细菌的人工培养技术
细菌的培养
细菌培养细菌培养是指在体外环境中使用特定培养基和其他条件来促进细菌生长的一种方法。
它可以帮助我们在有限的条件下大量培育细菌，从而进行有关细菌的研究和应用。
细菌培养是一种用人工方法使细菌生长繁殖的技术。
细菌在自然界中分布极广，数量大，种类多，它可以造福人类，也可以成为致病的原因。
大多数细菌可用人工方法培养，即将其接种于培养基上，使其生长繁殖。
培养出来的细菌用于研究、鉴定和应用。
细菌培养是一个复杂的技术。
培养时应根据细菌种类和目的等选择培养方法、培养基，制定培养条件（温度、pH值、时间，对氧的需求与否等）。
一般操作步骤为先将标本接种于固体培养基上，做分离培养。
再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。
培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。
一般细菌可在有氧条件下，37℃中放18～24小时生长。
厌氧菌则需在无氧环境中放2～3天后生长。
个别细菌如结核菌要培养1个月之久。
由于细菌无处不在，因此从制备培养基时开始，整个培养过程必须按无菌操作要求进行，否则外界细菌污染标本，会导致错误结果；而培养的致病菌一旦污染环境，就会引起交叉感染。
以疾病诊断为目的进行的培养，要选择合适的标本（血、尿、便、脓液、分泌物等），并应结合临床情况解释所得结果。
以光合细菌培养方法为例。
光合细菌培养的方法，按次序分为容器、工具的消毒，培养基的制备，接种和培养管理四个步骤。
（一）容器、工具的消毒参考、此处从略。
（二）培养基的制备1．培养用水如果培养的光合细菌是淡水种，菌种培养可用蒸馏水，生产培养可用消毒的自来水（或井水）配制。
如果培养的光合细菌是海水种，则用天然海水配制培养基，注意在海水中加入磷元素时，不能用磷酸氢二钾，应用磷酸二氢钾，不然会产生大量沉淀。
2．灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌。
小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒。
细菌的人工培养
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。 在工农业生产中的应用 ： 在基因工程中的应用
Stationary Phase
Logarithmic growth phase
Death Phase
Lag Phase
细菌在培养基中生长现象
固体培养基：菌落colony
平板接种
巧
克
杂菌污染
力
平
板
鉴别及选择培养基
EMB琼脂平板上大肠菌 SS琼脂平板上大肠菌为
菌落具有金属光泽
粉红菌落
Control organisms : Escherichia coli : Pink colonies (lactose fermentation) Proteus mirabilis : Colorless colonies ,no spreading Enterococcus sp. : No growth
Control organisms : Escherichia coli : A/A (G) Shigella flexneri : K/A Proteus vugaris : K/A, H2S Pseudomonas aeruginosa : K/N
Incubate : Aerobic 35° C, 24 hrs Shelf life : 8 weeks Price (Baht) : 5 (return tube)
Lowenstein-Jensen Medium
微生物试验-细菌的人工培养及形态学检查
实验一 细菌的人工培养
一、细菌在自然界的分布
1.空气中细菌的检查：每班两个血平板，标记 方法：在室内选择一处放一个平皿，揭开皿盖，
暴露放置10min，即盖上皿盖，放入37℃温箱 培养24小时，观察结果。
2.人体表面细菌的检查---手 指（每组1个平皿）
方法：取一普通平皿培养 基，一部分标记“前”， 另一部分标记“后”，然 后将手指在标记“前”的 部分沾一下，洗手后在标 记“后”的部分沾一下。 放入37℃温箱培养24h后 观察细菌的生长情况。
呼吸道咽部常驻菌群种类较多，正常人咽部需氧菌 中，甲型链球菌检出率最高，其次是奈瑟球菌属和表 皮葡萄球菌。
二、 理化因素对细菌的影响
1.物理因素对细菌的影响---紫外线
原理：紫外线主要作用于 DNA，使一条DNA链上相邻 的两个胸腺嘧啶以共价键结合成二聚体，从而干扰 DNA 的复制与转录导致细菌变异或死亡。
3.人体内部细菌的检查--咽喉部
