9.HPLC注意事项

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HPLC使用注意事项

HPLC使用注意事项高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析方法，适用于各种样品类型和复杂性。

为了确保HPLC的准确性和可靠性，有一些注意事项需要遵守。

以下是HPLC使用时的一些重要注意事项：1.选择合适的柱：根据所分析样品的性质和分离要求，选择适合的柱型、柱长度和粒径。

柱的性能直接影响到分离效果和峰形。

应定期检查柱的状态，保证柱的稳定性和工作寿命。

2.使用纯净的溶剂：使用优质的溶剂和试剂，避免其中含有杂质和离子，以免对实验结果产生影响。

可以使用反渗透水或高纯度的有机溶剂来制备溶液。

3.准备标准溶液：为了定量分析，准备一系列浓度递增的标准溶液。

确保标准溶液的准确度和精确度，并定期检查标准溶液的品质。

4.样品的准备：样品的准备非常重要，特别是对于复杂的样品，如生物样品。

样品应进行适当的前处理，以去除杂质、浓缩或降低干扰物浓度。

对于有机溶剂不溶的样品，可以使用溶剂萃取、固相萃取或其他样品处理方法。

5.控制流动性：流动性是保证HPLC分析准确性和重复性的关键。

使用适当的流速和流动相，以确保样品在柱中的适当保持时间和效果。

流速过高可能导致峰形变形或样品无法分离。

6.梯度洗脱的选择：在一些复杂的分离中，可以使用梯度洗脱来提高分离效果。

梯度洗脱时，需要根据样品特性和分离要求，选择合适的洗脱曲线和梯度程序。

7.实验参数的记录：在进行HPLC分析时，应详细记录实验参数，如流速、温度、柱型、流动相组成等。

这些参数记录对于结果的追溯和比较具有重要意义。

此外，还应记录任何异常或非典型结果，以便根据这些信息进行排查。

8.清洗和维护设备：定期进行HPLC设备的清洗和维护，以确保设备的正常运行和长期稳定性。

这包括清洗进样器、列室和检测器等部件。

定期更换柱和相关设备，以确保结果的准确性。

9.安全操作：在操作HPLC时，应遵守实验室的安全规范，确保个人安全和设备的安全。

避免使用有毒、易燃或易爆的溶剂，正确处理和处理废液。

10.定期校正和质量控制：定期校正和质量控制是确保HPLC分析准确性和可靠性的重要步骤。

hplc操作要点

hplc操作要点HPLC操作要点HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是一种常用的色谱分析技术，广泛应用于药品、食品、环境、生物和化学等领域。

