禽流感抗体滴度标准
鸡病常规抗体检测结果分析及运用
提示：三者均可以给商品肉鸡提供较高的母源抗体，保护雏鸡前期不受外界毒影响。
5
IBD（法氏囊）
1、 蛋/种鸡群：IBD免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗体较免前抗体有所上升（500—3000），并且变异系数缩小，说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。从大量检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。鸡群在产蛋期抗体滴度大于15000的鸡群在我们长时间检测中也有发现，抗体诊断几乎用不着，因典型症状较为明显。
2、 肉鸡群：以琼脂扩散试验(AGP)方法检测免后三周抗体≥50%为免疫合格。
6
REO（病关）
REO免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗体较免前抗体均有大幅度上升（5000—15000），并且变异系数缩小，说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。从大量的检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。
2、肉鸡群：如在发病后检测MG抗体，在未对其项目进行接种有阳性抗体且变异系数大，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
序号
检测新城疫）
1、 蛋/种鸡群：ND抗体在正常检测离散范围应为6log2—12log2，离散范围越小越能说明鸡群免疫应答反应好，如抗体滴度＞13log2，且离散范围大如：6log2—15log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
2、 肉鸡群：ND抗体正常检测离散范围在0log2-10log2之间，如抗体滴度≥11 log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
2、 肉鸡群：同ND相似。
3
H5（禽流感）
1、 蛋/种鸡群H5抗体正常检测离散范围应为4log2—10log2，鸡群感染后，抗体异常上升，且离散范围大。
鸡病常规抗体检测结果分析及运用
3
H5（禽流感）
1、蛋/种鸡群H5抗体正常检测离散范围应为4log2—10log2，鸡群感染后，抗体异常上升，且离散范围大。
2、肉鸡群：因该病感染和死亡涉及非常快，且病变典型，抗体对比意思不大。
4
IB（传支）
1、蛋/种鸡群：IB免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗体较免前抗体有所上升（500—2000），并且变异系数缩小，说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。从大量的检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。鸡群在产蛋期抗体滴度大于10000的鸡群在我们长时间检测中也有发现，鸡群无疾病表现，目前不能说明什么，有待进一步的认识。
2、肉鸡群：以琼脂扩散试验(AGP)方法检测免后三周抗体≥50%为免疫合格。
6
REO（病关）
REO免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗体较免前抗体均有大幅度上升（5000—15000），并且变异系数缩小，说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。从大量的检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。
2、肉鸡群：如在发病后检测MG抗体，在未对其项目进行接种有阳性抗体且变异系数大，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
7
MG（支原体）
1、肉种鸡群：MG免疫效果评价（ELISA检测）：我们种鸡常规MG抗体检测检测分两次，第一次为免前检测，如免前鸡群MG抗体阳性的话，就可以考虑不进行免疫接种，第二次为免后7周，因鸡群免过MG疫苗后21天到49天的血清转化，故在免后7周检测抗体转阳情况，一般正常情况下抗体阳性率应在80%以上。
序号
检测项目
检测结果分析
备注
1
ND（新城疫）
1、蛋/种鸡群：ND抗体在正常检测离散范围应为6log2—12log2，离散范围越小越能说明鸡群免疫应答反应好，如抗体滴度＞13log2，且离散范围大如：6log2—15log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
人感染高致病性禽流感临床诊断标准
人感染高致病性禽流感临床诊断标准人禽流感诊疗方案（试行）一、流行病学史发病前1周内曾到过禽流感暴发的疫点，或与被感染的禽类及其分泌物、排泄物等有密切接触者，或从事禽流感病毒实验室工作人员。
目前不排除与禽流感患者密切接触的人有患病的可能。