方法：用“咳碟法”进行检查，取一个血琼脂平 皿培养基，打开平皿盖，置于口腔前约 10cm， 对着平皿咳嗽几次，标记时间，姓名，然后放 入37℃温箱培养24h后观察菌落特征。
二、外界因素对细菌的影响：
1.物理因素对细菌的影响 ：
紫外线：全班两份普通平板：一组大肠杆菌， 一组葡萄球菌，比较紫外线对G+，G-的抑制作 用。
满足a充足的营无菌
（三）分类：1、按物理性状
分类：
+0.3~0.5%琼脂
+1.5~2.5%琼脂
半固体培养基 液体培养基
固体培养基
观察细菌动力 大量繁殖细菌 细菌的分离和纯化
短期保存菌种
固体平板培养基
液体培养基
固体斜面培养基 半固体培养基
细菌培养基本方法及其影响因素
概述细菌培养是一种用人工方法使细菌生长繁殖的技术.细菌在自然界中分布极广,数量大,种类多,它可以造福人类,也可以成为致病的原因.大多数细菌可用人工方法培养,即将其接种于培养基上,使其生长繁殖.培养出来的细菌用于研究、鉴定和应用.细菌培养是一个复杂的技术. 培养方法以光合细菌培养方法为例.光合细菌培养的方法,按次序分为容器、工具的消毒,培养基的制备,接种和培养管理四个步骤.（一）培养基的制备1．培养用水如果培养的光合细菌是淡水种,菌种培养可用蒸馏水,生产培养可用消毒的自来水（或井水）配制.如果培养的光合细菌是海水种,则用天然海水配制培养基,注意在海水中加入磷元素时,不能用磷酸氢二钾,应用磷酸二氢钾,不然会产生大量沉淀.2．灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌.小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒.大型生产性培养则把经沉淀砂滤后的水用漂白粉（或漂白液）消毒后使用.3．培养基配制根据所培养种类的营养需要选择合适的培养基配方.按培养基配方把所需物质称量,逐一溶解,混合,配成培养基.也可先配成母液,使用时按比例加入一定的量即可.（三）接种培养基配好后,应立即进行接种.光合细菌生产性培养的按种量比较高,一般为20％～50％,即菌种母液量和新配培养液虽之比为1∶4～1∶1,不应低于20％,尤其是微气培养,接种量更应高些,否则光合细菌在培养液中很难占绝对优势,影响培养的最终产量和质量.（四）培养管理光合细菌的培养过程中,管理工作包括日常管理操作和测试,生长情况的观察、检查以及出现问题的分析处理等三个方面.1．日常管理和测试（1）搅拌和充气：光合细菌培养过程中必须充气或搅拌,作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照,保持菌细胞的良好生长.小型厌气培养常用人工摇动培养容器的方法使菌细胞上浮,每天至少摇动三次,定时进行.大型厌气培养则用机械搅拌器或使用小水泵使水缓慢循环运转,保持菌体悬浮.微气培养是通过充气帮助菌体上浮,因为培养液中溶解氧含量增加,光合细菌繁殖受到抑制,产量下降,所以必须严格控制充气量.一般采用定时断续充气,充气量控制在1～1.5升／（升?h）之间,溶解氧量保持在1×10-6以下.（2）调节光照度：培养光合细菌需要连续进行照明.在日常管理工作中,应根据需要经常调整光照度.白天可利用太阳光培养,晚上则需要人工光源照明,或完全利用人工光源培养.人工光源一般使用碘钨灯或白炽灯泡.不同的培养方式所要求的光照强度有所不同.一般培养光照强度应控制在2000～5000lx之间.如果光合细菌生长繁殖快,细胞密度高,则光照强度应提高到5000～10000lx.光照强度可通过调整培养容器与光源的距离或使用可控电源箱调节.（3）调节温度：光合细菌对温度的适应范围很广,一船在23～39℃的范围内均能正常生长繁殖,可不必调整温度.在常温下培养也可通过调整,将温度控制在光合细菌生长繁殖最适宜的范围内,使光合细菌更好地生长.（4）酸碱度的测定和调整：在培养光合细菌的过程中,必须注意酸碱度的变化.由于光合细菌的大量繁殖,菌液的pH值上升,这意味着光合细菌正处于指数生长期.但当pH值超过最适范围甚至生长的适应范围时,光合细菌的生长达到顶点,随后生长下降.如果能及时调整菌液的酸碱度,使pH值保持在最适范围,则光合细菌能继续生长繁殖.为了延长光合细菌的指数生长期,提高培养基的利用率和单位水体的产量,测定和调整PH值是非常重要的.一船采用加酸的办法来降低菌液的酸碱度,醋酸、乳酸和盐酸部可使用,最常用的是醋酸.在日常的管理工作中,必须每天或隔天测定菌液的pH值,当pH值上升超出最适范围,即加酸调整.如果在培养过程中不测定、调整酸碱度,当光合细菌的生长达到一定密度后pH值也上升到9以上,细菌生长受阻,此时应采收或再扩大培养.在培养过程中不调整PH值,获得的最终产量低.2．生长情况的观察和检查光合细菌生长情况的好坏是培养成败的标准.