贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测

中国畜牧兽医2018,45(5) :13H7-1373
China Anim al Husbandry &Veterinary Medicine
d o i：10. 16431/j. cnki. 1671-7236. 2018. 05. 030
贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的
耐药性及耐药基因检测
王学君、谭艾娟〃，吕世明2,杜安定、陈波利、张盛珣1
(1.贵州大学生命科学学院，贵阳550025 (.贵州大学动物科学学院，贵阳550025)
摘要：为考察贵州省猪源大肠杆菌对四环素类抗菌药的耐药情况和耐药基因的流行情况，本试验采用微量肉汤
稀释法测定783株分离于贵州省8个地区规模化养殖场的猪源大肠杆菌对6种四环素类药物的敏感性，并通过
P C R方法检测其携带四环素耐药基因情况。

结果显示，猪源大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素、米诺环
素和替加环素的耐药率分别为97. 3%、97. 6%、96. 6%、89. 3%、48. 0%和34. 2%; 土霉素和四环素的耐药水平最
高，其M IC50分别为256和128 &g/m L，而M IC90均为512 &g/m L，四环素的耐药倍数高于土霉素；米诺环素和替加
环素的耐药水平最低，其M IC90分别为32和4 &g/m L，耐药倍数相同；耐药基因e A&3B、e C&3D和e M的检
出率分别为92. 60%、41. 50%、58. 75%、58. 62%和70. 10% ;耐药菌株中主要以e A基因为主，且大多数以携带复
合基因的形式存在；大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素和米诺环素的耐药性分别与耐药基因23B和
e M呈极显著相关（P<0. 01)，e D基因分别与对米诺环素和替加环素的耐药性呈极显著相关（P<0. 01#贵州
省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况十分普遍，尤其是四环素和土霉素，金霉素和强力霉素有高度耐药的
趋势（卜排泵是四环素类药物主要的耐药机制；在兽医临床上越来越严重的耐药情况与耐药基因的广泛存在有很
大关系。

关键词：药敏试验；四环素类药物；耐药基因；耐药表型
中图分类号：S852. 61 文献标识码：A文章编号：1671-7236(2018)05-1367-07
Detection of Resistance and Resistance Genes of Swine E scherichia c o li
in Guizhou to Tetracyclines
W A N G Xuejun1，T A N Aijuan1%，L V Shiming2，D U Anding1，C H E N Boli1，Z H A N G Shengxun1
(1.College o f L ife Science，Guizhou U niversity，Guiyang550025; China;
2.College o f Anim al Science，Guizhou U niversity，Guiyang550025, China)
Abstract：In order to investigate the resistance to tetracycline and the prevalence of resistant
genes of E.coii i n Guizhou province,the sensitivity of783 E.coii isolated from swine of8farms
i n Guizhou province to6kinds of tetracyclines was determined by broth microdilution method,and
tetracycline resistance gene was detected by P C R method.T he results showed that t rates of isolates to oxytetracycline,tetracycline,chlortetracycline,doxycycline,minocycline and
tigecyclinewere97.3%，97.6%，96.6%，89.3%，48.0% and34.2%，respectively.The resistance
levels of oxytetracycline and tetracycline were the highest,their MIC50were256 and128 &g/m L，respectively,while the MIC90were both512 &g/mL,and the drug resistance times of tetracycline
were higher than that of oxytetracycline.The drug resistance l e v e l ofminocycline and tigecycline
were the lowest,and their M I C% were32 and4yg/m L,respectively,the drug resistance times of
收稿日期：2017-10-27
基金项目：国家自然科学基金“u l基因在猪源大肠杆菌和人源嗜麦芽寡养单胞菌之间转移频率研究031760749)
作者筒介：王学君（1990-)，男，海南儋州人，硕士生，研究方向：细胞功能成分研究与利用，E-mail:1004636382® 信作者：谭艾娟（1963-)，女，贵州六枝人，教授，研究方向：生物化学与分子生物学，E-m a i l772771868@
1368中国畜牧兽医45卷minocycline and tigecycline were the same.The detection rates of tetracycline resistance genes ，26，2!and2Q were92.60C，41.50C，58.75C，58.62C and70.10C，respectively.The tetA.gene was mainly type i n resistance strains，and most of them carried complex resistance genes.The resistance rates of F.co Z f to oxytetracycline，tetracycline，chlortetracycline，doxycycline and minocycline were extremely significantly correlated with the detection rates of tetB and tetM genes (P#0. 01).The detection of etD gene was positively with tigecycline and minocycline re­sistance (P#0. 01) respectively.The d rug resistance of E.coli from swine i n Guizhou province was widespread,e s pecially to tetracycline and oxytetracycline；The drug resistance trend of chlor-tetracycline and doxycycline were highly；The mechanism of efflux pump was the main drug re­sistance mechanism of tetracyclines；I t had a great relationship between the prevalence of resis--ance genes and growth of antimicrobial resistance i n veterinary c l i n i c a l practice.
Key words：drug sensitivity test;tetracyclines;drug resistance genes;drug-resistant phenotype
四环素类药物为高效的广谱性抗菌药，临床上应用广泛。

