胶体金免疫层析法检测玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

准体系要定期不断改修补充充实。推动信息标准化 的另一头是抓实践。以业务的需求作为制订标准的 需 求 ，以 应 用 信 息 技 术 的 实 践 作 为 制 订 标 准 的 基 础 。 例 如 粮 食 物 流 业 务 中 ，需 要 使 用 粮 食 物 流 条 码 标 签 、 电子单证等。为此，先 在 一 定 范 围 内 试 点 使 用 电 子 单 证、条 码 标 签 开 展 业 务。 通 过 使 用，弄 清 这 些 单 证、条码在使用是 否 方 便，内 容 是 否 全 面，是 否 容 易 实现信息传送和 共 享。 进 而 通 过 总 结 提 高，再 制 订 标准。这样制订的标准就更加准确实用。选择信息 技 术 应 用 实 践 中 ，已 经 熟 悉 的 、涵 盖 的 内 容 比 较 单 一 的 技 术 ，制 订 标 准 ，这 些 标 准 积 累 多 了 就 有 条 件 制 订 内容更加广阔的大 标 准，同 时 也 可 以 提 高 标 准 的 使 用 价 值 ，推 动 粮 食 物 流 信 息 化 的 进 程 。
从表2可以看出只有粉碎细度达到20目以上的样品检测结果才和hplc法的检测结果相一致而未粉碎的糙米和较大颗粒的粉碎糙米均出现假阴性因此样品应粉碎至20目以不同粉碎程度样品检测结果样品样品中don样品细度编号含量gkg未粉碎过20目筛hplc法糙米粉碎糙米粉碎糙米3662阳阳阳21347阴阴阳31856阴阳阳212不同提取液的选择分别用甲醇乙腈和乙酸乙酯作为提取液对样品2以及样品3进行前处理试验结果表明乙酸乙酯和乙腈的提取检测效果好于甲醇相比之下乙腈的毒性明显要大于乙酸乙酯因此选择乙酸乙酯作为提取液
样品 编号
１ ２ ３ ４
样品中 ＤＯＮ 含 量 （μｇ／ｋｇ） －ＨＰＬＣ 法
３６６２
１３４７
１８５６
６２１
未粉碎 糙米 阳 阴 阴 阴
样品细度 粉碎糙米 过２０目筛
粉碎糙米
阳
阳
阴
阳
阳
阳
阴
阴
２．３ 准 确 性 取８份玉米样品，按照 ＨＰＬＣ 的 国 家 标 准 方 法
进行测定，与按照１．２．２ 前 处 理 方 法 进 行 处 理 的 检 测 数 据 进 行 比 较 ，结 果 见 表 ４。
标准品浓度 （μｇ／ｋｇ） Ｔ带
２００ ４００ ８００ １０００ １２００ １６００ ２０００ 红 红 微红 微红 微红 无 无
２ 结 果 与 讨 论
２．１ 前 处 理 条 件 的 优 化 ２．１．１ 不 同 粉 碎 程 度 的 选 择
从混匀的同一份样品中分别称取 ２．０ｇ未粉碎 的 糙 米 样 品 、存 在 较 大 颗 粒 的 粉 碎 糙 米 样 品 、粉 碎 过 ２０目筛的糙米样品，按照１．２．２．１ 和 １．２．２．２ 进 行 样品的提取和点样 分 析，对 ６ 份 不 同 玉 米 样 品 进 行 检测，同时用 ＨＰＬＣ 法进行比对，检测结果见表２。
表４ 胶体金法与 ＨＰＬＣ 法检测结果对比
样品编号
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８
胶体金法
Ｔ 带不显色，阳性 Ｔ 带显红色，阴性 Ｔ 带不显色，阳性 Ｔ 带不显色，阳性 Ｔ 带不显色，阳性 Ｔ 带不显色，阳性 Ｔ 带不显色，阳性 Ｔ 带显红色，１３４７ １６７９ １００５ １８５６ ６６２
结果是 否一致
是 是 是 是 是 是 是 是
３ 结 论