在培养过程中,可以通过观察菌液的颜色及其变化来了解光合细菌生长繁殖的大体情况,菌液的颜色是否正常,接种后颜色是否由浅变深,均反映光合细菌是否正常生长繁殖以及繁殖速度的快慢.必要时可通过显微镜检查,了解情况.3．问题的分析和处理通过日常管理、检测、检查,了解光合细菌的生长情况,就可以结合当时环境条件的变化进行分析,找出影响光合细菌生长繁殖的原因,采取相应的措施.影响光合细菌生长的原因很多,内因是菌种是否优良,外因是光照、温度、营养、敌害和厌气程度等.温度、光照和pH值都能影响着光合细菌的生长,而且温度、光照和pH值之间是互相制约的,温度与光照的强弱是对立统一的,所以光合细菌生长的最适条件应是互应的,即温度高,光照应弱；温度低,光照应强.如果是温度高,光照强,pH值就会迅速升高,培养基产生沉淀,抑制光台细菌的生长；如果温度低,光照弱,光合细菌得不到最佳能源,生长速度也慢.经试验得出光合细菌生长的最适条件是：①温度15～20℃时,光照30000～50000lx,培养基pH值为7.0；②温度25～30℃时,光照为3000～5000lx,培养基的pH值为7.0.。
实验二 细菌的人工培养
微免教研室
四、细菌的生化反应
IMViC试验 ❖大肠埃希菌 + + - ❖产气杆菌 - - + +
Xi’an Ｍedical University
微免教研室
四、细菌的生化反应 尿素酶试验
Xi’an Ｍedical University
❖原理： 细菌若有尿素酶，能分解培养基中的尿 素产生氨，使培养基变为碱性，酚红指示剂呈深 酒红色。
VP试验
❖ 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖 蛋白胨水，37℃培养18h～24h后，按每毫升培养 基加入含0.3%肌酸或肌酐的0.1ml 40% KOH溶液， 48℃～50℃水浴2h或37℃ 4h，充分摇动后观察。
甲基红试验
❖ 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖 蛋白胨水，37℃培养18h～24h后，滴加甲基红指 示剂观察结果。
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四、细菌的生化反应
Xi’an Ｍedical University
枸橼酸盐利用试验
❖原理： 细菌利用铵盐作为唯一氮源，并利用枸 橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基上 生长，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，并分解铵盐生 成氨，培养基呈碱性反应。
❖ 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于枸橼酸 盐培养基，37℃培养18h～24h观察。
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Xi’an Ｍedical University
二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象 细菌的生长现象
1、液体培养基：混浊生长、沉淀生长、菌膜生长 2、半固体培养基：扩散生长、非扩散生长 3、固体培养基：菌落、菌苔
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四、细菌的生化反应
Xi’an Ｍedical University
1、记录细菌的生长现象。 2、记录并分析细菌的生化反应。
细菌的人工培养方法
细菌的人工培养方法[适用对象]生物工程专业[实验学时] 4学时一、实验目的了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。
初步掌握各种培养基接种技术；观察细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。
二、实验原理培养基是用人工方法将微生物生长繁殖所需的多种营养物质调配在一起，形成的一种营养物质的混合物，用以分离、传代和培养细菌。
按培养基的用途分为基础（普通）培养基、营养培养基、鉴别培养基，选择培养基、厌氧培养基等。
按培养基的物理形状又分为液体、固体和半固体三种。
三、仪器设备三角烧瓶、天平、试管、平皿、高压消毒灭菌器。
四、相关知识点培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多。
但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