二、临床表现1.潜伏期一般为1～3天，通常在7天以内。
2.临床症状急性起病，早期表现类似普通型流感。
主要为发热，体温大多持续在39℃以上，热程1～7天，一般为3～4天，可伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛和全身不适。
部分患者可有恶心、腹痛、腹泻、稀水样便等消化道症状。
重症患者病情发展迅速，可出现肺炎、急性呼吸窘迫综合征、肺出血、胸腔积液、全血细胞减少、肾功能衰竭、败血症、休克及Reye综合征等多种并发症。
3.体征重症患者可有肺部实变体征等。
三、实验室检查1.外周血象白细胞总数一般不高或降低。
重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞下降。
2.病毒抗原及基因检测取患者呼吸道标本采用免疫荧光法（或酶联免疫法）检测甲型流感病毒核蛋白抗原（NP）及禽流感病毒H亚型抗原。
还可用RT-PCR法检测禽流感病毒亚型特异性H抗原基因。
3.病毒分离从患者呼吸道标本（如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上皮细胞）中分离禽流感病毒。
4.血清学检查发病初期和恢复期双份血清抗禽流感病毒抗体滴度有4倍或以上升高，有助于回顾性诊断。
四、胸部影像学检查重症患者胸部X线检查可显示单侧或双侧肺炎，少数可伴有胸腔积液等。
五、诊断根据流行病学史、临床表现及实验室检查结果，排除其他疾病后，可以作出人禽流感的诊断。
1.医学观察病例有流行病学史，1周内出现临床表现者。
与人禽流感患者有密切接触史，在1周内出现临床表现者。
2.疑似病例有流行病学史和临床表现，患者呼吸道分泌物标本采用甲型流感病毒和H亚型单克隆抗体抗原检测阳性者。
3.确诊病例有流行病学史和临床表现，从患者呼吸道分泌物标本中分离出特定病毒或采用RT-PCR法检测到禽流感H 亚型病毒基因，且发病初期和恢复期双份血清抗禽流感病毒抗体滴度有4倍或以上升高者。
流感禽流感红细胞凝集抑制试验抗体检测
标准操作规程（SOP ）中国国家流感中心流感/禽流感红细胞凝集抑制试验抗体检测一、目的 该文件是为流感/禽流感抗体检测、鉴定的血清学试验制定，用以说明红细胞凝集抑制试验用于血清抗体检测的操作过程和规范，确保红细胞凝集抑制试验的操作过程符合规范，确保抗体检测结果可信、滴度准确。
二、范围适用于中国国家流感中心所有技术人员进行流感/禽流感红细胞凝集抑制试验抗体检测。
三、程序（一）生物安全要求H5、H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的操作需要在BSL-3级实验室中进行。
其余流感病毒的操作需要在BSL-2级实验室中进行。
（二）材料1．抗原：季节性流感病毒：人群中常见流行的流感病毒如A （H1N1）、A （H3N2）、B 型流感病毒的标准参照抗原；抗原制备需要在BSL-2实验室进行，操作人员穿工作服、工作鞋，戴手套、帽子、口罩。
抗原制备、灭活见《流感/禽流感灭活抗原的制备和纯化SOP 》 和《β-丙内酯病毒灭活SOP 》。
禽流感病毒：灭活的H5N1亚型流感病毒。
抗原制备需要在BSL-3实验室进行，操作人员穿双层工作服、戴双层手套、帽子、口罩、防护目镜以及工作鞋。
抗原制备、灭活见《流感/禽流感灭活抗原的制备和纯化SOP 》 和《β-丙内酯病毒灭活SOP 》、《多聚甲醛病毒灭活SOP 》，灭活后的抗原可在BSL-2实验室内操作。
2．血清：（1）季节性流感参比血清： 编号：CNICSOP07034 制定时间：2007.01 制定人：王敏 梁倩 审核人：白天 董丽波 批准人：舒 跃 龙 生效日期：2007.03 版本号：V-2A（H1N1）亚型标准抗血清A（H3N2）亚型标准抗血清B型Yamagata系标准抗血清B型Victoria系标准抗血清血清取用需要在BSL-2实验室生物安全柜内进行。
（2）季节性流感待检血清：需急性期和恢复期双份血清，血清取用需要在BSL-2实验室生物安全柜内进行，相关操作见《临床标本的接收和保存SOP》。
《禽流感病毒ELISA抗体检测技术规范》标准文本
禽流感病毒ELISA抗体检测技术规范前言本标准按GB/T 1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。
本标准的附录A为规范性附录。
本标准起草单位：贵州省动物疫病预防控制中心。
本标准由贵州省动物疫病预防控制中心提出并归口。
本标准主要起草人：刘霞、王慧、李照伟、孙鹃、倪兴维、张霞、蒲同灿、汪忠荣。
禽流感病毒ELISA抗体检测技术规范1 范围本标准规定了禽流感病毒H5亚型、H7亚型抗体的竞争ELISA检测方法。
本标准适用于检测免疫的鸡、鸭、鹅等禽类血清中H5亚型或H7亚型禽流感病毒的抗体水平。
2 缩略语下列缩略语适用于本文件。
ELISA 酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent test）OD4500nm值 450纳米波长处的吸光值3实验原理本标准采用竞争酶联免疫吸附法（竞争ELISA），该方法利用抗原抗体反应具有特异性的特点，将特异性的H7亚型（或H5亚型）禽流感病毒血凝抑制试验抗原吸附到固相载体的表面，将待检血清和特异性酶标单抗同时加入包被板孔。
