Dot-ELISA和RT-PCR检测南方水稻黑条矮缩病毒灵敏度的比较

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实践报告---实验篇(南方水稻黑条矮缩病)

暑假实践报告利用今年暑假的时间，我和几个同学一起参与的老师带领的科技创新实验。

实验的课题是南方水稻黑条矮缩病毒等温扩增检测技术的研究。

我们要进行的研究就是简单化南方水稻黑条矮缩病毒检测的方法，把现今耗费资金，条件苛刻的检测方法简化为相对实惠，条件宽松的实验方法。

也就是实现核酸的等温扩增。

把从植物、昆虫，主要就是水稻和白背飞虱中提取出RNA，在一定条件下进行反转录转化为cDNA后的等温扩增。

在实验开始的阶段，我们依然是使用已经比较成熟的PCR扩增技术进行目标片段的扩增与检测。

首先，我们进行目标片段的提取，也就是从植物的中提取出dRNA。

我们首先在液氮的环境下把植物研磨成粉末，再在STE缓冲液与水饱和酚的作用下裂解植物细胞，并且将植物细胞中的RNA游离出来，经过提纯液体后，使用酚-氯仿-异戊醇的混合液洗涤RNA，再用纤维素沉淀RNA。

再经过一系列的用乙醇洗涤与提纯，干燥后，我们就能获得相对纯的RNA样本。

在试验的开始阶段，我们的目的是熟悉实验的操作，因此我们还是使用调节苛刻的PCR 扩增的方法进行病毒检测。

在没有使用等温扩增的时期，我们的熟悉实验的流程，同时也熟悉各个仪器的操作方法和实验的目的、目标。

提纯过后的我们使用PCR 和电泳观察目标片段的方法来检测是否带有病毒。

在进行过一段时间的PCR扩增后，我们开始使用等温扩增的技术开始对核酸进行扩增月检测。

在这次我们进行的是总RNA的提取，使用Trizol液体进行总RNA的提取相对以前使用的方法来说简便了很多。

因为Trizol本来就是提取总RNA使用的，因此在使用它后，我们的工作也就仅仅是剩余对RNA的提纯与清洗。

我们将提取出的总RNA进行电泳，查看是否提取出了目标片段后，就开始进行我们实验的最终目的，检测等温扩增技术使用的效果。

在众多的等温扩增技术中，我们选择的是环介等温扩增，也就是LAMP。

和PCR不同的是，等温扩增需要更多的时间，但是不需要PCR过程中的变温过程。

南方水稻黑条矮缩病综合防治的策略和配套技术

位分枝，节部有倒生不定根（生根）上部叶茎气，
片近基部叶面可见凹凸不平的皱褶，发病初期叶背面的叶脉和茎杆上有蜡泪状大小约１ｍ－２ｍ的
等害虫进行传播。株本身不相互传毒，子也病种不带毒，白背飞虱介体在病株上吸食汁液获得病毒后，终身带毒传播，不会经卵传到下一代。但
作者简介：圣河，刘农艺师，一直从事植保植检工作。
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２１年第４０１期总第１６期２
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产资料，多蔬、享等方式提高预报准确性，共正确指导本地防治。
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高度感病，应缩短间隔期，加用药次数，注意增要
福建农林大学谢联辉院士在防控技术上提
出了 “ ＋， “ 、、、、、、、加８２即水肥土种密保管工” ’
交替用药，延缓白背飞虱产生抗药性。４２３科学用药，护自然生态平衡．．保选用农药时应注意长效与速效相结合，选择高效、低毒的对口农药，防止环境污染，护农田保自然生态平衡。经多年的田间试验示范，介绍现
本田初期染病的稻株，明显矮缩（为正常约株高１）上部数片叶的叶枕重叠，叶破下叶／，２心叶鞘而出，或呈螺旋状伸出，叶片短而僵直，叶尖略有扭曲畸形，主茎和早期分蘖尚能抽穗，但结实率低或包穗、小，穗似侏儒病。

普通水稻黑条矮缩病毒的RT-PCR检测方法[发明专利]

专利名称：普通水稻黑条矮缩病毒的RT-PCR检测方法专利类型：发明专利
发明人：高必达
申请号：CN200910254294.X
申请日：20091209
公开号：CN101713000A
公开日：
20100526
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种普通水稻黑条矮缩病毒(rice black streaked dwarfvirus，RBSDV)的RT-PCR检测方法，所使用的一对引物是RBSDV第一段RNA特异的，是利用病毒核苷酸序列进化的保守性，从NCBI 搜索并下载RBSDV第一段RNA及相近病毒第一段RNA的核苷酸序列，运用MEGA4.0软件对这些序列进行比对，从mas文件中找出不同研究者报告的RBSDV核苷酸序列所共有而其它病毒序列均与之不同的引物候选区。

