抗棉虫转基因流程图
(技术规范标准)转基因抗虫棉花检测技术规范
转基因抗虫棉花检测技术规范——定性PCR 筛查方法（试行）编制说明为进一步加强对转基因抗虫棉花的安全监管，维护研发者、经营者和生产者的合法权益，保障人类健康和生态环境安全，根据《农业转基因生物安全管理条例》及其配套管理办法的规定和《关于加强转基因抗虫棉安全管理与监督检查的通知》(农办科[2005] 15号)的要求，满足开展技术检测工作的需要，特制定本技术规范。
1、编制原则本技术规范的编制遵循以下原则：(1)法治性：本技术规范的编制，严格执行国家法律法规和强制性标准的规定，以保证国家和研发者、经营者、生产者的权益。
(2)可靠性：本技术规范的编制，力求反应相关领域研究成果的先进性、成熟性和代表性，以保证检测结果的精确性和重复性。
(3)实用性：本技术规范的编制，力求把经济实用和技术实用结合起来，以保证检测的操作简便和费用低廉。
(4)规范性：本技术规范的编制，力求做到技术内容叙述正确无误、文字表达简明易懂，以保证检测人员准确把握。
(5)操作性：本技术规范的编制，力求将操作过程中的要点进行细化和量化，以保证检测人员操作方便。
(6)兼容性：本技术规范的编制，参考和借鉴了国外同类标准或规范内容，以保证既符合国情又尽可能与国际接轨。
2、编制依据本技术规范编制的法律依据主要有：(1)《农业转基因生物安全管理条例》——中华人民共和国国务院令第304号；(2)《农业转基因生物安全评价管理办法》——中华人民共和国农业部令第8号；(3)《农业转基因生物进口安全管理办法》——中华人民共和国农业部令第9号；(4)《农业转基因生物标识管理办法》——中华人民共和国农业部令第10号。
3、适用范围转基因抗虫棉花可从以下三个方面进行检测：(1)筛查检测：利用通用序列分别设计引物对棉花Sad1内标准基因、CaMV35S启动子、NOS终止子以及cry1Ac基因或者cry1Ab基因或者cry1Ac和cry1Ab的融合基因进行PCR扩增，筛查确定样品是否含有转基因成分，以判断送（抽）检样品是否为转基因抗虫棉花。
转基因双价抗虫棉的原理
转基因双价抗虫棉的原理今天来聊聊转基因双价抗虫棉的原理。
你看啊，就像我们在生活中总会想各种办法来防止害虫侵害我们心爱的东西一样，比如说我们为了防止米生虫会在米缸里放些花椒之类的东西。
那棉花也是这样啊，棉花可是非常容易被害虫盯上的，要是被害虫大规模地祸害，那棉农可就损失惨重了。
转基因双价抗虫棉，这里面的“双价”就是说它有两种武器来对抗害虫呢。
这就要说到植物昆虫之间斗争的故事了。
棉花最常见的害虫呢，就是棉铃虫等了。
而基因工程就像一个聪明的魔法师，通过转基因技术把能抗虫的基因转到棉花里面去。
打个比方啊，这个转基因双价抗虫棉就像是一个有超级保镖的城堡。
里面的这两种抗虫基因就好比两个特别厉害的保镖。
一个保镖呢是来自苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt，这里啊，Bt就是一个比较专业的术语啦，它是一种很神奇的细菌，能产生一种对害虫特别厉害的毒素）中的Bt毒蛋白基因，这个毒蛋白对棉铃虫之类的害虫来说就像是致命的毒药。
害虫只要吃了含有这种Bt毒蛋白的棉花叶子啊，那肚子可就受不了，最后就一命呜呼了。
另一个基因武器也不简单，它就像另一种暗器。
不过老实说，我一开始也不是那么明白这个基因具体的作用机制。
但经过学习发现它也是一种可以增强棉花对害虫防御能力的基因。
有意思的是，这就像我们预料的那样，有了这两个基因的棉花啊，害虫就不敢轻易来犯了。
在棉农那里这可是非常实用的好东西。
以前农民伯伯要用好多农药去打虫子，不仅成本高，对环境也不好，就像我们生病一直吃抗生素，体内细菌慢慢就有抗药性了一样，害虫对农药也会慢慢有抗性。
但是转基因双价抗虫棉这种天然的抗虫能力就避免了这些问题。
不过啊，这也不是就完全没有注意事项了。
有人就担心这个转基因作物会不会影响其他生物之类的。
这就要进一步好好研究啦。
说到这里，你可能会问这种转基因技术还能用在哪些作物上呢？其实在其他很多作物改良上都可能可以用到类似的技术思路哦。
我自己感觉这个转基因技术就像打开了一扇新窗户，未来在农业生物安全等等方面都值得大家多思考多探讨呢。
转基因抗虫棉的培育过程
转基因抗虫棉的培育过程随着全球人口的增长和农业需求的增加，农作物病虫害问题日益突出，传统农药防治手段面临着限制和挑战。
为了解决这一问题，科学家们研究出了转基因技术，通过转基因技术培育出抗虫棉，从而提高棉花产量和质量，降低农药使用量，减少环境污染。