待检血清中的抗体与酶标单抗竞争与包被抗原结合，因此，待检血清中抗体越多结合在包被抗原上的酶标单抗就越少，阳性血清反应呈色浅于阴性血清。
4 材料准备4.1 试剂见附录A。
4.2 仪器与器材酶标检测仪、台式低温高速离心机、37℃恒温培养箱、冰箱、微量移液器及配套洗头等。
4.3 样品动物血清或动物全血（待血液充分凝固后，4000r/min离心10分钟，收集上清），要求血清清亮，无溶血。
5 实验方法5.1 包被用包被液将包被抗原稀释至工作浓度（2μg/ml）加至抗原包被板中100μl/孔，置37℃下温育45分钟（或2℃～8℃包被15小时）。
5.2 封闭弃去包被液，每孔加入封闭液200μl，置37℃ 2小时；拍干，再置37℃干燥2小时。
5.3 1×洗涤液的配制使用前，将20倍浓缩洗涤液恢复至室温（15℃～25℃）并摇动使沉淀溶解（最好在37℃水浴锅中加热5～10分钟），然后用去离子水作20倍稀释（例如30ml 20倍浓缩洗涤液加上570ml去离子水），混匀，稀释好的洗涤液在2℃～8℃下存放7日。
鸡病常规抗体检测结果分析及运用
序号检测项目检测结果分析备注1、蛋/种鸡群：ND抗体在正常检测离散范围应为6log2—12log2，离散范围越小越能说明鸡群免疫应答反应好，如抗体滴度＞131ND（新城疫）log2，且离散范围大如：6log2—15log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
2、肉鸡群：ND抗体正常检测离散范围在0log2-10log2之间，如抗体滴度≥11log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
提示：两者离散范围大小是评价鸡群免疫应答反应效果和野毒感染的评价的重要指标。
发病前后7—141、蛋/种鸡群H9抗体正常的检测离散范围应为4log2—10log2，天抗体滴度升高2log鸡群持续接种疫苗后，鸡群抗体离散范围出现4log2—12og2也属2—4log2基本可以确2H9（禽流感）于正常，离散范围越小越能说明鸡群免疫应答反应好，如抗体体滴度＞13log2，且离散范围大如：6log2—15log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
2、肉鸡群：同ND相似。
1、蛋/种鸡群H5抗体正常检测离散范围应为4log2—10log2，鸡3H5（禽流感）群感染后，抗体异常上升，且离散范围大。
2、肉鸡群：因该病感染和死亡涉及非常快，且病变典型，抗体对比意思不大。
1、蛋/种鸡群：IB免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗体较免前抗体有所上升（500—2000），并且变异系数缩小，说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。
从大量的检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。
鸡群在产蛋期抗体滴4IB（传支）度大于100的鸡群在我们长时间检测中也有发现，鸡群无疾病表现，目前不能说明什么，有待进一步的认识。
2、肉鸡群：肉鸡IB抗体在30日龄-40日龄之间，在3000以下为正常范围，大于4000且变异系数＞100%，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
提示：三者均可以给商品肉鸡提供较高的1、蛋/种鸡群：IBD免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗母源抗体，保护雏鸡体较免前抗体有所上升（500—3000），并且变异系数缩小，说明前期不受外界毒影免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。
高致病性禽流感抗体HA和HI试验检测原始记录
样品编号 备注：
检测结果的原始记录
数据
检测结果
免疫合格
免疫不合 格
(log2)
(log2)
(log2)
(log2)
(log2)
样品编号
数据
检测结果 免疫合格 免疫不合格
(log2) (log2) (log2) (log2) (log2)
检验员： 年 月日
审核人： 年月日
2008年7月5日起实行 JZS/BJ03-1
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高致病性禽流感抗体HA和HI试验检测原始记录
样品编号 备注：
检测结果的原始记录
数据
检测结果
免疫合格
免疫不合 格
(log2)
(log2)
(log2)
(log2)
(log2)
(log2)
(l
(log2)
(log2)
(log2)
(log2)
(log2)
(log2)
JZS/BJ03-1
高致病性禽流感抗体HA和HI试验检测原始记录
样品编号
样品名称
检验项目
诊断试剂生产 厂家及批号
样品状态
样品处置
样品数量
检验依据
使用仪器名称 及型号
检验室环境