不同的微生物在固体、半固体和液体培养基中能表现出各自特有的培养特征，这些特征可以作为不同种类微生物的鉴别特征之一。
了解它们的培养特征、掌握其生长规律对识别、控制和利用微生物具有重要价值。
五、实验步骤（一）常用培养基的制备1、普通液体培养基(1)将新鲜的精牛肉除去脂肪和筋膜制成肉馅，取500克牛肉馅加l000ml蒸馏水，置4℃冰箱浸泡过夜，使牛肉中的水溶性营养物质充分浸出。
(2)次日将浸泡过夜的牛肉馅加热煮沸30分钟，放凉，使残余的脂肪凝固，然后用纱布和滤纸过滤，最后将滤液补足为原量，此种液体为牛肉浸汁。
(3)取1 000ml牛肉浸汁加蛋白胨10克，氯化钠5克加热溶解，冷至50℃左右时用氢氧化钠调整pH至7．6，再煮沸10分钟(因牛肉浸汁中部分碳水化合物，经加热破坏产酸，影响pH；产生多磷酸盐，培养基不澄清)待冷却后，再调整pH至7．6，然后以滤纸过滤，滤液必须澄清，此种液体称为肉汤培养基。
(4)将肉汤培养基分装于试管或三角烧瓶中，塞好试管和瓶塞，包装好后，用15磅(121℃)蒸气15～30分钟灭菌。
细菌的人工培养方法及意义35页PPT
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6、黄金时代是在我们的前面，而不在 我们的 后面。
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7、心急吃不了热汤圆。
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8、你可以很有个性，但某些时候请收 敛。
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9、只为成功找方法，不为失败找借口 (蹩脚 的工人 总是说 工具不 好)。
Hale Waihona Puke •10、只要下定决心克服恐惧，便几乎 能克服 任何恐 惧。因 为，请 记住， 除了在 脑海中 ，恐惧 无处藏 身。-- 戴尔． 卡耐基 。
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
细菌的人工培养技术操作方法
细菌的人工培养技术操作方法
细菌的人工培养技术操作方法一般包括以下步骤：
1. 准备培养基：选择适当的培养基，如琼脂培养基、液体培养基等，并根据需要添加适当的营养物质和抗生素。
2. 无菌操作：在无菌条件下进行操作，使用无菌工具和无菌培养器具，并对培养瓶、试管等容器进行高压蒸汽灭菌或通过过滤器灭菌。
3. 接种菌液：将需要培养的细菌菌株接入培养基中，可以通过接种环、接种棒等工具在培养基表面均匀涂抹或在培养液中加入适量菌液。
4. 培养条件控制：根据所培养菌株的需求，调整适当的培养条件，如温度、氧气浓度、光照周期等。
5. 培养时间控制：根据所培养菌株的生长速度和特性，确定适当的培养时间，通常在培养基上培养24小时以上。
6. 观察生长情况：定期观察培养物的生长情况，可以通过肉眼观察或借助显微镜观察细菌的数量和形态。
7. 存储和分离：根据需要，可以对培养物进行分离纯化，并采用液氮或低温冷
冻保存细菌菌株。
注意事项：
- 严格遵守无菌操作规范，防止外界的细菌污染。
- 对于不同的细菌菌株，根据其生长特性和需要，进行适当的培养条件的调整。
- 定期清理培养器具和培养环境，防止细菌过度生长或污染。
- 在操作培养菌液时要小心避免产生溅射和气溶胶，防止细菌感染。
- 对于属于生物安全级别2以上的病原菌，应遵守相关的安全操作规范和实验室条件。
实验二细菌的接种、培养及代谢产物
实验二细菌的接种、培养及代谢产物（B a c t e r i a l I n o c u l e t i o n a n d A r t i f i c a l C u l t u r e a n dM e t a b o i c p r o d u c t s）一、细菌的人工培养（A r t i f i c a l C u l t u r e o f B a c t e r i a）在适当条件下，绝大多数细菌可用人工方法培养，使其繁殖，通过人工培养，获得纯种细菌，是进一步观察研究各种细菌具有不同特性的基础。
(一)常用培养基的制备1、肉汤培养基：是常用的液体培养基，也是制备某些其他培养基的基础。
材料：（制备100m l肉汤培养基的用量）(1)培养基的成分：牛肉50g蛋白脂1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾(K2H P04·12H20)0.1g蒸馏水100m1(2)玻皿、试剂、比色管、比色架、吸管、1N与1／20N 的N a O H、三角烧瓶、漏斗、中试管、酚红指示剂、滤纸、卷筒、天平、蒸馏水。
