培养基灵敏度试验记录
培养基的灵敏度测试
培养基的灵敏度测试培养基的灵敏度测试是其质量控制的一个重要检测部分。
方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培养基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。
取预先制备好的琼脂培养基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培养基平皿3~5个（如较著名的如MERCK，DIFICOL产品）做对照试验，待培养基表面的菌液被琼脂培养基吸干或风干后，将培养皿倒置于培养箱的使用温度下培养48~72小时，（也可采用浇碟法进行）取出培养后的平皿点计菌落数。
样品培养基上的微生物数量应不得低于对照培养基上微生物生长数量的70%。
否则，需重新检查，或该培养基被视为不符合促生长要求。
2.用于控制菌检查的富集培养基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查。
每100ml培养基内分别接入试验菌小于100cfu，每个菌种接种两瓶培养基，将接过种的培养基置于指定条件下培养。
应在16~18小时后可明显观察到培养基内有微生物生长，则证明此培养基合格。
原则上无论是采用脱水培养基还是按相关处方配制的培养基，一旦制成成品培养基，则应对每个配制批号培养基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培养基的质量。
按脱水培养基的生产批号做灵敏度检查是基于培养基的灭菌程序已经经过验证。
如果实验室使用的是商购的成品培养基，供应商应随培养基提供相应批次的培养基质量检测报告，报告包括培养基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。
建议在使用某一新的成品培养基（新供应商或新培养基品种）时，应至少考察三个不同批次的培养基质量，只有三批质量均合格方可使用该培养基。
微生物限度检查用成品培养基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以复核其质量。
用于无菌检查试验的每批培养基，均必须按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于实验室自行配制的培养基。
硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查记录
硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查记录
硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查记录 R-
培养基批号生产厂家检验起止日期规格检验依据：《中国药典》（20xx 年版二部附录“无菌检查法”）。
2.
3.将各菌株的上述培养物以0.9%无菌氯化钠溶液倍比稀释后,取不同稀释级的菌悬液1ml 注皿，再加入营养琼脂培养基,在30~35℃倒置培养48小时后,计数。
注: 1ml含菌数小于100cfu的稀释级即为检验用稀释级.
4.制备培养基:
称取供试用培养基g，加入纯化水ml，加热搅拌至完全溶解。
分装至9支具塞试管中，每管12ml。
在℃湿热灭菌min。
5.分别向各支培养基中接种各菌株检验用稀释级的菌悬液（小于100cfu/ml）1ml，在30~35℃培养3天、观察：
[合格标准：空白管培养基无菌生长，加菌的培养基管均生长良好。
]
结论：
本批硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查。
检验人复核人。
实验室制备培养基测试结果记录单
实验室制备培养基测试结果记录单
记录单的格式可以根据实验室需求进行灵活调整，下面是一个示例：--------------
--------------
培养基名称：示例培养基
成分：
-纯水：500mL
-蛋白胨：10g
-葡萄糖：5g
-碳酸氢钠：1g
-磷酸二氢二钠：0.5g
-氯化钠：5g
-硫酸镁：0.5g
制备过程：
1.将纯水加热至80℃，并搅拌均匀。
2.加入蛋白胨，葡萄糖，碳酸氢钠，磷酸二氢二钠，氯化钠和硫酸镁，继续搅拌至溶解。
3.调整pH值至7.0。
4.通过0.2μm滤膜过滤，将培养基装入无菌瓶中。
测试方法：
1.准备无菌培养皿，每个培养皿装入约20mL培养基。
2.采用无菌技术将待测试菌株接种于培养皿中。
3.烘箱培养，温度设定为37℃，时间为24小时。
4.观察培养结果，记录菌落形态、颜色和数量等信息。
5.根据培养结果评估培养基的质量和适用性。
测试结果：
菌落形态：典型的菌落形态，呈现圆形、凹陷的形态。
菌落颜色：白色
菌落数量：在培养皿中可见约50个菌落。
评估结果：培养基质量良好，适用于该菌株的培养。
备注：由于示例培养基与不同菌株的适用性可能有所差异，建议在使用前进行更详细的测试。
