第四章 水中的细菌学测定

① 初发酵试验 ② 平板分离
25mL
水样
225m L无菌
10-1 1mL
水
10mL 1mL
1mL
10-2
1mL
革兰氏染色 ③ 复发酵试验
+
_
+ G-
37℃ 24h
+
+
37℃
+
+ 18-24h
G-
G+
37℃ 24h
Ⅱ 水中总大肠菌群的测定
三、滤膜法
滤膜是一种微孔薄膜（孔径0.45μm） ➢过滤水样
①滤膜及滤器的灭菌 ②过滤装置安装 ③水样量的选择 ④过滤水样
报告方式/ CFU·mL-
1
16 000或1.6×104 38 000或3.8×104 27 000或2.7×104 510 000或5.1×105
270或2.7×102 31 000或3.1×104
Ⅱ 水中总大肠菌群的测定
总大肠菌群:指那些能在37℃ 48h之内发酵乳 糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性 的无芽孢杆菌。 主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆 菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。
生活饮用水的总大肠菌群数每升不得超过3个
Ⅱ 水中总大肠菌群的测定
一、测定意义
作为水体受粪便污染的指标。
二、总大肠菌群的特征
❖在37℃ 48h之内发酵乳糖产酸产气 ❖是革兰氏阴性无芽孢杆菌 ❖在特殊培养基上能够长出具有典型特征的菌落
Ⅱ 水中总大肠菌群的测定
三、多管发酵法
(1) 生活饮用水
各 100mL
10-1
10-2
10-3
1
1 365
164
20
2
2 760
295
46
3
2 890
271
60
4
无法计算 1 650
513
5
27
来自百度文库
11
5
6
无法计算
305
12
两个稀释 度
菌落数之 比
－
1.6 2.2 － －
－
菌落总数 /CFU·mL-1
16 400 37 750 27 100 513 000
270 30 500
二、样品保存
采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学 检验。一般从取样到检验不宜超过2h，否则应 使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超 过6h
Ⅰ 细菌总数的测定
细菌总数：指lmL水样在营养琼脂培养基中，于
37℃培养24h后，所生长细菌菌落的总数。
◈生活饮用水的细菌总数lmL不得超过100个
水样
各 10mL
25mL 各1mL
225mL 无菌水
10-1
各1mL
37℃ 24h
EC培养液
44.5℃ 24－48h
Ⅲ 水中粪大肠菌群的测定
2.复发酵试验
阳性管接到EC培养液中。在44.5℃±0.5℃温度下培养 24h±2h，立即观察，发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性
3.计算和报告结果
查MPN表，按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠 菌群细菌的MPN值
Ⅱ 水中总大肠菌群的测定
➢ 培养
37℃
24h
➢结果观察和报告
•挑选典型特征的菌落进行革兰氏染色、镜检；
•染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌再接种于乳糖蛋白胨培 养液中，经37℃培养24h，产酸产气者则判为总大肠菌 群阳性
Ⅱ 水中总大肠菌群的测定
• 计数滤膜上生长的大肠菌群菌落总数，根据过
滤的水样量计算1L水样中总大肠菌群数。
粪大肠菌群（个/L）≤ 200 2000 10000 20000 40000
污染物排放标准：
污水类型
医院、兽院及医疗机构含病 原体污水
传染病、结核病医院污水
一级标准 ≤500 ≤100
二级标准 ≤1000 ≤500
三级标准 ≤5000 ≤1000
二、多管发酵法
Ⅲ 水中粪大肠菌群的测定
1.初发酵试验
项目七 水中的细菌学测定
一、水样的采集
1. 采水容器
① 采样瓶：具磨口玻塞的500mL广口瓶 ② 采样瓶的洗涤
③ 采样瓶的灭菌: 160～170℃干热灭菌2h，或用高压蒸汽 灭菌器，121℃灭菌15min
一、水样的采集
2. 采样步骤及注意事项
(1)去氯和高浓度重金属：灭菌前按500mL采样瓶加入 0.3mL10%Na2S2O3溶液 (2) 采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直接 将已灭菌的带塞采样瓶插入水中，约距水面10～15cm处采集
水样
各 10mL
25m L
各1mL
225m L无 菌水
10-1
各1mL
37℃ 24h
Ⅱ 水中总大肠菌群的测定
(3) 地表水和废水：水样应作1:10，1:100， 1:1000或更高的稀释
10（ml）
MPN值=MPN指数× 接种量最大的一管 ml
Ⅱ 水中总大肠菌群的测定
二、四管发酵法（以轻度污染者为例）
37℃ 24h
10-3
三、菌落计数
Ⅰ 细菌总数的测定
四、计算和报告计数结果
10-1
10-2
10-3
1562
152
13
2468
226
40
2613
218
56
无法计数 3547 319
28
10
4
无法计数 303
12
细菌总数 （个/mL)
Ⅰ 细菌总数的测定
四、计算和报告计数结果
例
不同稀释度的平均菌落数
次
一、细菌总数测定的意义
◈可以反映水体有机污染的程度
Ⅰ 细菌总数的测定
二、培养基的制作 三、测定方法及步骤
1.稀释水样 2.接种水样 3.培养：37℃下倒置培养24h
Ⅰ 细菌总数的测定
水样
25mL
225mL
1mL
1mL
无菌水
1mL
1mL
1mL
1mL
1mL
ck
10-1
10-2
ck
10-1
10-2
1mL 10-3
（3）采集一定深度的水样时，可使用单层采水器或深层采水器
（4）从自来水龙头采集样品时，采水前可先将水龙头打开至最 大，放水3～5min，用酒精灯火焰灼烧约3min灭菌
（5）在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免 不同层次的搅扰；同一采样点与理化监测项目同时采样时，应 先采集细菌学检验样品 （6）采样完毕，做好记录
① 初发酵试验
② 平板分离
阳性管接种在伊红美兰 培养基上，37℃培养 18～24h，挑选典型特 征的菌落，涂片、革兰 氏染色、镜检
③ 复发酵试验
原水样
＋＋ ＋ G-
各 10mL
＋ G+
37℃ 24h ＋
37℃ ＋ 18-24h
G-
37℃ 24h
Ⅱ 水中总大肠菌群的测定
(2) 水源水：将水样作1：10稀释
总大肠菌群数(个/L)=
滤膜上生长的大肠杆菌 菌落数
过滤水样 ml
1000
滤膜上菌落数以20~60个/片较为适宜
Ⅲ 水中粪大肠菌群的测定
在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大 肠菌群称为粪大肠菌群。
一、测定意义
更准确地反映出水质受粪便污染的情况
地表水环境质量标准：
序号
Ⅰ类 Ⅱ类 Ⅲ类 Ⅳ类 Ⅴ类