明日叶查尔酮对2型糖尿病大鼠胰腺_省略_Bcl_2和Bax蛋白表达的影响_王先红
明日叶查尔酮对2型糖尿病大鼠胰岛素受体表达的影响
０ ． ４４ ８±０． ０ ０ ８ ０ ． ３ ７ ５±０． ０１ ０ ０ ． ３ ７ ６±０． ０ ０ ９
０ ． ３ ７ ８±０ ． Ｏ１ １
糖尿病对照组红细胞 的高 、低亲和力受体结合位点
数ｒ 和ｒ ， 分别为 ６ ４ ． ７ ３ ± ｎ ３ ４ 、１ ８ ２ ７ ． ０ ５± ５ ５ ． ５ ４ ，均 低 于
） ，女 ，在读硕士 ，研究方 向：营养与食 品卫生。 ） ，男 ，博士生导师，教授 ，从事营养与食品卫生学和毒理学研究。
第１ 期
王庆平等 ：明 日叶查尔酮对 ２ 型糖尿病 大鼠胰岛素受体表达 的影响
２ ． ３ 红 细胞 胰 岛 素 受 体 的 表 达 水 平
７ １
表 ２ 各 组 大 鼠 肝脏 ｌ Ｒ蛋 白表 达 的 平 均 光 密 度 值
德 国罗 氏公 司 产 品 。 １ ． ３ 实验 方 法
细胞上胰岛素受体的表达水平等指标 ，观察 明 日叶查尔 酮对 ２型糖尿病大鼠胰 岛素受体表达的影响 。
１ ． ３ ． １ 模型 制备
将实验 动物 用高脂 饲料 喂养 ４周 ，
分别在第 ５ 周的 １ 、３和 ５天早晨 ，各空腹腹腔注射 Ｓ Ｔ Ｚ
中国食 物与营养
２ ０ １ ３ ， １ ９ （ １ ） ： ６ ９ — ７ ２
Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｎｕ ｔ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
明 日叶查 尔 酮 对 ２型 糖 尿 病 大 鼠 胰 岛 素 受体 表 达 的 影 响
王庆平 ，曹 卿， 钟进 义
凋亡相关蛋白Bcl_2及Bax在糖尿病大鼠下颌下腺内的表达
CHIN ESE J OU RNAL OF ANA TOM Y Vol.32No.22009解剖学杂志 2009年第32卷第2期凋亡相关蛋白B cl22及B ax在糖尿病大鼠下颌下腺内的表达第1作者E2mail:wuxueping2003019@ 收稿日期:2008207214;修回日期:2008210227吴学平1 彭彦霄1 伍雪芳1 贾雪梅2(1皖南医学院组织学与胚胎学教研室,芜湖 241000;2安徽医科大学形态学中心实验室,合肥 230032)摘要 目的:观察糖尿病大鼠下颌下腺内凋亡相关蛋白Bcl22和Bax表达变化。
方法:SD雄性大鼠用链脲佐菌素复制糖尿病动物模型,H2E染色观察下颌下腺形态学变化,免疫组织化学SABC技术检测Bcl22及Bax蛋白表达变化。
结果:糖尿病组大鼠下颌下腺组织萎缩,间质纤维增生。
与对照组比较,糖尿病组大鼠下颌下腺导管上皮细胞Bcl22表达下降,Bax表达显著增加。
结论:Bcl22及Bax表达在糖尿病病理变化过程中出现了一定的变化规律。
关键词 糖尿病;Bcl22;Bax;下颌下腺;大鼠Expression of apoptosis2related proteins B cl22and B ax in thesubmandibular gland of diabetic ratWu Xueping1,Peng Yanxiao1,Wu Xuefang1,Jia Xuemei2(11De partment of Histology and Embryolog y,W annan Medical College,W uhu 241000;21Morpholog y Center L aboratory,A nhui Medical Universit y,Hef ei 230032,China)Abstract Obj ective:To investigate the expression changes of apoptosis2related proteins Bcl22and Bax in the submandibular gland of diabetic rats.Met hods:A Sprague2Dawley diabetic rats model was established after injection of streptozotocin.The submandibular glands were observed using H2E staining and immunohistochemistry methods.Results:In the diabetic rats, the submandibular gland atrophied and showed the significant proliferating interstitial pared with the control group,Bcl22immunopositive cells in the submandibular gland showed a descending tendency with the progression of the dis2 ease.Bax immunopositive cells were more significantly increased in diabetic rat.Conclusion:Bcl22and Bax expression is of a certain regulation in the pathogensis of diabetes mellitus.K ey w ords diabetes mellitus;Bcl22;Bax;submandibular gland;rat 近年研究表明,由于各种凋亡调控机制失衡,激发胰岛β细胞凋亡,导致胰岛分泌功能丧失,且由糖尿病引起的中枢神经[1]、肾[2]等并发症亦有Bcl22凋亡基因家族的参与,因此细胞凋亡成为Ⅰ型糖尿病的发病机制之一。
桑银降糖活性成分对大鼠胰腺细胞凋亡相关蛋白bcl-2和bax表达的影响
桑银降糖活性成分对大鼠胰腺细胞凋亡相关蛋白ｂｃｌ－2和ｂａｘ表达的影响摘要目的：观察桑银降糖胶囊对糖尿病模型大鼠胰腺细胞凋亡相关蛋白bcl-2和bax表达的影响。
方法：免疫组化SP 法检测bcl-2 蛋白和bax 蛋白的表达.结果：在应用桑银降糖胶囊后,bcl－2 表达显著回升而bax 表达显著回降, 表明桑银降糖胶囊能通过调节bcl－2 和bax 的表达恢复bcl－2 与bax 间的正常比例, 而维护胰腺的自稳状态。
结论：桑银降糖胶囊能通过上调bcl－2 同时下调bax, 而抑制胰岛细胞凋亡, 从而维护糖尿病模型大鼠的胰岛功能。
关键词糖尿病；胰腺；细胞；bcl－2；bax；表达AbstractObjective：To observe the effect of Sangyin capsule, which is the Apoptosis and expression of apoptosis-related genes of islet cells of streptozocin(STZ) -induced diabetic rats. Methods: Forty STZ- induced diabetic rats were randomly divided into four groups: model group, positive control group with insulin-administration, high dose of Sangyin capsule- administration group, low dose of Sangyin capsule -administration group. 28 days later the blood glucose concentration was determined using one-touch basic Glu meter. To useimmunohisto- chemistrySP method detected their express the proteinum both Bcl-2 and Bax.result：Afert application Sangyin capsule- administration,Bcl－2 expression was advanced andBax expression was subdued predominance. The normal proportion ofboth Bcl-2 and Bax can be recovered to regulat the expression both Bcl-2 and Bax by Sangyin capsule and serviced immunological homeostasis ofinsular. Conclusion: Sangyin capsule can up-regulate Bcl-2 and dowe regulate Bax at the same time, and inhibit the apoptpsis of insular cells , whith protected the function on glandular cells of streptozocin(STZ) -induced diabetic rats.Key Wordsdiabetes；pancreas；cell；Bcl-2；Bax；expression糖尿病是严重危害人类健康的常见病和多发病，全球糖尿病的平均患病率目前大约为5.7%或更多，现今共有超过2.3亿的糖尿病患者,并且正以每年新增700万人的速度递增，成为仅次于心血管疾病的危险因素。
中药复方对2型糖尿病大鼠的胰腺中Bcl-2、Bax表达的影响
因 Ｂ ｌ ２和 Ｂｘ的表达 变化 。结果 中药复方治疗组糖尿病 大鼠的体质量 增长 明显 比模 型 对照组快 ， 糖水平 、 ｃ一 ａ 血 血糖 曲 线下面积均低 于模 型对照组 ， 凋亡相 关基 因 Ｂ ｌ ２的表 达升 高， Ｂ ｘ表达 降低。结论 本草 消渴丹 治疗糖尿 病的机 制 ｃ一 而 ａ
６Ｏ ． ｌ２ ０ ９ ８ ． ７５ ． １０ ６ ０ ７ ．
长 而下 降 。
表 ７ 培 养 时 间对 血 红 栓 菌 菌 丝 体 生 长 的 影 响
培养时间
４
５
参考 文献 ：
［ １］ 卯晓岚．中国大型真 菌 ［ ． 州 ： 南科 学技 术 出版社 ，２０ ： Ｍ］ 郑 河 ０ ０
ＬＳ ＩＨ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡＲ Ｓ Ａ Ｃ ００ Ｏ ２ Ｏ ６ Ｉ ． Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡＭ ＤＣ ＥＥ Ｒ Ｈ２ １Ｖ Ｌ．１Ｎ ． ＨＺ
时珍国医国药 ２ １ ０ ０年第 ２ 卷第 ６期 １
表６ ｐ Ｈ对血红栓菌菌丝体生长的影响
［ 卯晓岚．中国经济 真菌［ ． ３］ Ｍ］ 北京 ： 科学 出版社 ，１９ ： １． ９８ ４１ ４ 讨 论 ［ ４］ 陈今朝 ， 戴 玄， 谭永忠 ，等． 平菇液体种 子培养基 优化 ［ ］ 江 西 Ｊ． 实 验 结 果 表 明 ， 红栓 菌菌 丝体 生 长 的 最 适 培 养 基 组 成 为 葡 血 农 业 大 学 学 报 ， ０ ８３ （ ）９ ５ ２０ ，０ ５ ：１ ． 萄糖 ３０ ， 肉膏 ０７ ％ ， 酸 二 氢 钾 ０ ２ ％ ， 酸 镁 ０ ０ ％ ， ［ ．％ 牛 ．５ 磷 ．０ 硫 ． ５ ５］ 杨 芳 ， 新风 ， 王 朱 骏 ，等． 脉羊 肚菌 液体 培养 条 件 的研究 肋 维生素 Ｂ ０ ｏ ｇ ｍ 。血红栓菌深层 发酵菌丝体生长 的最适 初 ．ｌ ／ ｌ ｍ ［ ］ 食 品科 学 ， ０ ８ ２ （ ：８ ． Ｊ． ２ ０ ，９ ２）２ ０
糖尿病大鼠中细胞凋亡蛋白bax／bcl—2的相关研究进展
糖尿病大鼠中细胞凋亡蛋白bax／bcl—2的相关研究进展近些年来，我国糖尿病的发病几率开始逐渐升高，并且有年轻化的趋势，这严重影响了人们的生存质量。
到目前为止，糖尿病的具体发病机制尚不明确，导致临床上暂时还缺少有效的治疗手段。
近些年来，不断有研究指出，病人体内凋亡蛋白bax/bcl-2的变化与糖尿病的发病机制有非常密切的关系，由其引发的细胞凋亡是引起糖尿病产生并不断发展的重要原因之一。
本文通过查阅以往有关文献资料，从糖尿病概念、大鼠模型建立、细胞凋亡以及bax/bcl-2表达等几个方面对糖尿病的产生原因作出总结与综述，发现bax/bcl-2在集体内的表达水平与糖尿病的发生有非常密切的联系。
[Abstract] In recent years，the incidence of diabetes in our country has gradually increased，and there is a trend of younger age，which seriously affected the quality of people’s life，the pathogenesis of diabetes is still not clear，leading to a temporary lack of effective clinical treatment. In recent years，it has been pointed out that the change of bax/bcl-2 in patients with diabetes mellitus has a very close relationship with the pathogenesis of diabetes. This article reviewed the literature of the past，from the diabetes，diabetes，and the establishment of the model of the establishment of the diabetes，apoptosis and bax/bcl-2 expression and other aspects of the pathogenesis of diabetes，it was found that the expression level of bax/bcl-2 in the group was closely related to the occurrence of diabetes.[Key words] Diabetes；apoptosis；Bax；Bcl-2糖尿病是临床上非常多见的一种慢性疾病，病程较长，常发生于50岁以上的中老年人群[1]。
