氯雷他定口崩片的人体生物等效性研究

氯雷他定口崩片的人体生物等效性研究
官清;廉江平;扈本荃;张鹏;李小川
【摘要】目的建立测定人血浆中氯雷他定的高效液相色谱法(HPLC),研究氯雷他
定口崩片在男性健康志愿者体内的药动学行为,评价其人体相对生物利用度和生物等效性.方法 18例健康男性志愿者随机分组自身交叉对照实验设计,单剂量口服氯雷他定口崩片受试制剂和参比制剂20 mg,HPLC法测定服药后12 h内不同时间血浆中氯雷他定的质量浓度,BAPP药动学程序计算相对生物利用度并评价2种制剂的生物等效性.结果受试制剂和参比制剂的主要药动学参数:tmax分别为
(0.90±0.30)和(0.80±0.10) h;Cmax为(42.57±7.88)和(42.96±6.97) ng·mL-
1;t1/2分别为(2.20±0.35)和(2.07±0.50) h;药时曲线下面积AUC(0→12 h)分别为(126.00±23.30)和(123.24±30.55) ng·h·mL-1.受试制剂的相对生物利用度为104.6%±14.7%.结论建立的分析方法准确灵敏,统计学分析表明2种制剂生物等效.%Objective To establish an HPLC method for determining loratadine in human plasma,and to investigate the pharmacoki-netics and bioequivalence of Loratadine Orally Disintegrating Tablets in healthy volunteers. Methods 18 male healthy volunteers were randomized to take a single crossover oral dose of test tablets or reference tablets 20 mg. The concentration of loratadine in plasma was determined by HPLC. Results The loratadine main pharmacokinetic parameters of test tablets and reference tablets were as follows:tmax : (0. 90± 0. 30) and (0. 80 ± 0. 10) h;Cmax: (42. 57 ± 7. 88) and ((42. 96 ± 6. 97) ng o mL-1 ;t1/2 : (2. 20± 0. 35) and (2. 07 ± 0. 50) h,AUC(0→12h) : (126. 00 ± 23. 30) and (123. 24 ± 30. 55) ng o h o mL-1 ;F was 104. 6% ±14. 7%. Conclusion The established me thod
is sensitive and accurate. The test tablets are bioequivalent to the reference tablets.
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2012(027)005
【总页数】4页(P461-464)
【关键词】氯雷他定口崩片;高效液相色谱法;生物等效性
【作者】官清;廉江平;扈本荃;张鹏;李小川
【作者单位】陕西省妇幼保健院药械科,西安,710003;陕西省人民医院药剂科,西安,710068;西安医学院药学院,西安,710021;陕西省人民医院药剂科,西安,710068;陕西省人民医院药剂科,西安,710068
【正文语种】中文
【中图分类】R945
氯雷他定为长效三环类抗组胺药，可通过选择性地拮抗外周H1受体，缓解季节性变应性鼻炎的鼻部或非鼻部症状，本品目前在临床上已广泛使用［1］。

口崩片具有在口腔内能迅速崩解或溶解等优点，对吞咽困难和用药自主性差的儿童和老年患者是一种理想的口服给药剂型。

本实验用HPLC法测定血浆中氯雷他定的质量浓度，观察健康志愿者口服氯雷他定口崩片的血药质量浓度的经时过程，计算相应的药动学参数，并以市售氯雷他定口崩片为参比制剂，进行相对生物利用度和生物等效性评价，为临床用药提供参考依据。

1 仪器与试药
1.1 仪器液相色谱：P680泵；UVD170U检测器；ASI－100自动进样器；CHROMELEON（6.80）色谱工作站（德国DIONEX公司）。

XK96－A快速混匀机（姜堰医疗器械厂）；TDL80－2B高速离心机（姜堰医疗器械厂）。

1.2 试药氯雷他定口崩片，每片含氯雷他定10 mg（西安太极药业有限公司）；
参比制剂：氯雷他定口崩片，每片含氯雷他定10mg（河南天方药业股份有限公司）；氯雷他定对照品（质量分数99.4%，批号20040301，西安新通药物研究
有限公司）；地西泮（内标物，质量分数99.1%，批号171225－200302，中国
食品药品检定研究院）；甲醇（色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司）；乙腈（色谱纯，TEDIA公司），正己烷（色谱纯，TEDIA公司）；乙醚、磷酸二氢钾、磷酸、氢氧化钠、盐酸均为分析纯，蒸馏水为双蒸水。

空白人血浆由西安市中心血站提供。

2 实验方法
2.1 受试者选择 18名受试者均为健康男性，年龄为20～30岁，身高为165～
177cm，体质量在标准体质量的±10%之内，无既往病史和药物过敏史，精神状
态良好，不吸烟，不嗜酒，实验前2周及实验期间未服用其他任何药物。