因不合理的应用，近年来细菌对四环素 类药物出现高水平耐药[1]，药物的使用陷人用药" 耐药"加大药量"多重耐药的恶性循环中[2]，严重威胁着养殖业的健康发展。

大肠杆菌是人类和动物体内常见的共生性菌群，为条件性致病菌，同时也是耐药指示菌和多种耐药基因贮存库。

在耐药基因的传递及耐药性的传播中具有重要作用，因此，了解大肠杆菌的耐药性和耐药机制，对控制和预防细菌耐 药性具有重大意义[5]。

作者调查了贵州省各个地 区猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况及四环素耐药基因的流行情况，探讨了耐药表型与耐药基 因携带间的关系，以期为指导临床合理用药及控制 细菌耐药提供理论参考。

1材料与方法
l.i材料
1.1.1菌株来源从贵州省毕节市、贵阳市、六盘水市、铜仁市、遵义市、齡东南州、齡南州及齡西南州8个地区的部分规模化养猪场采集样本，并由贵州大学药理实验室分离纯化，保种783株猪源大肠杆菌。

大肠杆菌标准菌株A T C C 25922购自中国 兽药监察所。

1.1.2 药物与试剂土霉素（oxytetracycline)、四环素（tetracycline)、金霉素（chlortetracycline)、多西环素（doxycycline)、米诺环素（minocycline)和替加环素（tigecycline)标准品（&98%)均购自大连美 仑生物技术有限公司；L B肉汤购自北京奥博星生物科技有限责任公司；伊红美蓝琼脂（E M B)、米勒一海顿肉汤（M H B)均购自上海博微生物技术有限公 司；50 X T A E电泳缓冲液、D M2000 D N A Marker、2X Tag P C R MasterMix均购自北京康为世纪生物科技有限公司;Axygen胶回收试剂盒购自贵州宏硕生物有限公司;GoldView核酸指示剂购自Solarbio公司。

1.2方法
1.2. 1药敏试验通过微量肉汤稀释法，以大肠杆菌A T C C25922为质控菌株，检测783株猪源大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素、米诺环素和替加环素的最小抑菌浓度（M I C)。

判定标准参照美国临床实验室标准化委员会[6](CLSI)，对试验结果进行耐药率、MIC50、M I C m等分析。

1.2.2耐药基因检测试验参照黄名钱[1]设计的e A、e B、t C、e D和e，M基因引物，引物信息见表1。

引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合。

1.2.3耐药基因的P C R检测采用煮沸法[7]提取783株大肠杆菌总D N A为模板。

P C R反应体系25 &L:2X Tag P C R MasterMix 12.5 &L，D N A模板5 &L，上、下游引物各 0.5 &L，d d H zO 6. 5 &L。

P C R反应条件：95 °C预变性5min;95 '变性30 s，退火（退火温度见表1)30 s，72 '延伸30 s，共32个循环；72 '延伸7min;'保存。