在进行HPLC操作时，需要注意以下几个要点。

1. 样品准备在进行HPLC分析之前，样品的准备是至关重要的。

样品应该尽可能纯净，避免杂质的干扰。

对于固体样品，需要将其溶解于适当溶剂中，并进行适当的过滤以去除悬浮物。

对于液体样品，可以直接使用，但也要确保样品的纯度和稳定性。

2. 色谱柱的选择选择适合的色谱柱对于HPLC分析的成功至关重要。

色谱柱的选择应根据分析的目标和样品的性质来确定。

常见的色谱柱类型有反相色谱柱、离子交换色谱柱、凝胶过滤色谱柱等。

根据需要，还可以选择不同的柱长度和直径。

3. 流动相的选择流动相是HPLC分析中的关键因素之一。

流动相的选择应根据样品的性质和分析目的来确定。

常见的流动相包括有机溶剂和水的混合物，可以根据需要进行适当的调整。

此外，还可以添加缓冲剂、酸或碱来调节pH值，以提高分离效果。

4. 流速的控制流速的控制对于HPLC分析的准确性和重复性非常重要。

流速的选择应根据分析的要求和色谱柱的规格来确定。

通常情况下，较高的流速可以提高分析速度，但可能会降低分离效果。

因此，需要在速度和分离效果之间进行权衡，选择合适的流速。

5. 检测器的选择HPLC分析中常用的检测器有紫外可见光检测器、荧光检测器、电化学检测器等。

选择合适的检测器取决于分析的目标和样品的性质。

紫外可见光检测器是最常用的检测器之一，可以检测大多数有机化合物。

荧光检测器对于具有固有荧光性质的化合物具有较高的灵敏度。

电化学检测器适用于分析具有电化学活性的化合物。

6. 数据分析和结果解释在HPLC分析完成后，需要对得到的数据进行分析和结果解释。

可以利用峰面积、峰高度和保留时间等参数来定量分析。

同时，还需要进行结果的验证和解释，确保结果的准确性和可靠性。

hplc的注意事项

HPLC，即高效液相色谱法，是一种在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着广泛应用的技术。

在使用HPLC进行实验时，需要注意以下事项：流动相的纯度：流动相必须是高纯度的，以保证色谱柱和检测器的性能。

如果流动相中含有杂质，可能会堵塞色谱柱，影响分离效果。

流动相的脱气：流动相在使用前需要进行脱气处理，以避免在实验过程中产生气泡，干扰实验结果。

样品处理：对于复杂的样品，需要进行适当的预处理，如提取、浓缩、纯化等，以去除干扰物质，提高分离效果。

色谱柱的清洗和维护：色谱柱是HPLC的核心部件，需要定期清洗和维护，以保证其性能和使用寿命。

检测器的选择：根据实验需求选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等。

实验条件的选择：根据实验需求选择合适的实验条件，如流速、流动相组成、柱温等。

数据的记录和处理：实验过程中需要记录详细的实验数据，并采用适当的软件进行数据处理和分析。

总之，使用HPLC进行实验需要注意细节，严格遵守实验操作规程，以保证实验结果的准确性和可靠性。

hplc的注意事项 -回复

hplc的注意事项-回复公式高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生物医药、食品安全和环境科学等领域。