受试者
于实验前签署知情同意书。

在医院接受全面的体格检查，对肝、肾功能进行化验测定，并进行心电图检查，结果均属正常。

所有受试者均签署知情同意书，并经伦理委员会审批同意。

2.2 实验设计本实验采用双周期交叉、随机、自身前后对照实验设计。

18名受试
者随机分成A组和B组。

第1次实验A组服受试制剂，B组服参比制剂；第2次实验A组服参比制剂，B组服受试制剂，每次服药均用220mL温开水服下。

2次实验间隔1周。

受试者禁食10h后，于实验当日清晨空腹单次服用20mg受试制剂或参比制剂，温开水服下，在服药后4和10h进食统一的标准餐。

服药后受试者在室内休息，
采血期间禁烟酒、含咖啡因类和果汁类饮料，避免剧烈运动。

于口服给药前（0h）和服药后0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，2.5，3，4，5，6，8和12h由前臂静
脉取血4mL，立即移入经肝素处理的离心试管中，离心（3 000r·min－1）10min，分离血浆，于－20℃冰箱中保存待测。

2.3 血浆样品的处理精密吸取血浆样品1mL置于10 mL具塞离心管中，精密加入内标溶液（0.1μg·mL－1）100μL，1mol·L－1氢氧化钠溶液0.1mL，涡旋10 s，混匀后加入乙醚－正己烷（1∶1）3mL，涡旋振荡提取2min，于3 500r·min－1离心10min，移取上层有机溶液2.8mL于尖底离心管中，水层用乙醚－正己烷（1∶1）3mL同上再提取1次，合并有机层；然后加入1mol·L－1盐酸3mL，涡旋混合1min，离心，取水层2.8mL，加入10mol·L－1氢氧化钠溶液0.5 mL，
混匀，再加入乙醚－正己烷（1∶1）3mL，涡旋振荡提取2min，离心10min，取上清液2.8mL，在40℃水浴中氮气流挥干，残渣加入50μL流动相溶解，以12 000r·min－1高速离心10min，取20μL进样。

测定待测物及内标的峰面积，内
标法定量。

2.4 色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱（200mm×4.6mm，5μm），伯瑞（中国）色谱中心；流动相：乙腈－水－0.5mol·L－1磷酸氢二钾－磷酸
（52∶43∶5∶0.1）；流速：1.0mL·min －1；紫外检测波长：275nm；柱温：
室温。

2.5 数据处理将各受试者服药后各时间点血浆中氯雷他定的质量浓度数据输入计
算机，用药代动力学软件BAPP2.0进行等效性分析，采用梯形法计算
AUC0→12h值和AUC0→∞值，以半对数作图法，由消除相末端的质量浓度点计算Ke和t1/2，tmax和Cmax采用实测值，按下式计算氯雷他定的相对生物利用度（F）：
3 实验结果
3.1 方法专属性取空白血浆1mL，按2.3项下方法操作，进样20μL，记录色谱图（见图1），结果氯雷他定对照品的保留时间约为7min，色谱峰处无其他相应的峰出现。

3.2 标准曲线的制备取空白血浆1.0mL，加氯雷他定标准系列溶液50μL，配制相当于质量浓度约为100，50，20，10，5，2，1和0.5ng·mL－1的血浆系列标准溶液，按2.3项下依法操作，进样20μL，记录色谱图。

以待测物峰面积与内标峰面积的比值为横坐标，待测物质量浓度为纵坐标绘制标准曲线，进行回归运算，求得标准曲线方程为：Y＝9.967 5X－0.037 3（r＝0.999 9）。

氯雷他定血浆质量浓度测定方法的线性范围为0.50～100.0ng ·mL－1，定量下限（LLOQ）为
0.5ng·mL－1，S/N≥10。

图1 氯雷他定的高效液相色谱图A.空白血浆；B.空白血浆加氯雷他定对照品；C.给药后1h血浆样品；1.内标；2.氯雷他定Fig.1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.plasma standard；C.sample－after 1hadministration；1.internal standard；2.loratadine
3.3 回收率实验取空白血浆1.0mL，按3.2项下方法配制氯雷他定低、中、高3个质量浓度（分别为1，10，50ng·mL－1）的质量控制样品（n＝5），低、中、高（1，10，50ng·mL－1）3个质量浓度的血浆样品回收率分别为
103.2%±10.82%，99.06%±6.53%和97.73%±2.90%。

3.4 精密度实验取空白血浆1.0mL，按3.2项下方法配制氯雷他定低、中、高3个质量浓度（分别约为1，10和50ng·mL－1）的质量控制样品（n＝5），连续测定5d，并与标准曲线同时进行，计算样品的测得质量浓度，与配制质量浓度对照，求得本法的精密度，日内RSD分别为10.2%，
4.1%和3.35%；日间 RSD分别为7.82%，
5.67%，2.69%。

3.5 稳定性实验按3.3项下的方法，配制氯雷他定低、中、高3个质量浓度（分
别为1，10和50ng·mL－1）的质量控制样品（n＝5），本实验重点考察氯雷他
定血浆样品在－20℃冷冻、反复冻融及处理后样品室温条件下的稳定性。

