北京市房山区房山中学高三生物 实验导纲(含实验测试)人教版

光学显微镜操作技术
一、显微镜的使用
（一）取镜和安放
1．取镜：手握住镜臂，手
托住镜座，轻拿轻放。

2．安放：把显微镜放在实验台上，
略偏左（显微镜放在距实验台边缘7
厘米左右处）。

安装好和。

（二）对光
1．转动，使倍物镜对准
(物镜的前端与载物台要保持2厘米
的距离)。

2．调整，把一个的光
圈对准通光孔。

眼注视目镜内
(右眼睁开，便于以后同时画图)。

转
动，使光线通过通光孔反射到
镜筒内。

通过目镜，可以看到白亮的
视野。

（三）用低倍镜观察
1．把所要观察的玻片标本放在载物
台上，用压片夹压住，标本要正对通
光孔的中心。

2．转动准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜（眼睛看着物镜，以免）。

3．左眼向目镜内看，同时方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到为止。

再略微转动准焦螺旋，使看到的物像更加。

（四）用高倍镜观察
1、在低倍镜下把标本中需要放大的部分移到。

2、转动转换器，使倍物镜对准通光孔。

3、左眼向目镜内看，再稍微转动准焦螺旋，看清物像。

（五）显微镜的收存
1、实验完毕，把显微镜的外表擦拭干净。

2、转动转换器，，并把镜筒缓缓下降到最低处。

3、最后把显微镜放进镜箱里，送回原处。

二、制作临时装片的方法步骤
擦：擦拭片和片
滴：用滴管在载玻片中央滴一滴(适量)
取：用镊子撕取适量材料放在水滴中，用镊子将其
盖：盖上盖玻片，一般盖下来
放：将制成的装片放在显微镜载物台上
观：调焦观察
三、低倍镜和高倍镜的主要差异（见下表）
比较项目目镜镜头
长度物镜镜
头长度
物象大小视野大小观察细胞
数目多少
视野亮度物象清晰度
高倍镜短长大小少暗模糊
低倍镜长短小大多亮清晰
四、放大倍数计算：
物镜的放大倍数×目镱的放大倍数。

放大倍数指的是物体的长或宽。

放大倍数的判断方法：
目镜：镜头长放大倍数小，镜头短放大倍数大。

物镜：镜头长放大倍数大，镜头短放大倍数小。

物镜与装片之间的距离：距离近放大倍数大，距离远放大倍数小。

基础练习1
1、下图是光学显微镜的一组镜头，目镜标有5×和15×字样，物镜标有10×和40×字样。

请看图回答：
a)观察洋葱根尖细胞有丝分裂中期的染色体数目和形态时，显微镜的目镜、物镜组合
为（用标号答）？此时视野中染色体数目和显微镜放大倍数分别为多少？
b)在观察中，③与④的显微视野哪个明亮？选用哪组观察细胞数目多？
c)若在低倍镜视野中发现有一异物，当移动装片时，异物不动，转换高倍镜后，异物
仍可观察到，则此异物可能存在于( )
A.物镜上
B.目镜上
C.实验材料中
D.反光镜上
2、显微镜的一个目镜分别与4个不同倍数的物镜组合来观察血细胞涂片。

当成像清晰时，每一物镜与载玻片的距离如下图所示，如果载玻片位置不变，用哪一物镜在一个视野中看到的细胞最多（）
3、显微镜目镜为10×，物镜为10×，视野中被相连的64个分生组织细胞所充满。

若物镜转换为40×后，则在视野中可检测到的分生组织细胞数为
A．2个 B．4个 C．8个 D．16个
4、观察细胞中染色体行为并计数时，使用光学显微镜的正确方法是
A、低倍镜对焦，将观察目标移至视野中央，转用高倍镜并增加进光量，调焦观察
B、低倍镜对焦，将观察目标移至视野中央，转用高倍镜并减少进光量，调焦观察
C、低倍镜对焦，转用高倍镜，将观察目标移至视野中央，减少进光量，调焦观察
D、高倍镜对焦，将观察目标移至视野中央，增加进光量，调焦观察
5．若利用小麦的根毛细胞进行质壁分离实验，由于观察的细胞无色透明，为了取得更好的观察效果，调节显微镜的措施是：_____________________________。