转基因抗虫棉的培育过程主要包括以下几个步骤：1.选取抗虫基因：选择具有抗虫特性的基因作为转基因抗虫棉的材料。
这些基因可以通过自然产生的抗虫物质，在转基因抗虫棉中发挥相同的功能。
常用的抗虫基因包括Bt基因、Cry基因等。
2.构建转基因质粒：将选取的抗虫基因与转基因质粒载体进行连接。
转基因质粒是一种具有特定功能的DNA分子，可以将选取的基因导入到棉花细胞中。
常用的转基因质粒载体有pBI121、pCAMBIA1300等。
3.转化棉花胚性培养：将转基因质粒导入到棉花胚性组织中。
首先，通过切割幼嫩的棉花胚珠，得到碎片组织。
然后，将转基因质粒通过基因枪等手段导入到棉花胚性组织内。
转基因质粒会与棉花细胞的染色体融合，形成转基因组织。
4.再生植株培养：将转基因组织培养在含有适宜营养物质的培养基上进行培养。
转基因组织经过分裂和分化，最终发育为幼苗。
经过再生培养，可以得到许多转基因植株。
5.筛选抗虫转基因植株：通过PCR等分子生物学技术，筛选出带有抗虫基因的转基因棉花植株。
这些植株具有抗虫特性，可以抵抗常见的棉铃虫等害虫的攻击。
6.比较试验：将抗虫转基因植株与常规棉花品种进行比较试验。
比较试验包括生长特性、产量、纤维品质等方面的比较。
通过比较试验，可以评估抗虫转基因棉花的效果和优势。
7.田间试验：在田间条件下进行转基因抗虫棉的试验种植。
通过观察和分析抗虫转基因棉花在实际生长环境下的表现，可以更全面地评估其抗虫效果和农艺特性。
8.安全评估：进行对抗虫转基因棉花的安全评估，包括食品安全、环境影响等方面。
确保转基因抗虫棉花对人体和环境的影响符合安全标准。
9.市场推广：在安全评估通过后，将转基因抗虫棉花推广到市场。
转基因抗虫棉原理
转基因抗虫棉原理
转基因单价抗虫棉原理是将一种细菌来源的、可专门破坏棉铃虫消化道的Bt杀虫蛋白基因经过改造，转到了棉花中，使棉花细胞中存在这种杀虫蛋白质，专门破坏棉铃虫等鳞翅目害虫的消化系统，导致其死亡，而对人畜无害的一种抗虫棉花。
转基因双价抗虫棉原理是将杀虫机理不同的两种抗虫基因（Bt杀虫基因和修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因）同时导入棉花，由于这两种杀虫蛋白功能互补且协同增效，使双价抗虫棉不但可以有效延缓棉铃虫对单价抗虫棉产生抗性，还可增强抗虫性。
抗棉虫转基因流程图
转基因抗虫棉流程图
平时观察发现某些植物有抗虫的属性，研究这种植物，筛选出控制这个属性的基因：苏云金芽孢杆菌的Bt基因。
①：提取.获取目的基因是实施基因工程的第一步，从苏云金芽孢杆菌中获取Bt基因。
②：基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。
将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。
把Bt蛋白基因组合到四环素抗性基因中。
③：.将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。
目的基因的片段与运载体在生物体外连接形成重组DNA分子后，下一步是将重组DNA分子引入受体细胞中进行扩增，用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要
是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
④：检测与鉴定.目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。
在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。
因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。
检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。
重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。
12基因工程的基本操作程序用
Taq
Taq
PPCCRR反过应程条件95℃
PCR的特点
50℃
Taq
72℃
PCR的基本原理
PPCCRR反过应程条件72℃
PCR的特点
第2轮结束
过程：变性、退火、延伸三步曲
➢ 变性：加热至90～ 95℃双链DNA解链成 为单链DNA