从以 上 试 验 结 果 可 以 看 出，胶 体 金 法 检 测 玉 米 中脱氧雪腐 镰 刀 菌 烯 醇 的 结 果 与 ＨＰＬＣ 国 标 法 的 结果完全一致，且 操 作 过 程 简 单，检 测 结 果 准 确、快 速 ，特 别 适 合 基 层 检 验 和 快 速 检 测 ，对 更 好 地 加 强 粮 食饲料的卫生监管具有重大的意义。
从 表 ２ 可 以 看 出 ，只 有 粉 碎 细 度 达 到 ２０ 目 以 上 的样品检测结果才和 ＨＰＬＣ 法的 检 测 结 果 相 一 致， 而未粉碎的糙米和较大颗粒的粉碎糙米均出现假阴 性 ，因 此 样 品 应 粉 碎 至 ２０ 目 以 及 更 细 。
表 ２ 不 同 粉 碎 程 度 样 品 检 测 结 果
为提取液。
２．１．３ 点 样 后 观 察 时 间 的 限 定 将阳 性 样 品 的 待 测 液 滴 加 到 试 卡 孔 中，并 开 始
计时，分 别 在 ３ ｍｉｎ、５ ｍｉｎ、１０ ｍｉｎ、１５ ｍｉｎ 判 读 结 果，结 果 显 示 在 第 ３ ｍｉｎ，Ｔ 带 刚 刚 出 现，但 并 不 显 著，在第５ｍｉｎ时 Ｔ 带红色线条明显，在第 １０ ｍｉｎ、 １５ｍｉｎ 判 读 结 果 时，Ｔ 带 红 色 逐 渐 减 弱，因 此 选 定 ５ｍｉｎ为最佳判读 时 间，随 着 时 间 的 延 长，判 读 结 果 就不准确了。
关键词 玉米 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 胶体金
脱氧雪腐镰刀菌烯 醇 ＤＯＮ 是 最 常 见 的 一 种 污 染 粮 食 、饲 料 和 食 品 的 霉 菌 毒 素 之 一 ，严 重 影 响 人 和 牲畜的健康。它主要是由链孢霉属真菌在缺乏营养 物 质 时 产 生 的 次 级 代 谢 产 物［１］，其 结 构 为 雪 腐 镰 刀 菌烯醇（ｎｉｖａｌｅｎｏｌ，ＮＩＶ）的 ４－ 脱 氧 衍 生 物，所 以 命 名为脱 氧 雪 腐 镰 刀 菌 烯 醇 （４－ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｎｏｌ， ＤＯＮ）［２］。 许 多 粮 谷 类 都 可 以 受 到 污 染 ，如 小 麦 、大 麦、燕麦和玉米等。ＤＯＮ 对粮谷类的污染状况与产 毒菌 株、温 度、湿 度、通 风 和 日 照 等 因 素 有 关。 这 种 真 菌 大 多 在 低 温 、潮 湿 和 收 割 季 节 ，在 谷 物 中 慢 慢 生 长，一 般 在 大 麦、小 麦、玉 米、燕 麦 中 含 有 较 高 的 浓 度 ，在 黑 麦 、高 粱 、大 米 中 的 浓 度 较 低 ，对 人 和 动 物 可 以产生广泛 的 毒 性 效 应 。 ［１］ 近 年 研 究 发 现，脱 氧 雪 腐镰刀菌烯醇对人和动物的免疫功能产生明显 的 影响。根据 ＤＯＮ 的剂量 和 暴 露 时 间 不 同 可 引 起 免 疫抑制或免 疫 刺 激 的 作 用。 目 前 我 国 谷 物 中 ＤＯＮ 的 最 高 值 不 得 超 过 １０００μｇ／ｋｇ［３］。
疫层析法是免疫层 析 法 的 一 种，由 于 其 使 用 的 方 便 快 捷 性 ，检 测 的 准 确 性 愈 来 愈 受 到 人 们 的 重 视 ；该 法 的原理是通过以胶 体 金 为 示 踪 物，滴 加 提 取 液 到 检 测孔中，抗原抗体反 应 生 成 不 同 深 浅 的 颜 色 来 判 定 样品中 ＤＯＮ 的 含 量。 胶 体 金 免 疫 层 析 法 操 作 简 单，检测速度快，很 适 合 现 场 检 测，得 到 了 愈 来 愈 多 的应用。