甘草黄酮对Ⅱ型糖尿病大鼠血糖、血脂等生化指标的影响
Ｌｅｏｔｌｎ（覃±ｓ）
ＴＮＦ—ｃｔ／ｎｇ・ｍＬ～Ｌｅｐｔｉｎ／ｎｇ・ｍＬ一‘ ０．１３９±Ｏ．０８３ ０．１７２±０．０９６
０．５９４±０．１９５ ０．４４
ｃｏｎｔｒｏｌ ＣＦＬ ｍｏｄｅｌ ＨＬＦ
４－０．１２７
０．２８３士０．１２６＋０．７９６±０．５０１ ０．１７６－ｔ－Ｏ．０６４△０．３８３±０．１６０△ ０．４６３±０．２０５
ｍｓ／
引
ｏｌ
九ｌ
ｋＳ
ｂｏｄｙ・ｄ的ＬＦ灌胃，ＵＦ组以１００
ｍｓ／ｋｇ
ｂｏｄｙ・ｄ的ＬＦ灌胃。灌胃五周后，检测实验大鼠的空腹血糖（ＦＢＧ）、甘
油三酯（ＴＧ）、血清总胆固醇（ＴＣ）、游离脂肪酸（ＦＦＡ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－ Ｃ）、总抗氧化能力（Ｔ—ＡＯＣ）、胰岛素（ＩＮＳ）、肿瘤细胞坏死因子（ＴＮＦ）ａ和瘦素（Ｌｅｐｔｉｎ）水平；取肝脏、肾脏、肾周脂 肪、双侧附睾脂肪和大网膜脂肪称重；计算胰岛素敏感指数（１Ｓ１）、肝指数、肾指数及脂体比。结果：高剂量甘草黄酮 显著降低了糖尿病大鼠的ＦＢＧ，ＴＧ，ＴＣ，ＬＤＬ－Ｃ，ＦＦＡ，ＴＮＦ—ａ，ｋｐｔｉｎ肝体比和肾体比，并显著提高了糖尿病大鼠 的Ｔ．ＡＯＣ，ＩＳＩ和脂体比。与高剂量组相比，低剂量甘草黄酮除对ＦＢＧ，ＴＧ，Ｔ—ＡＯＣ和ＩｓＩ有明显作用外，对其他生 化指标的改善效果稍差。结论：甘草黄酮具有降低耱尿病大鼠血糖、调节脂代谢紊乱的作用，并可显著改善胰岛素 抵抗。 ［关键词】 甘草黄酮；ＩＩ型糖尿病；胰岛素抵抗；血糖；血脂
ｏｎ
ＦＢＧ．ＩＮＳ ａｎｄⅡＩ忙±ｓ来自； ｏ ０ ＾ ＾ ＾
№：目ｍｏｄｅｌｍ№＃，Ｐ（０ ０Ｉ．自ｍｎｔｍｌ日目Ｉｔ，‘Ｐ＜０ ０Ｉ。 ２
３Ⅱ对实验太鼠血脂水平的影响 ＬＦ对实验大鼠血脂水平的影响如表２所示。ｃｏｎｔｒｏｔ组和ＣＦＬ组两组间大鼠的ＴＧ，ＴＣ，ＦＦＡ，ＨＤＬ－Ｃ和
GLP-1受体激动剂对糖尿病大鼠心肌组织Bcl-2、Bax表达的影响的开题报告
GLP-1受体激动剂对糖尿病大鼠心肌组织Bcl-2、
Bax表达的影响的开题报告
糖尿病是一种与高血糖相关的代谢性疾病，常伴随着多种严重的病
理生理改变。
其中，心血管系统受损最为严重，导致心肌细胞的凋亡和
坏死，加速心血管疾病的进展。
因此，寻找针对心肌细胞的治疗方法具
有重要意义。
GLP-1受体激动剂是糖尿病治疗中常用的药物，已被证明可以改善
胰岛素的分泌和作用，从而降低血糖水平。
同时，研究表明GLP-1受体
激动剂还可以对心血管系统产生保护作用，但其具体机制尚不清楚。
通
过检测GLP-1受体激动剂对糖尿病大鼠心肌组织中Bcl-2和Bax的表达影响，可以探讨其保护心肌细胞的作用机制。
Bcl-2和Bax是两种与凋亡相关的蛋白质。
Bcl-2可以抑制细胞凋亡，而Bax则具有促进细胞凋亡的作用。
研究表明，GLP-1受体激动剂可以促进Bcl-2的表达，抑制Bax的表达，从而发挥保护作用。
通过检测GLP-1受体激动剂对这两种蛋白的影响，可以深入了解GLP-1受体激动剂的机
制并为开发更有效的治疗药物提供参考。
因此，本研究旨在检测GLP-1受体激动剂对糖尿病大鼠心肌组织
Bcl-2、Bax表达的影响，探究GLP-1受体激动剂保护心肌细胞的机制，
为糖尿病和心血管疾病的治疗提供新的思路。
丙泊酚对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤时凋亡蛋白Bax和BcL-2的影响的开题报告
丙泊酚对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤时凋亡蛋白Bax和BcL-2的影响的开题报告
1. 研究背景及意义：
糖尿病患者心肌梗死、缺血再灌注损伤等心血管疾病的发生率明显高于正常人群。
丙泊酚是一种广泛应用于临床麻醉的静脉镇痛剂，有一定的心脏保护作用。
然而，目前关于丙泊酚对糖尿病心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制的研究还很少。
本研究旨在探究丙泊酚对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤时凋亡蛋白Bax和BcL-2的影响，为进一步研究丙泊酚的心脏保护机制提供重要依据。
2. 研究内容和方法：
①研究对象：2型糖尿病大鼠
②试验组：随机分为对照组、缺血再灌注组、丙泊酚组和缺血再灌注+丙泊酚组，每组n=10只大鼠。
③建立心肌缺血再灌注损伤模型：通过结扎冠状动脉45min，再恢复灌注60min模拟心肌缺血再灌注损伤。
④处理方法：对照组和缺血再灌注组注射等体积的生理盐水，丙泊酚组和缺血再灌注+丙泊酚组分别注射丙泊酚5mg/kg。
⑤检测指标：收集心肌组织，采用免疫组化法检测心肌细胞中Bax 和BcL-2的表达水平，通过西方印迹法检测心肌细胞中caspase-3的表达水平。
3. 预期结果：
预计丙泊酚能够降低2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡相关蛋白Bax的表达水平，提高BcL-2的表达水平，从而发挥心
肌保护作用。
同时，丙泊酚能够降低心肌细胞caspase-3的表达水平，抑制心肌细胞凋亡。
4. 结论和意义：
本研究将有助于揭示丙泊酚的心脏保护机制，为丙泊酚在糖尿病心血管疾病的治疗中的应用提供理论依据，同时对于探究糖尿病心肌缺血再灌注损伤的发生机制及防治也具有一定的参考意义。
黄连素对2型糖尿病地鼠内脏脂肪组_省略_6信号通路基因mRNA表达的影响_刘栩晗
bortezomib0．5mg/kg，twice a week．Blood was collected every15days for HBsAg detection．30days later，mice were sacrificed，liver tis-sue was fixed to make HE staining and HBcAg immunohistochemical detection in order to Count the number of HBcAg positive cells in liver tissue．Ｒesults：Artesunate with50μmol/L and combining with1μmol/L bortezomib on primary hepatocytes of HBV-Tg mice showed no toxicity．10and50μmol/L of artesunate had significant inhibition on HBsAg，and artesunate could promote the inhibition of bortezomib on HBsA in Vitro．In vivo experiment，artesunate with30mg/kg daily for30days could also significantly inhibit the expression of HBsAg and HBcAg in HBV-Tg mice，but bortezomib with0．5mg/kg could stimulate HBsAg expression．Conclusion：In vivo and In vitro experiments showed that artesunate could inhibit HBV antigen expression in HBV-Tg mice．Key words artesunate（青蒿素）；bortezomib（硼替佐米）；HBV-Tg mice；primary hepatocytes；hepatitis B virus（HBV）黄连素对2型糖尿病地鼠内脏脂肪组织P107/PＲDM16信号通路基因mＲNA表达的影响*刘栩晗1，李国生2＊＊，李欣宇1，高政南1＊＊，黄澜2，刘亚莉2（1大连医科大学附属大连市中心医院内分泌科，大连116033；2大连医科大学附属第一医院病理科，大连116011）摘要目的：研究黄连素对肥胖2型糖尿病中国地鼠内脏白色脂肪组织（VWAT）中P107/Ｒb及PＲDM16信号通路系统基因mＲNA表达的影响及相关机制。
黄芪多糖对力竭运动大鼠心肌细胞凋亡及BcL-2、Bax蛋白表达的影响
黄芪多糖对力竭运动大鼠心肌细胞凋亡及BcL-2、Bax蛋白表达的影响马兰军;田振军【摘要】为了探讨黄芪多糖(APS)对力竭运动大鼠机体的保护作用,通过建立大强度力竭运动大鼠模型,选取成年健康雄性SD大鼠24只,随机分为安静对照组,运动组和运动加药组,运动组和运动加药组按照训练模型进行为期6周的耐力训练,最后1次训练进行1次力竭运动,随后取心肌组织并进行样本处理.检测大鼠心肌MDA 含量,用缺口末端标记法(TUNEL法)及免疫组织化学法检大鼠心肌细胞凋亡指数(AI)及BcL-2、Bax蛋白表达的变化.结果表明:运动组MDA含量、AI和BcL-2、Bax 蛋白表达水平均明显高于安静对照组(P＜0.05)；与运动组比较,运动加药组MDA 含量,AI与Bax蛋白表达水平均下降,而BcL-2蛋白表达水平显著增高(P＜0.05).黄芪多糖可有效抑制力竭运动大鼠心肌细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调BcL-2和下调Bax蛋白表达水平有关.%To study the supplementary astragalus polysaccharide (APS) to exhaustion movement rats myocardial cell apoptosis, observe the influence of myocardial cell apop-tosis BcL-2, the regulation of gene Bax changes, explore astragalus polysaccharide (APS) to exhaustion movement rats airframe of protection. By establishing high intensity exhaustion movement model of rats, the selection of adult health male SD rats 24 only randomly divided into quiet in the exercise group and control group, sports dosing group, the exercise group and exercise dosing groups according to training model six-week endurance training, last training once exhaustion movement, exhaustion after motion myocardial organize and sample processing. Detection rats myocardialMDA content, using gap end labeling (TUNEL law) and the method of immunohis to chemistry methods were used by rats myocardial cell apoptosis I,ndex (AI) and BcL-2, Bax protein expression changes. In the exercise group MDA content, AI and BcL-2, Bax protein expression levels were significantly higher in quiet in control group (P < 0. 05). Group compared with sports exercise dosing group MDA content, AI and Bax protein expression level decreased, and BcL-2 protein expression levels rose significantly (P< 0. 05). Astragalus polysaccharide (APS) can restrain the movement exhaustion rats myocardial cell apoptosis, this function may reduce oxidatie stress, raised with BcL-2 and cut Bax protein expression level concerned.【期刊名称】《华中师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(046)002【总页数】4页(P214-217)【关键词】黄芪多糖;力竭运动;心肌;细胞凋亡;BcL-2蛋白;Bax蛋白【作者】马兰军;田振军【作者单位】西安建筑科技大学体育系,西安710055;陕西师范大学体育学院,西安710062【正文语种】中文【中图分类】Q956大强度急性力竭运动过程中，随着运动强度的增加导致机体血液重新分布，心脏血流急骤下降，同时由于能量物质耗竭、代谢产物堆积及氧化应激所造成的自由基损伤等多种因素的影响，机体运动能力下降，出现运动性疲劳，从而引起体细胞凋亡.心肌是终末分化细胞，故一定程度的细胞凋亡可能会使心肌遭受严重的损伤并导致永久性的功能障碍.如何避免心肌损伤己成为运动医学领域的一项重要研究内容.黄芪为豆科植物膜荚黄芪及蒙古黄芪的根，近年来的研究发现黄芪中含多糖、皂苷、黄酮、氨基酸等多种有效成分，其中黄芪多糖（APS）经过高科技萃取、分离而得到，可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用［1-2］.但黄芪多糖对急性力竭运动大鼠心肌细胞是否有保护作用研究不多.本研究旨在采用急性大强度力竭运动大鼠心肌细胞损伤模型，观察其对心肌细胞凋亡调控基因BcL－2、Bax的变化，探讨黄芪多糖对力竭运动大鼠心肌细胞保护作用及可能的作用机制，为中医药在临床上防治心肌缺血、缺氧性疾病和抗运动疲劳的作用提供实验依据.