➢ 退火：冷却至55～ 60℃部分引物与模 板的单链DNA的特定
互补部位相配对和
变性
结合
➢ 延伸：加热至70～
75℃以目的基因为
模板，合成互补的
新DNA链
退火
延伸
请回答基因工程方面的有关问题： (1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复 制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子 链合成延伸的基础。 ①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA 片段所占的比例为_______。 ②在第_______轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链 等长的DNA片段。
生物 体内，则这个生物就是一个基因C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文
库
D、含有一种生物的一部分基因的基因叫cDNA（2）利用PCR技术扩增目的基因
PCR——多聚酶链式反应
是一项生物体外复制特定DNA片 段的核酸合成技术。通过此技术，可 获取大量的目的基因。
（二）利用PCR技术扩增目的基因
一、目的基因的获取
1、目的基因：主要指的是编码蛋白质的结 构基因，也可以是一些具有调控作用的因 增目的基因； （3）通过DNA合成？ 将含有某种生物不同基因的许多
转录、加工修饰
结构基因
mRNA
原核细胞与真核细胞的基因结构比较
不同点 相同点
原核细胞
抗虫棉基因工程的过程
抗虫棉基因工程的过程
抗虫棉基因工程的过程
抗虫棉基因工程是指经过基因技术改良的棉花，能够有效抵御害虫的危害，实现棉花的高产和优质，从而提升农业产值。
它的过程大致可以分为以下几个步骤：
1. 确定抗虫基因：通过对天然具有抗虫特性的植物进行深入研究，查找特定的基因，确定对应的抗虫基因。
在棉花中，针对棉铃虫的抗虫基因主要是Bt基因。
2. 克隆和注入基因：通过克隆技术，将确定好的抗虫基因进行扩增，得到高纯度的抗虫基因。
然后，通过注入技术将抗虫基因注入到棉花的基因组中，使其在生长过程中能够表达抗虫特性。
3. 转化体细胞选择：将注入基因的棉花体细胞培养在含有抗生素的培养基中，筛选能够生长的细胞，将其分离出来，得到具有抗虫特性的转化体细胞。
4. 物种再生：将筛选出的转化体细胞进行再生培养，形成完整的棉花植株。
在这个过程中，需要对棉花植株进行基因筛选和鉴定，确保其
拥有预期的基因组和抗虫特性。
5. 田间试验和商业化推广：在田间环境下，通过对抗虫棉花进行田间试验，评估其在实际生长环境中的表现。
根据试验结果，进行商业化推广，将抗虫棉花推广到市场上。
总的来说，抗虫棉基因工程的过程需要经过多个环节的研究、实验和推广，需要专业的技术团队和大量的经费支持。
虽然这项技术能够有效提升棉花产量和品质，但仍面临一些风险和挑战，需要持续投入研究和开发，才能实现其最大价值。
转基因抗虫棉
将目的基因导入植物细胞----农杆菌(LBA4404)转化法
①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 DNA分子杂交（southern blot） ②检测目的基因是否转录出了mRNA 检测 —
分子杂交（northern
抗原—抗体杂交(western
blot）
③检测目的基因是否翻译成蛋白质 blot)
质粒
DNA分子
同一种
限制酶处理（Ⅰ）
一个切口 两个黏性末端
两个切口 获得目的基因
DNA连接酶
重组DNA分子（重组质粒）
农杆菌LBA4404 经NaCl( 0. 15 mol/ L) 及CaCl2( 2mmol/ L) 处理后制备成感受态, 并用重组质粒进行转化，然后在合适的培 养基上培养。 再用叶盘法侵染棉花的组织细胞，然后在 含有PPT的培养基上连续筛选培养3代，然 后分化获得再生植株。
对盆栽植株进行棉铃虫接种，查看 是否具有抗虫作用
谢 谢
基因工程应用之
转BT抗虫棉
LOGO
1
概念
目的基因的获取
2
3
基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞
目的基因的检测与鉴定
4
5
Байду номын сангаас
概念
转基因抗虫棉是指棉花细胞染 色体上整合有外源抗虫基因的 棉花品种。 抗虫基因通常为来源于苏云金 芽孢杆菌的Bt基因。因此，转 基因抗虫棉也称为转Bt基因抗 虫棉。