方法：（1）将已去筋膜脂肪并经绞碎鲜牛肉50g，加蒸馏水100m l，放入冰箱中过夜。
（2）加热45—50℃一小时，并煮沸半小时，用数层纱布或滤纸过滤，滤液用蒸馏水补足其量为100m1。
（3）于滤液中加氯化钠0.5g，蛋白脂1g、磷酸氢二钾0.1g，加热使之完全溶化。
（4）测定酸碱度并调整至P H7.6，必要时用滤纸过滤。
（5）按需要分装于试管或烧瓶内，加棉花塞并包装后，置高压蒸汽灭菌器内经15磅／寸220—30分钟灭菌。
（6）灭菌后置37℃温箱，孵育24h，无杂菌生长，即可应用。
或放冰箱备用。
2、普通琼脂培养基它是最常用的固体培养基。
材料：肉汤、琼脂方法：(1)在肉汤中加入2％琼脂，熔化后调整P H7.6，必要时用棉花纱布过滤。
(2)于琼脂凝固前，分装于试管或小烧瓶内，然后加棉塞并包装。
(3)放入高压蒸汽灭菌器内，经15磅/寸220分钟灭菌。
细菌的人工培养
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理；
常规高压蒸汽灭菌： 1.05kg/cm2,121.3℃15-30分钟；0.56kg/cm2,112.6℃15-30分钟
培养基制备的一般程序
调配
培养基灭菌
★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟
溶化
矫正pH
★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 过滤澄清 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 分装 灭菌 检定 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌
保存
1、选用和设计培养基的原则和方法
目的明确 营养协调 理化条件适宜
经济节约
1）目的明确
根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。
培养化能自养型的氧化硫杆菌的培养基组成为： S 10g MgSO4.7H2O 0.5g NH4)2SO4 0.4g CaCl2 0.25g H2O 1000ml FeSO4 0.01g H2PO4 4g
液体培养基
不加任何凝固剂
大规模工业生产及在实验室进行微生物的 基础理论和应用方面的研究
含有一般微生物生长繁殖所 需的基本营养物质的培养基 按 用 途 不 同 划 分 基础培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的 一类营养丰富的培养基。特殊营养物质包括血 液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等 在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质， 用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体 抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物 中分离出来的培养基 的生长
4）经济节约
以粗代精
以氮代朊
以野代家
以废代好 以简代繁
以纤代糖
细菌的人工培养
无菌 asepsis： 不存在活菌的意思。防止微生物进入人体 或其它物品的操作技术，称为无菌操作。
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二、物理消毒灭菌法
（一）热力灭菌法
1、干热灭菌法: 焚烧: 废弃物品、动物尸体等。 烧灼：接种环、试管口。 干烤：玻璃器皿、瓷器、玻制注射器等。 红外线：医疗器械等。
2、细菌在培养基中的生长现象
液体培养基：混浊生长、菌膜、沉淀生长 半固体培养基：沿穿刺线生长或扩散生长 固体培养基：菌落
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液体培养基：混浊生长、菌膜、沉淀生长
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半固体培养基：沿穿刺线生长或扩散生长
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固体培养基：菌落
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液体 培养基
斜面 培养基
纯培养 (pure culture)
菌落(colony) 24
一、消毒灭菌的常用术语
