两个非自然年度猪病病原检测分析报告

两个非自然年度猪病病原检测分析报告
徐翠1，陈慧婷1，黎家祥1，左明开1，陈良荣1，黄冬艳2，花象柏2
（南昌珠安生物技术有限公司，江西南昌330013；2.江西农业大学动物科学技术学院）
文章编号:1004-2342(2018)05-0051-02中图分类号:S854.4+3
文献标识码：C
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病料来源与检测方法
1.1病料来源
从2016年7月至2018年6月两个非自然年
度，共在江西省大、中、小不同规模的猪场409户次，收集病料1304头份。

这些病料绝大部分是笔者所在团队的执业兽医师应邀前往上述猪场出诊，选择发病典型的猪只现场剖检采集。

到达现场后，先详细询问病史，后进入猪舍观察病猪的临床症状，最后选择该次发病有代表性的病猪1至数头剖检，记录剖检变化，拍摄病变器官图片。

所取病料1头猪作为1头份，通常包括扁桃体、肺脏、脾脏、肝脏和肾脏等器官及颌下、腹股沟、肠系膜和肺门等部位淋巴结的组织各少许，装入自封袋中，贴上标签。

如临床初诊见有神经症状的，加取大脑、小脑和嗅球等脑组织；见有腹泻或肠道有明显病变者，加取小肠和大肠等组织。

这些病料均一式两份，一份南昌株安生物有限公司实验室检测，一份备用或送其他实验室检测会诊。

疑难细菌性病例，带培养基至现场接种。

疑难病例，带固定液现场取病理组织固定切片观察。

少部分病料由猪场兽医人员，经与本团队执业兽医师沟通，自行采集送来，病毒性疾病病料亦可冰冻后寄送过来。

1.2检测方法1.2.1病毒类
1.2.1.1主要试剂与仪器。

饱和酚、
氯仿、异丙醇、无水乙醇、RNAiso Plus 、Proteinase K 、2*Taq PCR Mas-terMix(with Dye)和DL2000Marker 等均购自宝生物工程（大连）有限公司。

超净台，PCR 扩增仪和高速离心机等。

样品处理及核酸抽提。

根据RNAiso Plus 的使用说明书进行操作。

1.2.1.2引物设计与合成。

根据GenBank 登录的猪
繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV ），猪瘟病毒（CS-FV ），伪狂犬病病毒（PRV ），猪圆环病毒2型（PCV2），猪流行性腹泻病毒（PEDV ）,猪丁型冠状病毒（PDCoV ），猪圆环病毒3型（PCV3），猪捷申病毒（PTV ），猪细小病毒（PPV ）,日本乙型脑炎病毒（JEV ）,猪传染性胃肠炎病毒（TGEV ）和猪轮状病毒（PoRV ）的基因序列，用oligo6.0软件设计引物，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.2.1.3核酸检测。

病毒的扩增以上步抽提好的总产物为模板，
用TaKaRa one Step RNA PCR Kit 试剂盒进行扩增，RNA 病毒如PRRSV ，CSFV ，PEDV 等进行RT-PCR 反应条件RT ：37℃15min ，85℃5s;PCR:94℃5min ，（94℃30s,56℃30s,72℃45s ）×35个循环，72℃延伸10min ；DNA 病毒如PRV ，PCV2等进行PCR 反应，反应条件：94℃5min ，（94℃30s,60℃30s,72℃45s ）×35个循环，72℃延伸10min ；PCR 产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定。

1.2.2细菌类。

无菌采集病料，接种于TSA 培养皿上，37℃培养24h 。

1.2.3病理切片。

常规石蜡切片和H-E 染色，光镜下观察。

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结果与分析
2.1全部检测结果统计
自2016年7月至2018年6月，两个非自然年度各病原的阳性检出率如下：病毒类：PRRSV 为63.7%（497/780）,PCV2为89.3%（475/532）,PRV 为11.6%（47/404）,CSFV 为7.2%（32/446）,PEDV 为28.4%（119/419），PDCoV 为34.9%（15/43）,PCV3为37.5%（3/8）,PTV 为43.3%(13/30),PPV 为15.4%（4/26）,JEV 为2.6%（1/38）,未检出TGEV 和PoRV 。

细菌类：猪丹毒杆菌为66.7%（4/6）,副猪嗜血杆菌为22.2%（4/18）,猪副伤寒沙门氏菌为100%（3/3），
猪51··
链球菌为53.1%（17/32）。