LOGO
苏云金芽孢杆菌是抗虫棉的基因供体，苏云芽孢杆菌 是原核生物，目的基因直接提取就可获得。
获取的基因 3、化学方法人工合成(cry-IA杀虫基因) 4、直接从苏云芽孢杆菌中提取
LOGO
转基因抗虫棉实验
转基因抗虫棉实验一转基因植株的获得1.选取克隆良好的抗虫棉基因，并构建转基因载体抗虫棉的基因来自细菌，属于原核生物的基因，直接分离就行用来构建载体的是一般是一些病毒的环形基因，用限制性核酸内切酶分别对该环形基因和目的基因进行切割，将切好的目的基因（抗虫棉基因）和环形基因通过DNA连接酶进行连接构成一个完整的基因，这个基因就是带有抗虫棉基因的重组基因2.将目的基因转入植物细胞主要方法有：1.鸟枪法 2.根癌农杆菌转化 3.慢病毒转染农杆菌介导转化过程农杆菌介导转化过程主要分为两步：首先：农杆菌将T-DNA以单链的形式从Ti质粒上切下，然后与一系列Vir蛋白接个，这些过程都发生在农杆菌细胞内；然后：与T-DNA相连的virE2蛋白上有核定位序列，在它的作用下，T-DNA被转入宿主细胞，然后整合宿主基因组，整合的方式主要有双链打开修复和单链缺口修复两种方式。
3.再生植株培养（详细请查阅相关课本）4.再生植株移苗至盆栽二转基因植株分子检测1.取再生植株叶片，进行基因组DNA提取1 设备：移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。
2试剂1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。
2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇4、RnaseA母液：配方见第一章。
5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
3操作步骤：（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。
2. 再生植株叶片5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。
基因工程基本操作程序ppt课件
质粒
DNA分子
同一种 限制酶处理
一个切口 两个黏性末端
两个切口 获得目的基因
DNA连接酶
重组DNA分子（重组质粒）
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
基因表达载体的组成
复制原点+启动子+目的基因+终止子+标志基因
与RNA聚合 酶结合位点
非编码区
真核生物基因
非编码区
与RNA聚合 酶结合位点
编码区
非编码区
外显子
内含子
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 基因的许多DNA片断，导入到 受体菌的群体中，各个受体费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
苏云金芽孢杆菌含有一 苏云金芽孢杆菌 种可以合成毒蛋白的基因。
毒蛋白
让细菌的毒蛋白基因在
棉花细胞中表达，可培育出
抵抗棉铃虫害的抗虫棉。
想一想需要做哪些关键工作？
普通棉花 抗虫棉
基因探针：目的基因片段用放射性同位素标记
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
目的基因的获取基 1、从基因中获取目的基因 因 2、利用PCR技术扩增目的基因 工 3、化学方法人工合成
程 基因表达载体的构建
一、目的基因的获取
主要是编码蛋白质的基因 3、化学方法人工合成
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
课件18：1.2 基因工程的基本操作程序
3、下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述，正确的是 （ D） A. 表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转 录获得 B. 表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原 （起）点 C. 借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛 选出来 D. 启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用