观察实验
一、观察植物细胞的有丝分裂
实验原理1.染色体易被染成深色；
2.有丝分裂常见于；
3.有丝分裂各期变化可用观察到。

实验材料洋葱
药品用具体积分数95%酒精、质量分数15%盐酸，0.01g/ml龙胆紫或醋酸洋红，显微镜
实验现象在视野中可找到分别处于分裂间期、前、中、后、末期的细胞，其中期细胞数量最多。

实验步骤①解离——使用处理3-5min，目的。

②漂洗——使用处理10 min，目的。

③染色——使用，目的。

④制片——用镊子尖把洋葱根尖弄碎，盖上盖玻片。

⑤观察
实验原理用倍显微镜可观察到存在于细胞质基质中的高等植物的叶绿体，用叶绿体的运动作标志，观察活细胞。

实验材料叶片、新鲜（叶片要）
实验用具光学显微镜
实验现象主要分布在液泡周围的叶绿体，随细胞质流动而运动。

实验步骤制作装片→用显微镜观察细胞质流动方向和流动速度。

三、观察植物细胞的质壁分离与复原
实验原理1、作用；
2、外界溶液浓度＞细胞液浓度--细胞，和都出现一定程度的收缩，的伸缩性大，当细胞不断失水，逐渐发生。

3、外界溶液浓度＜细胞液浓度--细胞，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，逐渐发生。

实验材料
实验药品
或用具
的溶液、清水、光学显微镜
实验现象质壁分离：液泡体积变，颜色变；
质壁分离的复原：液泡体积变，颜色变。

实验步骤制作临时装片→盖玻片一侧滴加蔗糖溶液（另一侧用吸引）→观察质壁分离→盖玻片一侧滴加清水（另一侧用吸引）→观察质壁分离的复原
注意事项：
1.选材：选取紫色洋葱鳞片叶外表皮。

其细胞液为紫色，在显微镜下与无色透明的细胞壁容易区分，观察到的质壁分离和复原效果明显。

另外，取新鲜水绵、黑藻叶、南瓜表皮也可以做这个实验。

2.试剂：选用0.3g/ml 蔗糖糖溶液。

浓度过高，细胞质壁分离速度虽然很快，但不久就会将细胞杀死，细胞不能进行质壁分离复原；若浓度过低，则不能引起细胞质壁分离或速度太慢。

另外，5%的硝酸钾溶液在引起质壁分离后可自动复原。

3.时间的控制：做好质壁分离的实验后，不久就要做质壁分离复原实验。

避免使质壁分离
的细胞长时间处于较高浓度的外界溶液中，细胞过度失水而导致死亡。

从而观察不到质壁分离复原的现象。

4．应用：（1）可以用于测定细胞液的浓度（2）可以用于判断细胞的死活
5.注意问题：
（1）细胞发生质壁分离后，细胞壁与细胞膜之间的空隙充满的是0.3mg/mL蔗糖溶液。

（2）动物细胞能发生渗透作用但不会发生质壁分离。

基础练习2
1、取生长健壮的小麦根尖，经过解离、漂洗、染色、制片过程，制成临时装片，放在显微镜
下观察。

欲观察到细胞有丝分裂的前、中、后、末几个时期
A．应该选一个处于间期的细胞，持续观察它从间期到末期的全过程
B．如果在低倍镜下看不到细胞，可改用高倍物镜继续观察
C．如果在一个视野中不能看全各个时期，可移动装片从周围细胞中寻找
D．如果视野过暗，可以转动细准焦螺旋增加视野的亮度
2．（06海淀期末）显微镜是生物学实验常用的观察工具，下列相关实验操作中不正确的是
A. 设法提高细胞环境温度，有利于在显微镜下观察到植物细胞质的流动
B. 在观察植物细胞质壁分离和复原的实验中，更换细胞环境溶液应在载物台上操作
C. 若在低倍镜观察的基础上转换高倍物镜需先升高镜筒，以免镜头碰坏装片
D. 当观察角度与赤道板相垂直时，才能看清有丝分裂中期细胞的染色体
3. (07广东)．用洋葱鳞片叶表皮制备“观察细胞质壁分离实验”的临时装片，观察细胞的变化。

下列有关实验操作和结果的叙述，正确的是
A．将装片在酒精灯上加热后，再观察细胞质壁分离现象
B．在盖玻片一侧滴入清水，细胞吸水膨胀但不会破裂
C．用不同浓度的硝酸钾溶液处理细胞后，均能观察到质壁分离复原现象
D．当质壁分离不能复原时，细胞仍具正常生理功能
4（07山东）．用高倍显微镜观察洋葱根尖细胞的有丝分裂。