P C R产物经琼脂糖凝胶电泳检测后纯化回收，并送生工生物工程 (上海）股份有限公司测序。

1.2.4耐药性与耐药基因相关性分析 运用统计软件S P S S20.0进行完全随机设计两样本率的 !检验，7<0. 05时具有统计学意义，从而分析大肠杆菌耐药表型与耐药基因间的差异。

王学君等：贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测1369 5期
表1引物序列信息
T able 1P rim er sequences in fo rm atio n
基因G enes
引物序列
P rim er sequences (5/"3/)
扩增片段大小
A m plified
fra g m e n ts/b p
退火温度
A nnealing
t e m p e r a t u r e/'
G e n B a n k登录号
G enB ank
accession N o.
tetA F: G C T A C A T C C T G C T T G C C T T C
R: C A T A G A T C G C C G T G A A G A G G
21063. 9X61367 tetB F: G C C C A G T G C T G T T G T T G T C A T
R: C G T T T T T T C G C C C C A T T T A G T
61756. 1J01830 te t C F: C T T G A G A G C C T T C A A C C C A G
R:A T G G T C G T C A T C T A C C T G C C
41856. 8J01749 te t D F: A T G T G C T G T G G A T G T T G T A T
R: C C T G T A G T T T T C C C T G A T T T
72654. 1L06798 tetM F: G T G G A C A A A G G T A C A A C G A G
R: C G G T A A A G T T C G T C A C A C A C
40660. 9X90939
2 结果
2.1耐药率统计结果
由表2可知，目前783株贵州省猪源大肠杆菌对第1代四环素类药物土霉素、四环素、金霉素耐药 最严重，耐药率均超过95%(分别为97.3%、97.6% 和96.6%)，且中介率非常低；对第2代的多西环素 耐药率为89.3%，而人医临床用药米诺环素(8.0%)和替加环素（3).2%)耐药率较低，敏感率(分别为30.5%和47.3%)和中介率（分别为21.5% 和18.5%)较高。

2.2耐药水平分析
由表3可知，土霉素和四环素的M I C5〇和耐药 倍数最大，M I C。

分别为256和128 &g/m L，耐药倍 数均为8倍;替加环素的M I C5。

和耐药倍数最低，分 别为1&g/m L和0.5倍；四环素的M I C。

和耐药倍 数最高，M I C。

高达512&g/mL，是临床推荐治疗量的32倍;其次是土霉素。

表2S83株猪源大肠杆菌对6种四环素类药物的耐药情况
T able 2 R esistance of 783 E scherichia coli strain s to 6kinds of tetracycline drugs %抗菌药物A n tib acterials敏感S u scep tib ility中介In term ed iary耐药R esistan ce
土霉素O xy tetracy clin e1'7(13/783) 1. 0(8/783)97.3(762/783)
四环素T etracy clin e2'0(16/783)0.4(3/783)97.6(764/783)
金霉素C h lo rtetracy clin e2'4(19/783) 1.0(8/783)96.6(756/783)
多西环素D oxycycline4'6(36/783) 6.1(48/783)89.3(699/783)
米诺环素M inocycline30'5(239/783)21.5(168/783)48.0(376/783)
替加环素T igecyclin e47'3(370/783)18.5(145/783)34.2(268/783)
表3 783株大肠杆菌对6种四琢素类药物的M IC5"和M IC d
T able 3 M IC50and M IC9〇of 783 Escherichia coli strain s to 6k inds of tetracycline drugs
抗菌
A n tib ac te ria ls
M IC50/耐药倍数M IC90/
(&g/m L) D ru g re sistan c e tim e (&g/m L)
数
D ru g re sistan c e tim e
土霉素O xy tetracy clin e256851216四环素T etracy clin e128851232金霉素C h lo rtetracy clin e6441288多西环素D oxycycline322644米诺环素M inocycline80. 5322替加环素T igecyclin e10. 542
1370
中国畜牧兽医
)5卷
2.3 耐药基因检测结果
1 ，从783株猪源大肠杆菌中扩增出
大小分别为210 "衫A )、617 "衫B )、418 "衫C )、726 "叹0)和）06bp (如M )的片段，与目的条带一致。