过程 变性、退火、延伸三步曲
变性 退火
延伸
归纳总结1：PCR技术扩增与DNA复制的比较
PCR技术
DNA复制
相 原理
碱基互补配对
同 原料 点 条件
四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶
解旋 不 方式DNFra bibliotek在高温 下变性解旋
解旋酶催化
同 场所 体外复制
细胞核内
点 酶 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶
检测—
①检测转基因生物染色体的DNA
上是否插入了目的基因
方法—— DNA分子杂交
②检测目的基因是否转录出了mRNA 方法—— 分子杂交（注意与上不同之处）
③检测目的基因是否翻译成蛋白质
方法—— 抗原抗体杂交
鉴定——抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等
巩固练习
1、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。 在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的
步骤是 （ C ）
A.人工合成目的基因 B .目的基因与运载体结合 C .将目的基因导入受体细胞 D .目的基因的检测和表达
2、下列有关基因工程操作的叙述中，正确的是 （A ） A. 用同种限制酶切割载体与目的基因可获得相同的黏 性末端 B. 以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原 基因的碱基序列相同 C. 检测到受体细胞含有目的基因就标志着基因工程操 作的成功 D. 用含抗生素抗性基因的质粒作为载体是因为其抗性 基因便于与外源基因连接
转基因抗虫棉抗虫的流程
转基因抗虫棉抗虫的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!**引流袋性能检测流程**一、准备工作阶段。
在进行引流袋性能检测之前，需做好充分准备。
基因工程的基本操作程序第1课时课件-高二生物人教版选择性必修3
思考•讨论 基因表达载体的构建 3. 限制酶的选择原则
(3)确保出现相同黏性末端原则：
通常选择与切割目的基因相同的限制酶切割质粒，如图中PstⅠ； 为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接（或为了保证目的基因和 质粒发生定向连接）可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种不同的限制酶分别切 割目的基因和质粒。
本节小结
3 利用PCR获取和扩增目的基因
(2)基本条件 Taq DNA聚合酶
耐高温的DNA聚合酶
稳定的缓冲溶液 一般添加Mg2+
催化形成磷酸二酯键， 进而合成DNA子链
使耐高温的DNA聚合酶能够 从引物的3’端开始连接脱
氧核苷酸
激活真核细胞和细 菌的DNA聚合酶
提供合适的酸碱度和离子， DNA聚合酶需要Mg2＋激活
第三章 第2节 基因工程的基本操作程序
第1课时：目的基因的筛选与获取、 基因表达载体的构建
从社会中来
1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育 成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济 效益450亿元。
转基因抗虫棉
非转基因抗虫棉
➢ 你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？ ➢ 培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤呢？
体悟巩固 2.请结合下图，回答问题：
（2）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、 外源DNA的优点是什么？
①可以防止质粒、目的基因的自身环化连接； ②还可以防止目的基因与载体的反向连接。
谢 谢观 赏
36
RNA链 DNA链
逆转录酶
核酸酶H
DNA聚合酶
单链RNA 杂交双链
单链DNA
双链DNA
科学家通过基因工程.成功培育出能...
