标书报告正文汇总

报告正文（一）立项依据与研究内容1、项目的立项依据( 1 )．研究意义二十世纪末人类基因组计划初步完成后,国际上已经开始进行人类脑研究计划。

由于人类对自己脑的认识远远不够，如何认识脑、开发脑、保护脑、预防及治疗脑相关性疾病是目前以至相当长期的重要研究领域和方向。

可以说，脑研究将是21世纪医药学研究的金字塔尖。

脑血管相关性疾病是当前国人最主要的致残和病死原因，北方发病率高于南方，而且呈增长趋势，至今仍缺乏有效的预防和治疗药物，因此需要不断的研究新的具有脑活性（脑缺血损伤保护、脑缺血再灌注、脑血管内皮功能调节、抗脑血栓形成、抗血小板聚集、降血粘度、抗氧化、提高脑缺血后SOD活力、离子通道等）的药物及其药用机制。

天然药物在此领域具有重要价值并能够形成自主知识产权。

我们在国内外首次以辽宁地产乌苏里藜芦（Veratrum nigrum var. ussuriense Nakai）为素材，寻找新的、有效的抗栓、降粘生物碱活性成分，并对其进行化学结构和生物活性比较研究，揭示结构与药效关系，研究抗血栓作用机理,为研制新型血栓病治疗剂构筑应用基础，将具有重要的理论和实际意义。

( 2 )．国内外研究现状藜芦为百合科藜芦属植物，基原植物为黑藜芦（Veratrum nigrum L）。

我国有毛穗藜芦、光脉藜芦、乌苏里藜芦、毛叶藜芦、狭叶藜芦、天目藜芦、蒜藜芦、小藜芦等10余种[1]，中药藜芦系数种藜芦的干燥根茎。

古方如葛洪所著[肘后备急方]（1955年版）中记载藜芦能治疗“中风不省人事，牙关紧急者”。

中药大辞典亦称藜芦用于“中风失语、头痛、黄疸、疥疮、疟疾、痢疾的治疗及杀虫、催吐等”，提示具有抗栓、降粘作用。

虽然适应症广泛，但以往国内外研究多集中在降血压方面[2]。

国外对该属植物含有的生物碱成分进行了大量的化学研究，国内则研究不多。

至今已证明了近百种甾体和异甾体生物碱的化学结构[3]，但有关此类生物碱的抗栓降粘及结构与药效的比较研究，则至今未见报道。

国外曾用绿藜芦（V. viride）和白藜芦（V. album）生物碱进行了大量降血压实验，并作为降压药物用于临床，后因治疗剂量与中毒剂量距离小，而限制了应用[2,4,5]。

我国学者亦进行了国产几种藜芦的化学及药理学研究[6~12]，但从未将藜芦生物碱用于临床。

90年代以来，国际上对藜芦生物碱的研究渐趋增多，生物活性研究也逐渐扩展到麻醉-离子通道[13]、杀虫[14]、植物酶-基因[15] 、生殖[16]等方面。

我们首次对东北产三种藜芦：乌苏里藜芦（V . nigrum var. ussuriense Naikai ）、毛穗藜芦（V . maackii Regel ）、光脉藜芦（V . patulum L.）进行了所含生物碱的初步化学研究。

发现：乌苏里藜芦总生物碱（Vu-A ）主要由germine 类生物碱组成[17,18,19]，与国外产绿藜芦和白藜芦组成不同[3]( 主要由protoveratrine 类生物碱组成)；与主要由zygadenine 类生物碱组成的毛穗藜芦总生物碱（Vm-A ）[20,21,22]及由jervine 、veratramine 类生物碱组成的光脉藜芦总生物碱（Vp-A ）[23]也不相同。

Vu-A(germine 类) Vm-A(zygadenine 类)131Vp-A(Jervine 类) Vp-A (Veratrmine 类)国外绿藜芦和白藜芦主要含有protoveratrine 类1随后进行了三种藜芦总生物碱的生物活性试验，结果证明，虽然同为藜芦属植物，但是种的不同除了使分子结构和化学组成相差甚大之外，其使用剂量、活性强度及毒副作用差别更是不容忽视。