2.2混合感染的统计
依据2.1所示的全部病原检测结果，可知PRRSV,PCV2和PEDV 等3种病原检出率较高，故混合感染情况统计，分别以这3种病原为基础感染来进行。

2.2.1以PRRSV 为基础感染，
见表1。

表1PRRSV 与其他病毒混合感染情况表2PEDV 与其他病毒混合感染情况2.2.2以PEDV 为基础感染，
见表2。

2.2.3以PCV2为基础感染，二重感染为CSFV,或PRV 的阳性检出率分别为2.3%(12/532),或0.6%(3/532)。

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小结与讨论
3.1自2016年7月至2018年6月两个非自然年度的猪病病原检测结果表明，
检测病例数较多且检出率较高的是PRRSV,PCV2和PEDV 等3种病原。

说明全省各类型猪场危害严重的猪病是以PRRSV 为病原的蓝耳病，以PCV2为病原的圆环病毒病和以PEDV 为主要病原的低日龄仔猪腹泻。

由于猪场蓝耳病疫苗接种情况为少数未接种，多数为接种不规范，或病原类型发生变化，导致PRRSV 检出率高。

由它导致的猪体免疫功能降低，
可继发多种其他猪的病原感染，尤其是PCV2的继发，使这种二重感染检出率达25.1%（196/780）[1]
，尽管绝大多数猪场都
接种了PCV2型疫苗。

事实上，这种二重感染已成为猪场普遍存在的问题，并导致了猪场严重的经济损失。

2017年7月，江西余江一养殖户，因多年未对其饲养的猪群接种蓝耳病疫苗，结果暴发类似2006年下半年普遍发生的那种蓝耳病，
损失惨重。

采取该场4头病死猪的病料检测证实PRRSV 、PCV2、PRV 和CSFV 均为阳性，构成四重感染，尽管后3种病原引起的猪病均接种了疫苗，这种情况是较为罕见的。

3.2本报告结果中列出了PTV 的检出，值得一提的是该病原的检出过程。

2017年5月，我省一大型法系纯种猪场50d 以上的保育猪发生一种类似蓝耳病的猪病，但病料经针对PRRSV 的RT-PCR 检测结果并不支持蓝耳病的临床初诊。

病理切片观察揭示了该病的端倪。

病料经针对PTV 的PCR 检测，并通过测序确定为PTV ，于是明确了该场所发猪病是捷申病，属我省首次报道[2]。

3.3自2010年以来，全国各地先后发生发病与致死率均极高的低日龄（2～5d ）仔猪腹泻。

该病的一个特点是一种针对PEDV 的疫苗在不同的发病猪场使用，效果不尽相同，引发思考。

经过对本报告中报道的相关PEDV 的混合感染的多量检测分析，初步认为下列因素左右了该病的防控。

一是：病原的多样性，不只是PEDV,还存在PDCoV 及其两者的混合感染；二是：发病诱因（或混合感染）为PRRSV 、PCV2、PRV 和CSFV 的一个或多个存在于该病当中[3]；从而增加了低日龄仔猪腹泻的防控难度,也为防控低日龄仔猪腹泻找到了更好的途径。