-----------
这是一个简单的实验室制备培养基测试结果记录单示例，实际操作与记录单的内容可根据实验室需求进行调整和补充。
通过记录单，可以及时了解培养基的质量和适用性，为实验室提供高质量的培养环境。
培养基的灵敏度测试
培育基的灵敏度测试培育基的灵敏度测试是其质量掌握的一个重要检测部分。
方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培育基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。
取预先制备好的琼脂培育基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培育基平皿3~5个（如较闻名的如MERCK,DIFICoL产品）做对比试验，待培育基表面的菌液被琼脂培育基吸干或风干后，将培育皿倒置于培育箱的使用温度下培育48~72小时，（也可采纳浇碟法进行）取出培育后的平皿点计菌落数。
样品培育基上的微生物数量应不得低于对比培育基上微生物生长数量的70%。
否则，需重新检查，或该培育基被视为不符合促生长要求。
2.用于掌握菌检查的富集培育基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查。
每100ml培育基内分别接入试验菌小于100cfu,每个菌种接种两瓶培育基，将接过种的培育基置于指定条件下培育。
应在16~18小时后可明显观看到培育基内有微生物生长，则证明此培育基合格。
原则上无论是采纳脱水培育基还是按相关处方配制的培育基，一旦制成成品培育基，则应对每个配制批号培育基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培育基的质量。
按脱水培育基的生产批号做灵敏度检查是基于培育基的灭菌程序已经经过验证。
假如试验室使用的是商购的成品培育基,供应商应随培育基供应相应批次的培育基质量检测报告，报告包括培育基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。
建议在使用某一新的成品培育基（新供应商或新培育基品种）时，应至少考察三个不同批次的培育基质量，只有三批质量均合格方可使用该培育基。
微生物限度检查用成品培育基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以亚核其质量。
用于无菌检查试验的每批培育基，均必需按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于试验室自行配制的培育基。
培养基性能测试记录
培养基性能测试记录一、引言培养基是微生物学中常用的实验材料，其质量和性能直接影响到实验结果的准确性和可重复性。
因此，对培养基的性能进行测试是必要的。
本文将对其中一特定培养基的性能进行测试并记录测试结果。
二、液体培养基性能测试1.pH值测试使用pH计测量培养基的pH值，确保其处于适宜微生物生长的范围内。
测试结果显示，该培养基的pH值为7.2，符合微生物生长的适宜范围。
2.透明度测试通过目测法或光密度计测量培养基的透明度，确保培养基没有明显的颗粒或浑浊物。
测试结果显示，该培养基透明度良好，没有观察到任何颗粒或浑浊物。
3.溶解性测试将该培养基加入适量蒸馏水中，并搅拌均匀，观察是否能完全溶解。
测试结果显示，该培养基能够完全溶解在水中，无残留物。
4.营养成分浓度测试通过化学分析或光谱法测量培养基中特定营养成分的浓度，确保其在合适范围内，以满足微生物生长的需要。
测试结果显示，该培养基中各营养成分浓度符合标准要求。
三、固体培养基性能测试1.pH值测试同液体培养基性能测试中的方法，使用pH计测量培养基的pH值，确保其处于适宜微生物生长的范围内。
测试结果显示，该固体培养基的pH 值为7.4，适合微生物生长。
2.悬浮性测试将该固体培养基加入适量蒸馏水中，并搅拌均匀，观察是否能够均匀悬浮在水中。
测试结果显示，该固体培养基能够均匀悬浮在水中，没有明显的沉淀物。
3.凝固性测试将该固体培养基加热至液态后迅速冷却，并观察是否能够形成坚固的凝胶。
测试结果显示，该固体培养基能够迅速形成坚固的凝胶，适合微生物的生长。
4.含水量测试通过加热后称重法测量固体培养基中的水分含量，确保其符合标准要求。
测试结果显示，该固体培养基的水分含量为5%，符合标准要求。
四、结论通过对液体培养基和固体培养基的性能进行测试，测试结果显示该培养基的pH值符合微生物生长的适宜范围、无明显颗粒或浑浊物、能够完全溶解于水中、各营养成分浓度符合标准要求、固体培养基悬浮性良好、凝固性强、含水量符合标准要求。
培养基灵敏度试验