下列描述正确的是：
A．处于分裂间期和中期的细胞数目大致相等
B．视野中不同细胞的染色体数目可能不相等
C．观察处于分裂中期的细胞，可清晰看到赤道板和染色体
D．细胞是独立分裂的，因此可选一个细胞持续观察它的整个分裂过程
5．（08东城）下列判断细胞死活的方法中正确的是
A．在高倍镜下观察，若发现细胞质流动缓慢，则表明此时细胞是死细胞
B．将植物细胞置于不同浓度的蔗糖溶液中，能发生质壁分离和复原的是活细胞
C．洋葱根尖经解离后若发现细胞被龙胆紫溶液染上了色，则表明此时根尖细胞仍为活细胞D．将某细菌与水绵一起制成临时装片，用极细的光束照射水绵，若发现细菌没有趋向水绵照光部位，则说明细菌细胞为死细胞
6．（2012山东卷）某小组进行观察洋葱根尖分生组织细胞有丝分裂的实验，下列关于该实验的叙述正确的是
A．盐酸和酒精混合液主要起固定作用
B．碱性染料吡罗红（派洛宁）可用于染色体染色
C．观察到分裂末期细胞内细胞板向四周扩展形成新的细胞壁
D．细胞内染色体的存在状态可作为判断有丝分裂各时期的依据
7．（2012江苏卷）下列关于“观察洋葱根尖分生组织细胞有丝分裂”的叙述，错误
．．的是A．解离和压片都有利于根尖分生区细胞分散
B．先用低倍镜找到分生区细胞，再换用高倍镜观察
C．显微镜下绝大多数细胞中能观察到染色体
D．探究有丝分裂日周期性可为实验取材时机提供依据
8.（2005年全国大联考模拟八）在进行"观察植物细胞的有丝分裂"实验中，甲～戊五位同学在剪取洋葱根尖后立即进行的操作步骤如下：
学生
操作步骤
解离漂洗染色制片观察
甲- + + + +
乙+ - + + +
丙+ + - + +
丁+ + + + +
戊+ + + + + 请回答：
(1)甲观察到的实验结果是____，乙观察到的实验结果是_____，丙观察到的实验结果是_
A.染色体未着上颜色，无法看清
B.细胞重叠，看不到染色体
C.染色体着上颜色，清晰可见
D.染色体着色很浅，模糊不清
(2)丁同学在进行上述操作后，直接在高倍镜下观察，长时间未找到有丝分裂的细胞，正确操
作是__________。

(3)戊同学观察到了许多呈长方形的细胞，但未找到有丝分裂各时期的图象，可能的原因是___
___ ___。

(4)经教师纠正后，丁同学在视野中找到了有关细胞有丝分裂图象，但丁同学所看到的细胞图
象位于视野的右上方，你认为他应如何正确移动装片？________________。

(5)戊同学经教师指点后，也找到了细胞分裂图象，他欲观察洋葱根尖有丝分裂中期的染色体
数目和形态，应选用如图的目镜和物镜的组合是________和__________。

(6)对"观察植物细胞的有丝分裂"的叙述中，正确的一组是___________________ ①实验中使用的盐酸的质量分数为15% ②使用的酒精的体积分数为95% ③使用的龙胆紫染液的质量浓度为0.01 g/mL ④解离液的两种液体的配制比例为1∶1 ⑤解离的时间为10～15 min ⑥漂洗的时间为10 min ⑦染色的时间为3～5 min
生物体内物质的分离鉴定技术
实验原理某些化学试剂能使生物组织中的有关有机物产生特定的。

鉴定成分还原糖脂肪蛋白质
实验材料苹果、梨（含糖量较高、白
色或近于白色的植物组织）
花生种子豆浆或蛋清
实验药品斐林试剂/
班氏试剂
苏丹Ⅲ染液/
苏丹Ⅳ染液
双缩脲试剂
实验现象 / 反应
实验步骤
制备生物组织样液
↓
斐林试剂2ml
↓
(条件)
↓
观察
徒手切片
↓
苏丹Ⅲ染色2-3min
↓
去浮色，滴1-2滴
蒸馏水
↓
制作临时装片
↓
观察
制备样液
↓
双缩脲试剂A2ml
↓
双缩脲试剂B3-4滴
↓
振荡
↓
观察
浓度使用原理使用方法
双缩脲试剂0．１g/mlNaOH
0．０１g/mlCuSO4
碱性环境中的Cu2+
斐林试剂０．１g/mlNaOH
0．０５g/mlCuSO4
新配制的Cu(OH)2
实验原理1．NaCl溶液浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最低，可使DNA析出；
2.DNA不溶于酒精，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精，可提取出DNA；
3.DNA的反应。