例如，使犬血压降低25％以上的给药剂量Vu-A：1μg/kg，Vp-A：80μg/kg，Vm-A：40μg/kg。

半数致死量（LD50）Vu-A：173.38±17.94μg/kg，Vp-A：3110±15.01μg/kg，Vm-A：358±19.11μg/kg。

对呼吸的抑制作用Vm-A＞Vp-A＞Vu-A[24,25]。

通过等效剂量和时效作用比较，可见乌苏里藜芦生物碱（Vu-A）生物活性强、毒副作用低，有独特性，值得深入研究。

我们在上述基础上选择Vu-A为素材，最初亦是降血压研究，并将Vu-A制成200μg/2ml/支的注射剂，在国内首次试用于60例各类高血压病人。

成人200μg/1次／日，发现对多种高血压病疗效显著，因给药剂量适中，毒副作用甚微（有内部资料）。

在临床试用中发现对血瘀性头痛显效，有2名患顽固性头痛达10余年20年患者，须每日大剂量服用去痛片3－4次，与血压无相关性，经应用Vu-A后撤除了去痛片，每周肌注Vu-A 1~2次，200μg／次即可维持良好疗效（内部资料，可提供），此结果与中药大辞典中藜芦治疗头痛相吻合，提示对血粘、血凝、血流、缺血有活性。

后来由乌苏里藜芦中分离、鉴定了茋类化合物白藜芦醇（resveratrol）[26]，白藜芦醇对四氯化碳引起的肝损伤和过氧化脂质引起的肝功异常有治疗作用，该活性又与中药大辞典治疗黄疸相吻合[27]。

乌苏里藜芦的临床试用启示我们将目光集中到“中风失语”。

以此为契机，随即进行了乌苏里藜芦总生物碱（Vu-A）对抗栓降粘等活性的深入研究。

如：Vu-A对正常及血瘀大鼠血液流变学的影响，对家兔血液流变学的影响[28]，对大鼠颈动脉血栓形成的抑制作用[29]，对血小板聚集的抑制作用[29]，对小鼠急性脑缺血存活时间的延长作用，对小鼠尾出血时间的影响，对心肌细胞Ca2+、K+及对红细胞K+、Cl－离子通道的影响[30]，对大鼠中枢儿茶酚胺能神经元的影响[31]，对中枢神经系统的抑制作用[33]，对犬血流动力学的影响[25]及抗幽门螺杆菌作用[34]（新生物碱成分Verapatuline抗幽门螺杆菌使用剂量与青霉素相近，幽门螺杆菌为发生胃溃疡等胃肠疾病的致病菌，此作用与藜芦治疗痢疾的记载有相关性）等研究。

其中多项工作为藜芦属植物生物碱在国内外首次进行的研究工作。

Vu-A 在不同动物模型的活性试验中显示了强大的抗栓降粘及其它有益作用，甚有研究价值。

如：静脉给药测定颈动脉血流阻塞时间（Occlution Time, OT值），证明有明显的抗血栓形成作用，OT值延长百分率在100％左右，120分钟后仍有一定作用。

降血粘，降粘幅度高达65％，家兔给药3小时后血粘度仍呈下降趋势。

能够延长小鼠尾出血时间，但效用低于降斯匹林（不易引发出血）。

血瘀模型给药后，血小板最大聚集率显著降低。

Uv-A对红细胞膜K+离子电流有抑制作用，并可使Cl－离子通道明显开放，这些均对红细胞变形能力提高有一定影响，红细胞变形能力降低，全血粘度将提高。

Uv-A在抗栓降粘活性方面，即呈现量效性又有时效性，上述活性的内在机制有待深入研究。

乌苏里藜芦资源十分丰富，在辽宁省广有分布。

其生物碱含量较高（0.2%以上），更由于其有效剂量甚低（微克级），其作用强度在中药活性成分中不多见。

以往人们均认为藜芦“有毒”，为“下品”中药材。

而被视为“下下品”的中药砒霜（主含三氧化二砷，As 2O 3），现用于治疗白血病，每日静脉给药10mg/人，连续二个月，安全显效，关键在于我国学者在As 2O 3基础研究方面的深入投入而达到创新。