培养基灵敏度试验计数培养基适用性检查记录环境温度 ? 湿度 % 培养基名称批号配制日期 2011年月日玫瑰红钠琼脂培养基对照培养基批号生产厂家实验日期 2011年月日仪器型号及编号:立式灭菌器型号:LMQ.R 3260B 编号:H085 霉菌培养箱型号:MJ-160B-Z 编号: 电热恒温干燥箱型号:202-3AB 编号:H001菌液制备:接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，置30~35?培养24~48小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，置20~25?培养5~7天加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。
阳性对照菌液:白色念珠菌[CMCC(F)98 001] 编号: 黑曲霉[CMCC(F)98 003] 编号: 检查方法: 取5个无菌平皿，吸取白色念珠菌、黑曲霉菌各1ml，分别注入2个无菌平皿中，另一平皿不接种菌作为空白对照，立即倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固，置23~28?培养72小时，计数。
同时，用被检培养基同法操作。
检查结果:被检培养基对照培养基回收率被检培养基菌与阳性菌 (A/B对照培养基上菌皿1 皿2 平均A 皿1 皿2 平均B)% 落形态、大小白色念珠菌黑曲霉菌结果判断:若被检培养基上的平均菌落数与对照培养基上的平均菌落数相比大于70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，判该培养基适用性检查符合规定。
结论:复核人: 检验人: 年月日,。
培养基灵敏度检验记录
空 （白 不对 接 种）
白色念珠 菌
黑曲霉
空白对照 （不接种）
1
2
3
4
备注: 培5 养结 果阳性用“+”
培养皿编号 24H菌落数 48测试
1
2
3
结果判定(Result):
检 测/
复核/日 期:
生效日期：2016年05月18日
2.2
取每管装量9ml的TSB培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空 白对照，培养5天，逐日观察结果并记录.
3. 培养情况
培养仪器 培养箱编号
生化培养箱
校验有效期至
培养温度
30℃～35℃
23℃～28℃
天数
菌种 金黄色葡萄球 菌
铜绿假单胞 菌
枯草芽孢杆 菌
生孢梭 菌
KANGGU
嘉兴康谷医用材料有限公司
产品描述
培养基灵敏度检查记录
批号
QMR-098-00
数量
生产商
检测依据
2010版中国药典
检测日期
1. 检金测黄用色菌葡种萄球 菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌 生孢梭菌
白色念珠菌
黑曲霉
2. 程序
2.1
取每管装量为12ml的TSB培养基9支，分别接种小于100cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢 杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果并记录.
培养基灵敏度试验
计数培养基适用性检查记录
环境温度
C 湿度
%
仪器型号及编号： 立式灭菌器
型号：LMQ.R 3260B 编号：H085
霉菌培养箱 型号：MJ-160B-Z 编号:
电热恒温干燥箱 型号：202-3AB 编号：H001 菌液制备： 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，
置30~35C 培养24~48小时后，用0.9%无菌氯化
钠溶液制成每1ml 含菌数为50~100cfu 的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养
若被检培养基上的平均菌落数与对照培养基上的平均菌落数相比大于
70%,且菌落形态大小应与
对照培养基上的菌落一致，判该培养基适用性检查符合规定。
结论：
复核人:
基上，置 20~25 C 培养5~7天加入3~5ml 含0.05% 孢子洗脱。
然后，吸出孢子悬液至无菌试管中，用含 溶液制成每
1ml 含孢子数50~100cfu 的孢子悬液。
阳性对照菌液：
白色念珠菌[CMCC (F ) 98 001] 编号： 检查方法：
取5个无菌平皿，吸取白色念珠菌、黑曲霉菌各 种菌作为空白对照， 立即倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基 同时，用被检培养基同法操作。
(ml/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将 0.05% ( ml/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠 黑
曲霉[CMCC(F)98 003] 编号：
检验人:。
无菌检查培养基灵敏度检查记录
无菌检查培养基灵敏度检查记录
2、实验用仪器设备
□立式压力蒸汽灭菌器型号：编号：
□净化工作台型号：编号：
□生物安全柜型号：编号：