在使用HPLC进行实验时，有一些注意事项需要遵守，以确保结果的准确性和可重复性。

本文将逐步介绍HPLC的注意事项。

第一步：设备准备在进行HPLC实验之前，首先要确保设备的正常运行。

检查液相色谱仪的仪器参数，如流量、温度、压力和检测器的灵敏度等。

确保所有设备和仪器都处于良好的工作状态，并且有足够的试剂和耗材。

第二步：样品准备正确的样品准备是进行HPLC分析的关键。

首先，确定分析的目的和需求。

根据实验目的选择合适的溶剂和样品制备方法。

特别是对于复杂的样品，如生物样品，可能需要进行样品前处理，如蛋白质沉淀、固相萃取等。

第三步：试剂选择选择适当的试剂是确保HPLC实验成功的关键。

根据需要选择合适的溶剂、流动相和内标等。

溶剂的纯度和质量对实验结果至关重要，因此应尽量使用高纯度的试剂。

在选取流动相时，要考虑分离效果、分离时间和方法的可重复性。

选择合适的柱也是确保HPLC分析成功的关键。

柱的选择应考虑分离目标、样品性质和需求。

常见的柱类型有反相柱、离子交换柱和手性柱等。

在选择柱时，还要注意柱的尺寸、填充物和使用寿命等。

第五步：方法优化在进行HPLC实验之前，需要进行方法的优化。

优化的主要目标是提高分离效果、减少分离时间和提高方法的可重复性。

优化的关键点包括流量、温度、柱温控制、梯度程序和检测器的选择等。

通过优化方法，可以获得更好的实验结果。

第六步：系统稳定在进行HPLC实验之前，需要进行系统的稳定。

根据设备和方法要求，进行系统预运行和平衡。

确保系统的压力、流量和温度等参数在稳定的范围内。

在进行实验之前，还要做好基线的调整和峰形图的检查。

第七步：实验操作在进行实验操作时，需要注意以下几点。

首先，要准确记录所有的实验条件和参数，如溶剂的选择、柱的类型和条件、流量和梯度程序等。

其次，要严格控制实验过程中的温度，尤其是对于温度敏感的化合物。

HPLC使用操作和注意事项

HPLC使用操作和注意事项HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物和环境等领域。

在进行HPLC分析时，操作和注意事项非常重要，可以确保数据的准确性和可靠性。

以下是HPLC使用操作和注意事项：1.仪器准备和检查-在进行HPLC分析之前，确保仪器处于正常工作状态，并进行必要的检查和校准。

-检查并确保溶剂瓶、移液器、混匀器、色谱柱等零件的完整性和安装正确。

2.样品准备-样品应根据需要进行稀释或提纯。

-样品应避免与空气接触，以防止氧化或降解。

-对于固态样品，可以使用溶剂进行提取。

-对于液态样品，应尽量使用无色或低吸光度的溶剂。

-样品必须先过滤，以去除悬浮物和杂质。

3.HPLC系统设置-根据试验要求设置合适的流速、温度和检测方式。

-设置正确的进样量和进样方式，确保准确和稳定的进样。

-检查色谱柱的状态，确保它处于正常工作条件。

4.溶剂和试剂准备-使用HPLC级别的纯溶剂和试剂，以确保分析结果的准确性。

-为了避免测定结果的误差，必须使用纯化的水和有机溶剂。

-按照仪器的要求准备缓冲液。

5.进样与洗脱-采用适当的进样模式，如体积进样或峰进样。

-进样体积应根据样品浓度和检测灵敏度进行优化。

-洗脱条件是决定分析分离效果和峰形的关键因素，应根据实验要求进行优化。

6.数据分析-分析HPLC数据时，应先进行标定，确定峰的保留时间和相对峰面积。

-根据标定峰的结果，进行峰识别和定量分析。

-结果应进行统计分析，并计算相对标准偏差以评估数据的可靠性。

除了上述操作，使用HPLC时还需要注意以下事项：1.安全操作-使用HPLC时，应遵守实验室的安全规定，佩戴个人防护装备，如手套和安全眼镜。

-与高压液体及其设备一起操作时，必须特别小心。

2.色谱柱保养-定期进行色谱柱的保养和洗脱，以确保其性能和寿命。

-使用适当的保护柱，避免杂质和有害物质进入色谱柱。

3.仪器保养-定期清洗和保养仪器零件，如移液器和混匀器。

-定期更换空气过滤器和溶剂瓶，以防止污染。

HPLC使用注意事项

HPLC使用注意事项高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于分析化学和生物化学领域的分离技术。

在使用HPLC时，以下是一些需要注意的事项：1.选择合适的柱：根据样品性质和分离要求选择适当的柱。

不同的柱材料和填料对样品的分离效果有不同的影响。

2.样品准备：样品的准备对于HPLC分析至关重要。

样品应该是纯净的，不含杂质。

如果有需要，可以通过萃取、浓缩或衍生化等方法对样品进行前处理。

3.流动相的选择：选择合适的流动相对于分离效果也是至关重要的。

流动相可以是各种溶剂或它们的混合物。

对于高效液相色谱来说，通常使用的是有机溶剂如甲醇、乙腈等。

还需要注意一些流动相的pH值，应根据样品的性质来选择。

4.流速和梯度条件：选择适当的流速和梯度条件以满足分离的需求。

流速过高可能会导致柱压升高和分离效果下降。

而流速过低则会降低分离效率。

5.注射量：注射量应根据样品和柱的容量来确定。

一般来说，注射量不宜过大，以免超出柱的容量范围。

6.检测器的选择：根据分析目的选择适当的检测器。

常用的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器和质谱检测器等。

不同的检测器对不同的化合物有不同的灵敏度和选择性。

7.标定和校准：在进行HPLC分析之前，应该进行标定和校准以确保分析结果的准确性和可靠性。

标准品的选择和制备应严格按照相关的规范进行。

8.维护和保养：定期进行仪器和柱的维护和保养以保证仪器的正常运行。

比如清洗柱、更换柱和检测器的流体以及检查泄漏和杂质等。

9.数据分析和解释：在获得分析数据后，进行相应的数据分析和解释。

对峰进行积分、计算峰面积和峰高度等指标，并与标准品进行比较分析。

10.安全措施：在进行HPLC分析时，应遵守相关的安全操作规程，避免接触有毒和易燃物质。

总之，正确使用HPLC技术需要注意上述方面的事项，以保证分析结果的准确性和可靠性。

通过合理的实验设计和操作，可以获得满意的分离效果和分析结果。

HPLC的使用注意点

1.HPLC的使用注意点：使用HPLC时，经常注意废液储罐及排废液的管道是否插入废液储罐内，注意不要使废液溢出，污染环境及对人体造成伤害，严重时会产生中毒现象。

对于HPLC在更换灯之前要关闭仪器电源，并且拔下电源线插座，否则，可能会导致火灾、电击或损坏仪器。

另外，当灯室暴露在外面时，不要打开电源，否则会受到紫外线的伤害。

在更换灯之前，关闭电源，使灯有足够长时间的冷却，以防烧伤。

并且在更换时要务必注意不要使任何灰尘或污物沾污到镜面或过滤器表面，否则不能保证分析结果的准确性。

2.GC使用的注意点：对于FID的GC，由于火焰离子化检测器用H2做燃料，如果开着H2没有把色谱柱连到检测器入口接头上，H2会流进加热室引起爆炸事故。

因此，一旦氢气接入仪器，进样器和FID的检测器进口之间就必须始终接上色谱柱或用内放石墨垫圈的螺帽旋入FID检测器进口，用扳手拧紧及密封。

当清洗完FID检测器后换上新喷口时，一定要同时换上新的喷口密封垫圈，再用力将喷口旋紧，以防漏气。

使用GC时，注意进样器、检测器、柱箱的高温，以免烫伤；应严格按照先载气，再升温，后燃气、助燃气的顺序开机和先燃气、助燃气，再降温，后载气的顺序关机，以免对仪器和色谱柱造成损坏。