结果表明：氯雷他定血浆样品在反复冻融3次和－20℃冻存60d保持稳定，处理后的氯雷他定血浆样品在室温条件下放置24h稳定，数据见表1。

表1 样品稳定性实验（n＝5）Tab.1 The sample stability test（n＝5）质量浓度/ng·mL－1 室温±s RSD/% 冻融±s RSD/%冷冻±s RSD/%50 49.78±1.34 3.35 48.99±2.18 3.89 49.32±2.24 5.58 10 10.06±0.57 4.10 9.77±0.82 4.20
10.17±0.38 7.36 1 1.02±0.08 7.67 1.04±0.62 8.97 1.01±0.71 9.60
3.6 人体生物利用度
3.6.1 数据质量保证受试者血浆样品测定按2.3项下操作，同一受试者2周期血浆样品在同一天内测定，并以当日的标准曲线计算各时间点样品中氯雷他定的质量浓度，由质量控制样品决定当日数据的取舍。

对质量浓度高于定量上限
（100.0ng·mL－1）的样品，经空白血浆稀释后重新测定。

对质量浓度低于定量
下限（0.5ng·mL－1）的样品，质量浓度记为0。

3.6.2 血药质量浓度及药动学参数 18名健康受试者分别口服单剂量实验制剂与参
比制剂后的血药质量浓度－时间曲线见图2。

各时间点血浆中氯雷他定的质量浓度数据输入计算机，用药代动力学软件BAPP2.0进行等效性分析，所得参数列于表2。

图2 18名健康受试者口服氯雷他定受试制剂和参比制剂20 mg后氯雷他定的平
均血浆质量浓度－时间曲线Fig.2 Mean concentration－time curve after a single dose of 20 mg tested and reference formulations administrated to
18 healthy volunteers
表2 18名受试者口服氯雷他定口崩片20mg后氯雷他定的药动学参数s，n＝18）
Tab.2 The pharmacokinetic parameters in Chinese healthy volunteers after a single dose of 20mg tested and reference formulations参数受试制剂参比制剂t1/2/h 2.20±0.35 2.07±0.50 Cmax/ng·mL－1 42.57±7.88 42.96±6.97 tmax/h 0.90±0.30 0.80±0.10 AUC0－12h/ng·h·mL－1 126.00±23.30 123.24±30.55 AUC0－∞/ng·h·mL－1129.13±23.30 126.61±31.66
3.6.3 生物等效性评价 18名健康男性受试者口服含氯雷他定口崩片20mg的受试制剂和参比制剂后，以 AUC（0→12h）计算，氯雷他定口崩片的相对生物利用度平均为10
4.6%±14.7%。

将所得的AUC（0→12h）和Cmax经对数转换后进行方差分析，并进一步采用双单侧t检验和（1－2α）置信区间法进行生物等效性评价。

结果表明：两种制剂的Cmax和AUC（0－12h）拒绝生物不等效假设。

而tmax非参数检验结果（Wilcoxon符号秩检验）P＞0.05，受试制剂与参比制剂差异无统计学意义。

受试制剂AUC（0－12h）的90%置信区间为参比制剂相应参数的97.97%～109.72%，可认为2种制剂具有生物等效性。

4 讨论
本实验在查阅文献的基础上［2－3］，建立以乙醚－正己烷（1∶1）做提取溶剂进行3次提取的反相高效液相色谱检测方法。

该方法具有操作简便、干扰小、测定速度快、试剂便宜等优点，便于推广使用。

低、高、中3个质量浓度（分别约为1，10和50ng·mL－1）样品的方法回收率分别103.2%±10.82%，
99.06%±6.53%和97.73%±2.90%。

日内、日间精密度RSD均小于15%，符合生物等效性指导原则关于生物样品分析方法的基本要求［4－6］，血药质量浓度测定结果可靠。

口崩片可在无水的条件下（或仅有少量水存在）于口腔中快速崩解，随吞咽动作入消化道，在口腔内无黏膜吸收，体内行为与普通片剂一致。

实验中18名健康受试者服用受试制剂和参比制剂，根据氯雷他定口崩片使用说明书对用法用量的规定，
本研究给药途径为口服，选用临床常用量20mg/次。

结果表明，受试氯雷他定口崩片各药动学参数与参比制剂差异无统计学意义。

受试制剂 AUC（0－12h）的90%置信区间为参比制剂相应参数的81.49%～111.10%，可认为2种制剂具有生物等效性。

【相关文献】
［1］巴英竹.复方甘草酸苷联合氯雷他定治疗慢性荨麻疹的临床观察［J］西北药学杂志，2009，24（3）：213－214.
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［3］Pawel C K.Kunicki.Determination of loratadine in human plasma by high－performance liquid chromatographic method with ultraviolet detection ［J］.J Chromatogr B，2001，755：331－335.
［4］Isam Ismail Salem，Jafer Idrees，Jaafar I，et al.Determination of loratadine in human plasma by liquid chromatography electrospray ionization ion－trap tandem mass spectrometry［J］.J Pharm ＆ Biomed Anal，2004，34：141－151.
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