健康雄性SD大鼠（购于陕西中医研究所）24只，3月龄，体重252±13g，所有动物按国家标准啮齿类动物饲料分笼饲养，每笼6只，自由饮食饮水.室温控制在18℃～23℃，相对湿度40%～60%，自然光照.实验室隔天用消毒液消毒.将24只大鼠随机分为3组：安静对照组（安静组）、大强度耐力运动组（运动组）、大强度耐力运动＋黄芪多糖组（运动加药组），每组8只，安静组和运动组每天灌胃生理盐水0.1mL／10g，1次，运动加药组每天灌胃黄芪多糖（购于长沙绿康生物制品有限公司）0.1mL／10g，1次，实验时间6周.实验动物正式实验前，在国产跑台上作5min的适应性训练（速度8.2m／min坡度为0）.正式实验时，运动组和运动加药组大鼠采用Benford［3］根据大鼠体重／摄氧量回归方程建立递增负荷跑台运动疲劳模型，训练持续6周，每周6d，周日休息.先进行1周适应性训练，逐渐提高运动强度至80%VO2max以上，最后1d运动至力竭（表1）.运动时用声光刺激或者用毛刷刺激动物尾部，使动物保持在跑台前部1／3处，以保证运动强度.力竭判断标准：动物未能坚持原跑速，跑的姿势由开始时的蹬地跑变为半卧位跑，腹部与跑道时有接触，甚至为卧位跑，到运动末期，大鼠先后滞留跑道后1／3处达3次以上，各种刺激驱赶均无效，停跑后体征表现为呼吸急促、神情倦怠、腹卧位，对刺激反应迟钝，捕捉时逃避反应较运动前减弱［4-5］.1.3.1 实验仪器SHH·W21·600三用电热恒温水箱，UV－9200紫外可见光光度计，TGL－16C台式高速离心机，PT动物电动跑台，820轮转组织切片机（美国AO公司）；鼠源Bax一抗和鼠二抗（武汉博士德生物工程有限公司）；OLYMPUSBX52显微照相图像采集系统（日本奥林巴斯株式会社）.1.3.2 取材及样品制备在运动期的最后1d，安静组大鼠用20%乌拉坦（0.5mL／kg体重）腹腔麻醉后，打开胸腔，立即取出心脏待用.运动组和运动加药组大鼠进行一次性力竭运动，在力竭运动后即刻麻醉处死，取材待用（方法同安静组）.心肌线粒体悬液的制备：采用差速离心法.取大鼠心肌用介质Ⅰ（0.125mol／L蔗糖溶液，3.0mmol／L n－2－羟乙基呱嗪－n－2－乙磺酸，0.5mmol／L乙二胺四乙酸，pH＝7.4）冲洗净血污，剔除结缔组织，剪碎，加20mL介质电动匀浆器匀浆，放入离心管中离心，2 500r／min，5min，取上清液于12 000r／min离心，10min，沉淀用介质Ⅱ（0.25mol／L蔗糖溶液，2.0mmol／Ln－2－羟乙基呱嗪－n－2－乙磺酸，0.5mmol／L 乙二胺四乙酸，pH＝7.4）悬浮，手动匀浆器匀浆，加入2mL介质Ⅱ，12 000r／min离心，10min，沉淀悬浮在0.5mL介质Ⅱ中，制备成线粒体悬液.1.4.1 测试指标 BCA法蛋白定量试剂盒和MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所）；细胞凋亡检测试剂盒POD（No.MK1020，武汉博士德生物工程有限公司）；抗BcL－2多克隆抗体；抗Bax多克隆抗体.1.4.2 测定方法心肌 MDA含量测定：切取左室全层心肌，4℃，10%匀浆，低温离心取上清，－70℃冻存.按试剂盒说明，采用bicinchoninicacid（BCA）法进行蛋白定量，硫代巴比妥酸法测MDA含量.心肌细胞凋亡、BcL－2和Bax蛋白表达测定：切取2.5mm厚全层心室肌，4%多聚甲醛固定16～20h，常规石蜡包埋，连续切片，片厚5μm.用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡晚期特征性的细胞核DNA片段，以试剂盒提供的阳性对照片作为阳性对照，操作过程用PBS代替脱氧核糖核酸末端转移酶作为阴性对照.凋亡细胞的细胞核为深浅不一的棕黄色或棕褐色，非凋亡细胞呈蓝色.采用链霉亲和素－生物素－过氧化物酶复合法检测心肌细胞BcL－2与Bax的蛋白表达.在阴性对照操作中不加抗BcL－2和抗Bax抗体.蛋白阳性表达细胞的胞质呈棕黄色或棕褐色，细胞核蓝染.将TUNEL与免疫组切片于光镜下400倍放大，数码相机拍摄，图像经OLYMPUSBX52图文分析系统分析，每张切片随机选择10个视野，测定阳性染色的平均吸光度（A）和阳性细胞百分比，计算细胞凋亡指数（apoptotic index，AI）：AI（%）＝平均吸光度×阳性细胞百分比. 所有数据运用SPSS12.0for Windows软件包进行处理.统计学方法采用单因素方差分析（One－Way ANOVA）.实验结果以均数±标准差（X±S）.显著性差异选择P＜0.05和P＜0.01.表2结果显示，运动组比安静对照组心肌MDA含量明显增高，运动加药组比运动组MDA含量明显降低（P＜0.05）.表2结果显示，TUNEL检测结果显示安静对照组凋亡细胞极少，运动组凋亡细胞明显增多，运动加药组比运动组凋亡显著降低（P＜0.05）.表2结果显示，安静对照组中BcL－2、Bax蛋白表达水平较低；运动组与安静对照组相比，BcL－2、Bax蛋白表达均明显增加（均P＜0.05）；与运动组比较，运动加药组BcL－2蛋白表达明显增加，Bax蛋白表达显著降低（均P＜0.05）.在急性力竭运动中会伴有大量心肌细胞凋亡，从而加重了心肌的破坏，这与力竭所致的氧自由基及细胞内钙超载有关［6］.实验利用大鼠运动力竭模型，研究黄芪多糖对运动力竭大鼠心肌细胞凋亡及BcL－2、Bax蛋白表达的影响.结果显示APS可明显减轻因运动力竭导致的心肌细胞凋亡，BcL－2蛋白表达增高、Bax蛋白表达降低，同时MDA的含量降低.研究证实，APS具有抗自由基损伤，保存胞内ATP含量，减轻钙超载等多种生物学效应［7］.实验中APS有减少心肌细胞凋亡的作用，这可能与其抗自由基的作用有关.氧自由基可直接造成DNA损伤或激活凋亡发生过程的关键物质而诱发细胞凋亡［8］；除此之外，氧自由基通过使还原物质耗竭及合成受阻而改变胞内氧化还原状态，修饰刺激信号或活化与凋亡有关的关键蛋白等间接方式来诱导凋亡.氧自由基还会以间接方式介导细胞凋亡，其中涉及线粒体、蛋白激酶、转录因子等多信号转导途径.MDA是脂质过氧化的终产物，其含量间接反映机体细胞受自由基攻击的严重程度［9-10］.本实验进一步说明APS具有明显的抗自由基作用.BcL－2家族蛋白在细胞凋亡过程中具有双向调节作用.在生理条件下，细胞有序而协调地激活凋亡诱导基因和凋亡抑制基因共同控制着细胞代谢功能，维持细胞内环境的动态平衡.Bax是一种促凋亡基因，含有BH1到BH3 3个结构域，分布于线粒体外膜，通过作用于线粒体引起细胞凋亡.Bax蛋白以非活性形式存在于胞质中，在凋亡诱导因素作用下发生构型变化，从细胞质移位到线粒体膜与BcL－2形成异源二聚体抑制BcL－2的活性，使mPTP不可逆开放，启动和维持细胞凋亡的“线粒体途径”.而BcL－2是一种凋亡抑制基因，BcL－2和Bax的比率可决定细胞对凋亡信号的敏感性.BcL－2蛋白具有稳定mPTP的作用，使mPTP的功能保持正常［11］.BcL－2蛋白分布于线粒体外膜的浆膜面、内质网及核膜.它含有BH1到BH4 4个结构域，具有稳定线粒体膜的功能，阻止线粒体释放caspase及活性因子 AIF、Cyt c等.BcL－2能抑制Bax和Bad等从胞质向线粒体膜的移位；抑制Bax形成异源二聚体和寡聚体，抑制Bax与VDAC的相互作用，阻断Bax的成孔活性.实验发现运动组大鼠心肌BcL－2和Bax蛋白表达均增高，这可能是心肌在力竭运动过程中损伤和抗损伤相互拮抗的一种表现，BcL－2受到某种抑制因素的作用，使Bax促凋亡作用最终占优从而导致心肌细胞凋亡［12］.APS能够减少因运动力竭所致的心肌细胞凋亡，其作用的机制可能与抗自由基损伤、上调BcL－2和下调Bax蛋白表达有关，至于其具体的分子机制或信号传导途径尚需进一步深入研究.【相关文献】［1］毛淑梅，李承德，王琳，等.黄芪多糖对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡作用及机制的研究［J］.中国药理学通报，2009，25（9）：1227－1229.［2］尹艳艳，李卫平，王绍斌，等.黄芪提取物对大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤后炎症因子及细胞凋亡的作用［J］.中国药理学通报，2005，21（12）：1486－1489.［3］Bedford T G，Tipton C M，Wilson N C，et al.Maximum oxygen consumption of rats and its changes with various experimental procedures［J］.J App Physiol，1979，47（6）：1278－1283.［4］李善妮.急性力竭运动对大鼠肝细胞损伤及凋亡的影响［D］.长沙：湖南师范大学.2005. ［5］李善妮，翟树林，汤长发.急性不同强度至力竭运动对大鼠肝细胞凋亡的影响［J］.北京体育大学学报，2006，29（5）：634－636.［6］金其贯，邓荣华.过度训练对大鼠心肌细胞凋亡的影响［J］.中国运动医学杂志，2000，19（4）：356－359.［7］Mu Y L，Xie Y Y，Zhou L，et al Cardioprotective effect of methy lamine irisolidone，a new compound，in hypoxia／reoxygenation injury in cultured rat cardiacmyocytes ［J］.Chem Biodivers，2009，6（8）：1170－1177.［8］Danz E D，Skramsted J，Henry N，et al.Resveratrol prevents doxo－rubicin cardiotoxicity through mitochondrial stabilization and the Sirt1pathway［J］.Free Radic BiolMed，2009，46（12）：1589－1597.［9］Coudray C，Pucheu S，Boucher F，et al.Effect of ischemia／reperfu－sion sequence on cytosolic iron status and its release in the coro－nary effluect in isolated rathearts ［J］.Biol Trace Elem Res，1994，41（1－2）：69－75.［10］Gao F，Gong B，Christopher T A，et al.Anti－apoptotic effect ofBe－nidipine，along lasting vasodilating calcium antagonist，in ische－mic－reperfused myocardial cells ［J］.Brit J Pharmacol，2001，7（9）：132－136.［11］张钧，许豪文.运动对细胞凋亡的影响（综述）［J］.体育学刊，2002，9（6）：45－48. ［12］杨连君，司晓辉，王文亮.凋亡相关蛋白Bax在肝细胞癌的表达及其意义［J］.诊断病理学杂志，2001，8（5）：282－284.。
糖尿病大鼠早期视网膜形态观察和Bcl-2、Bax及VEGF表达的意义
㊃实验论著㊃糖尿病大鼠早期视网膜形态观察和Bcl-2㊁Bax及VEGF 表达的意义宋丽君1,2,王 艺2,3,4,陈 迪2,3,4,高富军1,丁 豪5,李玉明5,钟 萌5基金项目:泰安市科技计划发展项目(No.2015NS1119)作者单位:1(276000)中国山东省临沂市,山东省鲁南眼科医院;2(271000)中国山东省泰安市,泰山医学院附属医院眼科; 3(271016)中国山东省泰安市,泰山医学院眼视光学系; 4(271016)中国山东省泰安市,泰山医学院眼视光研究所; 5(271000)中国山东省泰安市,泰山医学院基础医学院作者简介:宋丽君,女,毕业于泰山医学院,硕士研究生,住院医师,助教,研究方向:眼底病㊂通讯作者:王艺,男,毕业于韩国全北大学,医学博士,副教授,副主任医师,泰山医学院眼视光学系副主任,眼视光研究所所长,研究方向:青光眼㊁眼底病㊁眼视光.346048368@收稿日期:2018-05-19 修回日期:2018-10-11 Retinal morphology and expression of Bcl-2,Bax and VEGF in early diabetic rats Li-Jun Song1,2,Yi Wang2,3,4,Di Chen2,3,4,Fu-Jun Gao1,Hao Ding5,Yu-Ming Li5,Meng Zhong5Foundation item:Tai’an Science and Technology Development Project(No.2015NS1119)1Shandong Lunan Eye Hospital,Linyi276000,Shandong Province,China;2Department of Ophthalmology,Affiliated Hospital of Taishan Medical University,Tai’an271000,Shandong Province,China;3Department of Optometry,Taishan Medical University,Tai’an271016,Shandong Province,China;4Institute of Optometry,Taishan Medical University,Tai’an271016, Shandong Province,China;5Basic Medical College,Taishan Medical University,Tai’an271000,Shandong Province,China Correspondence to:Yi Wang.Department of Ophthalmology, Affiliated Hospital of Taishan Medical University,Tai’an271000, Shandong Province,China.346048368@ Received:2018-05-19 Accepted:2018-10-11Abstract•AIM:To investigate the expression and significance of B-cell lymphoma factor(Bcl-2),Bcl2-Associated X protein(BAX)and vascular endothelial growth factor (VEGF)in the retina of early diabetic rats.