鸡肉中硒元素的测定SOP

鸡肉中硒元素的测定SOP
一、所需仪器：
1.CEM密闭微波消解；
2.不锈钢剪刀；
3.电子天平；
4.1ml移液管1；
5.5ml移液管1；
6.10ml移液管1；
7.100ml移液管5；
8.500ml移液管1；
9.200ml棕色试剂瓶1
10.200ml容量瓶2；
11.吸耳球；
12.聚四氟乙烯消化罐6；
13.30ml小烧杯1；
14.50ml烧杯两个
14.200ml烧杯2；
15.1000ml烧杯1
16.玻璃棒1
17.称量纸2张
18.200ml量筒1
19.钙、铁、锌、钠、钾、镁、铜、锰空心阴极灯
二、所需试剂：硝酸( 优级纯)150ml ;盐酸（优级纯）200ml；氯化钯（分析纯）0.0168g；30%双氧水10ml；蒸馏水1000ml
三、相关试剂的配制方法
1. 65%浓硝酸200ml
取1个200ml烧杯，用1支200ml量筒量取130ml蒸馏水加入烧杯中，再用1支100ml量筒缓缓加入65ml优级纯浓硝酸，边加边搅拌，等待至室温，取1个200ml容量瓶，用玻璃棒转移至其中，用胶头滴管定容至200ml，装入棕色试剂瓶。

【所用】优级纯浓硝酸65ml、蒸馏水150ml、100ml量筒2、200ml 容量瓶1、玻璃棒、胶头滴管、棕色试剂瓶。

2. 6mol/L的盐酸（硒标准溶液用）1000ml
36.5%优级纯盐酸的密度是1.18克/毫升，HCl分子量为36.5，经过计算得，需用,508.47ml优级纯盐酸溶液，6*1*36.5/1.18=508.47。

需要蒸馏水1000-508.47=491.53ml。

取1个规格大小为1000ml的烧杯，用1支500ml量筒量取400ml 蒸馏水放入烧杯中，另取1支500ml量筒和10ml移液管分两次吸取优级纯盐酸508.47ml ，缓缓沿烧杯壁倒入其中，并不断用玻璃棒搅拌，冷却至室温，用玻璃棒转移至1个1000ml容量瓶中，用胶头滴管定容至1000ml，静置冷却后放入试剂瓶中保存。

【所用】36.5%优级纯盐酸510ml、蒸馏水600ml、500ml量筒2、10ml移液管1、1000ml容量瓶1、玻璃棒、胶头滴管、试剂瓶。

3. 盐酸（2 %）：取2mL 优级纯盐酸，用水稀释至100 mL。

共需800ml
【所用】10ml移液管、500ml烧杯2、500ml容量瓶1、1000ml 容量瓶
4. 镧溶液（50 g/L）：电子天平称取29.32 g 优级纯氧化镧，放入200ml烧杯中，取10ml移液管分三次吸取25 mL 去离子水加入烧杯湿润氧化镧，用1支200ml量筒缓慢添加125 mL优级纯盐酸使氧化镧溶解后冷却至室温，用玻璃棒转移至500ml容量瓶中，用去离子水定容至500 mL。

【所用】电子天平、钥匙、称量纸、10ml移液管1、200ml烧杯1、200ml量筒1、500ml容量瓶、胶头滴管、玻璃棒、30g优级纯氧化镧、去离子水500ml。

四、SOP
（一）预处理部分
1. 取电子天平，调整平衡，将1个30ml小烧杯置于其上，刨零，用镊子取鸡肉样品放到小烧杯中，准确称取0.5g，共称取6次。

2. 开机后及每次运行方法前，按“P/T”键检查温度指示是否正常：温度T<60℃。

在运行方法前按“1”键，检查方法在“℃”下必须有“CONTROL”显示。

3. 称样，消解有机样品应限制在≤0.5克／容器，无机样品应限制在≤1.0克／容器。

鸡肉为有机样品，故将6次称取所得0.5g样品分别加入到6个消解罐中。

4. 加酸：消解时溶剂量至少为8ml酸（8ml<溶液总体积<30ml）反应片刻后每罐加入1ml双氧水。

PS 此处需要1ml移液管1,10ml移液管1
5. 容器安装：
①反应罐密封：严格确认反应罐的螺帽是否已经拧紧。

②保证每个内衬罐都已安装好外壳保护套，同时保证保护套为干燥状态。

③CEM仪器均为自动功率输出，但仍应注意功率平台与消解罐数的匹配关系，一般原则：6-16（800W），＞16（1600W）。

6. 载入方法load method或编辑/创建方法edit/creative method －→用户目录USER Directory －→选择方法（或新方法）－→选择样品形式（Organic）－→选择控制模式（RAMP TO TEMPERATURE）－→设定反应方法(最大功率、爬坡时间、目标温度、保持时间) －→按next －→方法命名－→填写实验备忘（可省略）－→按next结束回到初始界面（此时初始界面所显示的CURRENT METHOD，即新编方法）。