经BLAST结果表明，与引物1和引物2能100％覆盖且100％相同序列的全部是RBSDV 核苷酸序列。

用这对引物对RBSDV与SRBSDV病毒作RT-PCR，能将RBSDV与SRBSDV两种病毒准确的区分开来。

申请人：湖南农业大学
地址：410128 湖南省长沙市芙蓉区农大路1号
国籍：CN
代理机构：长沙正奇专利事务所有限责任公司
代理人：何为
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山东水稻黑条矮缩病毒dsRNA提取与RT-PCR检测研究

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水稻黑条矮缩病毒的RT—PCR检测

９０年代以来，病又迅速回升流行该呼肠孤病毒科（８。该病毒属１）济病毒属（ｖ衄）有斐ｉ，
接种２，４ｈ连续接种４次，共接４０棵苗。将接种过８
的水稻对号移栽到防虫网室中。对号收集最后成活的４０头灰飞虱，于一３ ℃冰箱内，为Ｒ－Ｅ置ｏ作ＴＰＲ昆虫检测材料。并将检测结果与相应的水稻植株发病情况进行比较。同时取４０头未饲毒的灰飞虱作为
维普资讯
浙江农业学报Ａａａ
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水稻黑条矮缩病毒的Ｒ．ＣＴＰＲ检测
吕永平，雷娟利，金登迪，陈声祥（江农科院病实室浙州３）浙省业学毒验江杭１￣１
一
从浙江省仙居县下各镇病区采集水稻病株３棵
作为实验材料，以网室里的健康水稻植株作为对照。１２带毒虫．
般减产１％一４００％，病田甚至颗粒无收 ’ 。重
取１ —２龄无毒灰飞虱若虫，在表现典型症状的
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ELISA法和荧光定量RT-PCR在登革热病毒感染早期检测中的差异对比

ELISA法和荧光定量RT-PCR在登革热病毒感染早期检测中的差异对比登革热是由登革热病毒传播而引起的疾病，是一种由病毒感染引起的急性传染性疾病。

登革热病毒主要通过蚊子叮咬传播，是全球性的公共卫生问题，尤其是在亚洲、南美和非洲地区。

由于登革热病毒感染早期症状不明显，因此对其进行早期检测非常关键。

ELISA法和荧光定量RT-PCR是目前常用的病毒感染早期检测方法，本文将对这两种方法进行差异对比，以期为登革热病毒感染早期检测提供参考。

ELISA法是一种酶联免疫吸附测定法，它通过酶标记的抗体与被测物结合，再通过底物的转化得出定量结果。

ELISA法的特点是操作简便、成本低廉、检测时间短、灵敏度较高，可以同时检测多个样本。

ELISA法在登革热病毒感染早期检测中被广泛应用。

ELISA法也存在一些局限性，如特异性不高、受干扰因素影响大、无法区分活病毒和死病毒等。

而荧光定量RT-PCR是一种核酸检测技术，利用病毒RNA进行扩增，通过荧光信号来定量检测病毒量。

荧光定量RT-PCR的特点是灵敏度高、特异性强、可靠性好，可以准确检测病毒感染的早期。

荧光定量RT-PCR还可以实现对病毒基因型的鉴定，对登革热病毒感染的早期诊断提供了更加精准的方法。

荧光定量RT-PCR也存在一些局限性，如设备昂贵、操作技术要求高、耗时较长等。

通过对ELISA法和荧光定量RT-PCR的差异对比，我们可以看出两种方法各有优势，ELISA法简便快捷、成本低廉，适合用于大规模筛查和流行病学调查；而荧光定量RT-PCR灵敏度高、特异性强，适合用于病毒定量和基因型鉴定。

在登革热病毒感染早期检测中，可以根据实际情况选择合适的方法进行检测，使诊断更加准确、有效。

随着生物技术的不断发展，病毒感染早期检测方法也在不断革新和完善。

近年来出现的免疫芯片技术、纳米技术等，都为登革热病毒感染早期检测提供了新的可能。

这些新技术的出现，将进一步提高病毒感染早期诊断的灵敏度、特异性和可靠性，为疾病的早期诊断和治疗提供更加有效的手段。

不同水稻品种对黑条矮缩病的抗性比较试验-2019年文档

不同水稻品种对黑条矮缩病的抗性比较试验水稻黑条矮缩病是由灰飞虱传播的一种病毒病，近年来由于麦田灰飞虱的发生量一直居高不下，且带毒率稳中有升，导致灌南县水稻罹患该病的面积逐年扩大，已取代水稻条纹叶枯病成为威胁全县水稻生产安全的第一病毒病[1-2]。

而防治水稻条纹叶枯病的实践表明，防治病毒病最好的方法是应用抗病品种，其具有高效、节本、易为农民接受等优点。

因此安排了本次试验，希望能够筛选出理想的品种，在全县推广应用。

1 材料与方法1.1 试验概况供试水稻选择目前灌南县水稻生产上应用面积较大的9个品种，分别为连粳3号（优系）、徐稻5号、徐稻3号、泗稻12号、连粳2号、连粳6号、连粳7号、武连粳1号、连嘉粳1号（优系），以及对照感病品种武运粳21。