□电热恒温培养箱型号：编号：
□霉菌培养箱型号：编号：
□电热鼓风干燥箱型号：编号：
备注:培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
4、实验
空白对照管应无菌生长，加菌的培养基管均生长良好。
5、结论：本次所检培养基空白对照管生长，加菌的培养基管,该培养基灵敏度检查规定。
检验人: 复核人：。
培养基灵敏度检查记录
培养基灵敏度检查记录摘要该文档描述了在实验室中对于培养基的灵敏度检查过程的记录，其中包括了实验的目的、方法、结果和。
该检查可以帮助实验室监测和评估培养基的质量，以便提高实验结果的准确性和可靠性。
目的培养基灵敏度检查的目的在于确定你所使用的培养基的效力和纯度，以便将其用于实验。
检查可以帮助我们确定培养基中是否存在污染物和其他的不良物质。
此外，该检查还可以提供有关细菌对不同抗菌药物的反应的重要信息。
方法实验室中使用了标准的方法来进行培养基灵敏度检查。
在本次实验中，我们使用了以下设备和试剂：•培养基测试板•细菌株（常见的细菌株）•抗生素（几种常见的抗生素）实验分为以下几个步骤：1.准备培养基测试板：在培养基测试板中制造一个0.5麦芽糖浓度的菌液2.加入细菌株：加入细菌株到培养基测试板上，以包含菌液3.添加抗生素：将各种抗生素添加到测试板上，量为MIC（最小抑菌浓度）4.实验过程的记录：记录在培养基测试板上出现的菌落数量并测定其直径结果实验室的培养基灵敏度检查显示我们的培养基十分纯净，并且没有污染，同时抗生素的剂量适中。
检测到的微生物株菌落数量为零，代表我们培养基中不存在细菌或细胞污染。
不同种类的抗生素对于不同的细菌株的反应不同，在检测的过程中，我们发现一些菌株对于某些抗生素具有更高的抵抗力，而对于其他抗生素则没有。
本次实验中，我们成功检测了培养基的纯度，并且也测试了抗生素在不同细菌株中的反应。
这种测试有助于实验室在保证实验准确性以及细胞健康的同时，还可以避免不必要的费用开支。
为了更好地保证培养基的品质，我们应该定期地对培养基进行检查，并且采用多种数据来进行评估。
这样，可以更好地保证实验结果的重现性和可靠性，并且避免浪费时间和资源。
培养基灵敏度试验
环境温度℃湿度%
培养基名称
玫瑰红钠琼脂培养基
批号
配制日期
2011年月日
对照培养基批号
生产厂家
实验日期
2011年月日
仪器型号及编号：
立式灭菌器型号：LMQ.R 3260B编号：H085霉菌培养箱型号：MJ-160B-Z编号：
电热恒温干燥箱型号：202-3AB编号：H001
菌液制备：
接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，置30~35℃培养24~48小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，置20~25℃培养5~7天加入3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。
检查果：
阳性菌
被检培养基
对照培养基
回收率（A/B）%
被检培养基菌与对照培养基上菌落形态、大小
皿1
皿2
平均A
皿1
皿2
平均B
白色念珠菌
黑曲霉菌
结果判断：
若被检培养基上的平均菌落数与对照培养基上的平均菌落数相比大于70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，判该培养基适用性检查符合规定。
结论：
复核人：检验人：年月日
阳性对照菌液：
白色念珠菌[CMCC（F）98 001]编号：黑曲霉[CMCC(F)98 003]编号：
检查方法：
取5个无菌平皿，吸取白色念珠菌、黑曲霉菌各1ml，分别注入2个无菌平皿中，另一平皿不接种菌作为空白对照，立即倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固，置23~28℃培养72小时，计数。同时，用被检培养基同法操作。
培养基灵敏度检查记录
培养基灵敏度检查记录
一、仪器、菌种、培养基
1、仪器高压蒸汽灭菌器恒温水浴箱培养箱
2、菌种金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉
3、培养基营养琼脂培养基批号：配制日期:
硫乙醇酸盐流体培养基批号：配制日期：
改良马丁琼脂培养基批号：配制日期：
改良马丁培养基批号: 配制日期：
4、其它0.9%无菌氯化钠溶液无菌试管
二、菌液制备
1、接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，
接种生孢梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中,放入培养箱30－35℃培养24小时。
用0。
9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含量小于100cfu的菌悬液。