消毒 disinfection： 杀死物体上病原微生物的方法，并不一 定 能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 。
灭菌 sterilization：
杀灭物体上所有微生物的方法，包括芽
胞 在内的全部病原微生物和非病原微生
物。
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清洁 cleaning：指去除尘埃和一切污秽以减少微 生物数量的过程。
干扰细菌的酶系统和代谢 如氧化剂、重金 属盐类（低浓度）
损伤菌细胞膜 如酚类（低浓度）、表面活 性剂、脂溶剂等
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四、消毒灭菌的应用
选用的消毒剂
病人排泄物、 分泌物
20％漂白粉，5％石炭酸，2％来苏，作用2h
皮肤
2.5％碘酊，70％乙醇
粘膜
1％硝酸银，0.1％新洁尔灭
细菌的人工培养一般检验方法主要动物细菌
（3） 致病性与抵抗力
致病力主要是毒素和酶,所 致的疾病为畜禽的化脓性疾 病，如：创伤感染、脓肿、 皮炎、乳房炎、败血症等。
抵抗力是在不形成芽胞的 细菌中是最强的，80℃30分 钟才被杀死，碳酸效果最好。
对青霉素、庆大霉素高度 敏感。耐药菌株逐年增多。
（4）检查： 根据病型采集病料，如取血液，乳汁，脓汁等
链球菌在血平板上菌落特征
丙链
甲链
乙链
（3）致病性与抵抗力： 产生多种酶和外毒素，不同的血清群的链球菌所致动
物的疾病不同，引起急性败血症，肺炎，淋巴结脓肿，脓 毒败血症。
本菌抵抗力不强，青霉素是首选药物。
（4）检查 根据不同的疾病，采集相应的病料，如取血液，乳汁，
脓汁、渗出物等。
• 1、直接涂片镜检：链状排列的球菌。 • 分离培养：病料接种于血液琼脂平板。
菌 膜
对
液体培养基
照
菌沉 淀
均匀浑浊
固体培养基
半固体培养基 粘液型菌落
细菌的生长表现
菌落：细菌在固体培养基上定点繁殖时，形成孤立的、肉 眼可见的堆积物。 表现：大小、形态、透明度、隆起度、度、湿润度，表面 光滑、粗糙、有无光泽。 菌苔：许多菌落融合成一片。
培养基的基本要求
1、有丰富的营养物质 2、PH、水分 3、均匀透明，易于观察。 4、经过灭菌和无菌检验
破伤风梭菌
猪丹毒杆菌G+
能力单元一（ 1-3）
细菌的人养基是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖 或积累代谢产物营养基质。
根据培养基的用途来分
基础培养基：满足一般微生物生长繁殖所需要的营养物质。 牛肉膏蛋白胨培养基是最常用的基础培养基。
营养培养基:在自然界中各种微生物通常是混杂在一起的， 了解了某一些微生物的营养要求，配制适合这种微生物生长 而不适合其他微生物生长的培养基，就达到了从自然界中分 离这种微生物的目的，这种培养基就称为营养培养基。一般 常加入血、血清或动植物提取液等。－－－－“投其所好”
项目四：微生物培养技术
生长因子等。 （二）温度 ：依据细菌对温度的需求不同，可将分为嗜冷菌、
嗜温菌、嗜热菌三大类。大多数病原菌的最适温度为37℃。 （三）PH：大多数细菌的最适pH7.2～7.6 （四）渗透压：细菌细胞需要在适宜的渗透压下生长繁殖 （五）气体：与细菌生长繁殖有关的气体主要是氧和二氧化
（二）根据培养基的用途分：
1、基础培养基 ：如牛肉膏蛋白胨琼脂 这种培养基可供培养一般细菌使用。
2、营养培养基 ：如加血液、血清、葡萄糖、酵母 浸膏等，可供营养要求较高的细菌生长。
3、选择培养基 ：如培养沙门氏菌的培养基中加入 四硫磺酸钠、亮绿，可以抑制大肠杆菌的生长。
4、鉴别培养基 ：如醋酸铅培养基、麦康凯培养基， 依靠指示剂的颜色反应，借以鉴别不同种类的细 菌。
(1)热原质 许多革兰氏阴性菌与少数革兰氏阳性 菌在代谢过程中能合成一种多糖物质，注入人 体或动物体能引起发热反应，称为热原质。
(2)毒素 毒素的产生与细菌的致病性有关，细菌 产生的毒素有内毒素和外毒素两种。
(3)细菌素 是某些细菌菌株产生的一类具有抗菌 作用的蛋白质 。
(4)维生素 动物机体的正常菌群能合成维生素B和 维生素K，可被机体利用。
5、厌氧培养基 ：如疱肉培养基，可供厌氧菌生长。
(三)按培养基的成分
（1）合成培养基：营养物质的成分及其浓度完全清楚；组 分精确；重复性强。但微生物生长缓慢，所用各种物质成 本昂贵，只在实验室里使用。
（2）天然培养基：采用动植物组织、微生物浸出物等，如 牛肉高蛋白质、玉米粉、麦芽汁、麸皮、马铃薯、酵母膏， 等皮革厂、肉食品加工厂、淀粉厂的付产品配制成。不稳 定、不精确。微生物生长良好，培养基易得，成本低廉， 适于大生产中配制培养基。
人工培养的概念