试验地设在新安镇曹庄村一农户的承包田中，经检测麦田中越冬代灰飞虱的黑条矮缩病病毒带毒率为6%。

1.2 试验方法试验共设10个处理，即每个品种为1个处理，以武运粳21作对照（CK）。

重复3次，随机区组排列，每个品种秧田面积6.7 m2，共计20 m2。

于5月11日应用18%杀螟·咪鲜可湿性粉剂浸种72 h后于5月14日播种，育秧为传统水育方式。

并于6月17日将同一品种3个小区的秧苗混合后，采用人工以每穴单本栽插方式移入本田。

水稻秧田期及本田拔节前均不使用对灰飞虱及黑条矮缩病毒有防治效果的药剂，其他病虫害防治同大田，拔节后病虫防治与周围田块一致[3-4]。

秧田、大田其他管理如施肥、灌排水等与正常栽培相同。

移栽后于6月23日以14%乙·苄可湿性粉剂750 g/hm2拌尿素150 kg/hm2撒施以控制田间杂草，后期施肥与病虫害防治等同于普通大田。

1.3 调查内容与方法秧田自水稻灰飞虱迁入之日起，每隔3 d进行1次田间灰飞虱虫量调查，直到移栽完毕；大田于水稻分蘖盛末期调查各个小区发病情况，每个小区对角线5点取样，每点查10穴，记载病穴率、病株率[5-6]。

南方水稻黑条矮缩病发生特点及防治措施

南方水稻黑条矮缩病发生特点及防治措施南方水稻黑条矮缩病是由水稻黑条矮缩病毒引起的一种病害，主要分布在我国的南方水稻种植区域，如江南、浙闽、湘鄂赣、粤桂等地。

这种病害发生的主要特点包括以下几个方面。

1. 发病季节和症状南方水稻黑条矮缩病在夏季和秋季多发，主要表现为苗期叶片出现黄斑和白斑，成熟期水稻植株出现矮缩、叶色变黄，垂死或死亡。

叶片上出现的黄斑和白斑常常呈现椭圆形或扇形，形状不规则。

有些叶片上还会出现条纹状或环状的黄斑，严重的会导致叶片褪绿，萎缩变形。

2. 病害传播途径南方水稻黑条矮缩病毒的传播途径主要包括昆虫、种子和土壤。

病毒可以通过叶蝉、蝗虫、蚜虫等吸食植株汁液时传播，也可以通过种子传播。

在土壤中，病毒可以通过残株、杂草等植物残体传播。

3. 防治措施（1）优选品种通过选育耐病品种来控制南方水稻黑条矮缩病的发生，这是一种有效的控制手段。

应选择适应本地气候和生态条件的品种，同时要注意其病害耐病性。

（2）病害监测与药剂防治定期巡查田间病情，及时发现病害发生，对有病株进行及时清除，防止病毒传播。

同时，在病害高发期，进行药剂防治，使用病毒抑制剂、除草剂等农药对南方水稻黑条矮缩病进行防治。

（3）田间管理南方水稻黑条矮缩病的病原菌多依靠中介宿主昆虫传播，因此要注意田间卫生，加强农田周围的清理，清除枯草落叶等病源和中介宿主昆虫，保持田间清洁卫生。

（4）土壤处理运用合理的土壤处理方法，如消毒、轮作、深耕、灭草等方法进行土壤管理，防止病害在土壤中传播和侵染。

总之，针对南方水稻黑条矮缩病的防治措施，需要多方面发力，在品种选育、田间管理、药剂防治、土壤处理等方面进行综合治理，以减少病害的发生和传播，保障水稻生产的稳定和健康。