残 留 限 量 （ｐｐｂ） 稀 释 液 加 量 （ｍＬ）
２００ ２
５００ ５
７５０ １０００ ７．５ １０
１．２．２．２ 将未开 封 的 试 纸 卡 和 检 测 样 品 恢 复 至 室 温 ；再 将 试 纸 卡 水 平 放 置 ，用 滴 管 向 试 卡 孔 缓 慢 逐 滴 加 入 ３ 滴 不 含 气 泡 的 检 测 液 ，过 ５ ｍｉｎ 后 判 断 结 果 ， 不 能 超 过 １０ ｍｉｎ。 １．２．２．３ 结 果 判 断
当前国家标准中对 ＤＯＮ 的 检 测 方 法 主 要 有 酶 联免疫吸附 法 （ＥＬＩＳＡ 法）和 免 疫 亲 和 层 析 净 化 高 效液相色谱法（ＨＰＬＣ 法）。酶联免疫吸附法是最常 用的一种不需额外 净 化，一 次 性 检 测 大 量 样 品 的 方 法，这种 方 法 的 主 要 缺 点 是 由 于 存 在 所 用 抗 体 与 ＤＯＮ 的乙酰化类似物的交叉反应，致使其检出值偏 高，容易出现假阳性，难以控制 。 ［４］ 免疫亲和柱 净 化 处理的高效 液 相 色 谱 法 （ＨＰＬＣ）灵 敏 度 高，准 确 性 好，得到了广泛的 认 可，但 使 用 成 本 昂 贵，前 处 理 过 程较为繁琐，不 利 于 大 规 模 的 推 广 使 用。 胶 体 金 免
２．２ 最 低 检 出 限 将 ＤＯＮ 标 准 品 分 别 稀 释 成 浓 度 为 ２００，４００，
８００，１０００，１２００，１６００和 ２０００μｇ／ｋｇ并 滴 加 到 试 卡 孔中，结果见表３。从结果可以 判 定，该 测 试 卡 的 最 低 检 出 限 为 １０００μｇ／ｋｇ。
表 ３ 不 同 稀 释 浓 度 的 最 低 检 出 限
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仓储物流
发展粮食物流信息化之我见
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共用共享的前提是标准化。由于粮食物流行业的信 息技术应用较少，制 订 相 关 标 准 的 条 件 不 成 熟。 在 推 进 粮 食 物 流 信 息 标 准 化 的 过 程 ，常 遇 到 “先 有 鸡 还 是先有蛋”的困 惑。 为 此 建 议 推 进 粮 食 物 流 信 息 标 准 化 采 取 抓 两 头 带 动 中 间 的 做 法 。 “两 头 ”其 中 之 一 是制订粮食物流信息标准体系。从粮食物流全局和 发展趋势，提出标 准 体 系 的 构 成 和 需 要 制 订 的 标 准 细目，明确各标准的 编 制 内 容 和 各 标 准 间 的 逻 辑 关 系，以便在某些粮食 物 流 信 息 技 术 有 一 定 的 应 用 实 践 时 ，及 时 进 入 对 应 标 准 的 制 订 程 序 ，发 挥 标 准 的 统 一实践指导实践 的 作 用。 制 订 标 准 体 系，也 必 须 有 一定的实践，好 在 国 内 外 信 息 技 术 发 展 很 快，有 许 多可以借鉴、参 考 的 资 料。 由 于 信 息 技 术 是 一 个 处 于 快 速 发 展 中 的 新 技 术 ，新 的 技 术 内 涵 不 断 涌 现 ，因 此粮食物流信息标 准 体 系，应 该 是 开 放 的 动 态 的 体 系 ，随 着 信 息 技 术 的 发 展 和 粮 食 物 流 实 践 的 丰 富 ，标