胶回收测序结果经N C B I 数据库比对，同源性分别 为 96%、98%、97%、98%和 99%。

M ，D M 2000 D N A M a rk e r; 1，阴性对照；2〜6，分别是化- f A 、t M 耐药基因阳性菌株 M ，D M 2000 D N A M a rk e r; 1，N egativ e co n tro l; 2-6，2&， te tB ，te tC ，tetD and tetM re sista n t gene po sitive s tra in s ， resp ectively
图1四环素类耐药基因P C R 扩增结果
Fig. 1 PC R am plified results of tetracycline resistant genes
2.4四环素类耐药基因检出率及组合类型
大肠杆菌四环素 基因检出情况见图2。

由图2 ，783 源大肠杆菌四环素耐药基因
的阳性检出率为9 8. 5 %，
其中e A 基因检出率最
高，为92. 6%其次是e M 基因，检出率为70. 1% 检 低的是e B 基因！ 41.5%。

携带二重耐药基因的囷株以e A b e M 基因检出率最尚，为 6 5. 4 % ;其次为e A b e C 基因和e A b e D 基 因，分别为54. 1%和54. 9%;携 重耐药基因的菌株以 e A b e C b e M 和 e A b e D b e M 基 因检出率较高，分别为37. 1%和37. 4% ;而携带四 重耐药基因的菌株以e B b e C b e D b e M 基因 的携 ，为24. 7%。

其中携带五重耐药基因的菌株以e A b e B b e C b e D b e M 基因的检 出率最尚，为8. 5 %。

2.
5耐药基因和耐药表型相关性分析
大肠杆菌携 基因与 表型相关性分析见表4。

由表4可知，耐药菌以e A 基因检出率最 ，耐药大肠杆囷e A 基因的检 皆超过了 85%，
其次为e M 基因。

菌和 菌所携带的5 基因的检 检验，结果表明，土霉素、四环素、金霉素、
多西环素和米 素的耐药菌株在e B 和e M 基因检出率均极显著高于敏 菌株（P C 0. 01)，而替 素的 菌其 基因e B 和e M 检出率均极显著低于敏感菌株（P < 0.01)，此外替加环素的耐药菌株e C 基因检出率 显著高于敏感菌株（P <0. 05)，米诺环素和替加环 素的 菌株e D 基因检 极显著高吁菌株（P <0. 01)。

3
2+22+29)
1
a s
3H
g H
V H
图
F i g
型
因基G e ]
t e s
a t
•1
c 0
E
-
83
f
i n 7
出e s 检e l l 因t g 基a n 药1s t 耐r e s 物l e 药1111类a c y 素t r a 环t e 四o f
菌
e s
杆r a t 肠n 大t i o
柹t e
83
D
e
王学君等：贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测1371 5期
表4大肠杆茼四环素类药物耐药基因与耐药性相关性分析
Table %Correlation analysis of drug resistance and resistance genes of tetracyclines in E@ coli %
基因
R esistan ce g en eL
土霉素
O xy t etracy clin e
四素
T etracy clin e
金霉素
C h lo rtetracy clin e
素
D oxycycline
米诺环素
M inocycline
替加环素
T igecycline
t e t A菌97. 6497.9195.5088.8492.0295.52菌
85. 7184.2188.8991.7691.6791.67
te t B菌42. 40%%42. 30%%42. 30%%44. 20%%53. 19%%28. 60%%菌9. 5210.5318.5218.8239.2947.87
te t C菌58. 2758.6458.6058.0857. 45%%64.55%菌76. 1963.1662.9663.5362.3055.62
te t D菌58.4054.3258.6059.5161. 17%%65. 30%%菌66.6773.6859.2650.5956.3555.04
te l M菌7109%%70. 81%%70. 90%%72. 10%%75. 53%%60. 82%%菌38. 1042.1148.1552.9462.9074.81
相同基因检出率耐药菌株与敏感菌株相比，％，差异显著（P<〇.〇5#%%，差异极显著（P C0.01)
T h e s a m e g e n e d e te c tio n r a te o f re sista n t s tra in s a n d sen sitiv e s tr a in s! %,S ignifican t d ifference (P<0. 05) ；%%,E x trem ely s i g- n ificant difference (P<0.01)
3讨论
当前贵州省猪源大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素、米诺环素和替加环素的耐药水平很高，尤其是兽医临床用药，而人医临床药物相对较 低，其耐药率分别为97.3%、97.6%、96.6%、89.3%、48.0%和34.2%，高于王基伟1报道的吉 林省猪源大肠杆菌对四环素的耐药率（83.63%)和张瑜等9调查的延边地区猪源大肠杆菌对四环素耐药率(89%)及王宏栋[10]报道的多西环素和米诺环 素的耐药率（与关淼等[11]、岳秀英等[12]及郭潇木 等[13]的检测结果相近，低于李海华等[14]和何莹 等[15]的研究结果。