广西南方水稻黑条矮缩病毒及水稻齿叶矮缩病毒的分子检测

广西南方水稻黑条矮缩病毒及水稻齿叶矮缩病毒的分子检测刘红艳;章友爱;廖咏梅;李子玲;王凯学;陈保善【摘要】[Objective] The current research was conducted to explore molecular biological methods for detecting southern rice black-streaked dwarf virus (SRBSDV) and rice ragged stunt vims (RRSV), understand the distribution of two viruses in Guangxi, and lay the foundation for controlling the two viruses in production. [Method]RT-PCR technique was used to detect the two viruses from rice, weeds and vector insects samples gathered from different regions of Guangxi. Fibrous cellulose powder (CF-11) was used to extract dsRNA from rice leaves and stems. dsRNA electrophoregram was observed on 1.5% agarose gel under ultraviolet light. [Result]A 850 bp sequence of SRBSDV was obtained from rice, Echinochloa cwsgalli, Miscanthus fioridulus, Leersia hexandra and Sogatella furciferu by RT-PCR, and a 700 bp sequence of RRSV from rice and Nihparvata higens. SRBSDV was detected from Miscanthus Qoriduius and Leersia hexandra for the first time. Eight bands of dsRNA were delected from rice infected by SRBSDV alone and by both SRBSDV and RRSV, but the sizes of dsRNA hands were different. Five bands of dsRNA were detected from rice infected by RRSV. A-mong the detected 181 rice samples from different regions of Guangxi, excepl rice samples from Beihai, Guigang and Wuzhou, SRBSDV were detected and reached 44.8 percent of the total samples. Except rice samples from Hezhou, Guigang, Yulin, Laibin and Wuzhou, RRSV were detected and reached 21.5 percent of the totalsamples, in which 11.0% of rice samples were infected by both SRBSDV and RRSV. [Conclusion]The special primer designed could be used in RT-PCR to detect SRBSDV and RRSV. dsRNA extracted from rice samples could rapidly and visually identify rice samples infected by SRBSDV, RRSV or both. Thanks to the designed special primer, two new hosts to SRBSDV. Mis-canfhus floridulu (Labnll.) Warb and Leersia hexandra, were discovered for the very first time.%[目的]探索南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)和水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)的分子检测技术,了解两种病毒在广西的分布,为生产上开展两种病害的防治奠定基础.[方法]用RT-PCR技术检测采自广西各地的水稻、杂草及稻飞虱样品；用CF-11纤维素粉提取水稻茎叶组织中的dsRNA,1.5％琼脂糖凝胶电泳观察dsRNA图谱.[结果]从水稻、稗草、五节芒、李氏禾和白背飞虱样品中获得850 bp左右的SRBSDV序列,从水稻和褐飞虱样品中获得700 bp左右的RRSV 序列；首次从五节芒和李氏禾中检测到SRBSDV.SRBSDV单独侵染、SRBSDV和RRSV复合侵染可见8条dsRNA条带,但带谱不一致；RRSV单独侵染可见5条dsRNA带.在供检测的181株水稻样品中,除了来自北海、贵港和梧州市的水稻样品外,其余样品均检测到SRBSDV；除了来白梧州、贺州、玉林、贵港和来宾的水稻样品外,其余样品均检测出RRSV;其中带SRBSDV的样品数占44.8％,带RRSV 的样品占21.5％,两种病毒复合感染占11.0％.[结论]研究设计的特异性引物能用于RT-PCR检测SRBSDV和RRSV、水稻样品提取dsRNA能快速直观地鉴定SRBSDV、RRSV单独感染及混合感染水稻.用设计的引物首次检测出SRBSDV的两种新寄主五节芒和李氏禾.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2012(043)007【总页数】6页(P955-960)【关键词】南方水稻黑条矮缩病毒;水稻齿叶矮缩病毒;RT-PCR;dsRNA;广西【作者】刘红艳;章友爱;廖咏梅;李子玲;王凯学;陈保善【作者单位】广西大学农学院,南宁530005;广西亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁530005;广西大学农学院,南宁530005;广西亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁530005;广西大学农学院,南宁530005;广西亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁530005;广西大学农学院,南宁530005;广西植保总站,南宁530022;广西亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁530005;广西大学生命科学与技术学院,南宁530005【正文语种】中文【中图分类】S435.111.490 引言【研究意义】南方水稻黑条矮缩病和水稻齿叶矮缩病近年来在广西局部地区发生严重，2009年全区发生面积达11673.33 ha（李莉等，2011），染病植株矮化、叶片深绿扭曲、迟抽穗或不抽穗，个别田块病丛率达80%，甚至绝收，对产量影响极大（卢百关等，2011）。

江西省南方水稻黑条矮缩病发生情况及防治建议

江西省南方水稻黑条矮缩病发生情况及防治建议潘华;程奀莲;钟玲;陈齐信;李湘民【摘要】The paper introduced the biological characteristics of southern rice black-streaked dwarf virus (SRBSDV), and the occurrence and forecast of SRBSDV in Jiangxi Province. Then the paper also put forward suggestions of control measures against the disease.%由斐济病毒属（Fijivirus）暂定新种南方水稻黑条矮缩病毒（southern rice black-streaked dwarf virus， SRBSDV）引起的水稻矮缩病，自2001年在广东省阳西县被华南农业大学周国辉教授等人鉴定发现以来，已迅速扩散至我国南方广大稻区。

2009年，该病害在我国南部及越南晚季稻上暴发成灾，造成严重的产量损失。

通过对南方水稻黑条矮缩病毒的生物学特性、近几年在江西的发生、预测预报情况进行综述，提出了该病的综合防治技术措施，以期为江西省南方水稻黑条矮缩病的发生及防治提供参考。