温度： ℃ 湿度： %
主要的操作程序：1、用HA法测定抗原的血凝价：在微量反应板的1孔~12孔加入25ul的 PBS；换滴头，吸取25ul的抗原加入到第1孔，然后倍比稀释至11孔，并弃去剩下的25ul，换 滴头；每孔再加入25ul的PBS，混匀后，每孔加入25ul的1%体积比鸡红细胞悬液；震荡混 匀，在室温下作用30min后观察结果。2、用HI测定血清中的抗体滴度：根据HA实验结果配 制4HAU，在微量反应板上的第1孔~11孔加入25ul的PBS，第12孔加50ul的PBS；吸取25ul待 检血清加入到第1孔内，充分混匀后倍比稀释至第10孔；在第1孔~11孔加入25ul的4HAU，室 温作用30min；然后每孔加入25ul的1%体积比的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温下作用 30min后观察结果。
抗体判定依据及分析
抗体判定标准及分析依据一、抗体判定标准：1.新城疫抗体：育雏育成鸡在7以上，产蛋鸡在9以上。
2.H5抗体：抗体值在6以上。
3.H9抗体：抗体值在7以上。
注：低于以上标准，则需要进行免疫。
免疫后抗体规律一般活疫苗免后7-10天产生抗体，2-3周抗体到达峰值，可以维持2个月。
灭活疫苗免后10-15天产生抗体，3-4周抗体到达峰值，可以维持3-4个月。
二、结果分析1、正常情况1）商品肉鸡母抗≤28，有时可达29，一般情况下母抗较种代鸡低2个滴度。
2）种鸡/蛋鸡2个月时可达26-8，甚至更高，多次免疫也不会超过212。
3）通常一旦建立免疫保护，HI抗体维持2个月不会有大变动，抗体波动不会超过2个滴度。
4）正常情况下，育成期或产蛋期的油苗免疫一次可以提升1.5-2个滴度，否则就是免疫失败，否则应加免。
2、发病情况1）未免疫鸡群的抗体出现阳性。
2）发病后2周的ND-HI至少比发病前高2个滴度，个别可能异常高。
3）肉鸡或育雏的种鸡/蛋鸡发病后10天，ND-HI可上升5个滴度到210。
4）种鸡/蛋鸡场野毒感染1个月后，个别的滴度可达214或更高。
5）生物安全措施良好的鸡场往往存在野毒的滚动感染，因此鸡场的病程往往持续数月之久。
如确诊的早，可从远离发病舍的（假定）健康鸡舍做紧急免疫。
3、数据的意义1）抗体滴度：个体抵抗力2）GMT：平均值，显示群体的平均抵抗力3）CV%：变异系数(标准差S/平均值X )，代表群体相对与平均值的离散程度。
4、免疫蛋鸡血清ND-HI抗体水平与保护力的关系（理论值）。
规模鸡场高致病性禽流感疫苗免疫抗体监测和分析
健康养殖·防控452020.01 畜牧业环境摘 要：针对我国对高致病性禽流感的防控现状，开展对高致病性禽流感疫苗抗体水平的分析十分必要。
根据文献资料和现实调查，针对养鸡场高致病性禽流感疫苗免疫后一次性进行的免疫效果评估很多，但对疫苗免疫后不同时间抗体水平跟踪监测的较少。
为此，开展了跟踪检测几个鸡场高致病性禽流感疫苗免疫后不同时间的抗体水平研究。
对洛阳市4个规模化鸡场共进行了33次共990羽（份）的血清抗体检测，总合格率为99.0%。
A场、B场、C场免疫程序有缺陷，存在较长的免疫保护空白期，D场免疫程序较合理，免疫保护空白期最短。
成年鸡用H5亚型H7N9流感重组三价灭活疫苗免疫，免疫保护期可达到4个月以上。
所选两个疫苗厂疫苗的免疫效果无明显差异。
强化免疫抗体水平较上次免疫抗体水平上升快而且维持时间较长。
关键词：高致病性禽流感；疫苗；抗体；监测；分析目前，我国使用的高致病性禽流感疫苗主要是H5亚型重组H7N9流感病毒灭活疫苗。
开展对疫苗免疫抗体的监测十分必要；本研究的目的在于通过跟踪监测几个鸡场高致病性禽流感疫苗免疫后抗体消长情况，为规模化鸡场高致病性禽流感疫苗选择提供数据评估参考；指导规模化鸡场对高致病性禽流感疫苗免疫程序的优化。
1 材料与方法1.1 材料和仪器1.1.1 疫苗疫苗分别选用青岛易邦H5亚型H7N9流感三价（Re-6 Re-7 Re-8）灭活苗（疫苗批号：160740201）和乾元浩H5亚型H7N9流感三价（Re-6 Re-7 Re-8）灭活苗（疫苗批号：2016021）。
1.1.2 试剂H7N9流感病毒H5（Re-6）亚型血凝抑制试验抗原和阴阳性血清，购自哈尔滨维科生物技术开发公司，批号：2015047，冻干的抗原和血清均按瓶签上规格标注的量，用PH值7.2 0.01mol/L PBS配置、阿氏（Alsevers）液的配置以及1%鸡血红细胞悬液的配置，按参考文献[1]操作。
实验五禽流感血清学诊断
血凝抑制（HI）试验
1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的 病毒液。 2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1 孔至第11孔各加50 uL生理盐水。 3. 第1孔加被检鸡血清50 uL，吹吸混合均匀，吸50 uL至第2孔，依 此倍比稀释至第10孔，吸弃50 uL，稀释度分别为：1:2、1:4、 1:8 …… ；第12孔加禽流感阳性血清50 uL，作为血清对照。
判定标准：HI效价小于或等于3lg2判定HI试验阴性；HI效价等于4lg2为可 疑，需重复试验；HI效价大于或等于5lg2为阳性