3.4本报告中一些检测病例数较少或检出率较低的病原，原因各不相同。

由于未接种疫苗，副猪嗜血杆菌病在实践中发病很多，是蓝耳病的一种重要继发感染；但因其剖检病变明显，故被病理诊断确定；只是进行药敏试验的病例才取病料检测。

猪丹毒在未接种疫苗的猪场发病也较多，但因用青霉素治疗效果好，只是在反复发生的病例才取病料检测确诊。

猪副伤寒沙门氏菌多年来已淡出人们的视线，疫苗亦不再使用；但近来剖检时见到一些大肠粘膜发生糠麸样坏死的病例，病料检测证实为副伤寒沙门氏菌，应引起重视。

猪链球菌是在未应用疫苗或应用疫苗后发病才进行检测，
后者分离菌血清型鉴PRRSV+PCV2+CSFV+JEV 0.1(1/780)
PRRSV+PCV225.1(196/780)混合感染阳性检出率(%)PPPSV+CSFV 1.4(11/780)PRRSV+PRV 0.4(3/780)PRRSV+PPV
0.1(1/780)PRRSV+PCV2+CSFV 1.3(10/780)
PRRSV+PCV2+PRV
1.0(8/780)PRRSV+PCV2+CSFV+PRV 1.0(8/780)
PEDV+PRRSV+PCV2+PDCoV
0.2(1/419)
PEDV+PRRSV 2.1(9/419)混合感染阳性检出率(%)PEDV+PCV20.7(3/419)PEDV+PRV
0.7(3/419)PEDV+PDCoV
1.1(5/419)
PEDV+PRRSV+PCV2
1.4(6/419)PEDV+PRRSV+CSFV 0.2(1/419)PEDV+PRRSV+PRV
0.2(1/419)··52
定证实疫苗中确实没有包含所检测到的血清型。

PPV 、JEV 和TGEV 等所引起的猪病因疫苗的使用得到了有效的控制。

PCV3和PTV （目前均无该两种相关疫苗）检出少，PoRV （未接种该疫苗）未检出，则反映了它们真实的发病情况。

CSFV 和PRV 两种疫苗都是猪场的常规免疫，CSFV 的少量检出由各种因素导致的免疫失败所致，PRV 的少量检出则可能与PRV 病原变异有关。

参考文献：
[1]夏伟,牟迪，唐志芬,等.2017年325个规模猪场7种病毒类
疾病病原监测数据分析与2018年防控建议[J].养猪，2018（2）∶89~92.
[2]黎家祥,徐翠,陈慧婷，
等.江西省猪捷申病病例首次分子生物学诊断报告[J].江西畜牧兽医杂志，2018（2）∶34~35.[3]牟迪，
夏伟.2015-2017年猪流行性腹泻病毒病原检测数据统计分析与预防对策[J].养猪，2017（6）∶89~92.
(收稿日期:2018-08-15)
浅析全南县病死动物无害化处理工作的难点与对策
陈玲
（全南县畜牧兽医局，
江西赣州341800）文章编号:1004-2342(2018)05-0053-02中图分类号:S851.2+3
文献标识码：C
1县情
全南县位于江西最南端，国土面积1535km 2，
辖9个乡（镇）86个行政村和长城企业集团、天龙公司、茅山林场，人口21万，是桃江的发源地。

2017年全县饲养量猪48.8万头、牛2.66万头、羊0.63万头、家禽201.81万羽。

全南县按国家政策落实养殖环节病死猪无害化处理补助经费，
对养殖环节病死猪无害化处理给予每对80元的补助，其中：中央承担50元/头，省市县各承担10元/头。

按照“谁处理、补给谁”的原则，该县经费严格按照审核确认的对象和数量核实发放。

2017年全县共监督养殖场无害化处理生猪2.156万头，屠宰环节25头。

2
工作现状
2.1县畜牧兽医部门和保险公司实行协作联动工作机制。

积极探索动物无害化处理办法，该县采取养殖场病死猪无害化处理补助政策与农业政策性保险相结合方式同时实施，
畜牧兽医部门与保险机构对彼此病死畜禽无害化处理结论相互认可，认可的结论作为保险理赔和政策补助的主要依据。

2.2部分养殖户动物疫病防控意识不强，
法律意识淡薄，病死猪不上报，自行采取就近掩埋，甚至有养殖户将病死畜禽直接抛弃于荒郊野外、小溪河流，给周边环境带来危害。

散养户规模不大，
利润不高，时养时不养，因此建立无害化处理设施难度较大。

深埋是目前普遍采用的处理方式，
部分散养户为图省事，在没有采取消毒措施的情况下，将病死动物进行简单的掩埋，达不到无害化处理效果，经常出现被狗猫等动物挖出抛尸野外的现象，
更有个别养殖户受利益驱动，将病死畜禽出售给不法商贩，给食品安全带来巨大的安全隐患。

2.3病死动物不能完全进行集中处理。

由于全南县县域边境线长，无害化处理场所收集病死动物存在成本高、风险大的原因；加上当地老百姓认为新建的无害化场所会影响周边环境倒致无害化处理中心项目落实难。

2.4生猪屠宰加工厂无规范有效的无害化处理设备。

县城生猪定点屠宰场集中检疫点多设在郊区，这些场的无害化处理设备较齐全，
能在官方兽医的监督下规范运营，处理效果较好，但是只限于处理本场废弃物。

乡（镇）定点场规模小、
缺少无害化处53··。