3.当大量使用剧毒化学物品（如二甲基亚砜）时，应做好个人的防护措施，以免大量吸入造成中毒现象。

4.使用离心机时，注意对称的放置样品，并使样品等重，使离心机保持平衡，以免产生重大的事故。

（四）．种子岗位1.高压蒸汽灭菌锅的使用注意点：在进行灭菌操作时应严格控制压力不能超过0.15MPa。

当消毒室压力降为0MPa时，方可打开锅门，以免蒸汽冲人。

对于液体类物品不能采用快速排气法，以防灭菌锅内因突然减压后引起的液体剧烈沸腾或容器爆破事故放、取物品时注意锅体内的高温，小心烫伤。

2.洁净室内工作注意点：不要在暴露在紫外灯下直接工作，以防紫外线的灼伤和更为严重的后果；应该在关闭紫外灯及开启日光灯后等待片刻方可进入洁净室进行操作。

HPLC使用注意事项和经验之谈

HPLC使用注意事项
1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
(七)峰拖尾
1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相
2.峰干扰清洁样品,调整流动相
3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品
4.同前(四)4 同前(四)4
5.同前(四)3 5.同前(四)3
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
2、流动相流速的选择：因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。

HPLC仪器使用注意事项

HPLC仪器使用注意事项HPLC（高效液相色谱）是目前广泛应用于分析化学的一种重要技术手段。

然而，在使用HPLC仪器时，需要注意以下几个方面的问题，以确保分析结果的准确性和仪器的良好运行。

1.仪器的日常维护：定期检查和保养HPLC仪器是确保其正常运行和延长使用寿命的重要措施。

这包括清洁仪器表面、更换耗材和消耗品、检查泵的压力以及检查和校准检测器等。

仪器的维护工作应按照仪器提供商的要求进行，并根据实际情况进行适当调整。

2.使用适当的溶剂：HPLC仪器几乎都使用有机溶剂，在选择时需要注意它们的纯度和质量。

使用优质的有机溶剂可以确保分析结果的准确性，并减少对仪器和柱的损害。

此外，应注意将溶剂储存在干燥、清洁、不受阳光直射的地方，以避免溶剂的蒸发和污染。

3.样品的准备和处理：HPLC仪器仅能处理液体样品，因此固体样品需要先进行溶解和过滤。

此外，样品的稳定性也需要考虑。

一些样品可能会在接触空气、光照或高温条件下发生分解，导致分析结果的不准确。

因此，在准备样品时，应尽量避免这些条件，并在分析之前进行适当的保存和封存。

4.柱的选择与维护：柱是HPLC分析的关键部分，其选择需要根据具体样品的性质和分离需求进行。

在选择柱时，应注意柱的尺寸、填料类型和粒径以及柱温设置等因素。

同时，为了保证柱的稳定性和使用寿命，需要定期进行逆洗和再填充等维护工作，以及对柱进行正确的保存和保养。

5.检测器的调整与校准：HPLC仪器使用的检测器包括紫外/可见检测器、荧光检测器和质谱检测器等，这些检测器需要经过适当的调整和校准才能保证分析结果的准确性。

在使用检测器前，需要根据仪器的说明书进行检测器的初始化操作，并根据标准物质进行灵敏度、线性度和准确性等校准工作。

6.数据的处理与解释：HPLC分析产生的数据需要进行适当的处理和解释，才能得出正确的结论。

在数据分析过程中，应考虑样品的稀释、补偿和基线的修正等因素，并结合仪器的性能和分析方法的要求进行结果的计算和解释。

液相色谱注意事项

液相色谱（HPLC）是一种广泛应用的分离和定量分析技术，用于检测复杂混合物中的各种化合物。

以下是进行液相色谱实验时需要注意的一些事项：
1. 流动相选择：
- 选择合适的流动相对于实验结果至关重要。

要根据待测物质的性质、固定相类型以及所需保留时间来确定。

- 流动相需要过滤脱气，以去除其中的微粒和气体，确保系统稳定。

2. 样品处理：
- 样品必须充分溶解，并且尽量减少杂质的引入。

- 对于不稳定的化合物，可能需要添加保护剂或在低温下操作。

3. 色谱柱使用：