2、接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，放入培养箱23－28℃培养48
小时。
用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含量小于100cfu的菌悬液。
3、接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，放入培养箱23－28℃培养5天，加
入5ml0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含量小于100cfu的孢子悬液。
三、培养基接种
1、取装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9管，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌的菌悬液各管，另一管不接种作空白对照,放入培养箱30－35℃培养天。
2、取装量为9ml的改良马丁培养基5管，分别接种白色念珠菌、黑曲霉各管，另一管不接种作空白对照,培养天。
3、仪器状态：
4、逐日观察结果，并记录于下表。
检验员: 复核: 报告日期：。
霉菌无菌试验培养基灵敏度试验法
霉菌无菌试验培养基灵敏度试验法
1 菌种
白色念珠菌、腊叶芽枝霉，由中国药品生物制品检定所分发。
2 培养基
凡应用于霉菌无菌试验用的培养基都应进行灵敏度试验。
3 操作
3.1 操作霉菌的无菌室应与其他无菌室隔离，有2个以上菌株试验时，不应在同一无菌操作室内同时进行。
3.2 将菌接种在土豆培养基上，20～25℃培养5～7天后用灭菌生理盐水洗下菌苔，移入装有玻璃珠的大管中将孢子打散，经装有脱脂棉注射器过滤。
将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度，然后做10倍系列稀释。
3.3 将10-5～10-7菌液各1ml分别接种到9ml试验培养基中，每个稀释度至少接种3管并用未接种过的培养基作对照，20～25℃培育5天，逐日观察结果。
4 结果判定
以接种培养基管数的2/3以上呈现生长的最高稀释度为该培养基的灵敏度，3次试验中以2次达到的最高灵敏度为判定标准。
培养基性能测试原始记录
A菌落数：CFU
B菌落数：CFU□定性：计分： 浊度值：
□符合
□不符合
□定量□半定量
□定性
参比培养基：
非选择性培养基(A)：
选择性培养基(B)：
培养：
温度℃时间
特异性
菌株：
□符合
□不符合
定性
参比培养基：
培养：
温度℃时间
生长率
菌株：
□定量：NS： NO：
PR=NS/NO=
□半定量：G=
A菌落数：CFU
培养基性能测试原始记录
实验地点：微生物实验室
样 品 编 号
样 品 情 况
分 析 日 期
检 测 依 据
□SN/T 1538.2-2016□GB 4789.28-2013
检 测 仪 器
□pH计 编号*******□天平编号*******□培养箱 编号HIN-******
实 验 用 水
批号：
脱水培养基名称
B菌落数：CFU
□定性：计分： 浊度值：
□符合
□不符合
□定量□半定量
□定性
参比培养基：
非选择性培养基(A)：
选择性培养基(B)：
培养：
温度℃时间
选择性
菌株：
□定量：DO：DS：
SF= DO- DS=
□半定量：G=
A菌落数：CFU
B菌落数：CFU□定性：计分： 浊度值：
□符合
□不符合
□定量□半定量
□定性
选择性培养基(B)：
培养：
温度℃时间
选择性
菌株：
□定量：DO：DS：
SF= DO- DS=
□半定量：G=
A菌落数：CFU
无菌培养基灵敏度试验验证
××公司无菌检查用培养基适用性验证资料文件编号：YZ-GC -0041.验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，特制定本验证方案。
2.参照标准：2005版中国药典二部附录XI H无菌检查法。
3.验证项目：硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基灵敏度检查。
4.验证小组4.试验材料：4.1. 被验证培养基：品名：硫乙醇酸盐流体培养基规格：批号：生产厂家：品名：营养肉汤培养基规格：批号：生产厂家：品名：改良马丁培养基规格：批号：生产厂家：4.2. 仪器设备：4.2.1. YM50立式压力蒸汽灭菌器4.2.2. SW-CJ-2F双人净化工作台4.2.3. JC101型电热鼓风干燥箱4.2.4.JY-B型生化培养箱(23～28℃)4.2.5.PHX-DHS-40x50恒温培养箱(35～37℃)4.3. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液4.4. 验证用培养基：4.5. 验证用菌株：5.菌液制备：5.1.取经培养18~24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。
