 13.0 0.19 1.46 样品3 36.4 0.26 0.71 样品3 35.4 0.46 1.30 14.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对85个样品进行DBIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.95x+0.68μmol/L；r=0.995。
14.4灵敏度：1.7mol/L。
14.5病人结果可报告范围：1.7～171μmol/L
15超出范围结果处理本法线性上限为171mol/L。
样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。
16.病危报警值的处理无。
17.方法局限性
17.1本法线性上限为171mol/L。
样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。
17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
血红蛋白浓度≥0.50g/L将产
生干扰。
18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19.参考文献：
Tietz,N.W.(Ed),FundamentalsofClinicalChemistry,3rdEdition,W.B.Saund ers,1987.
VandenBergh,A.andMueller,P.,BiochemZ,77:90,1916
NCCLS,InterferenceTestinginClinicalChemistry,EP7-P,1986.
Young,D.S.,EffectsofDrugsonClinicalLaboratoryTests,4thEdition,AACCPr ess,1995.
NCCLS,EvaluationProtocolEP5-T2,1992.
Rand,R.N.,DIPasque,A.,ClinChem1962;8:570
Henry,J.,Cannon,D.C.,Winkelmann,J.V.,Clinicalchemistry,principlesandt echnics,Harper&RowPublishersIns.,HagerstownMaryland,1974:1042 Thomas,L.:Laboranddiagnose,4thedition,DieMedizinischeVerlagsgesell schaft,Marburg,1992:235
20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。