【期刊名称】《生物灾害科学》【年(卷),期】2014(000)001【总页数】4页(P83-86)【关键词】南方水稻黑条矮缩病;预测预报;综合防治【作者】潘华;程奀莲;钟玲;陈齐信;李湘民【作者单位】江西省农业技术推广总站，江西南昌 330046;江西省横峰县植保植检站，江西横峰 334300;江西省植保植检局，江西南昌 330096;九江市植保植检局，江西九江 332000;江西省农业科学院植物保护研究所，江西南昌 330200【正文语种】中文【中图分类】S435.1111 南方水稻黑条矮缩病毒的生物学特性及其危害南方水稻黑条矮缩病毒（southern rice black-streaked dwarf virus，SRBSDV）是由我国科学工作者首先发现，并经华南农业大学周国辉教授等人鉴定和命名的为害农作物的病毒新种，属呼肠孤病毒科（Reoviridae）斐济病毒属（Fijivirus）[1-3]。

江苏水稻黑条矮缩病病毒的RT-PCR分析和快速检测

江苏水稻黑条矮缩病病毒的RT-PCR分析和快速检测杨杰;王军;周彤;陈志德;仲维功【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2008(023)006【摘要】为了明确江苏新发生的矮缩病害为水稻黑条矮缩病,采用RT-PCR和序列测定方法对其病原进行了精确鉴定.根据水稻黑条矮缩病病毒基因组序列的信息,设计扩增RNA聚合酶基因、外壳蛋白基因和RNA沉默抑制子基因以及核心蛋白基因部分编码区的4对引物,提取感染水稻黑条矮缩病病毒的水稻植株总RNA并进行RT-PCR扩增,可以在感病植株中分别扩增出水稻黑条矮缩病病毒基因组特有的4个条带,测序结果表明,来源于江苏南京的分离物的4个基因部分编码片段与已登录的对应基因片段核苷酸序列同源性达99% 以上,共发现7个碱基的突变.经生物信息学分析发现7个单碱基突变都是同义突变,氨基酸序列没有改变.根据以上结果确认该病病原为水稻黑条矮缩病病毒.利用该方法可以对水稻和其他寄主进行早期病毒检测.【总页数】6页(P87-92)【作者】杨杰;王军;周彤;陈志德;仲维功【作者单位】江苏省农业科学院,粮食作物研究所,江苏,南京,210014;江苏省农业科学院,粮食作物研究所,江苏,南京,210014;江苏省农业科学院,植物保护研究所,江苏,南京,210014;江苏省农业科学院,粮食作物研究所,江苏,南京,210014;江苏省农业科学院,粮食作物研究所,江苏,南京,210014【正文语种】中文【中图分类】S432.4+1【相关文献】1.双重RT-PCR法同时快速检测南方水稻黑条矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒 [J], 孙晓棠;崔汝强;贺浩华;欧阳林娟;胡丽芳;彭小松;陈小荣;朱昌兰2.Dot-ELISA和RT-PCR检测南方水稻黑条矮缩病毒灵敏度的比较 [J], 刘珊珊;周倩;高必达;李有志;张政斌;郭海明3.水稻黑条矮缩病毒的RT-PCR检测 [J], 吕永平;雷娟利;金登迪;陈声祥4.山东水稻黑条矮缩病毒dsRNA提取与RT-PCR检测研究 [J], 徐建第;吴修;张全芳;马加清;陈峰;杨连群5.应用RT-PCR、斑点杂交法和SDS-PAGE检测水稻黑条矮缩病毒 [J], 王朝辉;周益军;范永坚;薛宝娣;吴淑华;程兆榜;张文荟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

单头灰飞虱体内两种水稻病毒的双重一步法 RT-PCR检测

单头灰飞虱体内两种水稻病毒的双重一步法 RT-PCR检测李俊敏;周燕茹;孙宗涛;王旭;谢礼;陈剑平【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2014(000)002【摘要】灰飞虱传播的水稻条纹病毒（Rice stripe virus， RSV）和水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus， RBSDV）是危害我国水稻生产最主要的2种病毒，建立灰飞虱体内RSV和RBSDV快速、可靠的检测方法是水稻生产中的重要问题。

本研究根据RSV RNA3和RBSDV S10序列分别设计了2个病毒的特异性引物，通过退火温度和PCR循环数等条件的优化，建立了灰飞虱体内RSV和RBSDV快速鉴定的双重一步法RT-PCR体系。