人工培养的概念人工培养是指通过人工手段在控制的环境条件下，对生物体进行生长、繁殖以及细胞或组织的培养和繁殖。
在生物学中，人工培养包括细胞培养、组织培养和微生物培养等多个方面，它为科研和应用提供了非常重要的手段和工具。
人工培养的概念首先出现在细胞培养领域。
细胞培养是指将动植物组织从体内取出，根据其所需的培养基配方和培养条件，在人工环境中维持、繁殖和分化。
细胞培养的发展主要得益于细胞生物学、分子生物学、遗传工程和生物工程等学科的进步。
通过细胞培养，可以对细胞的生理、生化和遗传等方面进行深入研究，同时也可以用于制备生物药物、疫苗和体外组织替代品等。
组织培养是指将动植物组织分离出来，在适宜的培养基中进行培养和繁殖。
相比细胞培养，组织培养的研究对象更加复杂，但也更具挑战性。
通过组织培养，可以实现组织的快速倍增或者得到一定数量的新生植株、新动物个体，从而为基因改造、新品种选育和保护濒危物种等提供技术支持。
微生物培养是指将微生物菌株在培养基上进行培养和繁殖，包括细菌、真菌、藻类等微生物。
人工培养微生物是微生物学中的重要研究手段之一，也是微生物制造业中的重要环节。
通过微生物培养，可以得到大量纯种细菌用于疫苗制备、抗生素生产和工业酶生产等。
人工培养的关键在于创造适宜的环境条件，提供养分和适合的生长因子，以及控制温度、湿度、气体和光照等因素。
培养基的配方和培养条件的优化对于培养效果至关重要。
同时，人工培养还需要注意对细胞和组织的消毒、无菌操作和对培养过程中产生的废物和有害物质的处理等。
人工培养在生命科学研究和应用中具有广泛的应用价值。
它可以加速生物学研究的进程，为基础研究提供可控的实验条件，同时也为应用研究提供了重要的实验手段。
人工培养可以用于研究细胞和组织的生理过程、发育过程以及疾病发生和治疗等方面。
此外，人工培养还可以用于生物工程和生物技术的研究，用于生物药物的制备和生物工业的发展。
总之，人工培养是一种通过人工手段在控制条件下对生物体进行生长、繁殖、细胞或组织的培养和繁殖的方法。
人工培养细菌
细菌的人工培养人工制备营养充足的培养基并提供适宜的温度、气体、pH等培养条件，即能使细菌在体外环境迅速生长繁殖。
细菌培养对临床上病原菌的分离鉴定、制备抗生素、制备疫苗等生物制品都是必不可少的。
一、培养基的制备原则：1、必须有充足的营养。
2、合适的酸碱度。
3、绝对无菌。
二、培养基的制备培养基是用人工方法将多种营养物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合营养料。
常用的培养基有基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基等。
按照培养基的物理性状可分为液体，固体和半固体三类。
以下介绍常用基础培养基的制备。
（一）肉汤培养基：制法：称取营养肉汤粉1.8g（含牛肉膏0.3克g，蛋白胨1g、氯化钠0.5g）加入100ml蒸馏水中，用玻棒搅拌加热溶解。
按需要分装于三角瓶或试管，瓶口或管口塞棉塞，包装后置高压蒸汽灭菌器内，在0.11Mpa（1.05公斤/厘米2）压力下，温度达1210C，维持15～20分钟。
冷却后贴好标签，40C冰箱贮存备用。
制成后的肉汤呈浅黄色，清晰透明，pH 7.1+0.2肉汤培养基常用于增菌培养。
（二）肉汤琼脂固体培养基：在上述肉汤培养基中加入2～3%琼脂即成。
经高压灭菌后，趁热将试管斜置、冷凝，即成普通琼脂斜面培养基；或趁热取出后，稍冷，以无菌操作倾入灭菌的空培养皿，冷凝后即为普通琼脂平板。
制作琼脂平板时，每一空皿（9厘米直径）需培养基15～20ml。
普通琼脂平板用于分离培养繁殖细菌；普通琼脂斜面用于纯培养和保存菌种。
（琼脂是从石花菜等海藻类中提取的多糖物质，当温度达到98℃以上可溶化，45℃以下则凝固。
琼脂对细菌一般无营养作用，用做斜面、平板、高层等不同类型固体培养基的凝固剂。
琼脂通常呈酸性，加入液体培养基中可使酸碱度下降pH 0.2左右。
）（三）肉汤琼脂半固体培养基：在上述肉汤培养基中加入0.3～0.5％琼脂，加热溶化后，分装于小试管（10×100mm），每管约3ml，高压灭菌后直立冷凝即成。
微生物实验细菌的人工培养及形态学检查
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细菌的培养基：
（一）培养基的定义：
培养基是人工方法
水
碳源
配制的含有细菌生 长繁殖所需物质的 营养基质。其必须
营养物质 生长
氮源
因子
本身无菌，一般
无机盐
PH调至7.2 ~7.6。
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（二）制备原则:
1.调配营养物质：蛋白胨（氮源），牛肉膏，氯 化钠，蒸馏水。