实验材料血细胞液
实验药品0.1g/ml的柠檬酸钠（制备鸡血细胞使用抗凝血剂），蒸馏水，2mol/L的NaCl，0.015 mol/L的NaCl，95%的酒精，二苯胺。

实验步骤1.提取鸡血细胞的细胞核物质——取血细胞液5-10ml，加① 20ml，
玻璃棒沿一个方向搅拌，原理是，⑴纱布过滤，中含DNA和其他核物质，如蛋白质。

2.溶解细胞核内的DNA——用40ml㈠的NaCl溶液。

3.析出含DNA的黏稠物——向上述溶液中缓缓加入②，并轻轻地沿一
个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于被稀释到）。

4.滤取含DNA的⑵。

5.再溶解——用20ml㈡的NaCl溶液。

6.过滤含DNA的NaCl溶液⑶——获得含DNA的。

7.提取含杂质较少的DNA——将上述溶液加冷却的，缓缓搅拌，出
现白色乳状丝状物，用玻璃棒将丝状物卷起。

8.DNA的鉴定——㈢ NaCl溶液5ml，条件是，用4ml 鉴定。

（空白对照组）
实验步骤：
①制备鸡血细胞液
注意：柠檬酸钠防止凝血
②提取鸡血细胞的细胞核物质
注意：
1）加蒸馏水，血细胞吸水涨破，利于提取核物质；
2）玻璃棒快速搅拌，加速血细胞的破裂。

③溶解细胞核内的DNA和析出含DNA的粘稠物
注意：
1）玻璃棒搅拌，加速DNA溶解。

2）加蒸馏水使氯化钠浓度由2M降至0.14M,利于DNA析出
3）玻璃棒搅拌利于DNA析出
④滤取含DNA的粘稠物
用放有多层纱布的漏斗过滤含DNA粘稠物的溶液至500mL烧杯中,含DNA的粘稠物被留在纱布上.
⑤再溶解DNA的粘稠物,过滤获得含有DNA的氯化钠溶液
注意：玻璃棒搅拌，加速DNA溶解。

⑥获取含杂质较少的DNA
注意：玻璃棒搅拌，吸附、缠绕DNA。

⑦DNA的鉴定
注意事项：
1、该实验使用蒸馏水2次，作用分别是：
1）加蒸馏水，血细胞吸水涨破，利于提取核物质；
2）加蒸馏水使氯化钠浓度由2M降至0.14M,利于DNA析出2、使用NaCl4次，作用分别是：
1）加2MNaCl溶解提取的核物质
2）（加蒸馏水）0.14M使DNA析出
3）加2MNaCl溶解滤取含DNA粘稠物
4）0.015M NaCl溶解并鉴定DNA
3、使用纱布3次
1）过滤得细胞核物质（滤液）
2）滤取0.14MNaCl溶液析出的DNA（粘稠物）
3）过滤溶有DNA的2MNaCl溶液（滤液）
三、叶绿体中色素的提取和分离
⑴实验原理：
提取色素的原理：
叶绿体色素分子不溶于水，但溶于酒精、丙酮和石油醚等溶剂。

分离色素的原理：
不同的色素在中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得，因而可用层析液将不同色素分离。

⑵实验步骤：
（3）结果分析：①从色素带的宽度可知色素含量的多少依次为：叶绿素a ＞叶绿素b ＞叶黄素＞胡萝卜素；②从色素带的位置可知色素在层析液中溶解度大小依次是：胡萝卜素＞叶黄素＞叶绿素 a ＞叶绿素 b ；③在滤纸上距离最近的两条色素带是叶绿素a 与叶绿素b ，距离最远的两条色素带是胡萝卜素与叶黄素。