对一步法和两步法RT-PCR 检测结果进行比较，表明2种方法均能准确有效鉴定灰飞虱体内的2种病毒，且两步法的检测效果略好于一步法。

而灵敏度实验表明一步法RT-PCR可以从0.005 ng・μL-1的灰飞虱RNA初始模板中准确检测到病毒，完全满足单头灰飞虱体内病毒检测的需要。

应用本研究建立的双重一步法RT-PCR体系对200头获毒灰飞虱样品中的RSV和RBSDV进行了检测，结果进一步证实了此方法的稳定性和可靠性。

【总页数】6页(P378-383)【作者】李俊敏;周燕茹;孙宗涛;王旭;谢礼;陈剑平【作者单位】浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地，农业部植保生物技术重点实验室，浙江省植物病毒学重点实验室，浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所，浙江杭州 310021;浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地，农业部植保生物技术重点实验室，浙江省植物病毒学重点实验室，浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所，浙江杭州 310021; 浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华 321004;浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地，农业部植保生物技术重点实验室，浙江省植物病毒学重点实验室，浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所，浙江杭州 310021;浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地，农业部植保生物技术重点实验室，浙江省植物病毒学重点实验室，浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所，浙江杭州 310021;浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地，农业部植保生物技术重点实验室，浙江省植物病毒学重点实验室，浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所，浙江杭州 310021;浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地，农业部植保生物技术重点实验室，浙江省植物病毒学重点实验室，浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所，浙江杭州 310021【正文语种】中文【中图分类】S571.1【相关文献】1.从单头灰飞虱中检测水稻黑条矮缩病毒简单快速的方法 [J], 王朝辉;周益军;范永坚;程兆榜;张文荟2.单头灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒的快速检测 [J], 曲志才;沈大棱3.双重一步法RT-PCR同时检测兰花上的两种主要病毒 [J], 周国辉;陈晓琴;李梅辉;周洁浪;唐添华;冯盛祥;郭丽晶;张旺4.应用 RT-PCR 和dot-ELISA 方法检测单头灰飞虱体内水稻条纹病毒 [J], 张水英;蒋春和;兰平秀;张雪峰;李凡5.双重RT-PCR法同步检测单头异沙叶蝉携带的两种小麦病毒 [J], 杜真真; 刘艳; 王锡锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2011年湖南省水稻矮缩病病原的RT-PCR检测和病害分级

2011年湖南省水稻矮缩病病原的RT-PCR检测和病害分级徐志德;李舒;刘建军;刘见平;刘都才;周国辉【期刊名称】《湖南农业科学》【年(卷),期】2013(000)007【摘要】为明确湖南省水稻矮缩病的毒源种类,从湘北常德、湘中长沙和湘南永州三地采集中晚稻水稻秧苗、植株、稻谷等样品,并对其进行了毒源的RT-PCR检测.结果表明:湖南省水稻矮缩病毒源为南方水稻黑条矮缩病毒,所检测样品中没有齿叶矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒.2011年采集的所有水稻秧苗、植株和稻谷样品中南方水稻黑条矮缩病毒检出样品数占有病害症状样品数的23.73％.可以把样品是否具有蜡泪,作为判断南方水稻黑条矮缩病的1个典型症状.其病害危害程度可分为0～4级.【总页数】3页(P82-84)【作者】徐志德;李舒;刘建军;刘见平;刘都才;周国辉【作者单位】湖南省植物保护研究所,湖南长沙410125;华南农业大学资源环境学院,广东广州510642;常德市鼎城区农业局,湖南常德415100;湖南省植物保护研究所,湖南长沙410125;湖南省植物保护研究所,湖南长沙410125;华南农业大学资源环境学院,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】S511【相关文献】1.江苏省近年来新发生的一种水稻矮缩病害病原初步鉴定 [J], 季英华;任春梅;程兆榜;周彤;周益军2.桃树李矮缩病的RT-PCR检测 [J], 蔡志翔;马瑞娟;俞明亮;沈志军;许建兰;张妤艳3.2009年造成湖南省水稻大面积矮缩的是南方水稻黑条矮缩病 [J], 张松柏;张德咏;刘勇;罗香文;成飞雪;彭兆普;马明勇4.水稻矮缩病病原特征分析及防治方法 [J], 朱其美5.应用RT-PCR方法检测水稻植株和介体昆虫体内的水稻齿叶矮缩病毒 [J], 雷娟利;吕永平;金登迪;陈声祥;陈剑平*因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

三种水稻病毒病测报技术规范解读

2 术语与定义
水稻条纹病毒
属纤细病毒属，病毒可在灰飞虱体内增殖，循回期5～21天，潜育期10～25天。
传毒获毒
亲和性植物经介体或其它方式获得病毒的过程。
植物病毒经介体或其它途径，由一植物传至另一植物的过程。
传毒介体
灰飞虱，成虫与若虫皆能传毒，以高龄若虫和羽化初期的雌虫传毒能力最强。
2 术语与定义
南方水稻黑条矮缩病田间发生情况系统调查模式报表
序
1 2 3 4 5 6 7 8
号
报表内容
调查日期田间虫量（头/百丛）田间虫量比上年增减（%）田间虫量比常年增减（%）稻作类型本田病丛率（%）本田病株率（%）填报单位
报表程序
注：此表自田间见病后每月逢1日调查汇报1次。
4 水稻田间发病情况调查
全国水稻病毒病测报技术培训班
三种水稻病毒病的测报技术规范解读
陆明红全国农业技术推广服务中心 2014年6月12日浙江大学
主要内容
南方水稻黑条矮缩病测报技术规范（2013）水稻黑条矮缩病测报技术规范（试行）
水稻条纹叶枯病测报技术规范（2008）
一、南方水稻黑条矮缩病测报技术规范
1 2 3 4 5 6 7 范围术语与定义白背飞虱带毒率调查检测水稻田间发病情况调查数据报送和传输调查资料表册预测预报方法
经卵传毒显症
叶片褪绿，后扩展成与叶脉平行的黄色条纹。水稻感染病毒后一般20天后达显症高峰。
通过介体昆虫的卵而传播病毒，是介体传播病毒的一种方式。
叶片枯心状
叶片褪绿
3 系统调查
3.2 灰飞虱卵量调查
时间：本地灰飞虱成虫高峰后开始调查，每5天调查1次，连续