可见全国大部分地区猪源大肠 杆菌对四环素类药物的耐药水平都很高，且四环素耐药性的传播也很普遍，如植婵萍等[16]发现在有机养殖场中猪源大肠杆菌对四环素和多西环素均出现高耐药水平的情况。

本试验还检出了高耐药水平的饲料添加剂（金霉素），而这对于其用于本地猪场养 殖预防病原菌有很大限制作用，此外，用于参考的人医临床用药米诺环素和替加环素两种药物也出现较高水平的耐药，这可能与同类药物存在相同耐药机 制有关。

M I C m为区域内细菌平均耐药水平，M I C m为区域内有效治疗浓度，耐药倍数=细菌M I C值/耐药M I C判定值，这3项指标作为评价区域内细菌总体 的耐药水平的指标，其值越大细菌耐药水平越高。

贵州猪源大肠杆菌对土霉素和四环素的M I C9。

和耐药倍数高达512 &g/m L，是临床推荐治疗量的32倍，相对较低的是金霉素和多西环素M I C%分别为128和64 &g/m L，耐药倍数较低，但具有趋向于高 度耐药的趋势，因此，建议在贵州地区猪场中减少此类药物的使用，特别是降低金霉素在饲料添加剂中 的使用。

大肠杆菌四素的机制
机制和核糖体保护机制为主，已发现的主动外排机制基因有如A、如B、如C、祝D、如£、祝G、如
:、te tj、tetK、tetL、otrB、tcr3、tetP A、tetV 'tetY 等；而介导核糖体保护机制的基因有2M、2〇、
o.A、e P B等；此夕卜，目前唯一能使四环素降解并失活的酶的编码基因是e X [1719]。

这些耐药基因主要存在质粒上，可在不同物种间进行传递）0]。

本试验中，783株大肠杆菌的 Z t A、和i t M基因检出率分别为 92.60%、41.50%、58.75%、58.62%和70.10%,比张济培等[0]水禽源大肠杆菌、牛建宁等[1]鸡源大肠杆菌和张扬等[2]鸡源大肠杆菌检测的耐药基因检 出率高t t B基因检出率低于张济培等[0]水禽源大肠杆菌的报道，比李胜利等[3]报道的e B基因检出率高。

统计结果表明，大肠杆菌携带单一耐药基因 的菌株极少，基本上同时携带多种耐药基因，其中e A b e M基因组合型检出率最高（65.4%)，携带多种耐药基因可能与其高度耐药相关。

制约细菌耐药性表型的关键因素是耐药基
1372中国畜牧兽医45卷
因[24]。

通过S P S S20.0统计783株猪源大肠杆菌 的耐药表型与耐药基因的关系，结果表明，大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素和米诺环素耐 药分别与^出和k f M基因呈极显著相关（P< 0.01)，而如C和如D基因与其耐药性没有统计学 意义，耐药基因和的研究结果与张济培等）〇]和牛建宁等）1]报道相一致，而tedM基因存在差异；耐药基因与细菌对替加环素耐药存 在极显著相关，此外，大肠杆菌对米诺环素和替加环素耐药与如D基因也存在极显著相关。

