临床医学检验技士考试辅导之2019年检验技士精选体验课

2019年检验技士精选体验课四、血液涂片制备一张良好的血片①厚薄适宜②头体尾明显③细胞分布均匀④血膜边缘整齐⑤并留有一定空隙血涂片的制备①手工推片法25°～30°夹角血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容。

②厚血膜涂片法疟原虫、微丝蚴等。

五、血液细胞染色瑞氏染色法1.染料组成染料组成-酸性染料伊红（E）钠盐阴离子＋碱性染料亚甲蓝（M）氯盐阳离子将适量伊红、亚甲蓝溶解在甲醇中。

甲醇的作用：一是溶解亚甲蓝和伊红；二是固定细胞形态。

2.染色原理物理吸附与化学亲和作用-③中性颗粒呈等电状态与E+和M结合→淡紫红色④红细胞原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

3.pH值的影响细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色。

-①pH＜pI→Pr带正电荷多→易与E结合→染色偏红+②pH＞pI→Pr带负电荷多→易与M结合→染色偏蓝磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8）保证细胞受色时恒定最佳pH条件4.注意事项（1）血涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

（2）冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以防染料沉着在血涂片上。

冲洗时间不能过久，以防脱色。

如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。

（3）染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。

染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

六、方法学评价1.血涂片制备第2页2. 血液细胞染色瑞氏染色法：最经典、最常用。

对于细胞质成分、中性颗粒等可获得很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差。

吉姆萨染色法：对细胞核、寄生虫（如疟原虫等）着色较好，结构更清晰，但对细胞质成分的着色能力略差。

瑞- 吉姆萨复合染色：使细胞胞质、颗粒、胞核等均获得满意的染色效果。

瑞氏染料的质量规格用吸光度比值（rA）来评价。

新配制染料rA 接近2，降到（ 1.3 ±0.1 ）染料即可使用。

新鲜配制的染料偏碱，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待亚甲蓝逐渐变为天青B，贮存时间愈久，染色效果愈好。

在贮存过程中，必须加塞，以防甲醇挥发和氧化成甲酸。

所用甲醇须为AR级，若其中含过多丙酮，会使染色偏酸，白细胞着色不良。

七、质量控制2. 血涂片制备血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之则愈薄。

血细胞比容增高、血液黏度较高时，采用小血滴、小角度、慢推；血细胞比容减低、血液较稀时，应采用大血滴、大角度、快推。

3. 血液细胞染色染色深浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH值密切相关。

血清与血浆的区别是A. 血清缺少某些凝血因子B. 血浆缺少某些凝血因子C.血清缺少凝血酶D.血浆缺少凝血酶E. 血清缺少纤维蛋白『正确答案』 A『答案解析』血清与血浆的差别是：血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。

婴幼儿做血常规检查时，多使用的采血部位是A. 颈外静脉B. 耳垂毛细血管C.足跟毛细血管D.肘部静脉E. 以上都是『正确答案』 C『答案解析』手指采血操作方便，检查结果比较恒定，世界卫生组织（WHO）推荐采集左手无名指指端内侧血液，婴幼儿可采集大踇趾或足跟内外侧缘血液，严重烧伤患者，可选择皮肤完整处采血。

下列说法错误的是A. 采血前要仔细检查针头是否安装牢固B. 采血前要仔细检查针筒内是否有空气和水分C.使针头与皮肤成30°角斜行快速刺入皮肤D.抽血时针栓可以外抽和内推E. 取下注射器针头，将血液沿试管壁缓缓注入抗凝管中『正确答案』 D『答案解析』抽血时只能外抽，不能内推。

导致溶血的因素不包括A. 抽血速度太快B. 血液注入容器时未取下针头C.注入抗凝管后剧烈振荡混匀D.注射器干燥E. 取血后直接放入4℃冰箱『正确答案』 D『答案解析』注射器中有水会导致溶血，干燥不会。

血液标本4℃保存，可使血液分析仪A. 红细胞计数结果减低B. 红细胞分布宽度增加C.血小板计数结果增加D.血小板计数结果减低E. 白细胞计数结果减低『正确答案』 D『答案解析』血浆在4℃保存24h 后，某些凝血因子活性减少95%，低温（4℃）保存血液可使血小板计数结果减低。

影响血涂片时血膜厚度的因素有A. 血滴大小B. 血黏度高低C.推片角度D.推片速度E. 以上都是『正确答案』 E『答案解析』制备涂片时，血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之则愈薄。

血细胞比容增高、血液黏度较高时，应采用小血滴、小角度、慢推，可得满意结果；血细胞比容减低、血液较稀时，应采用大血滴、大角度、快推。

瑞氏染色中起溶解作用的有机溶剂是A. 无水乙醇B. 甲醇C.氯仿D.二甲苯E. 乙二醇『正确答案』 B『答案解析』瑞氏染色中甲醇的作用：一是溶解亚甲蓝和伊红；二是固定细胞形态。