经检测，乌苏里藜芦主要含有20余种生物碱，多为含有多个酯基的germine 类异甾体生物碱骨架生物碱，结构复杂。

以往由于总生物碱组成不清楚，虽然应用总生物碱进行活性实验证明药效强大，但是存在化学组成“混合”，则生物活性“混合”，致使药效、作用点、应用剂量及定量检测“含糊”。

以犬给药1μg/kg 的低剂量可使血压降低25％以上推测，即使总生物碱20余种成分中的某一种含量很低，在给药后也可能发挥很强的效力或副作用。

因此，要体现乌苏里藜芦的应用价值，必须分别搞清组成总生物碱的20余种成分的分子结构，这同样也是我国中药、天然药物向现代化迈进的难点。

为此，我们对乌苏里藜芦总生物碱进行了初步的分离、纯化，并主要应用二维核磁共振技术结合质谱等波谱技术鉴定了10种生物碱的分子结构，其中2种为新生物碱，并归属了全部碳、氢、氧、氮的化学位移和位置，此项研究达国际先进水平。

另从乌苏里藜芦中首次分离、鉴定了刺孢麴霉碱（echinuline ）[35]、橙黄胡椒酰胺（aurantiamide acetate ）,[36]及白藜芦醇（resveratrol ）等3种茋类化合物（Stilbenes ），其中1种是新化合物[26]，活性试验尚待进行。

最近又发现了乌苏里藜芦总生物碱对缺血性脑损伤的保护作用[37] ，这些工作为乌苏里藜芦生物碱的深入研究打下了基础。

H 刺孢麴霉碱 echinulineC 2O COCH 3CCH CH NH COAurantiamide acetate 橙黄胡椒酰胺C H C H HO HO OHC H C H HO HO OH C H C H HO HO OH HOOCH 3HO αβαββα白藜芦醇 Resveratrol3'5'234424115新化合物茋类化合物 Stilbenes 2,3',4,5'-tetrahydroxystilbene我们计划强化对乌苏里藜芦总生物碱的化学研究，将余下的10余种生物碱分离、纯化并鉴定分子结构，将20种不同结构的单一生物碱进行抗栓降粘活性的比较研究，揭示其构效关系，找出作用点和规律性，为开发新的抗栓降粘活性药物提供科学的依据。

在结构与药效的比较方面，我们曾与日本富山医科药科大学合作，已经有了一定进展。

如：在乌苏里藜芦germine骨架的3位存在乙酰基或2－甲基丁酰基，而同时在15位存在2－甲基丁酰基时，心肌产生正变力作用和正变时作用。

但是，若在3位存在藜芦酰基（3，4-二甲氧基苯甲酰基）、15位存在羟基时，反而产生负变时作用[33]。

藜芦属植物生物碱结构多为异甾体胺类反式喹嗪啶分子骨架,与中药贝母生物碱的分子骨架在反式喹嗪啶部分有一致性。

贝母生物碱近年来用于逆转肿瘤细胞多药耐药研究，从功能和化学结构上属新一类多药耐药逆转剂。

异甾体胺类反式喹嗪啶类生物碱的应用价值不容忽视。

贝母生物碱：目前，临床治疗血栓病均采用抗血小板、抗凝、溶栓、降粘疗法，乌苏里藜芦生物碱已经具备了此四种功能，应用前景令人鼓舞。

2、项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键问题。

研究目标对乌苏里藜芦含有的生物碱进行深入分离、纯化、鉴定各单一生物碱的分子结构，搞清总生物碱的化学组成。

各种纯的单一生物碱进行抗栓降粘的比较研究，研究抗血栓作用机理，寻找新的高活性生物碱，揭示乌苏里藜芦生物碱的构效关系，找出作用靶点和规律性。