•METHODS:An early diabetic retinopathy model was made in rat by intraperitoneal injection of streptozotocin (60mg/kg).The model rats were sacrificed at4,8,12wk after the establishment of the model,and the eyeballs were removed to make paraffin section and retina sheets were prepared.HE staining was used to detected the retinal morphology and vascularity. Immunohistochemistry(IHC)was employed to examine the expression of Bcl-2,Bax and VEGF in the retina. ADP enzyme staining were conducted to evaluate the retinal vascular morphologic change.Nikon-A1laser confocal microscopy was used to detect the morphology, fluorescence intensity and distribution of Ca2+in retinal cells.•RESULTS:In the diabetic group,the number of endothelial cells in the inner limiting membrane increased12wk later.In diabetes mellitus group,there was no vascular area in the middle and peripheral retina, and no vascular area was significantly more than that in the blank control group(P<0.05).There were significant differences in the values of VEGF,Bcl-2and Bax between diabetic rats and control group(P<0.05). Compared with diabetic rats at4,8,12wk,the fluorescence concentration of calcium ions in RGCs increased gradually,and the ratio of fluorescence staining intensity increased significantly(P<0.05).•CONCLUSION:The expressions of Bcl-2and Bax were significantly increased,which upgraded the expression of VEGF in the retinas of early diabetic rats.Bcl-2,Bax and VEGF might play an important role in the neovascularization of the retinas in early diabetic rats.•KEYWORDS:streptozotocin;vascular endothelial growth factor;neovascularization;retina;diabetic ratsCitation:Song LJ,Wang Y,Chen D,et al.Retinal morphology and expression of Bcl-2,Bax and VEGF in early diabetic rats. Guoji Yanke Zazhi(Int Eye Sci)2018;18(11):1951-1957摘要目的:探讨B-细胞淋巴瘤因子(B-cell lymphoma factor, Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl2-Associated X protein, Bax)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在早期糖尿病大鼠视网膜上的表达及意义㊂方法:用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射(60mg/kg)制作大鼠早期糖尿病模型㊂于造模后4㊁8㊁12wk颈椎脱臼法处死大鼠,取双眼全眼球组织做石蜡切片并做视网膜铺片,通过HE染色观察视网膜各层的形态学和血管分布变化;取双眼视网膜组织石蜡切片,通过免疫组化法检测Bcl-2㊁Bax和VEGF在视网膜组织中的表达㊂行ADP酶视网膜血管染色,观察视网膜血管形态变化㊂应用激光共聚焦显微镜检测视网膜细胞的形态㊁细胞中Ca2+的荧光强度和分布变化㊂结果:糖尿病组造模12wk突破内界膜的内皮细胞核个数呈递增趋势㊂糖尿病组视网膜中周部和周边部可见无血1591管区,无血管区面积也明显大于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)㊂糖尿病组大鼠VEGF㊁Bcl-2和Bax光密度值与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P< 0.05)㊂糖尿病组大鼠造模4㊁8㊁12wk比较,RGCs内钙离子荧光浓度逐渐升高,荧光染色强度比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂结论:早期糖尿病大鼠视网膜的Bcl-2和Bax表达非常明显,从而上调VEGF的表达㊂Bcl-2㊁Bax和VEGF是糖尿病视网膜病变中新生血管形成的重要影响因素㊂关键词:链脲佐菌素;血管内皮生长因子;新生血管;视网膜;糖尿病大鼠DOI:10.3980/j.issn.1672-5123.2018.11.02引用:宋丽君,王艺,陈迪,等.糖尿病大鼠早期视网膜形态观察和Bcl-2㊁Bax及VEGF表达的意义.国际眼科杂志2018;18 (11):1951-19570引言糖尿病引发的眼部疾病正日益受到重视,并且已成为主要的致盲性原因之一,而糖尿病视网膜病变已经成为糖尿病全身并发症中最严重的微血管病变之一[1]㊂糖尿病视网膜病变(diabetic retionpathy,DR)的发生发展和生长因子关系密切,现已证实诸多细胞因子,包括血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)㊁表皮细胞生长因子(epidermal growth factor,EGF)㊁成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)等参与该病理过程[2]㊂近年来,随着对Bcl-2和Bax在DR发病过程中的研究,基本确定二者是糖尿病视网膜病变的关键因子,这为今后从分子水平治疗和预防DR的发生和发展有重要意义㊂本实验旨在通过观察糖尿病大鼠视网膜形态学表现以及Bcl-2,Bax和VEGF在视网膜的表达,以确定其在DR发生发展过程中的作用和意义,达到寻求新的治疗领域和方向的目的㊂1材料和方法1.1材料 180~200g雄性SD大鼠60只,购自北京斯贝福实验动物有限公司,实验过程中饲养于泰山医学院生命科学研究中心SPF级动物房,置于12h亮和12h暗的环境中,所有实验操作均符合泰山医学院医学伦理审查委员会的标准,遵循ARVO眼科学和视觉科学学会的实验动物使用规范㊂腺苷二磷酸酶(adenosine diphosphatase,ADPase)试剂盒(美国Sigma公司);100g/L 水合氯醛(泰山医学院附属医院制剂室提供);兔抗大鼠Bax多克隆抗体(中国Bioworld公司);兔抗大鼠Bcl-2多克隆抗体(中国Bioworld公司);兔抗大鼠VEGF多克隆抗体(中国Bioworld公司);DM4000B显微图像处理系统(瑞士Leica公司);IX-100倒置荧光显微镜(日本Olympus公司),激光共聚焦显微镜(日本Olympus公司)㊂1.2方法1.2.1实验分组 实验分为空白对照组(BC组)和糖尿病组(DM组),其中BC组大鼠24只,DM组大鼠40只㊂将STZ溶于0.05mol/L柠檬酸缓冲液(pH=4.5)中,配制成10g/L溶液,按60mg/kg对DM组大鼠进行腹腔注射,空白对照组注射等量的生理盐水㊂注射STZ后3d取尾静脉血检测血糖,达11.1mmol/L入选DM组(剔除4只大鼠)㊂实验期间自由饮食,定期测血糖㊁体质量㊂于造模后4㊁8㊁12wk颈椎脱臼法处死大鼠㊂1.2.2眼球取材和固定 分别于4㊁8㊁12wk每个时间点处死糖尿病组大鼠6只,空白对照组4只,完整取出大鼠的双眼眼球,眼球内注射4%多聚甲醛固定24h㊂沿角膜缘环形切开,剥除晶状体和玻璃体,将眼杯以10%甲醛溶液固定㊂组织依次经过软蜡和3次硬蜡,最后硬蜡包埋㊂然后连续切片,厚度为4μm,备用于HE染色和免疫组织化学染色㊂1.2.3视网膜苏木精-伊红(HE)染色 应用二甲苯对石蜡切片脱蜡,并用99.9%㊁97%㊁75%㊁50%乙醇和蒸馏水依次清洗,苏木精染色1~3min;自来水洗1min,1%盐酸酒精分化20s;自来水洗1min;PBS返蓝30s;自来水洗1min,伊红染色1min;自来水洗30s,梯度酒精脱水;二甲苯透明,Histomount封片,光镜下观察高倍镜下两组大鼠视网膜神经节细胞形态和突破内界膜内皮细胞核个数并拍照㊂1.2.4免疫组织化学染色 将石蜡切片置于烘箱中58℃烤1~2h;石蜡切片常规二甲苯脱蜡,取出切片置入100%乙醇,3min依次置入90%~70%各级酒精中各3min㊂PBS洗3次×3min;用0.01mol/L柠檬酸钠抗原修复液(pH=6.0)煮沸热修复(95℃,15min),保温15min,室温自然冷却,PBS洗3次×3min;30mL/L H2O2抑制内源性过氧化物酶室温孵育20min,PBS洗3次×3min; 100mL/L正常胎牛血清室温孵育30min,PBS洗3次×3min;一抗4℃孵育过夜,PBS洗3次×3min;二抗37℃孵育1.5h,PBS洗3×3min;DAB显色3~5min;苏木素复染30s,盐酸酒精分化1s;取出切片置入70%乙醇,3min依次置入90%~100%各级乙醇中各3min㊂脱水吹干后,树脂封片;镜下观察,细胞核呈紫蓝色,阳性产物呈棕黄色或黄色颗粒㊂1.2.5视网膜ADP酶血管染色 分别于4㊁8㊁12wk每个时间点处死糖尿病组大鼠3只,空白对照组2只,将双眼眼球用4%多聚甲醛溶液固定10min,取出视网膜再放入多聚甲醛固定液中固定过夜,4℃时50mmol/L pH=7.2的Tris顺丁烯二酸缓冲液漂洗15min×5次,以后加入37℃新鲜配制的0.2mol/L pH=7.2的Tris顺丁烯二酸缓冲液(其中含硝酸铅3mmol/L㊁氯化镁6mmol/L㊁ADP1mg/mL),37°C孵育15min㊂再用室温50mmol/L pH=7.2的Tris顺丁烯二酸缓冲液漂洗15min×5次,然后加入1∶10硫化铵显色1min㊂最后用室温50mmol/L pH=7.2的Tris顺丁烯二酸缓冲液漂洗15min×3次㊂视网膜铺片腺苷二磷酸酶(adenosine diphosphatase, ADPase)酶染色,甘油封片保存,光镜观察㊂NIH Image (Scion Image)软件包计算视网膜无血管区面积㊂1.2.6激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度 分别于4㊁8㊁12wk每个时间点处死大鼠3只,空白对照2只,大鼠应用7%水合氯醛腹腔麻醉,摘除双眼眼球后,在显微镜下沿角膜缘后2mm剪开眼球,取出角膜㊁晶状体和玻璃体后,分离视网膜,并将视网膜置于事先准备好的保存溶液中(保存溶液配比:NaCl130,KCl5,CaCl222, MgCl221,HEPES10,glucose20,1mol/L NaOH调节溶液最终pH=7.4,单位mmol/L)㊂Ca2+荧光指示剂的选择:常规选用Fluo-3/AMFluo-3/AM进入细胞后,酯基被水2591电话:029⁃82245172 85263940 电子信箱:IJO.2000@解掉,Fluo-3与细胞内游离Ca2+结合,因而其荧光强度可以反映细胞内游离Ca2+的浓度㊂Ca2+荧光探针负载:以无菌D’-Hanks液清洗各处理标本3次,加入适量的Fluo-3/AM(终浓度为4μmol/L)和Pluronic-F127(终浓度为0.05%),避光,37℃恒温轻轻振荡,孵育45min㊂负载后的标本以含2mL/L牛血清白蛋白的Hanks液清洗2次,Hanks液清洗1次,以充分洗去细胞外未负载的残余荧光染料㊂按上所述,向各实验组细胞中加入相应的孵育缓冲液,室温放置20min,按实验设计作相应检测㊂激光共聚焦显微镜测定[Ca2+]:应用Nikon-A1型激光扫描共聚焦显微镜操作系统的488nm通道激光系统,扫描Fluo-3/ AM标记的Ca2+反应物㊂扫描选用的参数为:激发光波长为488nm,观测光波长为515±15nm,扫描方式为点扫描, Zoom为(1.0),像素为1048×1048㊂经NIS-Elements AR 软件(4.2.0)摄像,观察各标本细胞的形态㊁细胞中Ca2+的荧光强度和分布变化㊂统计学分析:采用SPSS20.0统计软件包进行数据统计分析㊂计量资料以均数±标准差(⎺x±s)表示,不同时间点的组间均数比较采用重复测量的方差分析,多组均数比较采用LSD-t检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1两组大鼠不同时间点血糖和体质量变化情况 