禽流感灭活疫苗免疫效果判断：HI抗体效价≥ 4log2(1:16) 为免疫合格。 禽流感弱毒疫苗免疫效果判断：鸡群免疫抗体转阳率≥50%判定合格。
正常合格为从高浓度到低浓度（从前到后）红细胞沉积依次减少，如1-4孔出 现不完全沉积，即凝集现象，即无抗体或抗体水平较低，不合格；反之，5-10 孔出现沉淀，则抗体水平较高，合格。
血凝（HA）试验
1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50 μL生理盐水。 2. 于左侧第1孔加50 μL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均 匀后，吸50 μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50 μL； 第12孔为红细胞对照。 3. 自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50 μL，在振荡器 上振荡，室温下静臵后观察结果。
﹣
振荡1分钟，室温10分钟
以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的滴度，即血清效价
血凝抑制（HI）试验
6. 结果判定：待病毒对照孔（第11孔）出现红细胞100%凝集（#），而 血清对照孔（第12孔）为完全不凝集（-）时，即可进行结果观察。
各类家禽禽流感免疫程序
－0.6ml，以后每 4 个月加强免疫一次，每只 0.6 －0.8ml。 说明：对疫苗注射剂量超过 1.0ml 的，宜分
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多点皮下或肌肉注射，每点 0.5－1.0ml。
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光偷走了我们很多东西，温暖的心抑或那个温柔的你。每个人的青春里都有一首
(3)种鸭、蛋鸭：接种重组禽流感灭活疫苗 (H5N1 亚型)。10 天龄每只接种 0.5ml，30－35 天龄每只接种 1.0ml，以后每 4 个月加强免疫一 次，每只 1.0ml。
(4)快大肉鸭(40－50 天出栏)：接种重组禽
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(7)肉鹅：接种重组禽流感灭活疫苗(H5N1 亚 型)。10 天龄每只接种 0.5－1.0ml，30－35 天龄 接种第二次，每只 1.0－1.5ml。 (8)种鸽：接种 H5 亚型禽流感疫苗。14 天龄 每只接种 0.3－0.4ml， 35－40 天龄每只接种 0.5
14 天龄每只接种 0.3－0.4ml，35－40 天龄每只
接种 0.5－0.6ml，以后每 4 个月加强免疫一次，
光偷走了我们很多东西，温暖的心抑或那个温柔的你。每个人的青春里都有一首
每只 0.6－0.8ml。 (2)肉鸡(中、慢速型)或阉鸡：接种 H5 亚型 禽流感疫苗。10 天龄每只接种 0.3ml，30－35 天 龄接种第二次，每只 0.5－0.6ml，80－90 天龄， 接种第三次，每只 0.8－1.0ml。
流感灭活疫苗(H5N1 亚型)。7－10 天龄每只接种 0.5ml，17－20 天龄接种第二次，每只 0.5－ 1.0ml。 (5)中型肉鸭(75 天出栏)：接种重组禽流感
禽流感疫苗不同免疫剂量对免疫鸡产生的抗体效价影响
禽流感疫苗不同免疫剂量对免疫鸡产生的抗体效价影响摘要通过应用同一批次的禽流感疫苗,在同一鸡群中采用相同的免疫方法和部位(均采用颈部皮下注射),在同一时间内进行不同免疫剂量的禽流感疫苗免疫注射试验。
根据免疫剂量的不同,将所选养殖场的同群鸡分别分为4个试验组(0.3mL/只、0.4mL/只、0.5mL/只和0.8mL/只)进行疫苗免疫,免疫后采用相同的饲养管理方式进行同群饲养管理,在间隔相同的时间后,采样进行免疫抗体水平检测,结果其产生的免疫抗体效价阳性率与免疫剂量成正比,高的达到92%,而低的仅11%。
根据群体抗体达标检测要求,抗体效价检测阳性率达到全群的70%才能达到免疫合格,而该次试验中免疫剂量为0.5mL/只和0.8mL/只的试验组其群体抗体效价阳性率达到免疫抗体效价群体合格的要求,其余2组未达标。
关键词禽流感;免疫;剂量;效价为了摸清畜牧业生产中禽流感疫苗免疫剂量对免疫抗体效价的影响,切实达到免疫目的,2008年底配合禽流感的强制免疫工作,西昌市选取了2家规模场和2个乡镇的农户所养殖的健康鸡作为试验动物,进行了同一鸡群不同免疫剂量的鸡所产生的免疫效果的对比试验。
现将试验结果总结如下。
1材料与方法1.1试验动物选取1个规模养殖蛋鸡场、1个规模养殖商品鸡场和2个乡镇农户所养的5周龄以上的健康鸡作为试验动物。
1.2试验器材(1)免疫疫苗。
黑龙江省生物制品一厂生产的重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)。
批号:200761;生产日期:20070927;有效期:12个月;参考免疫剂量:2～5周龄0.3 mL/只,5周龄以上0.5mL/只;保存状况:2～8℃避光保存,严禁冻结;规格:250mL/瓶。