Dot-ELISA和RT-PCR检测南方水稻黑条矮缩病毒灵敏度的比较

Dot-ELISA和RT-PCR检测南方水稻黑条矮缩病毒灵敏度的比较刘珊珊;周倩;高必达;李有志;张政斌;郭海明【期刊名称】《湖南农业科学》【年(卷),期】2014(000)001【摘要】南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus，SRBSDV）是近年来在我国南方稻区和越南危害严重的一种新病毒，主要由白背飞虱传播，造成水稻大面积减产。

检测田间白背飞虱、杂草和水稻植株的带毒率是南方水稻黑条矮缩病预测预报的基础。

为寻找一种适合大量样本的检测方法，以感染南方水稻黑条矮缩病毒的水稻植株和带毒的白背飞虱为材料，比较了斑点免疫测定法（Dot-ELISA）和反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）两种检测方法的灵敏度。

试验结果表明：RT-PCR技术的检测灵敏度比Dot-ELISA技术检测灵敏度高。

【总页数】4页(P52-54,57)【作者】刘珊珊;周倩;高必达;李有志;张政斌;郭海明【作者单位】湖南农业大学植物保护学院，湖南长沙 410128;湖南农业大学植物保护学院，湖南长沙 410128; 植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室，湖南长沙 410128;湖南农业大学植物保护学院，湖南长沙 410128; 植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室，湖南长沙 410128;湖南农业大学植物保护学院，湖南长沙 410128; 植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室，湖南长沙 410128;湖南省植保植检站，湖南长沙 410005;湖南省植保植检站，湖南长沙 410005【正文语种】中文【中图分类】S432.4【相关文献】1.双重RT-PCR法同时快速检测南方水稻黑条矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒 [J], 孙晓棠;崔汝强;贺浩华;欧阳林娟;胡丽芳;彭小松;陈小荣;朱昌兰2.荧光RT-PCR与普通RT-PCR检测技术的比较 [J], 兰玲;王涛3.应用 RT-PCR 和dot-ELISA 方法检测单头灰飞虱体内水稻条纹病毒 [J], 张水英;蒋春和;兰平秀;张雪峰;李凡4.苹果锈果类病毒的几种提取方法及RT-PCR检测灵敏度的比较 [J], 苏前富;郭瑞;李世访;白容霖;成卓敏5.应用dot-ELISA和RT-PCR法检测玉米花粉中玉米矮花叶病毒的研究 [J], 马占鸿;常胜军;周广和因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

3种水稻病毒检测方法的研究与应用的开题报告

3种水稻病毒检测方法的研究与应用的开题报告摘要：近年来，水稻是我国的主要粮食作物之一，但是由于各种环境影响和病毒的影响，水稻的产量和质量受到了很大的影响。

因此，对水稻病毒进行快速、准确的检测方法的研究和应用十分必要。

本文将对目前水稻病毒检测方法的研究现状进行探讨，并对其中的三种方法进行介绍和比较，包括RT-PCR、ELISA和南方杂交检测法。

最后，本文将对这三种方法的优缺点进行总结，以及未来的发展前景进行展望。

关键词：水稻病毒，快速检测，RT-PCR，ELISA，南方杂交检测法一、研究背景随着经济的快速发展，我国的粮食需求量越来越大，而水稻是中国最为重要的粮食作物之一。

然而水稻种植过程中常常会受到各种疾病的影响，其中病毒病是影响水稻生产的主要因素之一，不仅仅会导致产量和质量上的下降，还会对水稻的品质和安全带来威胁。

因此，对水稻病毒的快速检测是十分必要的。

二、研究现状目前，关于水稻病毒的检测方法主要包括多重PCR（MPCR）、反转录PCR（RT-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和南方杂交检测法等。