＊ 收 稿 日 期 ：２０１２－０４－２４ 通 讯 地 址 ：武 汉 市 江 汉 区 江 汉 一 路 ７－９ 号
粮油检测与加工
胶体金免疫层析法检测玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究
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至 室 温 后 按 照 表 １ 准 确 加 入 稀 释 液 ，即 为 检 测 液 。
表 １ 稀 释 液 对 照 表
参照国家 标 准 《ＧＢ／Ｔ ２３５０３－２００９ 食 品 中 脱 氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 免疫亲和层析净化高效 液 相 色 谱 法 》［５］。 １．２．２ 胶 体 金 免 疫 层 析 法 １．２．２．１ 称 取 具 有 代 表 性 的 ５０ｇ～１００ｇ 以 上 谷 物样品，粉碎，过２０目筛，混匀后称取 ２．０ｇ试 样加 入到１５ｍＬ 离心管中。再分别加入４．０ｍＬ 乙酸乙 酯和去离子水，盖紧 盖 子 后 放 置 于 振 荡 器 充 分 振 荡 ５ ｍｉｎ，放 置 于 离 心 机 中４０００ｒｐｍ，１ ｍｉｎ。 待 液 体 分 层，用刻度管量取２．０ ｍＬ 上 层 清 液 于 ８０ ｍＬ 玻 璃 烧 杯 中 ，用 电 吹 风 加 热 ，将 上 清 液 吹 干 。 待 烧 杯 冷 却
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粮 油 仓 储 科 技 通 讯 ２０１２（４）
粮油检测与加工
胶体金免疫层析法检测 玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究＊
刘 波 江晓娣 黄慧艳 （武 汉 市 粮 油 食 品 中 心 检 验 站 ４３００２１）
摘 要 采用乙酸乙酯提取法对玉米样品前 处 理，然 后 用 胶 体 金 免 疫 层 析 法 检 测 其 中 脱 氧雪腐镰刀菌烯醇的含量。该法 简 便 快 捷，与 ＨＰＬＣ 国 家 标 准 法 相 比 检 测 结 果 一 致，因 此 采 用此法可加强粮食的卫生监管。
１ 材 料 与 方 法
１．１ 仪 器 与 试 剂 Ｗａｔｅｒｓ ２６９５高 效 液 相 色 谱 系 统，胶 体 金 检 测
试 剂 盒 （最 低 检 出 限 为 １０００μｇ／ｋｇ），高 速 离 心 机 。 ＤＯＮ 标准品（液 体），乙 酸 乙 酯 （分 析 纯），甲 醇
（分 析 纯 ），乙 腈 （分 析 纯 ），蒸 馏 水 。 １．２ 方 法 １．２．１ 高 效 液 相 色 谱 法
２．１．２ 不 同 提 取 液 的 选 择 分别 用 甲 醇、乙 腈 和 乙 酸 乙 酯 作 为 提 取 液 对 样
品２以及样品３进 行 前 处 理，试 验 结 果 表 明 乙 酸 乙 酯 和 乙 腈 的 提 取 检 测 效 果 好 于 甲 醇 ，相 比 之 下 ，乙 腈
的毒性明显要大于 乙 酸 乙 酯，因 此 选 择 乙 酸 乙 酯 作
阴性：Ｃ 线 显 色，Ｔ 线 肉 眼 可 见，无 论 颜 色 深 浅 均判为阴性。
阳性：Ｃ 线显色，Ｔ 线 不 显 色，或 者 Ｔ 线 隐 隐 约 约 ，判 为 阳 性 。
无效：Ｃ 线不显色，无 论 Ｔ 线 是 否 显 色，该 试 纸 均判为无效。
检 测 卡 的 显 色 效 果 见 图 １。
图 １ 检 测 卡 的 显 色 图