（4）实验创新：在本实验中在圆形滤纸中央点上叶绿体色素的提取液进行层析，会得到近似同心的四个色素环，由内到外依次是黄绿色、蓝绿色、黄色、橙黄色。

基础练习3
待测物质检测试剂预期显色结果
①DNA 甲基绿红色
②脂肪苏丹Ⅲ橘黄色
③淀粉斐林试剂蓝色
④蛋白质双缩脲试剂紫色
A．①③B．②③C．①④D．②④
2.（09江苏卷）21．下列有关实验及显色结果的叙述，正确
．．的有
A．水浴加热条件下，蔗糖与斐林试剂发生作用生成砖红色沉淀
B．沸水浴条件下，脱氧核苷酸与二苯胺发生作用呈现蓝色
C．常温条件下，蛋白质与双缩脲试剂发生作用呈现紫色
D．常温条件下，核糖核酸与甲基绿作用呈现绿色
3．（06西城四模）实验室有四瓶失去标签的液体，其中有：清水、5%淀粉溶液、淀粉酶溶液、蛋白酶溶液。

某同学用三氯乙酸（一种能使蛋白质变性的试剂）和碘液准确地鉴别出了这
实验步骤
样品及试管号
①②③④
分别取四种样品各1mL置于四只试管中，
滴加碘液3~4滴后，观察
不变蓝不变蓝不变蓝变蓝
分别取四种样品各1mL置于四只试管中，
滴加三氯乙酸3~4滴后，观察
混浊无变化混浊无变化
再取①号和④号样品各1mL混合，37℃保温10分钟，加碘液3~4滴后变蓝
再取③号和④号样品各1mL混合，37℃保温10分钟，加碘液3~4滴后不变蓝
A．①是清水、②是淀粉、③是蛋白酶、④是淀粉酶
B．①是淀粉酶、②是清水、③是蛋白酶、④是淀粉
C．①是淀粉酶、②是蛋白酶、③是清水、④是淀粉
D．①是蛋白酶、②是清水、③是淀粉酶、④是淀粉
4. （07宣武二模）下面是四位同学的实验操作方法或结果，请指出错误的一位是
A. 低倍镜下看到洋葱根尖分生区细胞呈正方形
B. 将糖尿病病人的尿液加入班氏糖定性试剂；混匀后呈现砖红色
C. 析出含DNA的黏稠物，需加蒸馏水稀释，使氯化钠的物质的量浓度相当于0.14mol/L
D. 叶绿体色素分离后，滤纸条上色素带颜色从上到下是橙黄色、黄色、蓝绿色、黄绿色
5. （07朝阳一模）下列实验操作中正确的是
A. DNA提取液中加入斐林试剂，沸水浴5分钟，溶液显现蓝色
B. 用紫色洋葱鳞片叶外表皮制作的临时装片，可用于观察植物细胞的质壁分离与复原实验
C. 在稀释的蛋清液中加入双缩脲，摇匀，可看到溶液变砖红色
D. 用纸层析法分离叶绿体中的色素，扩散最慢的一条色素带呈橙黄色
6(07江苏)．若以鸡蛋蛋白液为材料进行蛋白质鉴定实验，发现蛋白液与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管壁上。

下列关于这一现象形成原因的描述中正确的是
A．鸡蛋蛋白液稀释不够，搅拌不匀
B．只添加了双缩脲试剂A，未添加双缩脲试剂B
C、鸡蛋蛋白液不是合适的实验材料
D．蛋白液与双缩脲试剂的反应时间不够长
7 (07广东理基)．下列健康人的4种液体样本中，能与双缩脲试剂发生紫色颜色反应的是
①尿液②胃液③汗液④唾液
A．①③B．①④C．②③D．②④
8 (07广东文基)．下列有关“叶绿体色素的提取和分离”实验的叙述正确的是
A．加入碳酸钙防止滤液挥发 B．用NaCl溶液提取叶片中的色素
C．用无水酒精或丙酮分离滤液中的色素 D．加入二氧化硅（石英砂）有利于充分研磨
9、（06朝阳模拟一）下列实习、实验常规操作方法正确的是
A.使用光学显微镜正确的方法是先在低倍镜下对焦，将观察目标移至视野中央，转用高倍镜并调小光圈，进行观察
B.在鉴定可溶性还原糖实验中，需用新制斐林试剂或双缩脲试剂
C.提取含杂质较少的DNA时使用体积分数为95%的冷酒精凝集效果较佳
D.调查人群中某种遗传病的发病率应选择有该遗传病的家系
10．将小麦种子分别置于20℃和30℃培养箱中培养4天，依次取等量的萌发种子分别制成提取液Ⅰ和提取液Ⅱ。

取3支试管甲、乙、丙，分别加入等量的淀粉液，然后按下图加入等量的提取液和蒸馏水，45℃水浴保温5分钟，立即在3支试管中加入等量裴林试剂并煮沸2分钟，摇匀观察试管中的颜色。