- 色谱柱应妥善保存，避免长时间暴露在空气中或光照条件下。

- 使用前确保色谱柱平衡至所需的流动相条件。

4. 进样：
- 进样量应适当，过大的进样量可能导致峰形变差或拖尾现象。

- 注意保持进样器清洁，定期清洗和维护。

5. 压力控制：
- 操作过程中要注意系统的压力变化，过高或过低的压力都可能是问题的信号。

- 如遇到异常情况，应立即停机检查。

6. 梯度洗脱：
- 如果使用梯度洗脱，要确保程序设置正确，并对梯度曲线进行测试。

- 在梯度结束时，要有一个适当的平衡段，以便色谱柱回到初始条件。

7. 数据处理：
- 确保采集到的数据是准确可靠的，并及时进行处理和解读。

- 记录所有的实验参数，包括仪器设置、流动相组成等，便于后续分析和重现实验。

8. 安全措施：
- 注意化学品的安全操作，遵守实验室安全规定。

- 对于有毒有害的溶剂和样品，要采取相应的防护措施。

高效液相色谱注意事项

高效液相色谱注意事项高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于各个领域的分析技术，下面是使用HPLC时需要注意的几点事项。

1. 样品准备：在进行HPLC分析前，需要仔细准备样品。

首先，确保样品是稳定的，不会在分析过程中产生降解或变化，并且准备足够的样品量以避免实验中的误差。

其次，要将样品充分溶解或悬浮于适当的溶剂中，以获得准确和可重复的分析结果。

2. 准备工作：在运行HPLC之前，需要对仪器进行一些准备工作。

首先，根据所需的分析方法，选择合适的柱和流动相，并对其进行装配。

然后，检查仪器的运行状态，如泵的压力和流量、检测器的灵敏度等，确保其正常工作。

最后，对仪器进行校准和标定，以确保分析结果的准确性和可靠性。

3. 流动相控制：在HPLC分析过程中，流动相的选择和控制非常重要。

合理选择流动相的组成和比例，以获得最佳的分离效果。

在分析过程中，要保持流动相的稳定性，避免气泡和颗粒物进入流动相中，以免影响分析结果。

4. 样品注射：样品注射是HPLC分析中关键的一步。

正确地注射样品可以避免样品在进样过程中的损失和变化，并确保准确和可重复的分析结果。

在进行样品注射时，要注意控制注射量和注射速度，以避免过量或不足的样品进入柱中。

5. 分离条件控制：为了获得最佳的分离效果，需要合理控制分离条件。

首先，选择合适的柱和流动相，以达到对于待分析物相容性和选择性的要求。

然后，根据分析方法的要求，调整流速、温度和梯度程度等参数，以优化分离效果。

6. 数据分析：在HPLC分析过程中，要准确记录和分析数据。

首先，记录样品处理、仪器参数和分析条件等操作步骤和参数。

然后，进行数据处理和结果分析，如计算峰面积、定量分析和结果比对等。

最后，对分析结果进行统计学分析，评估分析方法的准确性和可靠性。

总之，使用HPLC进行分析时，需要严格控制实验条件和仪器性能，并进行合理的样品准备和处理。

遵守上述几点注意事项，可以提高HPLC分析的效率和结果的准确性和可靠性。

实验心得记录HPLC操作流程及注意事项(二)

引言：
HPLC（高效液相色谱法）是一种广泛应用于分离和定量分析的仪器。

本文将详细记录我在进行HPLC操作时的一些心得体会，并总结了一些操作流程和注意事项，旨在帮助其他操作者提高实验效果和减少操作错误。

概述：
正文内容：
1.样品处理
1.1.样品的准备
1.2.样品的溶解
1.3.样品的过滤
1.4.样品的稀释
1.5.样品的保存
2.仪器设定
2.1.流速设定
2.2.柱温设定
2.3.检测器设置
2.4.分离柱的选择
2.5.分析方法的选择
3.色谱条件的调整
3.1.流动相的组成
3.2.流动相的pH调整
3.3.柱温的优化
3.4.柱压的控制
3.5.检测波长的选择
4.峰形和峰分离的优化
4.1.注射量的控制
4.2.色谱柱的选择
4.3.峰的分离度优化
4.4.峰的形状调整
4.5.退峰效果的改善
5.数据处理和结果分析
5.1.校正曲线的绘制
5.2.峰面积的计算
5.3.峰的重复性和稳定性评估5.4.数据的统计分析
5.5.结果的解释和报告撰写总结：
本文以HPLC操作流程和注意事项为主题，从样品处理、仪器设定、色谱条件调整、峰形和峰分离优化以及数据处理和结果分析五个大点进行了详细阐述。