这些方法具有检测快速、灵敏度高、检测结果准确等优点，已经在实际生产中得到了广泛应用。

三、RT-PCR检测方法RT-PCR是一种最为常用的水稻病毒检测方法。

通过反转录酶将RNA 转录为cDNA，然后再利用PCR扩增特定的DNA片段，从而判断是否存在水稻病毒。

RT-PCR具有检测快速、检测结果准确、灵敏度高等优点，但是其存在一定的缺陷，比如操作程序较为繁琐、依赖于PCR引物和模板RNA的质量、可能存在特异性问题等。

四、ELISA检测方法ELISA是一种利用特定抗体与病毒抗原特异性反应的技术，常用于水稻病毒的检测。

在ELISA方法中，将抗原标记在微孔板上，然后利用特异性的抗体检测样品中是否存在水稻病毒。

ELISA具有检测快速、灵敏度高、结果易于获取等优点，但是其特异性较差，容易受到外部因素影响，比如温度、湿度等。

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适合大量样本的检测方法，以感染南方水稻黑条矮缩病毒的水稻植株和带毒的白背飞虱为材料，比较了斑点免疫测定法（Ｄｏｔ — ＥＬＩＳＡ）和反转录一
聚合酶链式反应（ＲＴ．ＰＣＲ）两种检测方法的灵敏度。试验结果表明：ＲＴ．ＰＣＲ技术的检测灵敏度ＬＬＤｏｔ－ＥＬＩＳＡ技术检测灵敏度高。
摘要：南方水稻黑条矮缩病毒（Ｓｏｕ￣ｅｍｒｉｃｅｂｌａｃｋ．ｓｔｒｅａｋｅｄｄｗａｒｆｖｉｒｕｓ，ＳＲＢＳＤＶ）是近年来在我国南方稻区和越南危害严重的一种新病毒，
主要由白背飞虱传播，造成水稻大面积减产。检测田间白背飞虱、杂草和水稻植株的带毒率是南方水稻黑条矮缩病预测预报的基础。为寻找一种
｛１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＨＮＡＵ．Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０１２８，ＰＲＣ２ｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＣｏｎｔｒｏｌｏｆＰｌａｎｔ
ＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄＰｌａｎｔＰｅｓｔｓ，Ｃｈｎｇａｓｈａ４１０１２８，ＰＲＣ：３ＰｌｎｔａＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｎｄＱｕａｒｎｔａｉｎｅＳｔａｔｉｏｎｏｆＨａｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０１２８，ＰＲＣ１
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．ＤｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｉｎｆｅｃｔｅｄｒａｔｅｏｆＷＢＰＨ．ｗｅｅｄｓａｎｄｒｉｃｅｐｌａｎｔｓｉｎｉｆｅｌｄｉＳｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆｆｏｒｅｃａｓｔｉｎｇｔｈｅＳＲＢＳＤＶ．ＴＯｉｆｎｄａｄｅｔｅｃｔｉｎｇｍｅｈｏｔｄｗｈｉｃｈｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒａｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｓａｍｐｌｅｓ．ｔｈｅＳＲＢＳＤＶｉｎｆｅｃｔｅｄｒｉｃｅｐｌａｎｔｓａｎｄＷＢＰＨｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓｈｅｔｍａｔｅｉｒａｌｓ
ＣｈｉｎａａｎｄＶｉｅｔｎａｍｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｗｈｉｃｈｍａｉｎｌｙｓｐｒｅａｄｂｙｔｈｅｗｈｉｔｅｂａｃｋｅｄｐｌａｎｔｈｏｐｐｅｒ（ＷＢＰＨ），ｌｅａｄｉｎｇｔｏｓｅｒｉｏｕｓｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆｉｒｃｅ
关键词：南方水稻黑条矮缩病毒；反转录．聚合酶链式反应；斑点免疫测定；检测灵敏度
中图分类号：￥４３２．４
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６．０６０Ｘ（２０１４）０１．００５２．０３
ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＤｏｔ－ＥＬＩＳＡａｎｄＲＴ－ＰＣＲｉｎＤｅｔｅｃｔｉｎｇＳｏｕｔｈｅｒｎＲｉｃｅＢｌａｃｋＳｔｒｅａｋｅｄ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｏｕｔｈｅｒｎｒｉｃｅｂｌａｃｋｓｔｒｅａｋｅｄｄｗａｒｆｖｉｒｕｓ（ＳＲＢＳＤＶ），ａｎｅｗｖｉｕｓｒ，ｈａｄｃａｕｓｅｄａｓｅｒｉｏｕｓｒｉｃｅｄｗａｒｆｄｉｓｅａｓｅｉｎｓｏｕｔｈｅｒｎ
ＤｗａｒｆＶｉｒｕｓ
ＬｒＵＳｈａｎ－ｓｈａｎ１，ＺＨ０ＵＱｉａｎ．一，ＧＡＯＢｉ — ｄａ，一，ＬＩＹｏｕ－ｚｈｉ，一，ＺＨＡＮＧＺｈｅｎｇ．ｂｉｎｓ，ＧＵＯＨａｉ．ｍｉｎｇ
Ｄｏｔ．ＥＬＩＳＡ和ＲＴ．ＰＣＲ检测南方水稻黑条矮缩病毒灵敏度的比较
刘珊珊・，周倩１，２，高必达－．２，李有志一，张政斌，郭海明
（１．湖南农业大学植物保护学院，湖南长沙４１０１２８；２．植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室，湖南长沙４１０１２８；３．湖南省植保植检站，湖南长沙４１０００５）