(2)注射器。
使用上海市万佳动物保健器械有限公司生产的兽医用可调连续注射器,在使用前进行严格清洗和消毒,由专人进行统一调试和注射。
(3)采样器械。
碘酒、酒精、一次性注射器、消毒后的离心管和青霉素瓶等。
鸡禽流感h5、h7和h9抗体水平合格率检测
畜 牧 兽 医2020年第11期新农民鸡禽流感H5、H7和H9抗体水平合格率检测熊 鑫（安徽省宁国市农业农村局，安徽 宁国 242300）摘要：本试验为了检测宁国市某养殖场屠宰环节中经疫苗免疫后的鸡祖代及父母代禽流感H5、H7和H9抗体水平合格率。
通过血凝试验分别对H5、H7和H9抗原进行倍比稀释，测得四倍抗原，根据稀释倍数制备抗原稀释液。
通过血凝抑制试通过验将血清从第1孔倍比稀释到第5孔，第6孔倍比稀释到第10孔，其中每排第11孔为阳性对照，第12孔为阴性对照。
先加入抗原稀释液振荡混匀后置于在37℃充分反应，再加入1%红细胞悬液振荡混匀后置于在37℃充分反应，进行读数。
关键词：禽流感；抗体水平；血凝试验；血凝抑制试验1 试验方法1.1 样本制备①于屠宰环节随机选取某养殖场鸡祖代（80周龄）及父母代（48周龄）各50只；②通过翅静脉采集血液，于37℃放置2h；③取上清液在1800r/min条件下离心2～3min，用移液器吸取上层清液（即为血清）于新的离心管中；④进行编号标记后于-20℃保存。
1.2 制备1%鸡红细胞悬液①注射器吸取适量阿氏液，通过翅静脉采集健康公鸡血液；②于1500r/min条件下离心8～10分钟，用移液器尽可能吸净上层清液弃去；③加入生理盐水通过称量配平后，用移液器重复吹打使悬液充分混匀；④重复②③步骤3～5次；⑤离心后将上层清液弃掉，用生理盐水配成1%红细胞悬液，置于4℃保存备用。
1.3 HA试验①取1块96孔V型微量反应板水平放置于实验台，进行标记；②分别选取6排，其中每2排为重复操作，第1～12孔分别加入25μL生理盐水；③分别于相应标记的第1孔加入H5、H7和H9抗原25μL，倍比稀释至第11孔，弃去枪头内液体；④6排的每孔加入25μL生理盐水；⑤6排的每孔加入配制好的25μL 1%红细胞悬液，振荡混匀后于37℃恒温箱内反应15～20分钟；⑥观察结果，获得抗原血凝效价，制备抗原稀释液。
禽流感
禽流感作者：谭永龙韩永佩周家喜等来源：《湖北畜牧兽医》2008年第07期摘要：选昌伟农贸公司健康鸡400只(试验前抗体监测新城疫抗体效价小于或等于1：32。
禽流感抗体效价小于1：16的鸡为试验鸡)分4组，分别用滴鼻1羽份、肌肉注射1羽份、饮水2羽份、肌注1羽份3周后饮水2羽份加强免疫4种方式免疫，结果显示：禽流感一新城疫重组二联疫苗滴鼻、肌肉注射免疫的抗体效价合格率显著高于饮水免疫的抗体效价合格率(P＜0.05)，肌肉注射3周后饮水加强免疫一次能显著延长有效抗体持续期，能够产生更好的免疫效果。
一次滴鼻、肌肉注射和饮水免疫仅能维持1个月左右的高抗体水平，加强免疫方式能维持2个月以上的高抗体水平。
关键词：滴鼻；肌注；饮水；免疫预防；鸡；禽流感；新城疫中图分类号：S852.5+2文献标识码：A文章编号：1007-273X(2008)07-0023-021 材料方法1.1 材料1.1.1 试验动物夷陵区昌伟农贸公司3周龄未接种疫苗健康雏鸡400只(试验前抗体监测新城疫抗体效价小于或等于1：32，禽流感抗体效价小于1：16的鸡为试验鸡)。
1.1.2试验疫苗禽流感一新城疫重组二联活疫苗500羽份/瓶，哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号：兽药生字(2007)080012112。
1.1.3试验试剂纯化灭活禽流感(H5)、新城疫诊断抗原，标准阳性、阴性血清，稀释液(PBS)，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生产。
1％鸡红血球：采健康公鸡新鲜血液，与抗凝生理盐水等体积混合。
洗涤离心后备用。
1.2方法1.2.1 试验分组与疫苗接种(1)试验分组。
选择未接种禽流感一新城疫疫苗的健康鸡400只，分成4组：第1组：健康鸡100只，2007年3月22日采用滴鼻免疫方式免疫禽流感一新城疫疫苗1羽份/羽。
第2组：健康鸡100只，2007年3月22日采用肌肉注射免疫方式免疫禽流感一新城疫疫苗1羽份/羽。
第3组：健康鸡100只，2007年3月22日采用饮水免疫方式免疫禽流感一新城疫疫苗2羽份/羽。
河北省蛋鸡禽流感免疫抗体监测与分析