通过正确的操作流程和注意事项的遵守，可以提高HPLC实验结果的准确性和可信度。

希望本文对于其他操作者在HPLC实验中的操作指导有所帮助。

HPLC仪器使用注意事项

仪器使用注意事项1. 用棕色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液.光照影响瓶中藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行。

勿使用多日存放的蒸馏水。

2. 在比例阀的混合点，重力作用使盐颗粒沉淀下来，通常，下面阀A/D接水相/盐溶液，C/B接有机溶剂。

使用盐时脱气机易堵，可将管路入口与出口反接，用60摄氏度的温水反冲，用针筒缓慢吸200mL左右。

3. 流动相瓶中的滤头脏。

压力波动，可将滤头拔下，检查是否与滤头有关。

滤头污染，可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h 或过夜，看污染程度，最后用水冲洗干净，重新装好。

4. seal-wash 用10%的异丙醇。

使用缓冲盐时要加seal-wash选项，周期清洗。

5. LAN与CAN不能串联，LAN接仪器，PC。

CAN为模块间通讯。

6. 柱温箱选择3uL，减少死体积，延迟体积。

7. 液相上各种灯颜色。

电源打开后，四个模块左侧灯亮绿色。

状态指示灯位于各自模块的右上方：呈黄色：该仪器在未准备好状态(Not-ready) 或正在自检。

呈绿色：该仪器正在运行，采集数据(Run)。

无颜色：该仪器已准备好等待运行(Pre-run)。

呈红色：该仪器检测到有故障发生，仪器在错误状态,红色多发生于漏液时。

8. 过滤白头位于排气阀内，当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白头是否阻塞了。

判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。

如果过滤芯的颜色发黑，说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的。

9. 毛细管线分类：0.17mm内径------绿色;0.12mm内径-------红；0.25mm内径-------蓝PEEK 管线：内径-----0.18mm。

10. 灯能量测试，先将灯预热，用水平衡系统。

启动Agilent Lab advisor 进行测试。

启动软件connect（界面右上部分）Service&Diagnostics（左侧导航栏）选择G4212B Intensity Test Run 查看结果。

HPLC的使用操作和需要注意的事项

HPLC（高效液相色谱法）使用操作和注意事项HPLC的流程简图：流程流程：如右图所示，溶剂贮器（1）中的流动相被泵（2）吸入，经〔3〕梯度控制器按一写的梯度进行混后然后输出，经（4）测其压力和流量，导入（5进样阀（器）经（6）保护柱、（7）分离柱后到（8）检测器检测，由（10）数据处理设备处理数据或（11）记录仪记录色谱图，（12）馏分收集器收集馏分，（13）为废液。

.一．操作步骤1．排空状态：将吸液头让在已经超声的甲醇中，旋松排空阀让机器以高流速排走机器或输液管的气泡，3—5分钟后关闭排空阀，排空结束。

2．冲洗状态：以适当流速冲洗机器核色谱柱大约20分钟;同时开启检测器，让检测器处于预热和自检状态。

3．联机状态：打开联机电脑让色谱工作站和HPLC机器相连设定吸收波长，适当流速，查看系统压力是否正常。

4．用已经配好的流动相换下甲醇开始走基线，此过程大约20分钟5．当基线平稳，开始进样准备。

6．进样前用进样液清洗六通阀2-3次。

7．样品打入机器开始谱图。

8．谱图完成清洗机器和关闭电脑：用甲醇做流动相以适当流速开始冲洗机器大约15分钟，确定甲醇已经充满机器管道。

同时用甲醇清洗六通阀若干次。

退出色谱工作站和关闭电脑。

9．整理数据填写结果。

二．注意事项1、进样前样品处理及注意事项（1）须用专用平头液相专用注射器进样（禁用气相尖头进样针）；（2）进样试液应无颗粒、浑浊和乳化，使用前先用超声波溶解后，须用0.45um 的过滤膜过滤；（3）部分装取样时，取样体积一般小于定管的50%，完全装液相取样体积取必须是定量环的5 倍以上2、操作中注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。

脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

2) 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

3）所有过柱子的液体均需严格的过滤。

4) 压力不能太大，最好不要超过150kgf/cm2 .5) 因为缓冲试剂遇有机溶剂，会结晶，有损色谱柱，所以，每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。

hplc实验注意事项

高效液相色谱法（HPLC）是一种在化学分析中常用的技术，但在进行HPLC实验时需要注意一些事项，以确保实验的准确性和安全性。

以下是一些HPLC实验的注意事项：
1. 设备检查：在进行实验前，确保HPLC仪器的各个部件都处于良好状态，包括柱、检测器、流动相、进样器等。

2. 溶剂质量：使用优质的溶剂，并确保其纯度和配制的准确性。

不良的溶剂质量可能导致峰形状异常或基线漂移。

3. 柱的适用性：根据分析物性质选择合适的柱，并确保柱的状态良好。

柱的使用寿命有限，需要定期更换。

4. 流动相的准备：严格按照实验方法准备流动相，并使用过滤器或超纯水保证流动相的纯净性。

避免在流动相中引入气泡。

5. 进样器的操作：确保进样器干净，避免交叉污染。

正确设置进样体积和注射速度，以确保样品得到均匀的进样。

6. 检测器设置：根据实验要求选择适当的检测器波长和灵敏度。

在实验过程中，监测峰的形状和基线，确保信号的稳定性。

7. 温度控制：对于某些实验，需要对系统进行温度控制。

确保系统温度稳定，以获得准确的分析结果。

8. 废弃物处理：处理废弃物时，特别是有机溶剂，要按照安全规定进行，避免对环境造成污染。

9. 个人安全：使用适当的个人防护设备，如实验室外套、手套和护目镜。

避免接触有毒或刺激性物质。

10. 实验记录：记录实验条件、参数和结果。

良好的实验记录有助于追溯实验过程和结果。

在进行HPLC实验时，严格遵循实验方法、注意仪器维护和个人安全，能够提高实验的可靠性和准确性。

HPLC操作规程和注意事项

HPLC操作规程和注意事项一、操作规程1.准备工作(1)检查设备：检查HPLC仪器的仪表、进样系统、柱室、检测器等是否正常工作。

(2)准备试剂：准备好所需的试剂和溶剂，并按照操作要求进行配制。

(3)准备样品：根据需要分析的样品性质，选择适当的提取和前处理方法，准备好待测样品。

2.仪器操作(1)打开电源：首先接通HPLC仪器的电源，并预热一段时间，确保仪器达到稳定状态。

(2)装填柱子：按照操作说明将柱子正确装填到柱室中，并连接好进样系统和检测器。

(3)刷洗柱子：用纯溶剂将柱子刷洗，至少连续通过10倍柱子体积的溶液，以去除表面的杂质。

(4)进样：按照分析方法中的要求，设置好进样量和进样方式，确保样品能够均匀地进入柱子。

3.参数设置(1) 流速：根据分析方法的要求，设置适当的流速，一般应在0.5-2.0 mL/min之间。

(2)梯度程序：如果需要进行梯度洗脱，按照分析方法中的梯度程序设置好梯度条件和比例。

(3)柱温：根据样品性质和柱子的要求，设置适当的温度，一般应在室温到60℃之间。

4.检测和记录结果(1)检测器选择：根据分析物的性质，选择合适的检测器进行检测，如紫外检测器、荧光检测器等。

(2)检测条件：根据需要测量的物质，设置合适的检测波长、增益和灵敏度等参数。

(3)记录数据：及时记录分析结果和数据，包括进样量、保留时间、峰面积等，以备后续分析和比对。

二、注意事项1.安全操作(1)使用个人防护装备，如实验手套、安全眼镜和实验服。

(2)注意化学品的毒性和腐蚀性，避免接触皮肤和吸入有害气体。

(3)注意防火和爆炸，禁止在实验室中吸烟，并保持实验区域通风良好。

2.样品制备(1)样品的准备应尽量避免污染和氧化，以保证结果的准确性。

(2)样品的提取和前处理方法需根据样品特性和分析要求进行优化，确保提取效率和分析结果的可靠性。

(3)样品的溶解度要适宜，过高或过低的浓度都会影响分析结果。

3.仪器维护(1)定期检查和校准仪器，保证仪器的正常工作和准确性。

液相色谱注意事项及处理

液相色谱注意事项及处理液相色谱（HPLC）是现代化学分析中广泛应用的一种方法，它基于样品在流动相中的分离性质，通过分离和测定样品中的化合物。

以下是一些液相色谱操作中需要注意的事项以及常见的问题处理方法。

1.选择适当的柱子和固定相：-根据样品的性质、需要分离的化合物以及分离条件，选择适当的柱子和固定相。

柱子和固定相的选择对分离效果和分析结果至关重要。

2.准备好合适的流动相：-流动相的成分和性质直接影响分离效果。

需要注意流动相的溶剂纯度、特性以及配置方法。

合适的流动相可提高分离效果。

3.样品溶解及进样：-样品的溶解度及进样方法是分离的关键。

应根据样品特性选择适当的溶剂进行溶解，并确保进样量适中。

过高的样品浓度可能导致柱子堵塞或在检测器中引起峰形变。

4.良好的柱温控制：-柱温的控制对于提高分离效果和重现性至关重要。

柱子的工作温度应控制在恒定的范围内，以减小流动相的变化对结果的影响。

5.流速控制：-流速对分离时间、峰形和峰分离度有很大影响。

根据分析要求和实验条件选择合适的流速。

过高的流速可能导致峰形变差，而过低的流速可能导致分离不完全。