7. 摆放消解罐：
为了规范仪器的操作，应保证反应罐对称放置于转盘上。

反应罐安装好后，将转盘安放于仪器腔体中。

为减少多模微波场的影响，每批反应罐数应≥6罐。

①6-16个罐均匀摆放于内圈
②17-24个罐均匀摆放于外圈
③25罐以上，内圈放满，其余消解罐均匀摆放于外圈
8. 按star/pause键开始消解程序（表1）
9. 消解过程中如发现有异常现象按star/pause键即可暂停程序，再次按下star/pause键继续；按stop键停止消解。

10. 消解程序完成后，仪器自动进入冷却过程。

11.最后进行相关后续操作，包括赶酸（电炉子上）、转移、定容等，同时处理至少两个空白试样（空白需要消解吗？用什么做空白？）。

12.关机：待反应结束15分钟后再关机。

注意：开关机间隔至少一分钟。

13.冷却至室温后，移入50 mL 容量瓶中，用水定容，同时处理至少两个空白试样。

PS 此处需要50ml容量瓶3
表1 微波消化程序
ENTER METHOD PARAMETERS
STAGE POWER RAMP PSI℃HOLD
MAX%CONTROL
1 400 100 05:00 / 120 01:00
2 400 100 03:00 / 150 05:00
3 400 100 03:00 / 170 - 180 10:00
（二）硒标准操作流程：
2.1准曲线的绘制
2.1.1标准溶液的配制：取10ml移液管一个，100ml容量瓶5个，分别吸取0.1mg/ L （100ug/ml）硒标准应用液0. 0、0. 5、1. 0、2. 0、4. 0、8. 0ml 于100ml 容量瓶中, 再用6mol/L盐酸稀释至刻度，颠倒摇匀后备用。

【所需仪器】10ml移液管2个、100ml移液管1个、100ml容量瓶5个、胶头滴管。

【所需试剂】1. 0mg/ L 硒标准应用液15ml，6mol/L盐酸500ml。

2.1.2原子分光光度法测定标准溶液：3个变量3个平行
（1）原子分光光度计条件的选择：①硒波长196.0nm，光谱通带宽0.5nm，灯电流10mA，保持气体氩气流量0.3L/min（原子化时停气，净化时采用流量0.5L/min），进样体积10ul。

②变量的选择：（变量1）灰化温度1000C、1200C、1400C（变量2）基体改进剂用量的选择：0.1%氯化钯分别选2ul，5ul，10ul进行测量(变量3）灰化时间的选择：10s，15s，20s。

2.1.3标准曲线的绘制：将上述标准溶液利用原子分光光度计进行测量，3个变量3个平行共需进行试验27次。

2.2 利用响应面对实验进行优化，进行多因素分析
2.3spss分析实验结果及确定实验的最佳条件
3.样品的测定及结果分析：按上述操作得出的最佳条件进行测量得出结果并进行分析。

仪器参数
波长（nm）光谱通带(nm) 灯电流(%)
196.0 0.5 90
进样体积
样品体积（µL）0.2% PdCl2
（µL）
10 5
石墨炉升温程序
阶段温度（℃）保持时间（s）升温速率（℃
/s）氩气速度(L/min)
干燥105 35 10 0.3 灰化1000,1200,1400 10,15,20 0.3 原子化2300 3 - 停气除残2550 3 - 0.3
（三）其他微量元素的标准操作
3.1各元素的标准储备液
3.11 钙、铁、锌、钠、钾、镁标准储备液：分别准确吸取钙标准
溶液10.0 mL、铁标准溶液10.0 mL、锌标准溶液10.0 mL、钠标准溶
液5.0 mL、钾标准溶液10.0 mL、镁标准溶液1.0 mL，用2%盐酸分
别定容到100 mL 石英容量瓶中，得到上述各元素的标准储备液。

质
量浓度分别为：钙、铁、锌、钾：100.0 µg/mL；钠：50.0 µg/mL；镁：10.0 μg/mL。

【所用】10ml移液管6、100ml容量瓶6
3.12锰、铜标准储备液：准确吸取锰标准溶液10.0 mL，用2%盐酸定容到100 mL，再从定容后溶液中准确吸取
4.0 mL，用2%盐酸定容到100 mL，得到锰标准储备液。