河北省蛋鸡禽流感免疫抗体监测与分析陈立功;袁万哲;刘静;刘聚祥;王庚南;贾会娟;王琳;孙月川;董世山【摘要】为了解禽流感(Avian influenza,AI)疫苗实际免疫效果,采用血凝抑制(Hemagglutination-inhibition,HI)试验,对河北省7市35个蛋鸡场的662份血清样品中的H5亚型Re-4、Re-6和H9亚型禽流感免疫抗体进行了监测.结果表明:河北省蛋鸡群的H5亚型Re-4、Re-6和H9亚型禽流感平均免疫抗体合格率分别为99.7％,99.6％和97.7％.综合变异系数、滴度范围和平均滴度考虑,7市禽流感免疫效果存在差异,邢台市的Re-4、保定市的Re-6和保定和衡水市的H9抗体水平最好.父母代鸡场的整体免疫效果优于商品代鸡场.【期刊名称】《河北农业大学学报》【年(卷),期】2014(037)005【总页数】7页(P104-109,118)【关键词】禽流感;血凝抑制试验;监测;免疫抗体合格率【作者】陈立功;袁万哲;刘静;刘聚祥;王庚南;贾会娟;王琳;孙月川;董世山【作者单位】河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定 071001;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定 071001;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定 071001;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定 071001;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定 071001;河北省新乐市农业畜牧局,河北新乐 050700;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定 071001;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定 071001;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定071001【正文语种】中文【中图分类】S852.3禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）属于正黏病毒科、A型流感病毒属，是一种RNA病毒。
23.高致病性禽流感防治技术规范
高致病性禽流感防治技术规范高致病性禽流感（Highly Pathogenic Avian Influenza, HPAI）是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的以禽类为主的烈性传染病。
世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物传染病，我国将其列为一类动物疫病。
为预防、控制和扑灭高致病性禽流感，依据《中华人民共和国动物防疫法》、《重大动物疫情应急条例》、《国家突发重大动物疫情应急预案》及有关的法律法规制定本规范。
1 适用范围本规范规定了高致病性禽流感的疫情确认、疫情处置、疫情监测、免疫、检疫监督的操作程序、技术标准及保障措施。
本规范适用于中华人民共和国境内一切与高致病性禽流感防治活动有关的单位和个人。
2 诊断2.1 流行病学特点2.1.1 鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉鸡、鹧鸪、鸵鸟、孔雀等多种禽类易感，多种野鸟也可感染发病。
2.1.2 传染源主要为病禽（野鸟）和带毒禽（野鸟）。
病毒可长期在污染的粪便、水等环境中存活。
2.1.3 病毒传播主要通过接触感染禽（野鸟）及其分泌物和排泄物、污染的饲料、水、蛋托（箱）、垫草、种蛋、鸡胚和精液等媒介，经呼吸道、消化道感染，也可通过气源性媒介传播。
2.2 临床症状2.2.1 急性发病死亡或不明原因死亡，潜伏期从几小时到数天，最长可达21天；2.2.2 脚鳞出血；2.2.3 鸡冠出血或发绀、头部和面部水肿；2.2.4 鸭、鹅等水禽可见神经和腹泻症状，有时可见角膜炎症，甚至失明；2.2.5 产蛋突然下降。
2.3 病理变化2.3.1 消化道、呼吸道粘膜广泛充血、出血；腺胃粘液增多，2.3.22.3.3 输卵管的中部可见乳白色分泌物或凝块；卵泡充血、出血、萎缩、破裂,2.3.4脑部出现坏死灶、血管周围淋巴细胞管套、神经胶质灶、2.4 血清学指标2.4.1 未免疫禽H5或H7的血凝抑制(HI)效价达到24及以上（附件1）；2.4.2 禽流感琼脂免疫扩散试验（AGID）阳性(附件2)。
人感染高致病性禽流感诊断标准
人感染高致病性禽流感诊断标准(Highly pathogenic avian influenza)【WS 284-2008】(2008-02-28发布，2008-09-01实施)3 诊断依据3.1 流行病学史3.1.1 发病前7d内，接触过禽，尤其是病禽、死禽（包括野生禽、家禽），或其排泄物、分泌物及7d内下的蛋，或暴露于其排泄物、分泌物污染的环境。
3.1.2 发病前14d内，曾经到过有活禽交易、宰杀的市场。
3.1.3 发病前14d内，与人禽流感疑似、临床诊断或实验室确诊病例有过密切接触，包括与其共同生活、居住，或护理过病例等。
3.1.4 发病前14d内，在出现异常病、死禽的地区居住、生活、工作过。
3.1.5 高危职业史：从事饲养、贩卖、屠宰、加工、诊治家禽工作的职业人员；可能暴露于动物和人禽流感病毒或潜在感染性材料的实验室职业人员；未采取严格的个人防护措施，处置动物高致病性禽流感疫情的人员；未采取严格的个人防护措施，诊治、护理人禽流感疑似、临床诊断或实验室确诊病例的医护人员。
3.2 临床表现（参见附录F）3.2.1 H7亚型人禽流感主要表现出结膜炎和上呼吸道卡他症状。