空白对照组:24只大鼠血糖无明显变化,饮水量㊁尿量正常,体质量随鼠龄增加呈上升趋势㊂糖尿病组:40只大鼠注射STZ,48h后测血糖㊁尿糖,空腹血糖>11.1mmol/L㊁尿糖(+++)共36只,4只剔除,其血糖值见表1所示㊂方差分析结果显示,因素1(分组因素)和因素2(时间点因素)P<0.001(F分组=157.852,F时间=65.163),交互作用分析显示F分组×时间=59.938(P<0.001)㊂即两因素对空腹血糖值的变化均有影响,且具有交互作用㊂随鼠龄增加,糖尿病组大鼠体质量初期改变不明显,之后呈缓慢增长趋势,最终呈现消瘦状态,其体质量变化如表2所示,与正常对照组各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05)㊂方差分析结果显示,两因素对大鼠体质量变化的影响均有统计学意义(F分组= 157.073,P<0.001;F时间=349848.721,P<0.001);交互作用结果为F分组×时间=64189.073(P<0.001)㊂即分组因素和时间点因素对大鼠体质量的变化均有影响,且具有交互作用㊂2.2两组大鼠不同时间点视网膜HE染色结果 高倍镜下(×400)空白对照组大鼠可见视网膜表面光滑,视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGCs)排列整齐;内丛状染色较均匀;内核层和外核层细胞排列较整齐;视锥㊁视杆细胞排列整齐㊂糖尿病组大鼠4㊁8wk时的视网膜组织结构与空白对照组无明显差异;12wk时,可见视网膜内界膜略肿胀,表面不平㊁增厚,偶有毛细血管内皮细胞突出于内界膜,突破内界膜的内皮细胞核个数呈递增趋势(表3),RGCs排列不整齐(图1)㊂2.3两组大鼠不同时间点视网膜血管铺片形态学观察 空白对照组大鼠视网膜被血管完全覆盖,可见视网膜动脉和静脉各有4~6支分支自视乳头处放射状发出,血管分布均匀,走行自然,视网膜三层血管清晰可辨㊂糖 表1 两组大鼠不同时间点空腹血糖变化(⎺x±s,mmol/L)时间BC组DM组0wk4.14±0.864.52±0.792wk5.17±0.68a5.30±2.004wk5.45±1.35a16.19±4.49b,d 6wk5.45±0.81a19.58±1.52b,d 8wk5.36±0.62a22.15±1.78b,d 10wk4.88±0.66a25.65±2.11b,d 12wk5.14±0.91a29.17±2.00b,d 注:DM组:糖尿病组;BC组:空白对照组㊂a P<0.05,b P<0.001 vs同组内0wk;d P<0.001vs BC组同时间点㊂表2 两组大鼠不同时间点体质量变化(⎺x±s,g)时间BC组DM组0wk265.87±4.49264.63±6.921wk280.92±4.58b270.74±6.94a,d 2wk295.98±4.64b276.73±6.97b,d 3wk310.93±4.48b282.69±7.04b,d 4wk325.76±4.62b288.67±6.99b,d 5wk341.05±4.61b294.63±6.91b,d 6wk355.98±4.58b300.76±6.84b,d 7wk370.93±4.62b306.80±7.02b,d 8wk385.83±4.59b312.72±7.00b,d 9wk400.83±4.57b318.53±6.93b,d 10wk415.88±4.54b324.66±6.98b,d 11wk430.86±4.57b330.63±6.98b,d 12wk446.02±4.68b336.74±7.00b,d 注:DM组:糖尿病组;BC组:空白对照组㊂a P<0.05,b P<0.001vs 同一处理组内0wk;d P<0.001vs同一时间点BC组㊂表3 两组大鼠不同时间点突破内界膜的内皮细胞核个数(⎺x±s,个/高倍镜)组别4wk8wk12wk BC组8.95±0.767.76±0.507.76±1.13 DM组17.40±0.44a19.79±0.18a22.90±0.21a,c,e 注:DM组:糖尿病组;BC组:空白对照组㊂a P<0.05vs同一时间点BC组;c P<0.05vs DM组4wk;e P<0.05vs DM组8wk㊂尿病组大鼠视网膜中周部和周边部可见无血管区,血管迂曲㊁扩张,分布紊乱,渗漏严重;血管分层不清,可见异常交通支;无血管区面积也明显大于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05,图2,表4)㊂2.4两组大鼠不同时间点免疫组织化学结果观察 在各期糖尿病组和空白对照组大鼠视网膜都观察到明显Bax㊁VEGF和Bcl-2的表达㊂除Bcl-2蛋白外均以糖尿病组表达最高,空白对照组最低㊂空白对照组大鼠视网膜有部分Bcl-2㊁Bax和VEGF表达(图3~5);而糖尿病组大鼠视网膜各层可见部分Bcl-2㊁Bax和VEGF的阳性表达,视网膜血管和内核层散在VEGF阳性表达(图3~5)㊂图像分析结果表明,糖尿病组大鼠VEGF㊁Bcl-2和Bax光密度值与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,表5)㊂糖尿病组大鼠4㊁8㊁12wk均可见位于视网膜内核层的弱阳性染色,在部分切片的内界膜亦可见浅黄色阳性反应㊂3591图1 两组大鼠视网膜HE 染色结果(×100) A:空白对照组4wk;B:空白对照组8wk;C:空白对照组12wk;D:糖尿病组4wk;E:糖尿病组8wk;F:糖尿病组12wk㊂图2 两组大鼠不同时间点视网膜血管ADP 酶染色形态学观察(×100) A:空白对照组4wk;B:空白对照组8wk;C:空白对照组12wk;D:糖尿病组4wk;E:糖尿病组8wk;F:糖尿病组12wk㊂图3 两组大鼠不同时间点视网膜各层Bax 表达(×200) A:空白对照组4wk;B:空白对照组8wk;C:空白对照组12wk;D:糖尿病组4wk;E:糖尿病组8wk;F:糖尿病组12wk㊂GCL:神经节细胞层;INL:内核层;ONL:外核层㊂4591电话:029⁃82245172 85263940 电子信箱:IJO.2000@图4 两组大鼠不同时间点视网膜各层Bcl-2表达(×200) A:空白对照组4wk;B:空白对照组8wk;C:空白对照组12wk;D:糖尿病组4wk;E:糖尿病组8wk;F:糖尿病组12wk㊂GCL:神经节细胞层;INL:内核层;ONL:外核层㊂图5 两组大鼠不同时间点视网膜各层VEGF 表达(×200) A:空白对照组4wk;B:空白对照组8wk;C:空白对照组12wk;D:糖尿病组4wk;E:糖尿病组8wk;F:糖尿病组12wk㊂GCL:神经节细胞层;INL:内核层;ONL:外核层㊂表4 两组大鼠不同时间点无血管区面积测定指标(⎺x ±s ,mm 2)组别0wk4wk8wk12wkBC 组3.74±0.403.19±0.183.08±0.723.25±0.31DM 组3.74±0.315.53±0.72a9.77±2.56a,c10.28±0.70a,c,e注:DM 组:糖尿病组;BC 组:空白对照组㊂a P <0.05vs 同一时间点BC 组;c P <0.05vs DM 组0wk;e P <0.05vs DM 组4wk㊂表5 两组大鼠不同时间点视网膜Bax㊁Bcl-2及VEGF 的表达⎺x ±s 组别Bax 4wk8wk 12wkBcl-24wk8wk 12wkVEGF 4wk8wk 12wkBC 组0.129±0.0130.119±0.0080.122±0.0110.213±0.0130.224±0.0160.206±0.0110.133±0.0130.121±0.0110.127±0.009DM 组0.158±0.012a 0.184±0.013c,e0.211±0.016a,c,e 0.152±0.014a 0.136±0.011a,c0.105±0.017a,c,e 0.201±0.012a 0.241±0.014a,c0.296±0.019a,c,e注:DM 组:糖尿病组;BC 组:空白对照组㊂a P <0.05vs 同一时间点BC 组;c P <0.05vs DM 组4wk;e P <0.05vs DM 组8wk㊂表6 两组大鼠不同时间点RGCs 内钙离子荧光染色强度比值变化⎺x ±s 组别4wk8wk12wkBC 组1052.97±64.121054.18±58.731055.54±70.28DM 组1071.35±72.361381.42±137.28a,c1467.58±123.62a,c,e注:DM 组:糖尿病组;BC 组:空白对照组㊂a P <0.05vs 同一时间点BC 组;c P <0.05vs DM 组4wk;e P <0.05vs DM 组8wk㊂5591图6 两组大鼠不同时间点视网膜Fluo-3/AM 染色(×200) A:空白对照组4wk;B:空白对照组8wk;C:空白对照组12wk;D:糖尿病组4wk;E:糖尿病组8wk;F:糖尿病组12wk㊂2.5两组大鼠不同时间点视神经节细胞内钙离子浓度变化 空白对照组大鼠RGCs 内钙离子荧光染色强度无明显改变㊂糖尿病组大鼠8㊁12wk 组与同时期空白对照组比较,RGCs 内钙离子荧光染色强度与正常对照组比值差异有统计学意义(P <0.05,图6,表6)㊂糖尿病组大鼠4㊁8㊁12wk 比较,RGCs 内钙离子荧光浓度逐渐升高,荧光染色强度比值的升高,差异均有统计学意义(P <0.05)㊂3讨论本研究中,糖尿病组大鼠可见细胞增殖,排列紊乱,并可见新生血管芽,有些毛细血管腔中可见红细胞㊂这一结果表明,大鼠糖尿病视网膜病变随着糖尿病病程的延长而加重,血管增殖更为明显㊂各种因素导致氧化应激是共同致病因素,氧化应激可产生活性氧,破坏氧化和抗氧化平衡,激活下游信号传导通路而产生视网膜膜蛋白损伤因子,视网膜新生血管的形成与引起血管生成抑制因子和刺激因子这一对拮抗因子原有平衡被打破有关[3-6]㊂本实验结果表明,高血糖能通过上调VEGF 的表达,参与糖尿病视网膜病变新生血管的形成㊂所以,即使在糖尿病视网膜病变的非缺血期,也存在视网膜新生血管形成的危险因素:高血糖㊂这为糖尿病视网膜病变的治疗和研究提供了一个新的思路和方向㊂糖尿病早期大鼠RGCs 发生了凋亡,最早发生于成模后第4wk,并且随病程延长,凋亡的RGCs 逐渐增多㊂通过激光共聚焦显微镜检测钙离子浓度,在第4㊁8㊁12wk 时,糖尿病组RGCs 内的钙离子浓度较对照组均升高,并且通过糖尿病组内第4㊁8㊁12wk 之间比较发现,RGCs 内钙离子浓度逐渐升高㊂细胞内钙离子浓度的升高会激活一些生物酶,通过引起一系列的神经毒性作用,有可能最终导致RGCs 的凋亡㊂随着糖尿病病程的延长,凋亡的RGCs 逐渐增多,RGCs 内钙离子浓度逐渐升高,所以我们推测,在糖尿病大鼠模型早期RGCs 内钙离子浓度的升高可能是导致RGCs 凋亡的机制之一㊂VEGF 几乎参与了所有眼部新生血管性疾病进程的各个阶段,在糖尿病视网膜病变的发生和发展中也起着关键性作用[7]㊂血管内皮生长因子通过细胞增殖㊁细胞迁移和毛细血管形成的作用,促进新生血管的生长[8]㊂而对Bcl-2在这方面的研究报道颇为少见㊂所以,随着对Bcl-2进一步深入地研究,有可能为糖尿病视网膜病变的预防和治疗找到全新的干预靶点㊂高糖导致培养的内皮细胞DNA 损伤,细胞复制延迟[9]㊂Bcl -2属细胞存活基因[10]㊂有观点认为,当Bcl-2被活化㊁表达升高后可以反过来下调VEGF [11]㊂本研究中观察到的一个重要现象是,在糖尿病视网膜同一标本上既有VEGF 的表达又有Bcl-2的表达㊂高糖环境诱导的DNA 损伤刺激导致VEGF 表达升高,同时在此作用过程中,Bcl -2所起作用被认为是阻止视网膜血管内皮细胞的凋亡,与VEGF 表达升高共同作用以抵御高糖的损害,维持细胞相对稳定㊂Bax 与Bcl-2协同作用,分别促进或抑制细胞的凋亡[12]㊂当Bax 的量高于Bcl -2时,促进细胞凋亡;反之,细胞凋亡被抑制㊂VEGF 具有刺激血管内皮细胞增生和维持细胞存活的特异作用[13]㊂因此,VEGF 的抑制剂将成为治疗DR 的新方向㊂近年来,对于VEGF 的基础和临床研究已取得了较大的进展,VEGF 的表达与视网膜新生血管形成存在密切关系,VEGF 已被认为是新生血管形成的关键因子,但不是唯一因子㊂参考文献1Lu L,Lu Q,Chen W,et al .Vitamin D 3protects against diabetic retinopathy by inhibiting high -glucose -induced activation of the ROS /TXNIP /NLRP3inflammasome pathway.J Diabetes Res 2018;2018:81935236591电话:029⁃82245172 85263940 电子信箱:IJO.2000@2Safi H,Safi S,Hafezi-Moghadam A,et al.Early Detection of Diabetic Retinopathy.Surv Ophthalmol2018;63(5):601-6083Mohammad G,AlSharif HM,Siddiquei MM,et al.Rho-associated protein kinase-1mediates the regulation of inflammatory markers in diabetic retina and in retinal Müller cells.Ann Clin Lab Sci2018;48 (2):137-1454Huang YC,Liao WL,Lin JM,et al.High levels of circulating endothelial progenitor cells in patients with diabetic retinopathy are positively associated with ARHGAP22expression.Oncotarget2018;9 (25):17858-178665Sawada O,Ichiyama Y,Obata S,et parison between wide-angle OCT angiography and ultra-wide field fluorescein angiography for detecting non-perfusion areas and retinal neovascularization in eyes with diabetic retinopathy.Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol2018;256(7): 1275-12806Elshaer SL,Lemtalsi T,El-Remessy AB.High glucose-mediated tyrosine nitration of PI3-kinase:A molecular switch of survival and apoptosis in endothelial cells.Antioxidants(Basel)2018;7(4):47 7Holekamp NM,Campbell J,Almony A,et al.Vision outcomes following anti-vascular endothelial growth factor treatment of diabetic macular edema in clinical practice.Am J Ophthalmol2018;191:83-91 8Kiss S,Liu Y,Brown J,et al.Clinical utilization of anti-vascular endothelial growth-factor agents and patient monitoring in retinal vein occlusion and diabetic macular edema.Clin Ophthalmol2014;8: 1611-16219Ehlers JP,Wang K,Singh RP,et al.A prospective randomized comparative dosing trial of ranibizumab in bevacizumab-resistant diabetic macular edema:The REACT Study.Ophthalmol Retina2018;2(3): 217-22410Klaassen I,de Vries EW,Vogels IMC,et al.Identification of proteins associated with clinical and pathological features of proliferative diabetic retinopathy in vitreous and fibrovascular membranes.PLoS One2017;12 (11):e018730411Goruk NY,Deveci E.Immunoexpression of vascular endothelial growth factor and B-cell lymphoma2in the uterine tissue of rats treated with melatonin in the estrus phase1.Acta Cir Bras2018;33(7): 629-64012Cai J,Ahmad S,Jiang WG,et al.Activation of vascular endothelial growth factor receptor-1sustains angiogenesis and Bcl-2expression via the phosphatidylinositol3-kinase pathway in endothelial cells.Diabetes 2003;52(12):2959-296813Sirtl S,Knoll G,Trinh DT,et al.Hypertonicity-enforced BCL-2 addiction unleashes the cytotoxic potential of death receptors.Oncogene 2018;37(30):4122-41367591。
明日叶查尔酮对2型糖尿病大鼠胰岛素受体表达的影响
明日叶查尔酮对2型糖尿病大鼠胰岛素受体表达的影响王庆平;曹卿;钟进义【期刊名称】《中国食物与营养》【年(卷),期】2013(019)001【摘要】目的:探讨明日叶查尔酮(Ashitabe chalcone,AC)对2型糖尿病(2-DM)大鼠肝细胞及红细胞胰岛素受体表达的影响.方法:将采用小剂量链脲佐菌素(STZ)加高脂饲料饲养方法建立的Wistar大鼠2型糖尿病模型随机分为4组:高、中、低剂量组,分别经口灌胃给予明日叶查尔酮30、10、5 mg/(kg·bw);糖尿病对照组给予等量生理盐水灌胃,各组均喂以高脂饲料;正常对照组为正常大鼠喂以普通饲料.检测肝脏和红细胞胰岛素受体表达及空腹血糖、血清胰岛素等指标.结果:与正常对照组比较,糖尿病对照组空腹血糖和血清胰岛素水平显著性升高,肝细胞胰岛素受体表达和红细胞胰岛素受体结合位点r1和r2则均降低(P＜0.01);高剂量组的血糖水平和血清胰岛素水平均较糖尿病对照组降低,肝细胞胰岛素受体表达和红细胞胰岛素受体结合位点r1和r2则升高(P＜0.01),差异均有统计学意义.结论:明日叶查尔酮可上调2型糖尿痛大鼠肝组织和红细胞胰岛素受体表达水平,降低血糖和血清胰岛素水平.【总页数】4页(P69-72)【作者】王庆平;曹卿;钟进义【作者单位】青岛大学医学院,山东青岛266021;青岛大学医学院,山东青岛266021;青岛大学医学院,山东青岛266021【正文语种】中文【相关文献】1.明日叶查尔酮对2型糖尿病防护作用的研究进展 [J], 曹卿;王庆平;钟进义2.明日叶查尔酮对小鼠肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响 [J], 孟扬;钟进义;孙赫3.明日叶查尔酮对荷瘤小鼠抗氧化能力影响作用的研究 [J], 侯芳霖;钟进义;张燕4.明日叶查尔酮对2型糖尿病大鼠血清ET-1和VE-ca影响 [J], 张照杰;王先红;钟进义5.明日叶查尔酮对小鼠H22肝癌MVD水平的影响 [J], 李子超;王力平;钟进义;郭培志因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Bcl-2和Bax在吗啡依赖雄性大鼠生殖细胞中的表达
Bcl-2和Bax在吗啡依赖雄性大鼠生殖细胞中的表达王彦华;程万里;刘宇宁;刘惠民;李文斌【期刊名称】《中国应用生理学杂志》【年(卷),期】2011(027)001【摘要】目的:探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2和人Bcl-2相关x蛋白(Bcl-2、Bax)在吗啡依赖大鼠睾丸生殖细胞中的表达及细胞凋亡可能机制,为治疗阿片类毒品造成的男性性功能减退提供理论依据.方法:以递增法每日给予雄性大鼠皮下注射盐酸吗啡针剂,建立吗啡依赖组.空白对照组注射等量生理盐水.实验成功后将两组大鼠睾丸组织作常规HE染色和免疫组化染色.结果:吗啡依赖组大鼠生精管壁细胞明显地出现上皮层次减少,仅有2～3层,细胞排列疏松,界限模糊,精子细胞和精子数目减少,并发现曲细精管腔内有脱落的生精细胞;免疫组化结果:吗啡依赖组大鼠生殖细胞中bcl-2的阳性表达率明显低于对照组(P＜0.01),而生殖细胞中bax蛋白的阳性表达率明显高于对照组(P＜0.01).结论:吗啡依赖可造成雄性大鼠生殖细胞凋亡数量显著增加,其机制可能是通过下调抑凋亡因子Bcl-2,上调促凋亡因子Bax,促进生殖细胞凋亡来实现的.【总页数】4页(P55-56,123,后插7)【作者】王彦华;程万里;刘宇宁;刘惠民;李文斌【作者单位】河北工程大学医学院,邯郸,056002;中船重工第七一八所,邯郸,056002;河北工程大学医学院,邯郸,056002;河北工程大学医学院,邯郸,056002;河北医科大学,石家庄,050017【正文语种】中文【中图分类】Q492【相关文献】1.吗啡依赖对雄性大鼠睾丸生殖细胞组织学的影响 [J], 王彦华;刘惠民2.吗啡依赖对大鼠支持细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响 [J], 刘宇宁;王彦华;李梅杰;郭新华;连丽英;袁征3.db/db自发性糖尿病小鼠睾丸生殖细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax表达 [J], 岳凤鸣;庞晓静;高福禄;杜心欣4.大鼠睾丸扭转后生殖细胞凋亡与Bcl-2和Bax基因表达 [J], 刘子明;郑新民;李世文;杨志伟;胡礼泉5.甲醛对小鼠睾丸生殖细胞的DNA损伤及bcl-2、bax蛋白表达的影响 [J], 董杰影;楼哲丰;赵惠玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
明日叶查尔酮对小鼠肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响
明日叶查尔酮对小鼠肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响孟扬;钟进义;孙赫【摘要】目的:研究明日叶查尔酮(Ashitabe chalcone,AC)对小鼠H22肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响.方法:将50只荷H22肝癌小鼠随机分为AC不同剂量实验组(5、20、40 mg/kg),阴性对照组和环磷酰胺(cytoxan,CTX)阳性对照组,共5组,每组10只.AC实验组小鼠每天分别按不同的剂量灌胃,阴性对照组小鼠给予生理盐水灌胃,CTX组隔天腹腔注射CTX 20 ms/kg,10d后处死小鼠,取瘤组织测定瘤质量、抑瘤率,并采用免疫组化法检测各组小鼠肿瘤细胞Caspase-3和Bax 蛋白的表达,用MTT法检测各组小鼠肿瘤细胞增殖活性.结果:阴性对照组小鼠肿瘤细胞Caspase-3和Bax阳性细胞表达率分别为5.00%和4.68%,AC 40mg/kg剂量组分别为38.52%和35.76%,均高于阴性对照组(P<0.05);阴性对照组肝癌细胞增殖活性为1.135±0.032,AC 40 mg/kg剂量组为0.716±0.018,低于阴性对照组(P<0.05).AC 20、40 mg/kg剂量组平均瘤质量均明显低于阴性对照组(P<0.05).结论:明日叶查尔酮可上调Caspase-3和Bax蛋白的表达且具有抑制肿瘤细胞增殖作用.%OBJECTIVE: To investigate the effects of Ashitaba chalcone (AC) on Caspase-3 and Bax protein expressions in mouse hepatocarcinoma cells. METHODS: Fifty mice inoculated with hepatocarcinoma 22 cells were divided into five groups, 10 mice per group. 5,20,40 mg/kg AC were given daily by mouth to form low, medium and high dose groups, respectively. Normal saline by mouth was given to the tumor control group. 20 mg/kg cytoxan(CTX) by injection every other day were given to the CTX group. 10 days later, all mice were sacrificed. The levels of the Caspase-3 and Baxprotein expressions were measured by immunohistochemistry, and the proliferation activity of hepatocarcinoma cells was determined by MTT assay. RESULTS: The expressions level of Caspase-3 and Bax protein in tumor control group were 5.00％ and 4.68％, respectively, and those of the high-dose group were 38.52％ and 35.76％. The differences between two groups were significant (P＜0.05). The cell proliferation activity of tumor control group and high-dose group were 1.135 ± 0.032 and 0.716 ± 0.018, respectively. The difference was significant (P＜0.05). The rumor weight in AC 20,40 mg/kg were significantly lower than that in tumor control group (P＜0.05). CONCLUSION: AC could induce the expressions of Caspase-3 and Bax protein.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2011(023)001【总页数】4页(P50-53)【关键词】明日叶查尔酮;肝癌;Caspase-3;Bax【作者】孟扬;钟进义;孙赫【作者单位】青岛大学医学院,山东,青岛,266021;青岛大学医学院,山东,青岛,266021;青岛大学医学院,山东,青岛,266021【正文语种】中文【中图分类】R730.5明日叶(Ashitaba)是一种野生芹科植物，原产于日本八丈诸岛，因其生命力顽强，今日摘叶明日可发新芽，故称明日叶[1]。
明日叶查尔酮抗肿瘤作用研究进展