可见大肠杆菌四素的表与基因相关关系。

本研究通过四环素耐药性和耐药机制的研 究，一方面对比了人医药物和兽药药物耐药性的差 异；另一方面也补充了贵州省猪源大肠杆菌对四环 素类药物的耐药情况，为监控和预防四环素类药物 耐药提供参考。

%结论
敏感性试验结果表明，兽医临床药物的耐药水 平高于人医临床药物，并以第1代四环素药物最为 严重。

贵州四环素耐药基因的分子流行情况主要以和k d M基因为主，同时携带多种耐药基因的菌株最为常见；相关性分析表明，细菌耐药性与其携带的耐药基因呈明显相关性。

参考文献(References):
[1]黄名钱.猪源大肠杆菌四环素耐药基因检测及大肠杆
菌抑制剂筛选[D].南昌：江西农业大学，2013.
H U A N G M Q. D etectio n on tertacy clian resistan ce
gene and su p p re sso r screen in g of E scherichia coli in
sw in e[D].N a n c h a n g：Jian g x i A g ric u ltu ra l U n iv e rsity，
2013. (in C h in ese)
[2]韦嫔.贵州省猪源大肠杆菌四环素耐药基因检测及
转移的研究[D].贵阳：贵州大学，2016.
W E I P. R esearch on th e te stin g and tra n sfe r of te tra­
c y clin e-resistan t genes of sw ine E scherichia coli in
G uizhou p ro v in c e[D].G u iy a n g：G uizhou U n iv e rsity，
2016. (in C h in ese)
[3]张纯萍，宁宜宝，宋立，等.健康鸡猪体内大肠杆菌
对四环素的耐药性及耐药基因分布[J].中国农业科
学，2010,43(12):2578-2583.
Z H A N G C P，N I N G Y B，S O N G L，et O R esistan ce
to tetracy clin e and d istrib u tio n of tetracy clin e re s is t­
ance d e te rm in an ts in com m ensal E scherichia coli iso­
lated fro m clinically h ealth y chickens and pigs [ J].
Scientia A gricultura S in ica，2010,43(12) ： 2578-2583.
(in C h in e s e)
[4] K N E Z E V IC P, P E T R O V IC O. A n tib io tic resistan ce
of com m ensal E scherichia coli of foo d-p rodu cing an i­
m als fro m th ree V ojvodinian fa rm s, S e rb ia[J]. In ter­
national Jo u rn al o f A ntim icro bial A g e n S s，2008，
31(4)360-363.
[5]只帅，席美丽，刘攻关，等.陕西部分地区不同食源
性大肠杆菌耐药性检测[J].中国食品学报，2011，
11(1)=196-201.
Z H I S , X I M L , L IU G G , et al. D etectio n of d ru g re­
sistan ce of d ifferen t food borne E scherichia coli in
som e areas of S h a a n x i[J]. Jo u rn al o f Chinese In stitu­
te o f F ood Science a n d T ec h n o lo g y，2011 , 11(1)：
196-201. (in C h in ese)
[6] N atio n al C o m m ittee for C linical L ab o rto ry S tan d ard s.
A p p ro v ed sta n d ard M31-A[S]. W ayne P A：N C C L S，
2012'
[7]冯广达，陈美标，羊宋贞，等.用于P C R扩增的细菌
D N A提取方法比较[J].华南农业大学学报，2013,
34(3)439-442.
P N E G G D , C H E N M B , Y A N G S Z , et al . A com­
p arativ e stu d y on bacteria D N A ex tra c tio n m ethod s
used fo r P C R a m p lific atio n[J]. Jo u rn al o f South C hi-
n a A g ric u ltu ra l U n iv e rsity，2013 ? 34(3) ：439-442. (in
C h in ese)
[8]王基伟.猪源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究[D].
长春:吉林农业大学，2015.
W A N G J W. In sig h ts into prevalence of antim icrobial
re sistan c e and resistan ce genes in E scherichia coli iso­
lates fro m sw ine [D]. C h a n g c h u n：Jilin A g ric u ltu ra l
U n iv ersity , 2015. (in C h in ese)
[9]张瑜，李金霞，徐璐，等.猪源性大肠杆菌分离鉴