3.2.2 H9N2亚型人禽流感类似普通人流感，通常仅有轻微的上呼吸道感染症状。
3.2.3 H10N7亚型人禽流感仅有轻微的上呼吸道感染症状。
3.2.4 H5N1亚型人禽流感a）潜伏期一般为为1d～7d，通常为2d～4d。
患者呈急性起病，早期表现类似普通型人流感。
主要为发热，体温大多持续在39℃以上，可伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛、肌肉酸痛和全身不适。
部分患者可有恶心、腹痛、腹泻、稀水样便等消化道症状。
b）重症患者病情发展迅速，几乎所有患者都有临床表现明显的肺炎，可出现急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征（acute rspiratory distress syndrome，ARDS）、肺出血、胸腔积液、全血细胞减少、多脏器功能衰竭、休克及瑞氏(Reye)综合征等多种并发症。
宿豫区鸡高致病性禽流感免疫血清学诊断和监测
宿豫区鸡高致病性禽流感免疫血清学诊断和监测[摘要]近年来，用灭活疫苗免疫接种已成为宿豫区控制高致病性禽流感的一种主要策略。
但免疫效果能否控制高致病性禽流感的发生和流行，必须对免疫的鸡血清开展实验室诊断和监测。
为了防止高致病性禽流感的爆发和流行，2013年宿豫区加大力度对高致病性禽流感免疫抗体实验室诊断和监测力度，针对禽流感（-4株、-6株）抗体检测，判断标准为：抗体滴度≥24，免疫合格；抗体滴度<24，免疫不合格，要求不合格的养殖户及时补防高致病性禽流感疫苗，确保我区不发生禽流感疫情。
宿豫区通过随机抽取各乡镇规模养鸡场，每个场10份血样，共计140份；每个散养户5份血样，共计70份，总计210份，所有样品集中编号，检测禽流感抗体效价，结果显示：210份血样，-4株抗体不合格有16份，不合格率为7.6%；-6株抗体不合格有18份，不合格率为8.6%。
[关键词]宿豫区；禽流感；实验室；抗体检测1 高致病性禽流感临床诊断和免疫失败原因分析高致病性禽流感是一种由A型流感病毒引起的多种家禽及野鸟的高度接触性传染病，又名欧洲鸡瘟、真性鸡瘟，被OIE列为A类传染病，我国也将其列为一类传染病。
[1]1.1高致病禽流感临床症状高致病性禽流感潜伏期短（潜伏期几小时到数天，最长可达21天），发病初期无明显临床症状，表现为禽群突然暴发，常无明显症状而突然死亡。
病程稍长时，病禽体温升高（达43℃以上），精神高度沉郁，食欲废绝，羽毛松乱；有咳嗽、啰音和呼吸困难，甚至可闻尖叫声；鸡冠、肉髯、眼险水肿，鸡冠、肉髯发绀，或呈紫黑色，或见有坏死；眼结膜发炎，眼、鼻腔有较多浆液性或黏液性或黏脓性分泌物；病鸡腿部鳞片有红色或紫黑色出血；病禽有下痢，排出黄绿色稀便；产蛋鸡产蛋量明显下降，产蛋率可由80%或90%下降到20%或以下，甚至停产；产蛋下降的同时，可见软皮蛋、薄壳蛋、畸形蛋增多。
有的病鸡可见神经症状，共济失调，不能走动和站立。
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禽流感抗体滴度标准
禽流感是一种由禽类传播的病毒性疾病，对禽类养殖业造成了严重的经济损失。
为了控制和预防禽流感的传播，科学家们研究出了禽流感抗体滴度标准，以评估禽类对该病毒的免疫力。
本文将探讨禽流感抗体滴度标准的重要性、应用以及未来的发展方向。
禽流感抗体滴度标准的重要性不言而喻。
通过测量禽类体内的抗体滴度，我们可以了解它们对禽流感病毒的免疫程度。
这对于养殖业来说至关重要，因为它可以帮助养殖者评估禽类的健康状况，及时采取措施防止疫情的扩散。
此外，禽流感抗体滴度标准还可以用于评估疫苗的有效性，为疫苗研发和改进提供依据。
禽流感抗体滴度标准的应用范围广泛。
在禽类养殖业中，养殖者可以定期检测禽类的抗体滴度，以确保它们的免疫力处于良好状态。
此外，禽流感抗体滴度标准还可以用于监测疫情的爆发和传播情况。
通过对不同地区、不同禽类群体的抗体滴度进行比较，我们可以及时发现疫情的蔓延趋势，采取相应的控制措施。
然而，禽流感抗体滴度标准也存在一些挑战和争议。
首先，不同的研究机构和实验室可能采用不同的测量方法和标准，导致结果的不一致性。
这给禽类养殖者和政府部门带来了困扰，因为他们很难确定哪个标准是可靠的。
其次，禽流感病毒的变异性也给抗体滴度的测量带来了一定的困难。
由于病毒的变异，禽类可能对不同的病毒株产生不同程度的免疫反应，这使得抗体滴度的解读变得更加复杂。
为了解决这些问题，科学家们正在努力改进禽流感抗体滴度标准的测量方法和标准化程序。
他们希望通过建立统一的标准和参考范围，提高抗体滴度测量的准确性和可比性。
此外，研究人员还在探索新的技术和方法，以提高禽流感抗体滴度的测量效率和灵敏度。
例如，一些研究团队正在开发基于免疫学的快速检测方法，以便更快地获得禽类的抗体滴度信息。
总之，禽流感抗体滴度标准在禽类养殖业中起着重要的作用。
它可以帮助养殖者评估禽类的免疫力，及时采取措施预防疫情的发生和传播。
然而，禽流感抗体滴度标准的应用仍面临一些挑战和争议，需要进一步的研究和改进。
相信随着科学技术的不断进步，禽流感抗体滴度标准将会越来越准确和可靠，为禽类养殖业的发展和疫情控制提供更好的支持。