明日叶查尔酮抗肿瘤作用研究进展张雷;李子超;王力平;高翔;李群【摘要】明日叶为原生于日本的食药兼用植物,其主要活性成分为查尔酮类化合物.近年来,明日叶查尔酮因其显著的抗肿瘤活性而受到科研工作者的关注.本文总结了目前已从明日叶中分离鉴定的查尔酮类活性物质的种类及其在明日叶中的分布情况,并主要从其体内外抗肿瘤活性,抑制细胞生长及增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞血管生成、抗氧化作用、增强机体免疫力、抑制肿瘤细胞侵袭和转移等方面综述其抗肿瘤作用研究进展,以期为明目叶天然查尔酮资源的进一步研究及开发利用提供方向和建议.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)018【总页数】7页(P336-341,352)【关键词】明日叶;查尔酮;抗肿瘤;作用机制【作者】张雷;李子超;王力平;高翔;李群【作者单位】青岛大学化学化工学院,山东青岛266071;青岛大学生命科学学院,山东青岛266071;中国海洋大学校医院,山东青岛266100;青岛大学生命科学学院,山东青岛266071;青岛大学化学化工学院,山东青岛266071【正文语种】中文【中图分类】TS201.2明日叶(Angelica keiskei)属伞形科当归属,原产于日本太平洋沿岸八丈、伊豆等大岛,因今日摘叶、明日就能冒出新叶的强盛生命力而得名[1],在日本又被称为天赐之草、海峰人参、珍立草等。
从1603年起,岛上居民就有食用明日叶的习惯,并将明日叶用于滋补、利尿、通便、催乳等。
大量研究发现,明日叶中主要活性物质为查尔酮类物质,因其分子结构能与不同的受体结合,所以具有多重生理活性,如抗菌[2]、抗炎[3]、抗病毒[4]、抗氧化[5]、抗肿瘤、降“三高”、预防心脑血管疾病[6]等。
目前明日叶在日本已认定为“健康食品级”,成为国民桌上的佳肴和常用于养生保健的功能性食品。
如今肿瘤已成为危害人类健康的头号杀手,不仅给患者带来严重的并发症,而且给患者家属带来沉重的经济负担和巨大的身心压力。
氨氯地平对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax和bcl-2表达的影响
氨氯地平对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax和bcl-2表达的影响陈骅;李英;张海松【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2006(27)1【摘要】目的探讨钙通道阻滞药氨氯地平(amlodipine)对实验性2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及调控基因bax,bcl-2的影响,以及其防治糖尿病肾病的可能机制.方法通过高糖高脂膳食喂养SD雄性大鼠,诱发胰岛素抵抗,再注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发高血糖,复制实验性2型糖尿病大鼠模型.实验分为 3组,对照组、糖尿病组和氨氯地平治疗组.分别于注射STZ第8和12周后各取6只大鼠,光镜观察肾脏病理改变,免疫组织化学检测大鼠肾组织bcl-2以及bax表达,流式细胞术检测大鼠肾组织细胞凋亡率及bcl-2、 bax表达.结果糖尿病组肾小球系膜基质增生,基底膜增厚及细胞外基质堆积;少部分肾小管轻度萎缩或管腔扩张,上皮细胞肿胀,胞浆内可见小脂肪空泡.流式细胞术结果显示:糖尿病组肾小球及肾小管凋亡率高于其他各组,治疗组肾小球及肾小管凋亡率与糖尿病组比较降低,且有统计学意义(P<0.05).免疫组织化学结果显示:bcl-2与bax在各组均有不同程度表达,糖尿病组bcl-2与bax表达增强,治疗组与糖尿病组比较bcl-2表达增强,bax表达减弱.结论细胞凋亡及相关基因 bcl-2/bax参与了糖尿病肾病的发病;氨氯地平可以通过bax表达下降、bcl-2 表达增加使肾脏细胞凋亡率减少从而达到保护肾脏的作用.【总页数】4页(P15-18)【作者】陈骅;李英;张海松【作者单位】河北大学附属医院肾内科,河北,保定,071000;河北医科大学第三医院肾内科,河北,石家庄,050051;河北大学附属医院肾内科,河北,保定,071000【正文语种】中文【中图分类】R587.2【相关文献】1.参麦注射液对脓毒症模型大鼠肾脏细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响 [J], 林梅瑟;叶帆;赵志光2.缬沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及调控基因Bcl-2、Bax的影响 [J], 陈骅;张海松3.二黄糖肾康对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响 [J], 常风云;成秀梅;李立;张学红;丁英钧;张金虎4.血必净对急性百草枯中毒大鼠肾脏细胞凋亡及其调控因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响 [J], 赵艳霞;付赟;王鑫5.黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax表达的影响 [J], 孙洁;田林红;王收宝;张涛;王春玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax表达的影响
黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax表达的影响孙洁;田林红;王收宝;张涛;王春玲【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2011(27)5【摘要】Objective To investigate the effects of haicalin on the renal cell apoptosis in the diabetic rats. Methods Diabetic rat models were induced by high-lipids and high-sucrose feeding for a month and single intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ) , then were administrated with 150 mg/(kg·d) of baicalin for 8 weeks. At week 8, the body weight and renal weight were measured and then the renal index was calculated. At the end of the experiment, the hlood and 24h urine samples were collected for determination of hlood glucose and urine protein. The apoptosis was detected by terminal deoxvnucleotidyl transferase mediated nick end labeling (TUNEL) , and the expressions of Bcl-2 and Bax proteins were detected by immunohistochemical methods in one side of kidneys. The expressions of Bcl-2 and Bax mRNAs were detected by fluorescence real-time quantitative RT-PCR in another side. Results As compared with those in control group, the numher of apoptotic cells,expressions of Bax and Bcl-2, and Bax/Bcl-2 ratio were significantly increased in diahetic group (P ＜ 0.01). By baicalin treatment, the numher of apoptotic cells and the expressions of Bax and Bax/Bcl-2 ratio were decreased (P＜ 0.01), whileBcl-2 was increased (P＜ 0.01) as compared with those in diabetic group. Conclusion Baicalin may inhihit the apoptosis of renal cells in diahetic rats by regulating the expressions of Bcl-2 and Bax.%目的:研究黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响,并从抗凋亡的角度探讨其作用机制.方法:采用小剂量高脂高糖喂养联合链脲佐菌素单次注射法造成2型糖尿病大鼠模型,黄芩苷[150mg(kg·d)]灌胃8周,8周后称体重、肾重,计算肾指数;收集大鼠血液和24 h尿,测定血糖和尿微量蛋白;一侧肾脏采用TUNEL法检测凋亡及免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,另一侧肾脏液氮保存后采用荧光实时定量RT-PCR法测Bcl-2和Bax mRNA的表达.结果:与对照组比较,糖尿病组肾脏凋亡细胞数明显增多.Bax和Bcl-2表达均增强,Bax/Bcl-2增高(P ＜ 0.01);黄芩苷治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,Bax表达减弱,Bcl-2表达增强,Bax/Bcl-2降低(P ＜ 0.01).结论:黄芩苷可以抑制糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡,其作用机制可能与影响凋亡基因Bax和Bc1-2表达有关.【总页数】4页(P757-760)【作者】孙洁;田林红;王收宝;张涛;王春玲【作者单位】730030,兰州大学第二医院内分泌科;730030,兰州大学第二医院内分泌科;730030,兰州大学第二医院内分泌科;730030,兰州大学第二医院内分泌科;730030,兰州大学第二医院内分泌科【正文语种】中文【相关文献】1.缬沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及调控基因Bcl-2、Bax的影响 [J], 陈骅;张海松2.二黄糖肾康对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响 [J], 常风云;成秀梅;李立;张学红;丁英钧;张金虎3.糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡与Bax和Bcl-2基因表达 [J], 张艳玲;段惠军;李春香;王燕;史永红;李英敏4.氨氯地平对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax和bcl-2表达的影响 [J], 陈骅;李英;张海松5.血必净对急性百草枯中毒大鼠肾脏细胞凋亡及其调控因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响 [J], 赵艳霞;付赟;王鑫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
明日叶中查尔酮诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡的研究
明日叶中查尔酮诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡的研究王亦敏;马场贵美江【期刊名称】《中医临床研究》【年(卷),期】2011(3)5【摘要】目的:研究不同查耳酮成分对人肝癌细胞SMMC-772l增殖的抑制作用。
方法:以人胃癌细胞株MGC-803为研究对象,通过MTT法观察不同时间点明日叶中查尔酮成分对细胞增殖的影响,经Hoechst33258和AO/EB染色,再通过荧光显微镜观察其细胞核形态变化。
结果:MTT实验结果显示化合物1、2、6、7、9和10,对人肝癌细胞SMMC-7721均有较强的抑制作用,并且显示出明显的剂量依赖关系。
随药物浓度的增加,细胞增殖抑制作用明显加强。
结论:明日叶中查耳酮类成分有抑制SMMC-7721细胞增殖的作用。
【总页数】2页(P67-68)【关键词】明日叶;查耳酮;4-羟基德里辛(4HD);黄腐醇(XA);MTT;细胞凋亡【作者】王亦敏;马场贵美江【作者单位】海南兰地高新科技有限公司;日本大阪药科大学【正文语种】中文【中图分类】R735.2【相关文献】1.三氧化二砷诱导人胃癌细胞株MGC-803细胞凋亡的研究 [J], 陈云华;李建萍;陈亮;曾斌;曾明新2.姜黄素、二苯甲酰甲烷、查尔酮对人胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响 [J], 王丽;张宝旭;阎蕾;贾光;张景怡3.明日叶查尔酮对小鼠肝癌细胞凋亡相关蛋白表达的影响 [J], Yang Meng;Jinyi Zhong;He Sun4.眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究 [J], 齐元麟;张明芳;赵蓉;林建银5.明日叶查尔酮对小鼠肝癌细胞凋亡相关蛋白表达的影响(英文) [J], Yang Meng Jinyi Zhong He Sun因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
甘草黄酮对2型糖尿病大鼠抗氧化能力的影响