5.2.取经培养24~48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。
6.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15~20ml，置30～35℃培养箱培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液1ml加入培养皿，平行做2皿，注入不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15~20ml，置23～28℃培养箱培养三天。
7.无菌培养基的无菌性检查7.1培养基的配制硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。
培养基灵敏度验证
注意： 注意：
1. 培养基配置应使用洁净的玻璃容 不能使用金属容器。 器，不能使用金属容器。配置好的 培养基应尽快进行灭菌处理， 培养基应尽快进行灭菌处理，以免 长菌。 长菌。 2. 灵敏度检查是基于培养基的灭菌 程序已经经过验证。 程序已经经过验证。
3. 如果实验室使用的是购买的成品 培养基， 培养基，供应商应随培养基提供相 应批次的培养基质量检测报告， 应批次的培养基质量检测报告，报 告包括培养基的PH值 告包括培养基的PH值、无菌检查 结果和促菌生长（灵敏度） 结果和促菌生长（灵敏度）试验结 果等项目。 果等项目。同时应注意培养基有效 期。
6. 配制好的培养基应保存在2～25 配制好的培养基应保存在2 避光的环境， ℃、避光的环境，一般在三周内使 生化鉴别用培养基， 用。生化鉴别用培养基，应在一周 内使用； 内使用；选择性分离鉴别培养基最 好当日使用， 好当日使用，必要时于冷暗避光处 保存，最多不得超过三天。 保存，最多不得超过三天。
3. 如对实验结果有怀疑，可将新、老 如对实验结果有怀疑， 将新、 批号培养基在相同的条件下同时进行 试验。 设立对照培养基（ 试验。或设立对照培养基（如进口培 养基）。 养基）。 4. 标准菌株（如 ATCC 或NCTC标准 标准菌株（ NCTC标准 菌株或CMCC） 菌株或CMCC）及经过准确鉴定的临 床分离菌。试验前对菌种进行传代培 床分离菌。 对照菌株必须使用新鲜培养物。 养，对照菌株必须使用新鲜培养物。 一旦发现对照菌株污染或存在问题， 一旦发现对照菌株污染或存在问题， 则应立即更换。 则应立即更换。
培养基灵敏度检查所用的菌株传代次 数不得超过5 数不得超过5代（从菌种保存中心获得 的冷冻干燥菌种为第0 ），并采用适 的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适 宜的菌种保藏技术， 宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株 的生物学特征。 的生物学特征。实验用菌应是生命活 力旺盛的新鲜培养物， 力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三 代的培养物。 代的培养物。
支原体培养基灵敏度检査(变色单位试验法)
支原体培养基灵敏度检査（变色单位试验法）及供试品检查方案目的：建立支原体培养基灵敏度检査（变色单位试验法）及供试品检查方案。
范围：适用于支原体培养基灵敏度检査及供试品检查。
依据：《中国药典》2015年版内容:1、概要：除药典推荐培养基外，亦可使用可支持支原体生长的其他培养基，但灵敏度必须符合要求。
2、设备生化培养箱、生物安全柜。
3、培养基灵敏度检査（变色单位试验法）3.1干粉培养基及对应菌种产品号产品名称菌种名称菌种编号11109 支原体肉汤培养基肺炎支原体ATCC 15531株11C21 精氨酸支原体肉汤培养基口腔支原体ATCC 23714株11A09 支原体半流体培养基肺炎支原体ATCC 15531株11321 精氨酸支原体半流体培养基口腔支原体ATCC 23714株3.2 培养基配制按照标签处方量配制成液体培养基，并按标签规定的温度和时间进行湿热灭菌，待用。
3.3灵敏度检查3.3.1菌液制备将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传两代。
3.3.2培养基接种及培养将培养物接种至待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7〜10-9，接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3〜10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内。
每个稀释度接种 3 支试管，置36℃±1℃培养7〜14天，观察培养基变色结果。
3.3.3结果判定：以接种后培养基管数的2 / 3 以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。