准确吸取铜标准溶液10.0 mL，用2%盐酸定容到100 mL，再从定容后溶液中准确吸取6.0 mL，用2%盐酸定容到100 mL，得到铜标准储备液。

质量浓度分别为：锰：4.0 µg/mL；铜：6.0 µg/mL。

【所用】10ml移液管4、100ml容量瓶4
3.2试样待测液的制备
3.2.1 钙、镁待测液
从50 mL 的样品试液中准确吸取1.0 mL 到100 mL 容量瓶中，加2.0 mL 镧溶液，用水定容。

同样方法处理空白试液。

【所用】1ml移液管6、100ml容量瓶6、5ml移液管6、二级水300ml、镧溶液10ml、样品2ml
3.2.2 钠待测液
从50 mL 的样品试液中准确吸取1.0 mL 到100 mL 容量瓶中，用2%盐酸定容。

同样方法处理空白试液。

【所用】1ml移液管3、100ml容量瓶3、2%盐酸300ml、样品1ml 3.2.3 钾待测液
从50 mL 的样品试液中准确吸取0.5 mL 到100 mL 容量瓶中，用2%盐酸定容。

同样方法处理空白试液。

【所用】1ml移液管3、100ml容量瓶3、2%盐酸300ml、样品1ml
3.2.4 铁、锌、锰、铜待测液
用50 mL 的样品试液直接上机测定。

同时测定空白试液。

3.2.5 为保证试样待测试液浓度在标准曲线线性范围内，可以适当调整试液定容体积和稀释倍数。

3.3标准系列使用液的配制
按表1 给出的体积分别准确吸取各元素的标准储备液于100 mL 容量瓶中，配制铁、锌、钠、钾、锰、铜使用液，用2%盐酸定容。

配制钙镁使用液时，在准确吸取标准储备液的同时吸取2.0 mL镧溶液于各容量瓶，用水定容。

此为各元素不同浓度的标准使用液，其质量浓度见表2。

3.4标准曲线的绘制
按照仪器说明书将仪器工作条件调整到测定各元素的最佳状态，选用灵敏吸收线K 766.5 nm、Ca
422.7 nm、Na 589.0 nm、Mg 285.2 nm、Fe 248.3 nm、Cu 324.8 nm、Mn 279.5 nm、Zn 213.9 nm 将仪器
调整好预热后，测定铁、锌、钠、钾、铜、锰时用毛细管吸喷盐酸A （4.12）调零。

测定钙镁时先吸取
镧溶液（4.15）2.0 mL，用水定容到100 mL，并用毛细管吸喷该溶液调零。

分别测定各元素标准工作液
的吸光度。

以标准系列使用液浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

3.5 试样待测液的测定
调整好仪器最佳状态，测铁、锌、钠、钾、铜、锰用盐酸A（4.12）调零，测钙、镁先时，先吸取
镧溶液（4.15）2.0 mL，用水定容到100 mL，并用该溶液调零。

分别吸喷试样测液测试液的吸光度及空
白试液的吸光度。

查标准曲线得对应的质量浓度。

3.6 分析结果的表述
3.7精密度
相关要点：
1. 常用敞开湿法消解样品中硒的回收率很低, 并且有些有机硒化合物耐酸, 消解中通常不能使硒完全转化为无机硒。

密闭微波消化法具有节约试剂、污染少、快速、样品消解完全等特点, 在生物样品的处
理中得到了广泛的运用,借助这种方法可以快速溶解头发、血液、脑组织和脏器官、骨骼等
2. 常用的生物样品分解体系主要有HNO3PH2 SO4 , HNO3PHClO4 , H2SO4PH2O2, HNO3PH2O2 , 纯HNO3 等相同微波消化程序下, HNO3PHClO4( 4B1) 的消化效果最好, 但发现HClO4 对聚四氟乙烯消化罐有腐蚀作用, 故不宜采用。

HNO3PH2 SO4( 1P1) 和HNO3PH2O2( 10P3) 的消化效果也较好, 考虑到硫酸盐在灰化阶段不易去除, 给石墨炉测定带来较大的基体干扰, 故选用 4 mL 的HNO3PH2O2( 10P3) 作为样品消化的试剂。

进一步的实验显示, 为避免由于微波消化时反应过于剧烈使灌内压力超过消化罐的承受能力而发生冲罐现象, 可先加入3 mL 1B1 HNO3微波消化冷却后, 打开罐盖摇动释放反应产生的气体, 再加入1 mL H2O2 进行消化一次。