6.运行条件的优化：-运行条件的优化对提高方法的灵敏度和分离效果至关重要。

可以通过调整流动相的成分、柱温、流速等参数来优化方法。

试验不同条件，并选择最适合的条件。

7.检测器使用和校准：-液相色谱中常用的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。

使用检测器时，注意校准和灵敏度调整。

8.数据分析和结果解释：-得到的色谱图需要进行数据分析和结果解释。

尽可能使用专业的数据分析软件进行峰面积的计算和样品的定量分析。

常见问题处理方法：1.噪声问题：-噪声问题可能由仪器本身的电子噪声或环境噪声引起。

可以尝试提高信号峰值，调整积分时间或使用峰值选定的方法来处理噪声。

2.色谱峰形变差：-色谱峰形变差可能是由于流动相成分变化、柱子老化或柱温不稳定引起的。

可以尝试更换柱子、重新配置流动相、调整柱温或优化运行条件来解决此问题。

HPLC(硬件)的日常注意事项

HPLC（硬件）的日常注意事项1.流动相溶剂的选择和使用上的注意事项：使用PEEK树脂配管时,因浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃（THF）、二氯甲烷、氯仿、二甲化砜（DMSO）等溶剂可使PEEK树脂强度变差,配管容易破裂使溶剂外溅,因此请勿使用。

（注：用于确认梯度等性能时，短时间使用浓度在0.5%以下的低浓度丙酮水溶液没有问题。

）流动相溶剂应选择HPLC用溶剂，或以此为标准的溶剂，使用前用过滤器（0.45μm以下）清除微粒或灰尘。

KCI、NaCI、NH4、CI等含有卤素离子的溶剂，或经反应产生卤素离子的溶剂，对配管的不锈钢材料有腐蚀作用，须尽量避免使用。

非使用不可时，分析完了后，应立即用蒸馏水把全流路清洗干净。

用于高敏度检测器时，使用UV吸收性小的HPLC用溶剂作为流动相溶剂。

流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力、温度变化时容易产生大量气泡，会导致泵错误动作，检测器产生噪声信号等。

2.HPLC（硬件）的日常注意事项：用HPLC进行分析时，即使装置无故障，有时也会无法做准确的分析。

分析前做检查，可防患于未然。

为此，将平时须注意的事项，做以下简要介绍。

2.1启动前的检查（1）流动相的制备及与装置的相适应：✧流动相必须经过过滤在送液泵内，为防止杂质（固体）进入流路，装有吸滤器，但网眼孔径为10微米，比此更小的颗粒仍可通过。

这会导致流路和柱堵塞和污染。

为此，建议采用0.45微米的隔膜过滤器。

✧流动相恢复到室温后使用流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定（特别是发生漂移），容易产生气泡等现象。

水与有机溶剂混合时，混合液的温度变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。

✧务必进行脱气在装置系统上安装脱气装置，虽然并非完全必要，但使用HPLC时遇到的最大麻烦是产生气泡，这会引起泵输液不畅或检测器产生噪声。

✧更换液体时应注意事项1）更换具有互溶性的流动相时：○1准备更换的流动相放在清洁的烧杯中备用。

HPLC使用注意事项及HPLC柱子使用经验之谈

HPLC使用注意事项及HPLC柱子使用经验之谈(zhuan)HPLC使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。

2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。

对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。

5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。

6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。

7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。

8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。

清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。

9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。

11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。

更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

高效液相色谱常见故障的断定及解决诊状可能的原因解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相PH值保持在3"7.5检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分*1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。