灵敏度应达到：支原体肉汤培养基：肺炎支原体（ATCC 15531株）应达到10-8；精氨酸支原体肉汤培养基：口腔支原体( ATCC 23714株)应达到10- 4。
3.3供试品检查法3.1干粉培养基及对应菌种产品类型产品名称产品号液体培养基支原体肉汤培养基11109精氨酸支原体肉汤培养基11C21 半流体培养基支原体半流体培养基11A09精氨酸支原体半流体培养基11321 或：琼脂培养基支原体琼脂培养基11C233.2配制半流体培养基（或琼脂培养基) 按照标签处方量配制，并按标签规定的温度和时间进行湿热灭菌；在使用前应煮沸10〜15分钟，冷却至56°C左右，然后加人灭能小牛血清（培养基: 血清为8 ：2) ，并可酌情加入适量青霉素，充分摇匀。
培养基灵敏度检查SOP
培养基灵敏度检查SOP1．目的规范无菌检查用培养基灵敏度检查，确保无菌试验用培养基的灵敏度，防止无菌试验结果出现假阳性现象。
2．范围本标准规程适用于本公司无菌检查用培养基的灵敏度检查，每批无菌试验用干粉培养基均做灵敏度检查。
3．定义3.1.菌种：检查所用菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），以保证试验菌株的生物学特性。
3.2.金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26003〕：用于无菌检查培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.3.铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10104〕：用于无菌检查培养基灵敏度检查；3.4.枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63501〕：用于无菌检查培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.5.白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕：用于无菌检查培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.6.生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64941：用于无菌检查培养基灵敏度检查；3.7.黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98003〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。
5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部6．材料6.1.房屋、设备、试验用具6.1.1.房屋：阳性实验室。
6.1.2.设备：100级洁净工作台，30～35℃培养箱，20～25℃培养箱，灭菌器。
6.1.3.试验用具：隔离服、洁净工作服、工作鞋、口罩、帽子、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管、毛巾、吸耳球、记号笔、中试管架、酒精灯、镊子、酒精棉、托盘、电子天平、药勺、量筒、6.2.培养基：营养琼脂斜面培养基（中管）、硫乙醇酸盐流体培养基（中管）、改良马丁琼脂斜面培养基（中管）。
培养基的灵敏度检查
培养基的灵敏度检查
一、目的：建立培养基灵敏度检查的操作规程，保证无菌检查结果的准确性、可靠性。
二、适用范围：适用于培养基灵敏度检查。
三、职责：质量检验员对本标准的实施负责。
四、正文：
1 实验设备及用具：
高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪瓷托盘、时钟、75%酒精棉球、无菌服。
2培养基：需气菌、厌气菌培养基（如：流体硫乙醇酸盐培养基）、真菌培养基。
3测试用菌种
藤黄微球菌[CMCC（B）28 001]
生孢梭菌[CMCC（B）64 941]
白色念珠菌[CMCC（F）98 001]
4操作：
取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物 1ml，用 0.9%无菌氯化钠溶液作 10 倍梯度稀释，制成 1ml 中含 10-100 个菌并计数。
4.2 将藤黄微球菌、生孢梭菌的上述稀释菌液各 1ml 分别接种至每管装量为 9ml 的需气菌、厌气菌培养基 3 管，白色念珠菌的上述稀释菌液 1ml，接种至每管装量为 9ml 的真菌培养基 3 管。
以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。
5 结果判定：以每株菌接种后培养基不得少于 2 管呈现生长，即该培养基
的灵敏度检查符合要求。