下列有关瑞氏染色法的叙述中，哪项是正确的A. 是酸性染料亚甲蓝和碱性染料伊红组合的复合染料B. 细胞核被染成红色C.新鲜配制的染料可以马上使用D.对细胞的染色原理仅有正负电荷的作用E. 是血涂片染色最常用的方法『正确答案』 E『答案解析』瑞氏染色法：是最经典、最常用的血涂片染色方法。

对于细胞质成分、中性颗粒等可获得很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差。

第一节抗原抗体反应的原理抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。

除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。

一、抗原抗体结合力抗原抗体是一种非共价结合，不形成共价键。

5. 静电引力（库伦引力）：是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力，这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。

两个电荷距离越近，静电引力越大。

6. 范德华力：这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时，两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。

这种引力的能量小于静电引力。

7. 氢键结合力：是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。

其结合力较强于范德华引力。

8. 疏水作用：最强。

水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。

二、抗原抗体的亲和性和亲合力亲和性指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相适应而存在的引力，它是抗原抗体间固有的结合力。

亲和性用平衡常数K 来表示，K 值越大，亲和性越强，与抗原结合也越牢固。

抗体的亲合力指抗体结合部位与抗原表位间结合的强度，与抗体结合价、抗体的亲和性、抗原有效表位数目等相关。

三、亲水胶体转化为疏水胶体抗体和大多数的抗原同属蛋白质，在通常的血清学反应条件下带有负电荷，形成水化层，成为新水胶体，因此，蛋白质分子不会相互凝集或沉淀。

当抗原与抗体结合，使其表面电荷减少，水化层变薄，失去亲水性能，抗原抗体复合物成为疏水胶体。

在电解质作用下，胶体粒子表面的电荷被中和，使疏水胶体进一步靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。

第二节抗原抗体反应的特点一、特异性抗原表位与抗体超变区结合的特异性，是两者在化学结构和空间构型上呈互补关系所决定的。

这一特性，是应用于临床诊断的基础。

但某些天然抗原具有多种抗原表位，与另一物质可能有共同抗原表位，对检验结果产生交叉反应。

二、可逆性抗原抗体是非共价结合，故不牢固，是一种动态平衡过程。

抗原抗体的亲合力及反应条件（如离子强度、pH等）可影响解离。

亲和层析法就是利用这个原理来纯化抗原或抗体。

三、比例性抗原抗体比例合适时，沉淀物形成快而多，称为抗原抗体反应的等价带；若抗原或抗体极度过剩则无沉淀形成，称为带现象，抗体过量时，称为前带，抗原过量时，称为后带。

四、阶段性抗原抗体反应可分为两个阶段。

第一阶段：抗原与抗体特异性结合阶段，此阶段仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应。

第二阶段：可见反应阶段，此阶段需要数分钟至数小时。

反应过程受到反应条件（如温度、pH、电解质、抗原抗体比例等）的影响。

第三节影响抗原抗体反应的因素一、反应物自身因素9. 抗体：浓度、特异性、亲和性和等价带的宽窄都影响抗原抗体反应。

应选择高特异性、高亲合力的抗体作为诊断试剂。

但单克隆抗体不适用于沉淀反应。

10. 抗原：理化性状、分子量、抗原表位的种类及数目均可影响反应结果。

颗粒性抗原出现凝集反应，可溶性抗原出现沉淀反应，单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。

二、环境因素4. 电解质：抗原抗体反应时常用0.85%NaCl 或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。

5. 酸碱度：抗原抗体反应一般在pH6～9 之间进行。

6. 温度：一般为15～40℃，常用反应温度为37℃，如高于56℃，可导致已结合的抗原抗体解离，甚至变性或破坏。

7. 振荡：适当振荡也可加速反应。

第四节免疫学检测技术的类型免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应。

早期包括：凝集现象、沉淀现象、溶血现象等。

免疫组织化学技术、免疫测定、放射免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、化学发光免疫技术和金免疫技术等。

抗原抗体反应不包括A. 特异性B. 比例性C.可逆性D.多价性E. 电离性『正确答案』 E『答案解析』抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性和阶段性。

可以用已知抗原或抗体检测相应的抗体或抗原，是由于抗原抗体反应的A. 特异性B. 比例性C.可逆性D.多价性E. 电离性『正确答案』 A『答案解析』抗原抗体的特异性指的是抗原表位与抗体超变区结合的特异性，是两者在化学结构和空间构型上呈互补关系所决定的。

抗原抗体反应需要合适的温度才有利于二者结合，其范围一般为A.4～10℃B.11 ～15℃C.16～20℃D.15～40℃E.41 ～50℃『正确答案』 D『答案解析』抗原抗体反应的温度一般为15～40℃，常用反应温度为37℃，如高于56℃，可导致已结合的抗原抗体解离，甚至变性或破坏。

不是影响抗原抗体反应的因素是A. 温度B. 电解质C.pHD.适当振荡E. 隔绝空气『正确答案』 E『答案解析』影响抗原抗体反应的因素：①反应物自身因素：抗体、抗原。

②环境因素：电解质、酸碱度、温度、振荡。

不属于抗原抗体反应的是A.PCR技术B. 免疫电泳技术C.酶联免疫技术D.免疫比浊技术E. 放射免疫技术『正确答案』 A『答案解析』聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。