定及体外抑菌试验[J].延边大学农学学报，2017,
39(1) :55-60.
Z H A N G Y , L I J X , X U L , et al. Iso latio n and iden titi-
cation of E scherichia coli fro m sw ine and in vitro a n­
tib a cteria l t e s t[J]. A g ric u ltu ra l Science Jo u rn al o f
Yanbian U n iv e rsity，2017,39(1)：55-60. (in C h in ese) [0]王宏栋.黑龙江地区猪源致病性大肠杆菌耐药性分析
及P M Q R基因检测[D].哈尔滨:东北农业大学，2016.
W A N G H D. A naly sis of d ru g resistan ce and d etec­
tio n of P M Q R gene in path ogenic E scherichia coli
iso lated fro m sw ines in H eilong jiang province [D].
H a rb in： N o rth e a st A g ric u ltu ra l U n iv e rsity , 2016. (in
C h$nese)
[1]关淼，赵凤菊，赵晓彤，等.辽宁猪源大肠埃希菌的
分离鉴定与药敏试验[J].动物医学进展，2017,
38(2) :132-136.
G U A N M，Z H A O F J，Z H A O X T，et l Id entifica­
王学君等：贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测1373 5期
tio n and d ru g sen sitiv ity te st of sw ine E scherichia coli
isolated in L ia o n in g[J]. P rogress in V eterina ry M ed i­
cine ,2017,38(2) ： 132-136. (in C h in ese)
)2]岳秀英，葛荣，吴晓岚，等.四川省猪、鸡源大肠杆菌对抗生素耐药性研究[J].中国兽医杂志，2017,
53(1)93-95.
Y U E X Y,G E R,W U X L，t al. A n tib io tic resistan ce
of E scherichia coli iso lated fro m sw ine and chicken in
S ichuan p ro v in c e[J]. Chinese Jo u rn al o f V eterinary
M edicine ,2017,53(1) ：93-95. (in C h in ese)
)3]郭潇木，杨铜，贺丹丹，等.广东地区猪源大肠杆菌耐药性及其系统发育群的研究）].中国畜牧兽医，
2014,41(1) $82-186.
G U O X M, Y A N G T，H E D D，et l S tu d y o f d r u g
resistan ce and p h ylo genetic g ro u p s of E scherichia coii
isolated fro m pigs in G uan g d o n g p ro v in c e[J]. China
A n im a l H usb an dry 0V eterina ry M e d ic in e，2014，
41(1) $82-186. (in C h in e s e)
)4]李海华，郭蔚冰，杨海明，等.内蒙古中东部地区不同来源大肠杆菌耐药性调查）].中国畜牧兽医，2017,
44(4) $182-1188.
L I H H，G U O W B，Y A N G H M，et l In v estig atio n
on an tib io tics resistan ce of E scherichia coii iso lated
fro m differen t so u rces in th e m iddle east reg io n of In­
ner M o n g o lia[J]. (Zhina A n im a l H usb an dry 0V eter­
in a ry M ledicine，2017,44(4) ；1182-1188. (in C h in ese) [5]何莹，于蔼玲，黄柳，等.猪源大肠杆菌耐药性的
检测与分析[J].黑龙江畜牧兽医，2015, $26-128.
H E Y , Y U A L , H U A N G L , et al. D etectio n and an al­
ysis of d ru g re sistan c e of E scherichia coii from
s w in e[J]. H eilo n g jia n g A n im a l Science a nd V eteri­
n a ry M e d ic in e，2015 ? 3：126-128. (in C h in ese)
[6]植婵萍，郭小婷，姚旭，等.有机农场鸡、猪源大肠杆
菌耐药性研究[J].中国畜牧兽医，2015，42(12)
3351-3357
Z H I C P，G U O X T，Y A O X，et l S tu d y o n d ru g
resistan ce of E scherichia coii iso lated fro m chicken
and sw ine in org an ic farm[ J ]. C hina A n im a l
H usb an dry0V e i n a r y M d i i n e，2015，42 ( 12 ) $
3351-3357. (in C h in ese)