结果是（）A．甲呈蓝色，乙呈砖红色，丙呈无色
B．甲呈无色，乙呈砖红色，丙呈蓝色
C．甲、乙皆呈蓝色，丙呈砖红色
D．甲呈浅砖红色，乙呈砖红色，丙呈蓝色
11．下列实验中所用试剂错误
．．的是
A．在观察植物细胞有丝分裂实验中，使用醋酸洋红溶液使染色体着色
B．在提取叶绿体色素实验中，使用丙酮提取色素
C．在DNA的粗提取与鉴定实验中，使用氯化钠溶液析出DNA
D．在蛋白质的鉴定实验中，使用苏丹Ⅲ染液鉴定蛋白质
12(07江苏)．在采用鸡血为材料对DNA进行粗提取的实验中，若需进一步提取杂质较少的DNA，可以依据的原理是
A．在物质的量浓度为0．14 mol／L的氯化钠溶液中DNA的溶解度最小
B．DNA遇二苯胺在沸水浴的条件下会染成蓝色
C．DNA不溶于酒精而细胞中的一些物质易溶于酒精
D．质量浓度为0．1g／mL的柠檬酸钠溶液具有抗凝血作用
13．（08崇文）下表是探究淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用的实验设计及结果。

下列叙述不正确的是试管编号①②③④⑤⑥
2mL3%淀粉溶液＋＋＋－－－
2mL3%蔗糖溶液－－－＋＋＋1mL2%新鲜淀粉酶溶液＋＋＋＋＋＋
反应温度（℃）40 60 80 40 60 80
2mL斐林试剂＋＋＋＋＋＋
砖红色深浅＋＋＋＋＋＋－－－注：“＋”表示有：“－”表示无。

“＋”的多少代表颜色的深浅
A、本实验依据的原理之一是淀粉和蔗糖水解后都能产生可溶性还原糖
B、本实验的实验变量是反应物的种类和温度
C、本实验可用碘液代替斐林试剂进行结果的检测
D、本实验中淀粉酶的活性在60℃最高
微生物的培养与利用
一、微生物的实验室培养
1、微生物的营养
（1）培养基的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基
质。

（2）微生物需要的营养物质及功能
微生物生命过程中需要的化合物有、、、、。

概念来源最常用来源作用
）培养基的配制原则：目的要明确、营养要协调、 pH要适宜。

（1）配制培养基的方法（以制备牛肉膏蛋白胨固体培养基为例）
①计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制100mL的培养基时，各种成分的用
量。

②称量：准确地称取各种成分。

牛肉膏比较粘稠，可以用玻棒挑取，放在称量纸上称量。

牛
肉膏和蛋白胨都溶液吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。

③溶化：a.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水，加热。

当牛肉膏溶化
并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。

b.往烧杯中加入称量好的蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解。

c.加入琼脂，加热使其熔化。

在此过程中，不断用玻棒搅拌，防止琼脂糊底而导致
烧杯破裂。

d.当琼脂完全熔化后，补加自来水至100mL
④调pH：用滴管逐滴加入1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸，直到pH为7.2～7.6。

⑤灭菌：a.将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞( 防止杂菌污染，保证通气良好)，包
上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压灭菌锅，在压力100Kpa,温度121℃条件下，灭菌 15—30min。

b.将培养皿用几层旧报纸包紧，5~8套培养皿作一包，包好后放入干热灭菌箱内，在
160—170℃下灭菌2小时。

⑥倒平板：待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。

（注意：先调pH，后灭菌。

）
(2) 无菌技术：泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

①灭菌：是指用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

常用灭菌方法：
a. 灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯
火焰上灼烧。

在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以
通过火焰灼烧来灭菌。

b.干热灭菌：能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具
等放入干热灭菌箱内在160—170℃加热1—2小时。

c.高压蒸汽灭菌：将培养微生物的培养基放入高压蒸汽灭菌锅内，在压力100Kpa,温度121℃条件下，维持15—30min。

②消毒：是指用相对温和的理化方法杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。

常用的消毒方法有：煮沸消毒法、射线消毒法和化学药剂消毒法。

a.对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和。

b.用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行。

c.为避免周围环境中微生物的污染，实验操作的整个过程应在进行。

d.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

(3)接种技术：
①平板划线法：用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。

当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。

②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。

（4）实验室培养
微生物培养的条件
①适宜的温度：微生物生长最旺盛时的温度叫最适生长温度，绝大多数微生物的最适生长温。