2.调配PH：加入缓冲剂，保持PH稳定。
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2、按用途分：
(1).基础培养基：含有大多数细菌生长所需要 的基本营养成分。最常用的为肉汤培养基
(2).增菌培养基：在基础培养基中添加生长因 子（eg:血清等）或微量元素等其他营养物 质或特殊抑制剂。
如血平板：5-10%脱纤维羊/兔血， （60°C左右加入血）。巧克力平板:80°C 左右加入血。
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1、液体培养基中的生长现象
• 混浊：大多数 细菌
• 沉淀：多见于 链状排列的细 菌
• 菌膜：多见于 专性需氧菌 菌膜
菌沉淀 均匀浑浊 对照
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2、半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：在培
养基中沿穿刺线 并向外扩散生长， 穿刺线边缘模糊。
无鞭毛细菌：只沿
穿刺线生长，穿 A、有动力 B、无动力 C、空白对照 刺线边缘清晰。
③损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成， 物理结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒灭菌
作用。
有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物，称 为化学消毒剂；浓度低时能抑制细菌生长，称为
防腐剂。
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（2）化学内的所有微生 物，适用于不耐热力灭菌但要进入人体内部的
细菌培养的原理
细菌培养的原理
细菌培养是一种将细菌生长和繁殖的过程模拟在人工环境中的方法。
其原理基于细菌的生理需求和适宜生长条件。
以下是细菌培养的基本原理：
1. 选择合适的培养基：不同的细菌需要不同类型的培养基来提供所需的营养物质。
培养基通常包括碳源、氮源、矿物质和水。
例如，通常使用的液体培养基包括营养琼脂（Nutrient Agar）、大肠杆菌培养基（Luria-Bertani，LB培养基）等。
2. 提供适宜的温度：细菌对生长环境温度有一定的适应性，一般来说，常见的人体细菌在37°C左右的温度下生长最佳。
3. 创建合适的环境气氛：有些细菌需要特定的气氛条件才能生长，例如革兰氏阳性菌的生长需要富含二氧化碳的环境，而革兰氏阴性菌则需要氧气。
4. 防止污染：细菌培养需要注意避免外部环境的污染，以免其他微生物的干扰。
使用无菌技术、实验室消毒和灭菌设备等方法可以有效减少污染的发生。
5. 选择合适的培养方法：根据不同的实验目的，可以选择液体培养、平板培养和深层培养等不同的培养方法。
液体培养常用于大规模培养和生产，平板培养则用于分离和鉴定细菌，深层培养则用于研究和检测细菌的代谢能力。
通过以上原理，可以创造出适合细菌生长和繁殖的人工环境，
从而实现细菌培养的目的。
这项技术在医学、食品工业、环境科学等领域起着重要作用，可以用于检测病原体、生产抗生素等。
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• 固体培养基
• 含0.3~0.5%琼脂
谢 谢！
重点与点
• 重点
• 培养基、菌落的概念 • 培养基制备的基本要求及程序 • 培养基的类型及应用
• 难点
• 细菌在培养基上生长情况在细菌鉴定中的意义
培养基的概念
• 把细菌生长繁殖所需要的各种营养 物质合理地配合在一起，制成的营 养基质称为培养基。
制备培养基的基本要求
• 营养丰富 • 均质透明 • PH适宜
细菌的人工培养技术
学习目标
• 知识目标
• • • • 掌握培养基、菌落的概念 了解培养基制备的基本要求及程序 理解培养基的类型及应用 理解细菌在培养基上的生长情况在细菌鉴定中的意义
• 能力目标
• 具备进行培养基的制备、细菌培养特性鉴定的理论基 础
主要内容
• • • • • 培养基的概念 制备培养基的基本要求 制备培养基的程序 培养基的类型及用途 细菌在培养基上的生长情况
• 不含抑菌物质和杂菌
配料 制 备 培 养 基 的 基 本 程 序 溶化
测定及纠正PH值
过滤
分装
灭菌 无菌检验 冷藏备用
培养基类型及用途
• 按物理状态分：
• 液体培养基 • 半固体培养基
• 含0.3~0.5%琼脂
• 按营养组成和用途分
• • • • • 基础培养基 营养培养基 鉴别培养基 选择培养基 厌氧培养基