科学家通过基因工程，成功培育出能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉，其过程
大致如下图所示：
(1)上述过程中，将目的基因导入棉花细胞内使用的方法是，这种导入方法较经济、有效。
目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA上，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是。
(2)基因工程基本操作程序中的核心步骤是，其目的是使目的基因在受体细胞中，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。
(3)利用基因工程技术培育抗虫棉，与诱变育种和杂交育种方法相比，具有和等突出的优点，但是目前基因工程仍不能取代杂交育种和诱变育种。
(4)基因工程中，细菌的毒蛋白基因能在棉花细胞内得以表达，产生抗虫性状，是因为。
【答案】
(1)农杆菌转化法 DNA分子杂交技术
(2)基因表达载体的构建稳定存在
(3)目的性强克服远缘杂交不亲和性(或能有效地打破物种的生殖隔离界限)
(4)所有的生物共用一套遗传密码（2分）
【解析】（1）将目的基因导入双子叶植物常用农杆菌转化法；检测目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA上，采用DNA分子杂交法。
（2）基因工程基本操作程序中的核心步骤是基因表达载体的构建，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。
（3）基因工程育种的优点是目的性强、克服远缘杂交不亲和性或
能有效地打破物种的生殖隔离界限。
（4）由于所有的生物共用一套遗传密码，所以细菌的毒蛋白基因在棉花细胞内能够表达。
转基因抗虫棉的遗传转化与功能验证
转基因抗虫棉的遗传转化与功能验证一、农杆菌介导的棉花胚胎再生遗传转化体系（一）实验方法以W0为受体，将pC2-dsGFP、pC2-dsJHAMT、pC2-dsPTTH3、pC2-dsPTTH5、pC2-dsJHBP载体的农杆菌菌株，运用农杆菌介导法分别将目的基因转入棉花下胚轴，通过组织培养技术获得转基因再生株系。
嫁接试验采用根系发达抗病性强的海岛棉（海7124）的实生苗做砧木，接穗是转化基因再生植株。
（二）实验步骤农杆菌介导的棉花遗传转化分3步，转化、胚胎发生和植株再生。
1）种子脱绒：轧花后的棉花种子，烘干（40℃左右），用适当硫酸（H2SO4）脱去短绒，自来水洗掉种子表面浓硫酸，充分晾干；2）种子的消毒处理：选取饱满棉花种子于无菌三角瓶中，无菌水冲洗一次，70%乙醇表面消毒种子30 Sec，弃去乙醇，加入30%过氧化氢（H2O2）于摇床振荡2-3 h，弃掉H2O2，无菌水冲洗种子3-5 次，保留少量无菌水浸过种子，存放28℃，18-24 h，待到种子破壳露白；3）外植体制备：在无菌条件下，滤掉消毒过种子的无菌水，剥去种子种壳，接种于苗培养基（1/2MS）上，28 ℃黑暗培养（N）3 d，然后在28℃、3000-5000 Lx光照下培养(D/N＝16 h/8 h) 3 d。
4）农杆菌活化与浸染液制备：将-70℃保存的农杆菌载体菌株，取出冻融。
在固体LB平板培养基上（含Kan 50μg/ml＋Rif/Str 50μg/ml）划线，28℃静止培养1-2天。
平板挑取单菌落，接种于含相应抗生素的LB液体（Kan 50μg/ml＋Rif/Str 50μg/ml）培养基（10ml）中，28℃振荡过夜，再按1%接种量转接入50mL新鲜培养基中（含Kan 50μg/ml＋Rif/Str 50μg/ml）培养8小时左右，测定OD600为0.5左右。
4℃，5000rpm离心5min ，收集菌体。
然后用5mLMSB0（含100 uM/ml AS）液体培养基重新悬浮沉淀，再转入15-45mL的MSB0（含100uM AS）液体培养基，28℃摇床上培养至OD600为0.5左右，稀释培养液OD600 值0.3-0.7 时备用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
转基因抗虫棉流程图
平时观察发现某些植物有抗虫的属性，研究这种植物，筛选出控制这个属性的基因：苏云金芽孢杆菌的Bt基因。
①：提取.获取目的基因是实施基因工程的第一步，从苏云金芽孢杆菌中获取Bt基因。
②：基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。
将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。
把Bt蛋白基因组合到四环素抗性基因中。
③：.将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。
目的基因的片段与运载体在生物体外连接形成重组DNA分子后，下一步是将重组DNA分子引入受体细胞中进行扩增，用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要
是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
④：检测与鉴定.目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。
在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。
因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。
检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。
重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。