甘草黄酮对2型糖尿病大鼠抗氧化能力的影响赵海燕;杨少娟;马永平;刘旺【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2011(21)35【摘要】目的研究甘草黄酮(LF)对2型糖尿病大鼠抗氧化能力的影响.方法采用高脂高糖饲料喂养结合一次性小剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法复制T2DM大鼠模型.正常对照组(Control)和模型组(DM)以溶剂(1,2-丙二醇)灌胃,正常给药组(CLF)和甘草黄酮治疗组(LF)以甘草黄酮300mg/(kg·d)灌胃.6周后,检测实验大鼠的空腹血糖(FBG),测定血清中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量.结果与DM组相比,LF组大鼠的FBG水平显著降低(P＜0.01),血清T-AOC水平显著增高(P＜0.01),GSH-PX 和SOD抗氧化酶活性显著升高(P＜0.01,P＜0.05),而血清中MDA含量显著降低(P ＜0.05).结论 LF可显著提高2型糖尿病大鼠的抗氧化能力.【总页数】4页(P4359-4362)【作者】赵海燕;杨少娟;马永平;刘旺【作者单位】北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川750021【正文语种】中文【中图分类】R587.1;R-332【相关文献】1.甘草黄酮对2型糖尿病大鼠骨骼肌中PPARγ蛋白的影响 [J], 赵海燕;杨少娟;马永平;王彦芳2.甘草黄酮对糖尿病大鼠血糖、血脂水平及抗氧化能力的影响 [J], 冯亚娟;胡滨青;周建华3.甘草黄酮对2型糖尿病大鼠肝脏中GSK-3β蛋白表达的影响 [J], 金鑫;赵海燕;马永平4.长期有氧运动对2型糖尿病大鼠抗氧化能力和肝细胞凋亡的影响 [J], 宋海霞5.虾青素对2型糖尿病大鼠海马抗氧化能力的影响 [J], 刘庆春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
甘草黄酮对2型糖尿病大鼠高血糖、高血脂的抑制作用
甘草黄酮对2型糖尿病大鼠高血糖、高血脂的抑制作用赵海燕;王勇;马永平;王奕【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2010(0)17【摘要】目的研究甘草黄酮(LF)对2型糖尿病大鼠血糖、血脂等生化指标的影响.方法将实验大鼠分为正常对照组(Control)、正常给药组(CLF)、模型组(DM)、高剂量给药组(HLF)、低剂量给药组(LLF)、预防对照组[100mg、300mg/(kg·d)](PC)和预防给药组(PLF).分别以LF或溶剂(1,2-丙二醇)灌胃.检测实验大鼠的空腹血糖、血脂等生化指标及肝体比、肾体比和脂体比.结果高剂量甘草黄酮[300 mg/(kg·d)]显著降低了糖尿病大鼠的FBG、TG、TC、LDL-C、FFA、TNF-α、Leptin、肝体比和肾体比,并显著提高了糖尿病大鼠的T-AOC、ISI和脂体比.预防给药[300mg/(kg·d)]显著抑制了由高脂高糖饲料喂养结合小剂量STZ(35mg/kg)注射引发的FBG、TG、TC、LDL-C和肝体比水平的升高及脂体比的下降,并显著提高了实验大鼠的T-AOC.结论甘草黄酮对2型糖尿病大鼠血糖的升高和脂代谢紊乱具有显著的抑制作用.【总页数】6页(P2573-2578)【作者】赵海燕;王勇;马永平;王奕【作者单位】北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川750021【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.诺迪康胶囊对高血压、高血糖合并高血脂大鼠的影响 [J], 王峥嵘;马艳艳;宋光耀;刘淼2.甘草黄酮对2型糖尿病大鼠骨骼肌中PPARγ蛋白的影响 [J], 赵海燕;杨少娟;马永平;王彦芳3.Rho 激酶抑制剂对高血糖合并高血脂大鼠内皮功能的影响 [J], 张子新;吉虓;慕翠翠;余陆娇4.甘草黄酮对2型糖尿病大鼠抗氧化能力的影响 [J], 赵海燕;杨少娟;马永平;刘旺5.甘草黄酮对2型糖尿病大鼠肝脏中GSK-3β蛋白表达的影响 [J], 金鑫;赵海燕;马永平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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中图分类号：R587.1文献标识码：A 文章编号：1002－3127（2013）02－0137－03·实验研究·明日叶查尔酮对2型糖尿病大鼠胰腺细胞Bcl-2和Bax 蛋白表达的影响王先红，张照杰，李蕾，钟进义（青岛大学医学院预防医学系营养研究所，山东青岛266021）【摘要】目的研究明日叶查尔酮（Ashitaba Chalcone ，AC ）对2型糖尿病大鼠胰腺细胞Bcl-2和Bax 蛋白表达的影响。
方法将用高脂饲料喂养加小剂量链脲佐菌素腹腔注射诱发的2型糖尿病雄性大鼠随机分为4个组，高、中、低剂量AC 组高脂饲料喂养的基础上分别每日经口灌胃给予AC 30、10和5mg /kg ，糖尿病对照组只喂饲高脂饲料，正常对照组喂养普通饲料，实验期4周。
用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖含量，放射免疫法测定血清胰岛素含量，免疫组化法检测胰腺细胞Bcl-2和Bax 蛋白的表达水平，噻唑蓝（MTT ）法检测胰腺细胞的增殖活性。
结果糖尿病对照组Bcl-2和Bax 表达水平分别为（0.407ʃ0.032）和（0.615ʃ0.050），高剂量AC 组则为（0.488ʃ0.020）和（0.544ʃ0.026），差异均有统计学意义（P ＜0.05）；糖尿病对照组胰腺细胞增殖活性为（0.244ʃ0.023），高剂量AC 组较其明显升高（P ＜0.05）。
结论AC 可上调胰腺细胞Bcl-2蛋白的表达，下调Bax 蛋白的表达，对2型糖尿病大鼠胰腺细胞损伤具有一定的拮抗作用。
【关键词】查尔酮；胰腺细胞；Bcl-2；Bax 作者简介：王先红，硕士研究生，研究方向：卫生毒理学。
通讯作者：钟进义，教授，博士生导师，研究方向：卫生毒理学。
明日叶（Angelica keiskei Koidzumi ）是原产在日本八丈诸岛的伞形花科多年生草本植物。
据国外文献报道，明日叶中的查尔酮（Chalcone ）活性成分，其化学结构为1，3-二苯基丙烯酮，是植物体内合成黄酮的前体，具有抗肿瘤、抗氧化、抗糖尿病等多种生物学活性［1-3］。
本实验通过给高脂饮食联合腹腔注射小剂量的链脲佐菌素（STZ ）诱发的2型糖尿病大鼠，灌胃给予不同剂量明日叶查尔酮（AC ），检测各组大鼠胰腺细胞Bcl-2和Bax 蛋白的表达和胰腺细胞增殖活性等指标，观察了AC 对2型糖尿病大鼠胰腺细胞损伤的拮抗作用。
1材料与方法1.1材料1.1.1动物与饲料：清洁级健康雄性Wistar 大鼠60只，6 8周龄，体重180 200g 许可证号：SCXK （鲁）2009-0007，由山东鲁抗医药实验中心提供。
高脂饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供。
1.1.2实验样品：AC 由本实验室制备，经紫外分光光度法测定其纯度＞90%。
查尔酮标准品购于美国Sigma 公司。
1.1.3试剂与仪器：RPMI-1640培养基、胎牛血清、四甲基偶氮唑蓝（MTT ）均购自美国Gibco 公司；Bcl-2和Bax 一抗、二抗和即用型SABC 免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司；瑞典Rosys Anthos 2010型双波长酶标仪；日本Olympus XDS-1B 型倒置显微镜；5%CO 2恒温培养箱，日本三洋电器有限公司出品；TDL-5离心机，上海安亭科学仪器厂出品。
1.2方法将60只雄性Wistar 大鼠适应性喂养1周后随机抽取10只为正常对照组，其余动物采用饲以高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素的方法诱发2型糖尿病大鼠，链脲佐菌素剂量为15mg /kg ，自第2周开始注射，1周1次，连续3周［4］。
空腹血糖值高于16.7mmol /L 判定为2型糖尿病。
将造模成功的40只2型糖尿病大鼠随机分为4个组，并在高脂饲料喂养的基础上，高、中、低剂量AC 组分别每天经口灌胃给予AC 30、10和5mg /kg ，糖尿病对照组给予等量蒸馏水。
正常对照组普通饲料喂养并经口灌胃给予等量蒸馏水。
连续4周，在末次灌胃后禁食12h ，尾尖采血测定空腹血糖。
全部动物经腹腔注射7%的水合氯醛麻醉后，腹主动脉采集血样并分离血清和迅速分离胰腺组织备检。
1.3检测指标1.3.1空腹血糖和血清胰岛素：空腹血糖葡萄糖还原酶法用血糖仪测定，血清胰岛素用放免法测定。
胰岛素抵抗指数（HOMA-IR ）=（空腹血糖ˑ空腹血清胰岛素）/22.5。
1.3.2胰腺细胞Bcl-2和Bax 蛋白的表达：采用SABC 免疫组化法，按检测试剂盒说明检测。
将胰腺组织经4%多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，3%H 2O 2消除内源性过氧化物酶，微波修复抗原。
按1ʒ50浓度滴加一抗，4ħ过夜，滴加二抗，DAB显色，脱水，透明和封片。
高倍显微镜观察和Image-Pro Plus图像软件进行光密度分析。
各组Bcl-2和Bax蛋白的表达水平以平均光密度值表示并计算Bcl-2/Bax比值。
1.3.3胰腺细胞增殖活性：用噻唑蓝法（MTT）测定。
将胰腺组织剪碎研磨，经过滤、离心后制成胰腺细胞悬液。
调节细胞密度为1ˑ106/ml，接种于96孔培养板，每孔100μl，每个样品4个平行孔。
经5%CO2、37ħ培养24h，490nm处测定各孔吸光度（A）值。
各组细胞增殖活性用平均A值表示。
1.4统计学方法实验数据用珋xʃs表示，应用SPSS 17.0统计软件对数据进行单因素方差分析，组间进行SNK法多重比较，以α=0.05为检验水准。
2结果2.1空腹血糖和血清胰岛素水平糖尿病对照组的血糖、胰岛素和胰岛素抵抗指数分别为（17.30ʃ3.58）mmol/L、（38.28ʃ4.97）mU/L和28.06ʃ3.24，均高于正常对照组，而高剂量AC组则3项指标检测结果均较糖尿病对照组降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。
各组的测定结果见表1。
表1各组血糖、血清胰岛素和胰岛素抵抗指数测定结果（珋xʃs）组别血糖/（mmol/L）胰岛素/（mU/L）HOMA-IR正常对照组 4.59ʃ1.63*25.70ʃ2.33* 5.15ʃ0.73*糖尿病对照组17.30ʃ3.5738.28ʃ4.9728.06ʃ3.24低剂量AC组17.05ʃ3.20#37.85ʃ5.0227.96ʃ4.36中剂量AC组13.91ʃ3.15*37.04ʃ5.4423.47ʃ5.66高剂量AC组7.00ʃ2.55*#29.50ʃ5.31*#9.00ʃ0.79*#注：与糖尿病对照组比较，*P＜0.05；与中剂量AC组比较，#P＜0.05；n=10。
2.2胰腺细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达水平Bcl-2和Bax主要在胞浆表达，光学显微镜下阳性表达细胞的胞浆中呈棕黄色或褐色颗粒。
本实验糖尿病对照组Bcl-2阳性表达的细胞少，染色浅，呈弱表达（图1A），Bax阳性表达的细胞数多且颜色较深，呈强表达（图2A）。
与糖尿病对照组比较，高剂量AC组Bcl-2表达增强（图1B）而Bax表达减弱。
各组Bcl-2和Bax表达的见表2。
2.3胰腺细胞的增殖活性高、中剂量AC组胰腺细胞增殖活性分别为0.297ʃ0.031和0.252ʃ0.012，均较糖尿病对照组明显提高，差异有统计学意义（P＜0.05）。
各组细胞增殖活性测定结果见表3。
表2各组胰腺细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的光密度分析结果（珋xʃs）组别Bcl-2Bax Bcl-2/Bax比值正常对照组0.516ʃ0.045*0.481ʃ0.041* 1.074ʃ0.106*糖尿病对照组0.407ʃ0.0320.615ʃ0.0500.660ʃ0.084低剂量AC组0.410ʃ0.028#0.603ʃ0.042#0.670ʃ0.063#中剂量AC组0.455ʃ0.036*0.580ʃ0.036*0.789ʃ0.074*高剂量AC组0.488ʃ0.020*#0.544ʃ0.026*#0.902ʃ0.052*#注：与糖尿病对照组比较，*P＜0.05；与中剂量AC组比较，#P＜0.05；n=10。
图1胰腺细胞Bcl-2蛋白的表达（DABˑ400）图2胰腺细胞Bax蛋白的表达（DABˑ400）表3各组胰腺细胞的增殖活性（珋xʃs）组别吸光度A值正常对照组0.307ʃ0.04*糖尿病对照组0.244ʃ0.02低剂量AC组0.248ʃ0.02中剂量AC组0.252ʃ0.01*高剂量AC组0.297ʃ0.03*#注：与糖尿病对照组比较，*P＜0.05；与中剂量AC组比较，#P＜0.05；n=10。
3讨论2型糖尿病的基本病变是胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能缺陷。
胰岛素抵抗是2型糖尿病发病的核心问题，也是多种慢性并发症产生的重要因素［5］。
本研究通过大鼠高脂饲料喂养加小剂量的链脲佐菌素腹腔注射的方法，诱发了典型的2型糖尿病特征。
实验结果可见高剂量AC组的空腹血糖、胰岛素水平和胰岛素的抵抗指数3项指标的检测结果则均较糖尿病对照组明显降低，表明AC能降低2型糖尿病大鼠血糖、胰岛素水平，改善胰岛素抵抗。
本结果与文献中报道的查尔酮具有诱导葡萄糖转运体对血糖的转运和益于糖尿病的治疗等研究结果相一致［6-7］。
Bcl-2是Bcl-2家族成员中主要的抗凋亡因子，Bax是凋亡促进基因［8］。
Bcl-2和Bax调节细胞凋亡不仅取决于自身表达的高低，而且Bcl-2/Bax比值决定着凋亡信号刺激后细胞的存活状态［9］。
当比值增大时，抑制细胞凋亡；而比值减小时，则促进细胞凋亡。
本实验结果可见，高、中剂量AC组Bcl-2蛋白的阳性表达均高于糖尿病对照组，而Bax蛋白表达降低，Bcl-2/Bax比值增大，说明AC可上调2型糖尿病大鼠胰腺细胞中Bcl-2蛋白的表达，下调Bax蛋白的表达，提高Bcl-2/Bax比值，对2型糖尿病大鼠胰腺细胞凋亡有抑制作用。
该结果与文献中报道的查尔酮抑制细胞凋亡的作用的结论相一致［10］。
细胞增殖活性是反映细胞生理状态的基础性指标，MTT法是目前国内外测定细胞增殖活性的常用方法，当细胞生长受到抑制，表现为增殖活性的降低［11］。
本实验结果显示，高、中剂量AC组胰腺细胞增殖活性明显高于糖尿病对照组，说明AC可以提高2型糖尿病大鼠胰腺细胞的存活率。
本项结果也与上述Bcl-2和Bax的测定结果相吻合。
综合本次实验结果可以认为，AC能提高2型糖尿病大鼠胰腺细胞的增殖活性，上调Bcl-2蛋白表达水平，下调Bax蛋白的表达，改善胰岛素抵抗，对2型糖尿病胰腺细胞损伤具有一定的拮抗作用。
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