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结果与分析
1、低浓度甲酸诱导酿酒酵母中的凋亡细胞死亡
指数生长期 细 胞 存 活 率
从左图可以看出 ①随着甲酸浓度的增加细胞存活率
稳定生长期
下降。
②比起指数生长期的细胞,稳定生 长期的细胞更耐甲酸。由此说明细 胞的存活率取决于甲酸处理的时 期。
甲酸浓度
结果与分析
细 胞 核 是 环 状 的 细胞核是圆的
1
研究背景和意义
2 2
材料和方法
3
结果与分析
研究背景和意义
凋亡是一种活跃的细胞死亡过程,发挥维持细胞稳态的重要作用。过去的研究已经 为细胞凋亡可以发生在单细胞生物以及后生动物中提供了大量的证据。 因为在CDC48突变体中发现了典型的细胞凋亡表型,出芽的酿酒酵母已经
成为研究细胞程序性死亡的典型模型系统。
细 胞 少 细胞丰富
DNA链完好
DNA链断裂
DNA链被完全摧毁
结果与分析
2、甲酸诱导的细胞死亡是伴随质膜完整性的改变的过程
结果与分析
3、在甲酸诱导凋亡细胞死亡过程中产生了活性氧
绿色荧光(图4A,左面 板)生产绿色用甲酸处 用甲酸处理过的细 理过的细胞 发出强烈的绿色荧光 胞发出强烈的绿色 (图4a,左图) 荧光表示产生了 信号ROS的产生,荧光 ROS 。 (图4A ,左面板)生产 ROS信号ROS信号
蚁酸(甲酸)是一种弱酸,能引起氧化应激。低浓度甲酸广泛用作防腐剂的主要 成分。在另一方面,甲酸已被证明是一种有毒的甲醇代谢产物,它是一种常用的有机 溶剂。甲酸能引起代谢酸中毒影响视网膜和视神经细胞,最终导致失亡的细胞死亡,这一活跃过程
中伴随着活性氧的爆发。我们的研究将是第一个阐明酵母中甲酸诱导
甲酸浓度存活率结果与分析细胞核是圆的细胞核是环状的细胞丰富细胞少dna链断裂dna链被完全摧毁dna链完好结果与分析2甲酸诱导的细胞死亡是伴随质膜完整性的改变的过程结果与分析3在甲酸诱导凋亡细胞死亡过程中产生了活性氧绿色荧光图4a左面板生产绿色用甲酸处左面板生产绿色用甲酸处用甲酸处理过的细理过的细胞发出强烈的绿色荧光图发出强烈的绿色荧光图4a左图信号左图信号ros的产生荧光图的产生荧光图4a左面板生产ros信号ros信号用甲酸处理过的细胞发出强烈的绿色荧光绿色荧光表示产生了ros
结果与分析
、甲酸诱导的酵母细胞死亡减少了线粒体膜电势,并且最 终导致线粒体分解
线粒体分解
线粒体膜电 势减小了
结果与分析
5、低浓度甲酸诱导的细胞死亡是不依赖Yca1p基因的
细胞存活率 少了
结果与分析
6、ROS的爆发是在细胞死亡早期,并且在Yca1pindependent菌株中的爆发比在野生型菌株中水平更高。
④4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色:评估染色质凝聚和分散
⑤若丹明123(Rh123)染色:评估线粒体膜电位的动作评估
⑥末端标记法分析:鉴定DNA链的断裂
⑦ROS产生的检测:将5 mg mL-1DHR123加入到酵母细胞YPD培养基中,并在黑暗中
(37℃)培养15分钟。然后将细胞冲洗一次并重新悬浮于1毫升含不同甲酸的浓度的YPD 培养基中。在30℃中培养40分钟后,细胞用PBS洗一次。处理细胞中ROS的生成通过共 聚焦显微镜监测。 ROS产生的过程还可以通过流式细胞仪(FACS)在不同时间点确定。
论文分析
Formic acid induces Yca1p-independent apoptosis-like cell death in the yeast Saccharomyces cerevisiae
l
甲酸在酿酒酵母中诱发不依赖于Yca1p的细胞凋 亡
制作者:刘慧敏 、 褚立婷 班级:132 学号:06、07
甲酸处理:将中期指数生长期或稳定生长期的酵母细胞悬浮在含0,20,40,50, 60、70、80或120微升甲酸的YPD培养基中。 细胞死亡评估:通过CFU计数检测细胞存活率
②透射电子显微镜分析: 观察不同处理的酵母细胞。
材料和方法
③膜联蛋白-V-荧光素 - 异硫氰酸酯(FITC)和碘化丙啶(PI)染色:用于细胞 染色
野生型菌株 yca1D菌株
谢 谢 !
细胞凋亡的作用方式的研究。此外,我们的研究将建立一个在酵母 中独立Yca1p细胞死亡过程中产生 ROS的调控级联反应的模型 系统。
材料和方法
材料: 酵母菌株W303-1A和它的同基因敲除突变体W303-1A、生长酵母细胞的 YPD培养基(1%酵母生长提取物,2%细菌蛋白胨和2%葡萄糖)或选择性合 成培养基。 方法: ①甲酸处理与细胞死亡评估:
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