[17]冯新，韩文瑜，雷连城.细菌对四环素类抗生素的耐
药机制研究进展[J].中国兽医杂志，2004，38(2)
38-42
F E N
G X ,
H A N W Y , L E
I L C. R esearch p ro g ress on
m echanism of re sistan c e of b acteria to tetracy clin e a n­
tibiotics [J].Chinese Jo u rn al o f V eterinary D r u g，
2004,38(2) ：38-42. (in C h in ese)
[18] N G U Y E N F , S T A R O S T A A L , A R E N Z S , et al. T e t­
racy cline an tib io tics and re sistan c e m echanism s [J].
B io lo gica l
C h e m istry，2014,395(5) ：559-575.
[19] S L O A N J，M C M U R R Y L M，L Y R A S D，et l T h e
C lo strid iu m p e rfrin g e n s T e t P d e te rm in an t com pri­
ses tw o o v erlap pin g genes ：te tA ( P ) , w hich m ediates
active tetracy clin e efflu x , and te tB(P) , w hich is re la t­
ed to th e rib o so m al p ro tectio n fam ily of tetracycline-
re sistan c e d e te rm in a n ts[J]. M olecular M ic ro b io lo g y，
1994,11(2) ：403-441.
[20]张济培，韦庆兰，谭华龙，等.广东地区水禽源大肠杆
菌对四环素的耐药性及耐药基因检测[J].畜牧与兽
医，2015，47(12)94-97.
Z H A N G J P , W E I Q L , T A N H L , et al. D etection of
tetracy clin e re sistan c e and antibiotic resistan ce genes
of E scherichia coii isolated fro m w aterfo w l in G u a n g-
do ng p ro v in c e[J]. A n im a l H usb an dry 0V eterinary
M e d ic in e，2015,47(12) ；9 4-97. (in C h in ese)
[21]牛建宁，崔恩慧，唐攀，等.鸡源致病性大肠杆菌对
四环素类抗生素耐药性及耐药基因检测[J].西北农
业学报，2014，23(11)35-39.
N IU J N , C U I E H , T A N G P , et al. T h e re sistan c e of
p ath ogenic E scherichia coii iso lates fro m chickens to
tetracy lin e an tib io tics and th e d etectio n of resitan ce
g e n e s[J]. A cta A g ricu ra e B oreali-occidentalis S in i-
c a，2014,23(11)：35-39. (in C hinese)
[22]张扬，陈丽鹏，吴华，等.鸡源大肠杆菌四环素耐
药基因检测[J].江西农业学报，2014，26(1) $4-96.
Z H A N G Y , C H E N L P , W U H , et al. D etection of
tetrac y c lin e-to leran t genes in E scherichia coii isolated
fro m c h ic k e n s[J]. A cta A g ric u ltu ra e J i a n g x i，2014，
26(1) ：94-96. (in C h in ese)
[23]李胜利，刘保光，杨东东，等.河南省鸭源大肠杆菌四
环素类及磺胺类耐药基因的分子检测[J].黑龙江畜
牧兽医，2016,11:174-176.
L I S L , L IU B G , Y A N G D D , et al. M o lecular d etec­
tio n of tetracy clin es and sulfon am id es resistan ce genes
in E scherichia coii iso lated fro m du cks in H en an
p ro v in c e[J]. H e ilo n g jia n g A n im a l Science a n d V et­
erin a ry M e d ic in e，2016,11：174-176. (in C h in ese) [24]刘建华.鸭源大肠杆菌主动外排基因及其调控基因的
表达水平与多重耐药机制[D].郑州：河南农业大学，
2011'
L IU J H. T h e ex p ressio n le v ll of active efflux system
related genes and m echanism of m u ltid ru g resistan ce
in E. coii iso lated fro m d u c k s[D]. Z h en g z h o u： H en an
A g ric u ltu ra l U n iv ersity , 2011. (in C h in ese)
(责任编辑董晓云）。